5-Aza-CdR通过抑制大鼠原代肾肌成纤维细胞Epo基因启动子高甲基化逆转PMT

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作者 袁玲 王蕾 +2 位作者 程鹏 江茜 崔晓雪 《中国比较医学杂志》 北大核心 2025年第1期79-85,共7页

目的观察去甲基化剂5-氮杂-2’脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对大鼠原代肾肌成纤维细胞的周细胞肌成纤维细胞转化(pericyte-myofibroblast transition,PMT)的影响。方法取5-Aza-CdR 250 ng/mL处理大鼠原代肾肌成纤维细胞... 目的观察去甲基化剂5-氮杂-2’脱氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)对大鼠原代肾肌成纤维细胞的周细胞肌成纤维细胞转化(pericyte-myofibroblast transition,PMT)的影响。方法取5-Aza-CdR 250 ng/mL处理大鼠原代肾肌成纤维细胞72 h,采用焦磷酸测序方法检测促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)基因启动子甲基化程度,采用免疫荧光与Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMΑ)、血小板源性生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptorβ,PDGFRβ)和DNA甲基转移酶3a(DNA methyltransferase 3a,Dnmt3a)的蛋白表达水平,并检测细胞上清液EPO水平。结果与对照组相比,5-Aza-CdR处理能显著降低Dnmt3a的表达和Epo启动子高甲基化水平,并随之降低了肌成纤维细胞中α-SMA的表达及α-SMA与PDGFRβ的表达比例,同时,5-Aza-CdR处理提高了细胞上清液中EPO的水平。结论5-Aza-CdR可通过抑制大鼠原代肾肌成纤维细胞Epo启动子高甲基化逆转PMT。 展开更多

关键词 周细胞-肌成纤维细胞转化 EPO DNA甲基化 5-氮杂-2’脱氧胞苷 DNA甲基转移酶

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LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴促进类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的恶性病理学过程

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作者 曹周芳 汪元 +2 位作者 王梦娜 孙玥 刘菲菲 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第2期371-378,共8页

目的探讨LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)病理学过程的影响。方法选用正常成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)和RA-FLS,构建LINC00837的过表达质粒和干扰质粒转染至RA-FLS中,实验分为对照组(FLS)、... 目的探讨LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)病理学过程的影响。方法选用正常成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)和RA-FLS,构建LINC00837的过表达质粒和干扰质粒转染至RA-FLS中,实验分为对照组(FLS)、模型组(RA-FLS)、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-LINC00837组、siRNA-NC组、siRNA-LINC00837组。采用双荧光素酶验证LINC00837靶向miR-671-5p及miR-671-5p靶向SERPINE2关系;使用qRT-PCR实验检测各组细胞LINC00837、miR-671-5p、SERPINE2表达量;Edu法检测细胞增殖情况,划痕愈合实验检测RA-FLS迁移数,Western blotting法检测细胞增殖、迁移相关蛋白表达水平;ELISA法检测炎性细胞因子分泌情况。结果双荧光素酶报告基因结果显示,LINC00837与miR-671-5p的3'非翻译区(3'UTR)结合,而miR-671-5p与SERPINE2的3'非翻译区(3'UTR)结合,两两之间具有结合位点(P<0.01)。同一时间段,与对照组相比,模型组LINC00837和SERPINE2表达量升高,而miR-671-5p表达量降低,细胞增殖、迁移能力提高,促炎细胞因子表达升高,抑炎细胞因子表达降低(P<0.01);与模型组相比,pcDNA-LINC00837组细胞增殖、迁移活跃,促炎细胞因子表达升高,抑炎细胞因子表达降低(P<0.01);与模型组相比,siRNA-LINC00837组细胞增殖、迁移能力下降,促炎细胞因子表达下降,抑炎细胞因子水平升高(P<0.01)。结论RA-FLS中存在LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴,该功能轴促进RA-FLS增殖、迁移及炎症因子分泌等恶性病理学过程,干预LINC00837有望成为调控RA-FLS病理学过程的潜在策略。 展开更多

关键词 类风湿关节炎 成纤维细胞样滑膜细胞 LINC00837 增殖迁移 炎症因子

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周细胞向肌成纤维细胞转化在组织纤维化中的研究进展

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作者 唐蕾 史俊(综述) 王朝(审校) 《医学研究与战创伤救治》 北大核心 2025年第8期873-879,共7页

周细胞是具有产生细胞外基质作用的一个功能独特的细胞亚群,被证实是环绕微血管的间充质起源的收缩细胞。肌成纤维细胞的活化、增殖被认为是纤维化病理进程中的核心因素。随着遗传谱系追踪和单细胞RNA测序等技术的应用,周细胞-肌成纤维... 周细胞是具有产生细胞外基质作用的一个功能独特的细胞亚群,被证实是环绕微血管的间充质起源的收缩细胞。肌成纤维细胞的活化、增殖被认为是纤维化病理进程中的核心因素。随着遗传谱系追踪和单细胞RNA测序等技术的应用,周细胞-肌成纤维细胞转化被证实是肌成纤维细胞活化的新途径。文章主要就周细胞-肌成纤维细胞转化参与组织纤维化过程中涉及的多条信号转导途径以及代谢重编程、细胞外囊泡、内皮祖细胞旁分泌、周细胞-内皮细胞间通讯、蛋白质糖基化反应等干预靶点进行综述。 展开更多

关键词 纤维化 周细胞 周细胞-肌成纤维细胞转化 细胞外基质

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艾拉莫德抑制巨噬细胞向肌成纤维细胞转分化减缓慢性移植肾间质纤维化

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作者 杨铖铖 倪斌 +3 位作者 郑明 谭若芸 顾民 沈百欣 《南京医科大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第5期619-626,共8页

目的:探讨艾拉莫德(iguratimod,IGT)在慢性移植肾间质纤维化中的作用和机制。方法:构建并鉴定了同种异体小鼠慢性移植肾失功(chronic renal allograft dysfunction,CAD)模型,并使用IGT灌胃干预,通过组织学染色评估移植肾损伤及纤维化程... 目的:探讨艾拉莫德(iguratimod,IGT)在慢性移植肾间质纤维化中的作用和机制。方法:构建并鉴定了同种异体小鼠慢性移植肾失功(chronic renal allograft dysfunction,CAD)模型,并使用IGT灌胃干预,通过组织学染色评估移植肾损伤及纤维化程度,通过免疫荧光染色、Western blot及qRT⁃PCR等方法检测IGT干预后的CAD小鼠移植肾中纤维化指标和巨噬细胞向肌成纤维细胞转分化(macrophage⁃to⁃myofibrolast transition,MMT)的变化。使用转化生长因子(transforming growth factor,TGF)⁃β诱导小鼠原代骨髓来源巨噬细胞(bone marrow⁃derived macrophage,BMDM)发生MMT并使用IGT干预,转录组测序用于探索IGT调节MMT的下游分子机制。结果:同种异体小鼠CAD模型出现了显著的移植肾间质纤维化,免疫荧光染色显示MMT相关标志物在移植肾中显著上调,IGT可显著减轻16周时CAD小鼠的移植肾间质纤维化,并减少MMT细胞的数量。体外实验表明IGT可显著减缓TGF⁃β诱导的MMT,细胞转录组测序结果表明IGT可能通过诱导铁死亡相关通路抑制MMT、减轻纤维化。结论:IGT可能通过诱导铁死亡相关通路抑制MMT并减轻移植肾间质纤维化。这可能为IGT在同种异体肾移植中的应用提供新见解。 展开更多

关键词 艾拉莫德 慢性移植肾失功 巨噬细胞向肌成纤维细胞转分化 间质纤维化 铁死亡

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新风胶囊含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)影响类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡 被引量：1

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作者 李舒 万磊 +6 位作者 刘健 黄传兵 李方泽 程静 胡赛赛 陈莹莹 朱子衡 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期792-799,共8页

目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的影响。方法XFC灌胃大鼠,制备含药血清。人RA-FLS来源于RA患者滑膜组织,用100μL的10 ng/mL肿瘤坏死因子... 目的探讨新风胶囊(XFC)含药血清通过调控环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB)对类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)增殖、凋亡的影响。方法XFC灌胃大鼠,制备含药血清。人RA-FLS来源于RA患者滑膜组织,用100μL的10 ng/mL肿瘤坏死因子α(TNF-α)刺激RA-FLS建立模型。构建pcDNA3.1-circ-CBLB及阴性对照,分别转染至RA-FLS中。实验分为对照组、TNF-α处理的RA-FLS组、XFC处理的RA-FLS组、pcDNA3.1-circ-CBLB-NC转染的RA-FLS组(过表达空转组)、pcDNA3.1-circ-CBLB转染的RA-FLS组(过表达组)、pcDNA3.1-circ-CBLB联合XFC处理的RA-FLS组(过表达给药组)。采用CCK-8法检测细胞活力,采用流式细胞术检测细胞周期与凋亡,采用实时定量PCR检测circ-CBLB表达水平,采用ELISA检测抗炎因子白细胞介素4(IL-4)、IL-10,促炎因子IL-6、TNF-α水平。结果XFC最佳含药血清量为200 mL/L,处理时间为72 h;与同一时间模型组相比,XFC组、过表达组、过表达给药组的细胞活力均下降。与模型组比较,XFC组、过表达组、过表达给药组circ-CBLB表达水平升高、凋亡率升高,S期和G2期细胞比例增加,IL-4、IL-10含量升高,IL-6、TNF-α含量降低。结论XFC处理上调RA-FLS中circ-CBLB表达,提高抗炎因子的水平,降低促炎因子的水平,抑制RA-FLS的细胞活力,提高其凋亡率,延长细胞周期,抑制RA-FLS增殖并促进其凋亡。 展开更多

关键词 新风胶囊(XFC) 环状RNA Cbl原癌基因B(circ-CBLB) 成纤维细胞样滑膜细胞(FLS) 细胞增殖 细胞凋亡 细胞因子

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湖北枫杨总黄酮通过调控PI3K/AKT信号通路抑制成纤维细胞样滑膜细胞的迁移和侵袭 被引量：3

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作者 吴昊 陈国庆 +5 位作者 卢曼 高瑛 江蕲玲 罗豪楠 袁林 向阳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期134-140,共7页

目的:观察湖北枫杨总黄酮(PHSTF)对人类风湿成纤维细胞样滑膜细胞(MH7A细胞)迁移和侵袭的抑制作用并初步探讨其可能作用机制。方法:将MH7A细胞分为分为对照组(不做任何处理)、低剂量(6.25 mg/L)PHSTF组、中剂量(12.5 mg/L)PHSTF组、高剂... 目的:观察湖北枫杨总黄酮(PHSTF)对人类风湿成纤维细胞样滑膜细胞(MH7A细胞)迁移和侵袭的抑制作用并初步探讨其可能作用机制。方法:将MH7A细胞分为分为对照组(不做任何处理)、低剂量(6.25 mg/L)PHSTF组、中剂量(12.5 mg/L)PHSTF组、高剂量(25 mg/L)PHSTF组、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)激动剂740Y-P(10μmol/L)组和740Y-P(10μmol/L)+高剂量(25 mg/L)PHSTF组。采用CCK-8法检测MH7A细胞活力;划痕实验和Transwell实验检测MH7A细胞的迁移和侵袭;Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平。结果:与对照组相比,各剂量PHSTF组MH7A细胞活力显著降低(P<0.05),划痕愈合面积显著减小(P<0.01),迁移和侵袭至下室的细胞显著减少(P<0.01),MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著降低(P<0.01)。与高剂量PHSTF组相比,PI3K激动剂740Y-P显著提高了PHSTF处理下MH7A细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01),也使得MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著升高(P<0.01)。结论:PHSTF能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制MH7A细胞迁移和侵袭。 展开更多

关键词 湖北枫杨总黄酮 成纤维细胞样滑膜细胞 类风湿关节炎 PI3K/AKT信号通路

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纳米氧化锌对人胚肺成纤维细胞的生物毒性 被引量：9

7

作者 袁金华 李光 +2 位作者 陈慧珍 查河霞 宋黎军 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期170-173,178,共5页

【目的】研究化妆品添加剂-氧化锌纳米粒子对正常人胚肺成纤维细胞(HELF)的生物毒性。【方法】采用MTT法检测氧化锌纳米粒子对体细胞存活率的影响;利用光学显微镜评价细胞的形态学变化;电子显微镜观察细胞与纳米氧化锌作用前后表面微结... 【目的】研究化妆品添加剂-氧化锌纳米粒子对正常人胚肺成纤维细胞(HELF)的生物毒性。【方法】采用MTT法检测氧化锌纳米粒子对体细胞存活率的影响;利用光学显微镜评价细胞的形态学变化;电子显微镜观察细胞与纳米氧化锌作用前后表面微结构的变化。【结果】在测试的2.5～150mg·L-1浓度范围内,氧化锌纳米粒子对HELF细胞均有抑制作用,细胞毒性呈明显的剂量依赖效应关系。浓度在20mg·L-1以上时,氧化锌纳米粒子可致使细胞生存率低于10%。荧光显微镜可见典型的细胞凋亡改变。扫描电子显微镜观察到HELF细胞表面与高浓度纳米粒子作用后产生的纳米级孔。【结论】纳米氧化锌粒子由于小尺寸效应和Zn2+自身毒性的协同作用,高浓度时抑制细胞结活性,致使细胞死亡。在化妆品中添加氧化锌纳米粒子作为紫外屏蔽剂时,建议控制浓度为20mg·L-1以下。旨在对化妆品生产企业在功效添加方面起到警示作用,也为卫生监督提供理论依据。 展开更多

关键词 肺 成纤维细胞细胞 氧化锌纳米粒子 生物毒性 化妆品添加剂

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猪胎儿成纤维细胞APOE基因的差异表达研究 被引量：4

8

作者 李仕新 高萍 +3 位作者 陈赞谋 张豪 王翀 李加琪 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第19期11590-11592,共3页

[目的]研究APOE基因在不同代数的猪胎儿成纤维细胞中的差异表达。[方法]收集正常传代生长的1、10、15、20、25、50代猪胎儿成纤维细胞,分别提取细胞总RNA。采用RT-PCR技术,检测不同代数猪胎儿成纤维细胞中APOE基因的表达。[结果]猪APOE... [目的]研究APOE基因在不同代数的猪胎儿成纤维细胞中的差异表达。[方法]收集正常传代生长的1、10、15、20、25、50代猪胎儿成纤维细胞,分别提取细胞总RNA。采用RT-PCR技术,检测不同代数猪胎儿成纤维细胞中APOE基因的表达。[结果]猪APOE基因在第1代猪胎儿成纤维细胞中表达水平最高,随着细胞代数的增加,表达量逐渐下降,到第50代表达量为最低。[结论]APOE基因在不同代数的猪胎儿成纤维细胞中有选择性表达的趋势。 展开更多

关键词 猪 胎儿成纤维细胞细胞 衰老 APOE 基因表达

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碱性成纤维细胞生长因子对犬牙周成纤维细胞样细胞增殖影响的体内研究 被引量：8

9

作者 杨丕山 孙钦峰 +1 位作者 宋爱梅 葛少华 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期59-61,共3页

目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对犬牙周成纤维细胞样细胞增殖的影响。方法　选用 4只成年杂种犬 ,将其上颌两侧的前磨牙 (P1_3)、第一磨牙 (M1 )、下颌两侧的前磨牙 (P2_4 )、第一磨牙 (M1 )作为实验牙。在每个象限 4个实验... 目的　观察碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对犬牙周成纤维细胞样细胞增殖的影响。方法　选用 4只成年杂种犬 ,将其上颌两侧的前磨牙 (P1_3)、第一磨牙 (M1 )、下颌两侧的前磨牙 (P2_4 )、第一磨牙 (M1 )作为实验牙。在每个象限 4个实验牙的近中根颊侧人工制备“U”形骨缺损 ,并设计为 4组 ,即对照组、bFGF组、ePTFE组、bFGF +ePTFE组。每周手术 1次 ,每次手术做 1个象限的 4个牙位 ,连续 4次。完成 4次手术后 1周处死动物。动物处死前 1h注射尿嘧啶脱氧核苷 (BrdU) ,标本行免疫组化染色 ,显微镜下计数BrdU标记的成纤维细胞样细胞。结果　各组中BrdU+ 细胞数均于术后 2周最多 ,术后 3、4周显著减少。术后 1、2周 ,bFGF组和bFGF +ePTFE组的BrdU+ 细胞明显多于对照组和ePTFE组。结论　牙周术后 2周是牙周功能细胞增殖的活跃期 ,bFGF的局部应用可明显促进牙周愈合早期牙周功能细胞的增殖 。 展开更多

关键词 碱性成纤维细胞生长因子 BFGF 犬 牙周 成纤维细胞样细胞 细胞增殖 免疫组化

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胎牛血清促进色素上皮衍生因子在皮肤角质形成细胞和成纤维细胞中的表达 被引量：3

10

作者 满孝勇 姚永刚 +2 位作者 杨晓红 蔡绥勍 郑敏 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期343-347,共5页

目的:探讨表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响因素。方法:体外培养角质形成细胞和成纤维细胞,并以10%FBS(胎牛血清)刺激,通过免疫荧光和Western blot检测PEDF的表达。结果:PEDF大多位于细胞浆中,但在... 目的:探讨表皮角质形成细胞和真皮成纤维细胞中色素上皮衍生因子(PEDF)表达的影响因素。方法:体外培养角质形成细胞和成纤维细胞,并以10%FBS(胎牛血清)刺激,通过免疫荧光和Western blot检测PEDF的表达。结果:PEDF大多位于细胞浆中,但在细胞核中也有少量表达。细胞浆中PEDF并非均质型分布,而是呈细颗粒状集聚。10%FBS促进角质形成细胞和成纤维细胞中PEDF的集聚和表达,而且这一分布形式不受组胺和佛波肉豆蔻醋酸(PMA)的影响。结论:10%FBS促进角质形成细胞和成纤维细胞中PEDF的集聚和表达。 展开更多

关键词 角蛋白细胞 成纤维细胞/细胞学 眼蛋白质类 真皮/细胞学 丝氨酸内肽酶类 细胞 培养的

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芍药苷上调lncRNA MALAT1抑制Wnt1/β-catenin通路促进人类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞凋亡 被引量：10

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作者 杨帆 沈俊逸 蔡辉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期692-698,共7页

目的探讨芍药苷(PAE)对体外培养类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养RA-FLS,噻唑蓝(MTT)法检测(20、40、80)μmol/L PAE培养24、48、72 h的细胞生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率;合成3条... 目的探讨芍药苷(PAE)对体外培养类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响及其作用机制。方法体外培养RA-FLS,噻唑蓝(MTT)法检测(20、40、80)μmol/L PAE培养24、48、72 h的细胞生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率;合成3条长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1的小干扰RNA(si-MALAT1)片段,脂质体转染48 h后,实时定量PCR检测筛选出敲除效果最佳si-MALAT1。将细胞分对照组、PAE组、si-NC组、si-MALAT1组、PAE联合si-MALAT1组。敲低MALAT1表达后,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时定量PCR检测各组Wnt1、β联蛋白(β-catenin)、胱天蛋白酶3(caspase-3)、caspase-9、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)的mRNA表达;Western blot法检测各组Wnt1、β-catenin、caspase-3、caspase-9、Bcl2、BAX的蛋白表达。结果不同浓度PAE对RA-FLS均有抑制作用,相同浓度RA-FLS活力呈时间依赖性下降;与FLS对照组相比,RA-FLS组MALAT1表达下调,经PAE处理后细胞凋亡率增加;RA-FLS中si-MALAT1组细胞凋亡率最低,而PAE联合si-MALAT1组显著增高;PAE组较对照组Bcl2、Wnt1、β-catenin的mRNA表达降低,caspase-3、caspase-9、BAX的mRNA表达则升高;si-MALAT1组的Bcl2表达显著增高,PAE联合si-MALAT1组的Bcl2表达则显著下调,BAX、caspase-3、caspase-9表达显著升高。结论PAE通过上调MALAT1抑制Wnt1/β-catenin通路促进RA-FLS凋亡。 展开更多

关键词 芍药苷 长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(lncRNA MALAT1) WNT1 β联蛋白(β-catenin) 成纤维细胞样滑膜细胞(FLS) 细胞凋亡

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N-乙酰半胱氨酸通过阻断Nrf2/Keap1通路抑制(H_(2)O_(2))处理的佐剂性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞增殖 被引量：1

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作者 杨珺 黄焱平 +5 位作者 刘梅梅 汪陶荣 张晔 周文瀚 瞿子庭 陈晓宇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期687-692,共6页

目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对低浓度过氧化氢(H_(2)O_(2))处理的佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(AA-FLS)增殖的影响及机制。方法SD大鼠分为正常对照组和模型组(均为10只),模型组采用足趾皮下注射Freund完全佐剂造模,28 d... 目的探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)对低浓度过氧化氢(H_(2)O_(2))处理的佐剂性关节炎(AA)大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(AA-FLS)增殖的影响及机制。方法SD大鼠分为正常对照组和模型组(均为10只),模型组采用足趾皮下注射Freund完全佐剂造模,28 d后处死大鼠。硫代巴比妥酸法检测血清丙二醛(MDA)含量、羟胺法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,免疫组织化学染色法检测踝关节滑膜组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)蛋白表达;体外培养和鉴定AA-FLS,CCK-8法检测(0、0.3、0.9、3、10、30、90、180)μmol/L NAC对5μmol/L H_(2)O_(2)处理的AA-FLS活力的影响,采用MitoSOX线粒体活性氧荧光探针检测AA-FLS中线粒体活性氧(ROS)含量,Western blot法检测(0、3、10、30)μmol/L NAC对低浓度H_(2)O_(2)处理AA-FLS的Nrf2、Keap1蛋白表达的影响。结果与正常对照组比较,AA模型大鼠血清MDA水平增加、SOD、GSH-Px水平降低,滑膜组织中Nrf2表达升高、Keap1表达降低;免疫细胞化学染色证实分离培养的细胞是AA-FLS,NAC可浓度依赖性抑制H_(2)O_(2)处理的AA-FLS增殖,且线粒体ROS含量下降,Nrf2、Keap1蛋白表达降低。结论NAC可抑制H_(2)O_(2)处理后的AA-FLS增殖,其机制可能与阻断Nrf2/Keap1通路有关。 展开更多

关键词 N-乙酰半胱氨酸(NAC) 核因子E2相关因子2(Nrf2) Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1) 氧化应激 佐剂性关节炎(AA) 成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)

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人巩膜成纤维细胞体外三维胶原基质培养系统的构建及其生物力学特性

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作者 胡守龙 李莉 +1 位作者 崔冬梅 曾骏文 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期108-113,共6页

背景眼轴的过度伸长和巩膜组织的扩张是高度近视发病机制研究的热点之一，建立合理的人巩膜成纤维细胞（HSFs）培养体系模型有助于进一步探讨HSFs在高度近视形成过程中与胶原基质相互作用的生物学机制。 目的构建HSFs与Ⅰ型胶原的三维... 背景眼轴的过度伸长和巩膜组织的扩张是高度近视发病机制研究的热点之一，建立合理的人巩膜成纤维细胞（HSFs）培养体系模型有助于进一步探讨HSFs在高度近视形成过程中与胶原基质相互作用的生物学机制。 目的构建HSFs与Ⅰ型胶原的三维培养系统，微观模拟在体巩膜，建立巩膜重塑模型。 方法采集新鲜供体巩膜组织，采用组织块培养法分离和培养HSFs，采用免疫荧光技术检测细胞中波形蛋白和角蛋白的表达以鉴定细胞；获取8周龄SPF级雄性SD大鼠鼠尾腱制备鼠尾胶原，400 μl胶原加入50 μl NaOH（0.1 mol/L）溶液中混匀，加入80 μl 10倍培养液，混匀，溶液pH值约为7。加入1 100 μl终浓度1×106/ml细胞悬液混合形成凝胶培养系统，于倒置相差显微镜下观察HSFs的增生情况和细胞形态，采用IPP-5软件对三维培养的含细胞胶原收缩面积进行测量以分析三维胶原系统的物理特性；采用生物力学试验机对三维胶原系统的生物力学特性进行测定。 结果培养的HSFs波形蛋白呈阳性表达，角蛋白表达阴性。未接种培养细胞的无成纤维细胞SD鼠鼠尾胶原凝胶透明，实验期间性状无明显变化，而含HSFs的三维胶原凝胶随着细胞培养时间的延长细胞数量增加，倒置相差显微镜下可观察到数十层成纤维细胞相互交错呈网状排列，培养后7～14 d凝胶块呈乳白色，凝胶面积保持在正常的10%左右，三维培养系统中的HSFs接种后24 h细胞产生多向性突起，呈双极形或纺锤形。HSFs胶原凝胶复合物的弹性材料蠕变曲线呈非线性（0～100 s）部分与线性（100～600 s）部分，前者是胶原凝胶在短暂应力的作用下本身的弹性变化，后者是胶原凝胶在定力的作用下随拉伸时间的延长而出现的蠕变变化。 结论鼠胶原凝胶对培养的HSFs有良好的生物相容性，HSFs胶原凝胶可形成三维复合物，可呈现机械性生物学特性，是研究成纤维细胞与细胞外基质之间以及细胞之间相互作用的良好模型，可用于巩膜重塑的模拟研究。 展开更多

关键词 成纤维细胞/细胞学 巩膜 人 胶原 SD大鼠 生物力学 细胞培养技术/方法 种植 人巩膜成纤维细胞的胶原蛋白基质

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凝血酶和PAR-1受体对成骨细胞白介素-6和成纤维细胞生长因子-2表达的影响

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作者 宋淑军 王宗烨 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 2009年第12期905-907,共3页

目的探讨凝血酶对小鼠成骨细胞某些因子表达的调节作用。方法使用小鼠颅骨的成骨细胞,通过荧光定量PCR方法和人工合成的PAR-1或PAR-4特异性激活短肽了解受体介导的凝血酶对成骨细胞因子表达的影响。结果凝血酶不影响成骨细胞转化生长因... 目的探讨凝血酶对小鼠成骨细胞某些因子表达的调节作用。方法使用小鼠颅骨的成骨细胞,通过荧光定量PCR方法和人工合成的PAR-1或PAR-4特异性激活短肽了解受体介导的凝血酶对成骨细胞因子表达的影响。结果凝血酶不影响成骨细胞转化生长因子、血小板生长因子A、胰岛素样生长因子-Ⅰ和-Ⅱ的表达,凝血酶和PAR-1受体激活肽可以显著上调成骨细胞成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)和白介素-6(IL-6)的表达,但对IL-6表达的调节作用,凝血酶远较PAR-1激活肽为强,而PAR-4特异性激活肽并不影响这两种因子的表达。结论凝血酶可以促进小鼠成骨细胞FGF-2和IL-6的表达,此作用可能是通过PAR-1和非PAR-1通路介导的,凝血酶对FGF-2表达的调节可能完全是由PAR-1介导的,而凝血酶对IL-6表达的影响部分是由PAR-1介导的,部分可能是由未知受体介导的。PAR-4并不参与介导凝血酶对FGF-2和IL-6表达的调节作用。 展开更多

关键词 凝血酶 成骨细胞 成骨细胞成纤维细胞生长因子-2 白介素-6

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右美托咪定通过抑制TLR4/NF-κB信号通路促进佐剂性膝骨关节炎大鼠成纤维细胞样滑膜细胞凋亡 被引量：16

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作者 邢丹丹 康文越 +4 位作者 王志华 王颖 李娜 吴多志 林慧 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期1479-1486,共8页

目的:观察右美托咪定(DEX)对佐剂性膝骨关节炎(KOA)大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响,并探讨Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路在其中的作用。方法:SD大鼠右侧前、后膝关节处注射弗氏完全佐剂(FCA)建立KOA模型,建模... 目的:观察右美托咪定(DEX)对佐剂性膝骨关节炎(KOA)大鼠成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)凋亡的影响,并探讨Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)信号通路在其中的作用。方法:SD大鼠右侧前、后膝关节处注射弗氏完全佐剂(FCA)建立KOA模型,建模成功大鼠随机分为模型组、DEX组和DEX+TLR4激活剂组,每组10只,另取10只大鼠设为对照组(将FCA注射液换为生理盐水)。DEX组鞘内注射100μL/kgDEX,DEX+TLR4激活剂组在DEX组基础上鞘内注射500μg/kg脂多糖(LPS),对照组和模型组相同部位注射等体积生理盐水,每天1次,连续28 d。以KOA评估值和膝关节直径评价KOA情况;苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠膝关节滑膜组织形态;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记(TUNEL)染色检测膝关节滑膜组织细胞凋亡情况。各组大鼠FLS分离培养后,CCK-8法检测FLS活力;annexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测FLS凋亡情况;Westernblot法检测FLS中TLR4、NF-κB p65、caspase-3和cleavedcaspase-3蛋白水平。结果:建模后,与对照组相比,模型组、DEX组和DEX+TLR4激活剂组KOA评估值和膝关节直径显著升高(P<0.05)。给药后,模型组出现大量炎症细胞浸润现象,纤维组织和滑膜细胞增生明显,呈重度滑膜炎现象;DEX组呈轻度滑膜炎现象;DEX+TLR4激活剂组呈中度滑膜炎现象。与对照组相比,模型组KOA评估值和膝关节直径显著增大(P<0.05);与模型组相比,DEX组KOA评估值和膝关节直径显著减小(P<0.05),膝关节滑膜组织细胞凋亡指数显著升高(P<0.05);与DEX组相比,DEX+TLR4激活剂组KOA评估值和膝关节直径显著增大(P<0.05),膝关节滑膜组织细胞凋亡指数显著降低(P<0.05)。分离培养的细胞均呈纺锤形,血管细胞黏附分子1(VCAM-1)呈阳性表达,即培养细胞为FLS。与对照组相比,模型组FLS活力、FLS中TLR4蛋白水平及核内NF-κB p65蛋白水平显著升高(P<0.05),核外NF-κB p65蛋白水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,DEX组FLS活力、FLS中TLR4蛋白水平及核内NF-κB p65蛋白水平显著降低(P<0.05),FLS凋亡率、cleavedcaspase-3/caspase-3及核外NF-κB p65蛋白水平显著升高(P<0.05);与DEX组相比,DEX+TLR4激活剂组FLS活力、FLS中TLR4蛋白水平及核内NF-κB p65蛋白水平显著升高(P<0.05),凋亡率、cleavedcaspase-3/caspase-3及核外NF-κB p65蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:DEX能够抑制TLR4/NF-κB信号通路蛋白表达,促进KOA大鼠FLS凋亡,实现对KOA大鼠的保护。 展开更多

关键词 右美托咪定 TLR4/NF-κB信号通路 佐剂性膝骨关节炎 成纤维细胞样滑膜细胞 细胞凋亡

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三种转染试剂介导pGPU6/GFP/Neo真核表达载体转染鸡胚成纤维细胞的比较研究 被引量：3

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作者 何星 李华 +5 位作者 邵雁 胡莹 顾子春 陈力 马菁晶 兰志勇 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期660-665,共6页

目的:采用不同转染试剂介导pGPU6/GFP/Neo质粒转染鸡胚成纤维细胞UMNSAH/DF-1,以获得最优化的方法。方法:分别采用不同剂量(1.25μl、2.0μl、2.5μl)的Lipofectamin2000、Gbfectene-Elite及HilyMax转染试剂介导1μg质粒进行转染,观察... 目的:采用不同转染试剂介导pGPU6/GFP/Neo质粒转染鸡胚成纤维细胞UMNSAH/DF-1,以获得最优化的方法。方法:分别采用不同剂量(1.25μl、2.0μl、2.5μl)的Lipofectamin2000、Gbfectene-Elite及HilyMax转染试剂介导1μg质粒进行转染,观察其转染效率,测定其转染细胞存活率。结果:HilyMax组的转染效率为(86.85%±2.32%),较Lipofectamin2000组(48.33%±3.24%)、Gbfectene-Elite组(37.35%±5.41%)高(F=18.882,P<0.05);其中,HilyMax 2.5μl组的转染效率最高为(90.53%±1.15%)。Lipofectamin2000组的细胞存活率(65.76%±5.78%)明显低于HilyMax组(89.54%±0.86%)、Gbfectene-Elite组(82.45%±3.56%)(F=90.676,P<0.05)。结论:HilyMax对于鸡胚成纤维细胞具有最好的转染效率和最低的细胞毒性,推荐使用2.5μl HilyMax:1μg质粒进行鸡胚成纤维细胞的转染。 展开更多

关键词 转染 质粒DNA/遗传学 鸡胚成纤维细胞/细胞学 绿色荧光蛋白质类 细胞毒性

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糖尿病肾病中肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化的意义 被引量：3

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作者 钟雯 曾姣娥 +1 位作者 李又空 宁尚侠 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第11期1929-1932,共4页

目的:通过糖尿病肾病(DN)患者肾脏标本及DN大鼠模型,探讨肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(EMT)在DN中的意义。方法:肾穿刺活检取DN患者肾脏组织,通过Western blot检测E-cadherin及α-SMA蛋白的表达,免疫组化观察E-cadherin及α-SMA... 目的:通过糖尿病肾病(DN)患者肾脏标本及DN大鼠模型,探讨肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化(EMT)在DN中的意义。方法:肾穿刺活检取DN患者肾脏组织,通过Western blot检测E-cadherin及α-SMA蛋白的表达,免疫组化观察E-cadherin及α-SMA的表达,Real time-PCR检测ColⅠRNA基因的表达,并检测空腹血糖、血清肌酐及24h尿蛋白水平。注射链脲佐菌素建立大鼠DN模型,分别于建模后1、2、4、8、12及24周处死动物并取肾脏组织,并用上述同样方法检测相关指标。结果:DN患者中E-cadherin表达下降,α-SMA及ColⅠ mRNA表达上调。DN组大鼠肾组织α-SMA蛋白及ColⅠ mRNA水平明显高于正常对照组(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著低于正常对照组(P<0.05);相关分析结果提示,DN组大鼠α-SMA、ColⅠ的变化趋势与血糖、24h尿道白及肌酐的变化呈正相关;E-cadherin蛋白表达与上述生化指标的变化呈负相关。结论:EMT能够导致DN患者肾功能的下降,在DN进展中起重要作用。 展开更多

关键词 糖尿病肾病 肾小管上皮细胞 肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化

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新风胶囊通过抑制成纤维细胞样滑膜细胞的长链非编码RNA和NF-κB表达减轻类风湿关节炎的炎症反应 被引量：6

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作者 文建庭 刘健 +1 位作者 王馨 王杰 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期640-645,共6页

目的 研究长链非编码RNA ENST00000619282(lncRNA ENST00000619282)、 miR-148b-5p、核因子κB(NF-κB)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)中的表达,以及新风胶囊(XFC)的干预作用。方法 收集正... 目的 研究长链非编码RNA ENST00000619282(lncRNA ENST00000619282)、 miR-148b-5p、核因子κB(NF-κB)在肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的类风湿性关节炎成纤维细胞样滑膜细胞(RA-FLS)中的表达,以及新风胶囊(XFC)的干预作用。方法 收集正常人和XFC治疗前后RA患者外周血单个核细胞(PBMC)各30例,观察ENST00000619282的表达、与临床指标的相关性分析及XFC的治疗作用;建立RA-FLS永生化细胞系,制备XFC含药血清,观察XFC含药血清对RA-FLS ENST00000619282、 miR-148b-5p及NF-κB通路表达的影响。结果 与正常组相比,RA患者ENST00000619282表达显著升高,受试者工作特征(ROC)曲线结果显示ROC曲线下面积(AUC)为0.7166, Spearman相关性分析结果表明,ENST00000619282与病程、 IgA呈负相关,与28关节疾病活动度评分(DAS28)、视觉模拟评分(VAS)、血沉(ESR)、 C反应蛋白(CRP)呈正相关;XFC治疗后,ENST00000619282表达显著下降。CCK-8法结果显示,TNF-α对RA-FLS最佳处理剂量和时间分别为10 ng/mL和48 h, XFC对RA-FLS的最佳干预浓度和时间分别为648 mg/100 gXFC和72 h。实时定量PCR结果显示,与RA-FLS组相比,TNF-α处理的RA-FLS组ENST00000619282、 B细胞κ多肽基因增强子抑制蛋白激酶γ(IKBKG)、核因子κB抑制蛋白激酶α(IKKα)、 IKKβ、核因子κB抑制蛋白α(IκBα)、 NF-κB p65的表达显著升高,miR-148b-5p的表达显著降低;经XFC处理后,ENST00000619282、 IKBKG、 IKKα、 IKKβ、 IκBα、 NF-κB p65的表达显著降低,miR-148b-5p的表达显著升高。免疫荧光结果显示,与RA-FLS相比,TNF-α处理的RA-FLS组IKBKG蛋白的表达显著升高;经XFC处理后,IKBKG蛋白的表达显著降低。结论 ENST00000619282在RA-PBMC和RA-FLS中表达均升高,XFC通过下调ENST00000619282和NF-κB的表达、上调miR-148b-5p的表达,抑制RA炎症免疫反应和细胞凋亡。 展开更多

关键词 新风胶囊(XFC) 成纤维细胞样滑膜细胞(FLS) 外周血单个核细胞(PBMC) ENST00000619282 核因子κB(NF-κB)

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酸性成纤维细胞生长因子诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用及机制 被引量：4

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作者 钟波 张璟 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期778-781,共4页

目的　探讨酸性成纤维细胞生长因子 (AcidfibroblastgrowthfactoraFGF)在大鼠肾小管上皮细胞株 (NRK)转分化中的作用 ,为肾小管 间质纤维化的防治提供理论依据。方法　在NRK细胞的培养基内加入不同剂量的重组人aFGF ,并在Ⅰ型胶原处理... 目的　探讨酸性成纤维细胞生长因子 (AcidfibroblastgrowthfactoraFGF)在大鼠肾小管上皮细胞株 (NRK)转分化中的作用 ,为肾小管 间质纤维化的防治提供理论依据。方法　在NRK细胞的培养基内加入不同剂量的重组人aFGF ,并在Ⅰ型胶原处理过及未处理的玻璃表面 ,无血清培养 6d。使用透射电镜、免疫细胞化学对肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞形态及表型的转变进行评估。结果　不同剂量的aFGF(1、1 0、50ng/ml)处理后的NRK细胞形态和表型发生不同程度的改变 :体积增大、失去尖端 基底极性和微绒毛、细胞延长、具有浸润特征的前后向双末端极性、出现肌动蛋白中间丝结构。免疫组化和Westernblot分析显示加入aFGF后角蛋白表达减少 ,有肌成纤维细胞的特异性标志物α 平滑肌动蛋白 (α SMA)的表达。α SMA阳性细胞的比例与aFGF的浓度呈正相关 ,亲和抗aFGF抗体可消除这种转分化现象。加入aFGF后 ,在玻璃表面α SMA阳性细胞数 (34 4± 0 0 90 ) %较Ⅰ型胶原处理培养表面α SMA阳性细胞数 (74 6± 0 1 0 1 ) %有显著差异 (P <0 0 5)。结论　aFGF在促进肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞转分化的过程中有重要的意义 ,该过程亦与细胞的生长环境有关 。 展开更多

关键词 酸性成纤维细胞生长因子 肾小管上皮细胞 上皮细胞-肌成纤维细胞转分化 肾脏疾病 预后

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异绿原酸A抑制TNF-α引起的MH7A人成纤维细胞样滑膜细胞的增殖和迁移并促进其凋亡 被引量：8

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作者 刘杨 王永萍 +3 位作者 刘明 杨长福 曹峰 梁江 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期693-698,共6页

目的研究异绿原酸A对MH7A人成纤维细胞样滑膜细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法20μg/L肿瘤坏死因子α(TNF-α)体外诱导MH7A细胞后,加入(0、0.04、0.09、0.13、0.16、0.20)μg/μL异绿原酸A处理。采用CCK-8法检测MH7A细胞增殖、Tr... 目的研究异绿原酸A对MH7A人成纤维细胞样滑膜细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法20μg/L肿瘤坏死因子α(TNF-α)体外诱导MH7A细胞后,加入(0、0.04、0.09、0.13、0.16、0.20)μg/μL异绿原酸A处理。采用CCK-8法检测MH7A细胞增殖、TranswellTM小室法检测细胞侵袭和迁移能力,试剂盒检测MH7A细胞胱天蛋白酶3(caspase-3)、活性氧(ROS)、基质金属蛋白酶3(MMP3)的含量,免疫荧光细胞化学染色分别检测MH7A细胞BAX和Bcl2表达。结果20μg/L TNF-α处理明显增加MH7A细胞增殖、侵袭和迁移,减少细胞凋亡。与TNF-α体外诱导相比,异绿原酸A能明显抑制MH7A细胞增殖、侵袭、迁移及MMP3分泌,增加ROS的释放,促进MH7A细胞凋亡。结论异绿原酸A抑制MH7A人成纤维细胞样滑膜细胞增殖、侵袭、迁移并促进其凋亡。 展开更多

关键词 异绿原酸A 成纤维细胞样滑膜细胞 细胞增殖 细胞凋亡 基质金属蛋白酶3(MMP3)

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