成纤维细胞及成纤维细胞条件培养液对L_(833)白血病细胞增殖与分化的影响 被引量：2

1

作者 刘志强 王绮如 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 1994年第1期49-56,共8页

本文通过连续传代的方法建立纯化的成纤维细胞层,观察成纤维细胞及成纤维细胞条件培养液(F-CM)对L_(833)白血病细胞增殖与分化的影响。并对F-CM进行了初步的生物学活性鉴定。结果提示:成纤维细胞对L_(833)细胞增殖有抑制作用;其条件培... 本文通过连续传代的方法建立纯化的成纤维细胞层,观察成纤维细胞及成纤维细胞条件培养液(F-CM)对L_(833)白血病细胞增殖与分化的影响。并对F-CM进行了初步的生物学活性鉴定。结果提示:成纤维细胞对L_(833)细胞增殖有抑制作用;其条件培养液有刺激L_(833)细胞增殖并部分诱导分化作用;成纤维细胞对L_(833)细胞增殖的抑制作用强于混合基质细胞;F-CM促分化效应强于F_0-CM及rmGM-CSF。经琼脂隔离后的成纤维细胞对L_(833)细胞增殖的抑制作用消失。 展开更多

关键词 骨髓成纤维细胞 成纤维细胞条件培养液 粒巨噬系集落刺激因子 白血病细胞分化诱导活性

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骨髓成纤维细胞条件培养液对巨核系细胞体外增殖和血小板体内生成的影响 被引量：4

2

作者 黄艳红 周小莹 +3 位作者 谭孟群 程腊梅 卢光琇 王绮如 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期726-728,共3页

关键词 骨髓成纤维细胞 条件培养液 巨核细胞 血小板 小鼠

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骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成的促进作用 被引量：4

3

作者 周小莹 黄艳红 +2 位作者 王绮如 卢光琇 谭孟群 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期658-661,共4页

目的 :探讨骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成的促进作用。方法 :制备骨髓成纤维细胞条件培养液 (bonemarrowfibroblastsconditionedmedium ,BMF CM) ,分别观察BMF CM或BMF CM联合IL 11对体外培养条件下成熟巨核细胞生成的... 目的 :探讨骨髓成纤维细胞条件培养液对体外巨核系细胞生成的促进作用。方法 :制备骨髓成纤维细胞条件培养液 (bonemarrowfibroblastsconditionedmedium ,BMF CM) ,分别观察BMF CM或BMF CM联合IL 11对体外培养条件下成熟巨核细胞生成的影响及BMF CM对巨核系祖细胞生成的影响 ,并用RT PCR的方法检测Meg 0 1人巨核细胞系细胞NF E2mRNA的表达。结果 :BMF CM促进成熟巨核细胞生成。BMF CM联合IL 11促进成熟巨核细胞生成的效果更佳。BMF CM能促进巨核系祖细胞的生成。将 30 %BMF CM加入Meg 0 1人巨核细胞系培养体系培养 4h ,与对照组相比 ,NF E2表达增强。结论 展开更多

关键词 巨核细胞 骨髓 成纤维细胞 细胞生成 体外 条件培养液 IL—1 RNA RT—PcR 表达

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小鼠胚胎成纤维细胞条件培养液的蛋白质组学初步分析 被引量：1

4

作者 石敏 谢常青 卢光琇 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期11-15,共5页

目的:运用双向电泳、质谱技术对小鼠胚胎成纤维细胞饲养层条件培养液进行蛋白质组学分析,寻找 其中可能具有抑制分化作用的蛋白因子。方法:用60Coγ 射线照射昆明白小鼠胚胎成纤维细胞,制成饲养层,置于 ITS(胰岛素 转铁蛋白 硒钠盐... 目的:运用双向电泳、质谱技术对小鼠胚胎成纤维细胞饲养层条件培养液进行蛋白质组学分析,寻找 其中可能具有抑制分化作用的蛋白因子。方法:用60Coγ 射线照射昆明白小鼠胚胎成纤维细胞,制成饲养层,置于 ITS(胰岛素 转铁蛋白 硒钠盐)培养液中培养24h,收集条件培养液。用冷冻干燥、凝胶过滤层析、冷丙酮沉淀的方 法从条件培养液中提取蛋白质样品,经双向电泳和银染得到双向电泳图谱,用Imagemasterelite2.0软件进行图像 分析。取蛋白点进行酶解,再用CapLC ESI Q TOF质谱进行分析,使用Mascot软件在NCBInr数据库中进行搜索。 结果:双向电泳得到(221±67)个蛋白点的银染图谱,初步分析鉴定13个蛋白点。结论:昆明白小鼠胚胎成纤维细 胞条件培养液中含有β 半乳糖苷结合蛋白、半胱氨酸富集的酸性分泌蛋白(SPARC)等成分。 展开更多

关键词 小鼠 胚胎成纤维细胞 饲养层 条件培养液 双向电泳 质谱技术 干细胞分化抑制因子

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水牛胎儿成纤维细胞低密度培养条件的研究

5

作者 邵晓云 徐绍业 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2010年第2期183-185,共3页

目的:探讨胰岛素和条件培养液对低密度水牛胎儿成纤维细胞增殖的影响。方法:根据是否添加胰岛素(2IU/mL)或条件培养液,以及成纤维细胞的培养密度(1、2、4、6、8个/滴),分15个处理组。结果:胰岛素(2IU/mL)培养液组细胞的平均增殖指数显... 目的:探讨胰岛素和条件培养液对低密度水牛胎儿成纤维细胞增殖的影响。方法:根据是否添加胰岛素(2IU/mL)或条件培养液,以及成纤维细胞的培养密度(1、2、4、6、8个/滴),分15个处理组。结果:胰岛素(2IU/mL)培养液组细胞的平均增殖指数显著高于条件培养液组和对照组(3.49±0.07vs1.47±0.29,2.97±0.17;P<0.05),而条件培养液组细胞的平均增殖指数不及对照组,呈显著差异(1.47±0.29vs2.97±0.17;P<0.05)。同时,细胞增殖指数随细胞密度的逐渐增大而呈上升趋势。结论:适宜浓度的胰岛素对水牛胎儿成纤维细胞的增殖具有促进作用;单个成纤维细胞在体外能培养增殖,但其增殖速度低于群体培养。 展开更多

关键词 胰岛素 条件培养液 培养 水牛 胎儿 成纤维细胞

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内皮克隆形成细胞条件培养基对人真皮成纤维细胞生物学作用的影响 被引量：1

6

作者 王布霖 吴燕虹 +2 位作者 王玉芝 郭晓瑞 李勤 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第6期862-866,共5页

目的:探讨内皮克隆形成细胞条件培养基(ECFCs-CM)对人真皮成纤维细胞(HDFs)生物学作用的影响。方法:从人脐带血中分离内皮克隆形成细胞(ECFCs)并鉴定;采用抗体芯片检测ECFCs-CM中细胞因子表达谱;将ECFCs-CM作用于HDFs,EBM-2作为对照,采... 目的:探讨内皮克隆形成细胞条件培养基(ECFCs-CM)对人真皮成纤维细胞(HDFs)生物学作用的影响。方法:从人脐带血中分离内皮克隆形成细胞(ECFCs)并鉴定;采用抗体芯片检测ECFCs-CM中细胞因子表达谱;将ECFCs-CM作用于HDFs,EBM-2作为对照,采用CCK-8法、细胞划痕实验及流式细胞术分别检测细胞的增殖、迁移及凋亡情况。结果:原代培养细胞符合ECFCs的特征;ECFCs-CM相对高表达PDGF-BB、EGF等细胞因子;实验组HDFs增殖能力和迁移能力均高于对照组,且在血清饥饿环境下实验组HDFs凋亡率低于对照组。结论:ECFCs-CM可促进HDFs增殖和迁移,并可抑制其在血清饥饿环境下的凋亡。 展开更多

关键词 内皮祖细胞 内皮克隆形成细胞 条件培养基 成纤维细胞 创面愈合

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脂质体介导外源基因体外转染牛胎儿成纤维细胞条件的优化 被引量：23

7

作者 李扬 吴凯峰 +2 位作者 郭旭东 郭继彤 旭日干 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期653-655,共3页

通过脂质体(FuGENE-6)介导,将真核表达载体pEGFP-C1成功导入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,探讨影响外源基因转染效率的参数,如DNA和脂质体的用量、转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA与脂质体复合物的时间长度。通过实验发现,绿色荧光蛋白(... 通过脂质体(FuGENE-6)介导,将真核表达载体pEGFP-C1成功导入体外培养的牛胎儿成纤维细胞,探讨影响外源基因转染效率的参数,如DNA和脂质体的用量、转染的细胞数量以及细胞暴露于DNA与脂质体复合物的时间长度。通过实验发现,绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein,GFP)基因的表达随DNA、脂质体量的增加而增加,延长细胞暴露时间反而使转染效率下降,转染细胞数适当才能得到较高的转化率。 展开更多

关键词 脂质体介导 外源基因体外转染 牛胎儿成纤维细胞 优化 绿色荧光蛋白 转染条件

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电转液L对绵羊成纤维细胞电转染条件优化 被引量：4

8

作者 李炜杰 杨娇 +6 位作者 王聪慧 罗健 周平 黄威 姚建龙 何高明 皮文辉 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1481-1485,共5页

【目的】采用实验室配制的电转液L,优化绵羊成纤维细胞的转染效率。【方法】利用Lonza 4D—Nucleofector设备,针对实验室配制的电转液L,将P max绿色荧光蛋白表达质粒导入绵羊成纤维细胞中,通过流式细胞仪测定和荧光显微镜观测细胞转染... 【目的】采用实验室配制的电转液L,优化绵羊成纤维细胞的转染效率。【方法】利用Lonza 4D—Nucleofector设备,针对实验室配制的电转液L,将P max绿色荧光蛋白表达质粒导入绵羊成纤维细胞中,通过流式细胞仪测定和荧光显微镜观测细胞转染效率。【结果】通过测定细胞转染效率,得到较佳电转方案:L电转液100μL悬浮绵羊成纤维细胞,采用CZ-167电转程序,质粒浓度4 g,2×106个细胞,电击一次,电转后37℃放置10 min可获得理想的转染效率。 展开更多

关键词 绵羊成纤维细胞 细胞转染 转染效率 条件优化

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体外培养视网膜色素上皮细胞对成纤维细胞生长的促进作用 被引量：2

9

作者 樊郑军 魏厚仁 +1 位作者 王强 陈德权 《眼科研究》 CSCD 1995年第4期244-246,共3页

观察体外培养的视网膜色素上皮细胞条件培养液对成纤维细胞生长的影响。利用￣３Ｈ胸嘧啶核苷掺入法和细胞计数法首次显示了视网膜色素上皮细胞条件培养液对成纤维细胞生长有促进作用。采用ＳＤＳ——聚丙烯酰胺凝胶电泳从视网膜色素上... 观察体外培养的视网膜色素上皮细胞条件培养液对成纤维细胞生长的影响。利用￣３Ｈ胸嘧啶核苷掺入法和细胞计数法首次显示了视网膜色素上皮细胞条件培养液对成纤维细胞生长有促进作用。采用ＳＤＳ——聚丙烯酰胺凝胶电泳从视网膜色素上皮细胞条件培养液中分离出一些细胞分泌性蛋白质，其中某些可能具有细胞因子作用。这些结果有助于增殖性玻璃体视网膜病变的病因学研究。 展开更多

关键词 视网膜 色素上皮 条件培养液 成纤维细胞

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不同pH值对鸡胚成纤维细胞培养的影响 被引量：7

10

作者 袁建琴 高斌战 郑明学 《养殖与饲料》 2010年第9期1-5,共5页

利用不同的pH对鸡胚成纤维细胞进行培养,观察细胞在不同pH条件下的生长状况,研究不同pH对于细胞培养的影响。设置pH值为6.4、6.8、7.2、7.4、7.6和7.8的六个培养条件分别对鸡胚成纤维细胞进行培养,同时做重复对照,给每组中生长良好的细... 利用不同的pH对鸡胚成纤维细胞进行培养,观察细胞在不同pH条件下的生长状况,研究不同pH对于细胞培养的影响。设置pH值为6.4、6.8、7.2、7.4、7.6和7.8的六个培养条件分别对鸡胚成纤维细胞进行培养,同时做重复对照,给每组中生长良好的细胞接毒,观察其接毒后在不同pH下的生长状况。通过观察可以看出细胞的耐酸性要强于耐碱性,而且鸡胚成纤维细胞在7.4～7.6的范围内生长情况最为良好和稳定。 展开更多

关键词 不同PH值条件 鸡胚成纤维细胞 培养 影响

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牵拉力对共培养的表皮干细胞及成纤维细胞迁移行为的影响

11

作者 吕东媛 霍波 +3 位作者 高宇欣 孙树津 陈娟 龙勉 《医用生物力学》 EI CAS CSCD 2009年第S1期63-64,共2页

关键词 表皮干细胞 真皮成纤维细胞 共培养 迁移行为 创面愈合 力学刺激 相互作用 细胞组成 培养条件 调控机制

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牙囊细胞条件培养液在大鼠脂肪间充质干细胞向成牙骨质分化中的作用 被引量：1

12

作者 顾斌 刘娜 +4 位作者 周霞 温秀杰 聂鑫 安建平 邓蔓菁 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2014年第4期298-301,305,共5页

目的:探讨牙囊细胞条件培养液(DFCCM)在诱导大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)向成牙骨质样细胞分化中的作用。方法:分离培养大鼠脂肪间充质干细胞、牙囊细胞,制备DFCCM。用DFCCM诱导ADSCs,通过MTT检测ADSCs增殖能力的变化;免疫荧光及实时定... 目的:探讨牙囊细胞条件培养液(DFCCM)在诱导大鼠脂肪间充质干细胞(ADSCs)向成牙骨质样细胞分化中的作用。方法:分离培养大鼠脂肪间充质干细胞、牙囊细胞,制备DFCCM。用DFCCM诱导ADSCs,通过MTT检测ADSCs增殖能力的变化;免疫荧光及实时定量PCR方法检测成骨关键蛋白-骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALP)及成牙骨质关键蛋白-牙骨质附着蛋白(CAP),牙骨质蛋白(CP23)的情况。结果:牙囊细胞条件培养液诱导ADSCs后可抑制ADSCs的增殖能力。DFCCM诱导7d后,ADSCs细胞浆内表达OCN及CAP。同时DFCCM诱导ADSCs后CAP,CP23,ALP及OCN mRNA表达水平显著高于对照组。结论:牙囊细胞条件培养液构建的微环境可使ADSCs向成牙骨质样细胞分化,为干细胞介导的牙骨质再生提供新的思路。 展开更多

关键词 脂肪间充质干细胞 牙囊细胞条件培养液 成牙骨质样细胞

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人牙髓细胞条件培养液对人牙囊细胞成骨分化作用的体外研究 被引量：1

13

作者 陶昱 喻金凤 +1 位作者 陈军 余勇 《实用口腔医学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第3期339-343,共5页

目的:探索人牙髓细胞条件培养液(HDPSCs-CM)对人牙囊细胞(HDFSCs)向成骨分化的作用。方法:利用胶原酶消化法获得HDFSCs,经纯化鉴定后培养于HDPSCs-CM中;CCK-8检测HDFSCs增殖活性,观察细胞形态改变;碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红S染色定... 目的:探索人牙髓细胞条件培养液(HDPSCs-CM)对人牙囊细胞(HDFSCs)向成骨分化的作用。方法:利用胶原酶消化法获得HDFSCs,经纯化鉴定后培养于HDPSCs-CM中;CCK-8检测HDFSCs增殖活性,观察细胞形态改变;碱性磷酸酶(ALP)染色、茜素红S染色定性分析细胞成骨能力的改变。qRT-PCR检测HDFSCs中骨膜蛋白(POSTN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)以及骨桥蛋白(OPN)的mRNA表达情况。结果:经HDPSCs-CM诱导后,HDFSCs形态发生成牙骨质或成骨样改变;诱导组HDFSCs增殖活性受到明显抑制(P<0.05或P<0.01);诱导组ALP染色强于对照组,茜素红S染色矿化结节多于对照组;诱导组POSTN、Col-Ⅰ、ALP、BSP、OPN的表达量明显增高(P<0.05或P<0.01)。结论:HDPSCs-CM能促进HDFSCs成骨分化。 展开更多

关键词 人牙囊细胞(HDFSCs) 人牙髓细胞条件培养液(HDPSCs-CM) 微环境 成骨分化

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小鼠乳鼠心脏成纤维细胞的原代培养及鉴定 被引量：3

14

作者 张毅 孟祥雯 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期344-348,共5页

目的探索更高效、稳定的小鼠乳鼠心脏成纤维细胞原代培养的方法。方法采用Ⅱ型胶原蛋白酶多次消化法,通过控制乳鼠日龄、胶原蛋白酶含量以及消化时间这三个条件,对小鼠乳鼠心脏成纤维细胞的提取进行优化。使用显微观察心脏成纤维细胞的... 目的探索更高效、稳定的小鼠乳鼠心脏成纤维细胞原代培养的方法。方法采用Ⅱ型胶原蛋白酶多次消化法,通过控制乳鼠日龄、胶原蛋白酶含量以及消化时间这三个条件,对小鼠乳鼠心脏成纤维细胞的提取进行优化。使用显微观察心脏成纤维细胞的形态,CCK-8法检测细胞活性,免疫荧光细胞化学染色检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达鉴定细胞纯度。结果1 d日龄、1 g/L胶原蛋白酶、每次消化2 min,所得细胞活力最佳,增殖能力最强,且此条件下提取的小鼠乳鼠原代心脏成纤维细胞纯度高于95%。结论建立了高效、稳定的小鼠乳鼠原代心脏成纤维细胞培养方法。 展开更多

关键词 心脏成纤维细胞 原代培养 条件优化

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骨髓内皮细胞条件培养液对巨核系细胞体外增殖的影响 被引量：2

15

作者 黄艳红 王绮如 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期386-388,共3页

目的 :探讨骨髓内皮细胞条件培养液 (E CM)对巨核系细胞体外增殖的调节作用。方法 :分离纯化骨髓内皮细胞和骨髓成纤维细胞 ,分别收集其无血清条件培养液 ,比较两种无血清条件培养液对体外扩增成熟巨核细胞和巨核系祖细胞的作用。结果 :... 目的 :探讨骨髓内皮细胞条件培养液 (E CM)对巨核系细胞体外增殖的调节作用。方法 :分离纯化骨髓内皮细胞和骨髓成纤维细胞 ,分别收集其无血清条件培养液 ,比较两种无血清条件培养液对体外扩增成熟巨核细胞和巨核系祖细胞的作用。结果 :E CM和骨髓成纤维细胞条件培养液 (F CM )对成熟巨核细胞及巨核系祖细胞有体外扩增作用 ;E CM对巨核系祖细胞的扩增作用明显优于F CM (P <0 .0 5 ) ;对成熟巨核细胞的扩增作用弱于F CM(P <0 .0 1 )。结论 :E CM对巨核系细胞 。 展开更多

关键词 条件培养液 巨核系祖细胞 体外扩增 体外增殖 骨髓内皮细胞 巨核细胞 成纤维细胞 分离纯化 成熟

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小鼠皮肤成纤维细胞的体细胞核移植 被引量：2

16

作者 曹鸿国 张涌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期559-563,共5页

取成年小鼠唇部皮肤进行培养, 分离成纤维细胞并血清饥饿培养1 周, 用作核供体。对成年小鼠进行超排, 取卵母细胞用作核受体,核移植重构胚经SrCl2 激活处理6 h后, 同mM16培养液和小鼠输卵管上皮细胞共培养, 把发育到早期囊胚的重构胚转... 取成年小鼠唇部皮肤进行培养, 分离成纤维细胞并血清饥饿培养1 周, 用作核供体。对成年小鼠进行超排, 取卵母细胞用作核受体,核移植重构胚经SrCl2 激活处理6 h后, 同mM16培养液和小鼠输卵管上皮细胞共培养, 把发育到早期囊胚的重构胚转移至小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上, 添加ES细胞条件培养液,消化分离ICM,然后接种培养, 对孵出的ES细胞样集落进行鉴定培养。结果显示, 小鼠唇部皮肤成纤维细胞为核供体, 核移植重构胚2 细胞率为54 05%, 桑椹胚率17 14%, 囊胚率6 90 %, 对照组卵丘细胞的核移植重构胚2 细胞率为60 00%, 桑椹胚率21 85%, 囊胚率11 69 %, 但2种供体细胞在支持核移植重构胚发育能力上差异不显著。成纤维细胞重构囊胚中6个囊胚分离出ES细胞样集落, 3个ES细胞样集落可稳定传代; 对照组卵丘细胞重构囊胚中9个囊胚中分离出ES细胞样集落, 5个ES细胞样集落可稳定传代。从核移植重构胚中分离出的ES细胞样集落具有岛状或巢状群体生长形态,生长旺盛的集落可自发分化成单个散在或片状存在的上皮样或梭形细胞, 碱性磷酸酶检测为阳性, 常规冻存复苏, 仍显示ES细胞特征。 展开更多

关键词 皮肤成纤维细胞 体细胞核移植 ES细胞 输卵管上皮细胞 胎儿成纤维细胞 成年小鼠 2-细胞 卵丘细胞 重构胚 SrCl2 条件培养液 碱性磷酸酶 血清饥饿 卵母细胞 早期囊胚 接种培养 发育能力 供体细胞 生长形态 细胞特征 核供体

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不同方法制备鸡胚成纤维细胞的比较试验 被引量：2

17

作者 牛家强 支海兵 +2 位作者 徐业芬 陈国先 吴华伟 《河北畜牧兽医》 2003年第5期18-19,共2页

采用传统法、半胚法和全胚法制备鸡胚成纤维细胞(CEF)单层。结果表明:在同等条件下,均以成纤维细胞为主,并伴有少量的上皮细胞,仅有全胚法含有极少量的肝细胞;培养时细胞贴壁和生长状况无明显差异,其产量稍有差异(全胚法>半胚法>... 采用传统法、半胚法和全胚法制备鸡胚成纤维细胞(CEF)单层。结果表明:在同等条件下,均以成纤维细胞为主,并伴有少量的上皮细胞,仅有全胚法含有极少量的肝细胞;培养时细胞贴壁和生长状况无明显差异,其产量稍有差异(全胚法>半胚法>传统法)。 展开更多

关键词 鸡胚成纤维细胞 制备 上皮细胞 肝细胞 产量 培养液

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胃硬癌细胞通过抑制成纤维细胞自噬诱导其衰老的机制 被引量：2

18

作者 韩方 姜飞 +1 位作者 张宇华 张成武 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期985-988,998,共5页

目的检测胃硬癌的条件培养基(CM)对成纤维细胞自噬和衰老的影响,探讨胃硬癌细胞对成纤维细胞的影响及机制。方法利用胃硬癌细胞株KATOⅢ和NUGC4的CM作用于人正常成纤维细胞系FEF3和WI38。共培养并观察其形态学改变,检测增殖情况。Wester... 目的检测胃硬癌的条件培养基(CM)对成纤维细胞自噬和衰老的影响,探讨胃硬癌细胞对成纤维细胞的影响及机制。方法利用胃硬癌细胞株KATOⅢ和NUGC4的CM作用于人正常成纤维细胞系FEF3和WI38。共培养并观察其形态学改变,检测增殖情况。Western blotting检测凋亡、自噬、衰老相关蛋白的变化。SA-β-Gal染色研究成纤维细胞衰老情况。检测雷帕霉素和CM作用下对成纤维细胞衰老和自噬的影响。结果 CM作用下成纤维细胞出现了细胞质空泡化、核固缩等特征性改变,同时自噬被抑制。随着作用时间增加,成纤维细胞数量减少,衰老相关蛋白p21表达上调。SA-β-Gal染色后残存的细胞表现衰老的特征。采用雷帕霉素处理成纤维细胞诱导自噬后,自噬被加强,而衰老被抑制。结论胃硬癌细胞通过抑制成纤维细胞的自噬,诱导成纤维细胞提前衰老。 展开更多

关键词 胃硬癌 成纤维细胞 自噬 衰老 条件培养基

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六君子汤乙酸乙酯提取物干预CAFs条件培养基下EC9706细胞能量代谢的机制研究

19

作者 陈星 娄翔宇 +5 位作者 尚艺婉 周哲旭 刘洋 刘娅茹 胡啸博 陈玉龙 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2023年第11期17-24,共8页

目的探索六君子汤乙酸乙酯提取物(EAELD)对癌相关成纤维细胞(CAFs)条件培养基下食管癌EC9706细胞能量代谢影响的分子机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测EAELD对EC9706增殖活性的影响;比色法检测EAELD对CAFs条件培养基(CAFM)下EC9706细胞上清... 目的探索六君子汤乙酸乙酯提取物(EAELD)对癌相关成纤维细胞(CAFs)条件培养基下食管癌EC9706细胞能量代谢影响的分子机制。方法噻唑蓝(MTT)法检测EAELD对EC9706增殖活性的影响;比色法检测EAELD对CAFs条件培养基(CAFM)下EC9706细胞上清中乳酸及葡萄糖含量的影响;Seahorse能量代谢分析系统检测EAELD对CAFM下EC9706细胞能量代谢的影响;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测EAELD对能量代谢相关分子mRNA及蛋白表达的影响。结果与DMEM相比,除10μg/mL组外,EAELD对EC9706细胞增殖活性均有明显抑制作用(P<0.05),选取抑制浓度(IC30)25μg/mL,半抑制浓度(IC50)40μg/mL,作为低、高剂量组进行后续实验。在CAFM培养的EC9706细胞各组中,EAELD低、高剂量组都能显著降低非线粒体耗氧、基础呼吸值、最大呼吸值、合成ATP耗氧量、备用呼吸能力、基础糖酵解、补偿糖酵解、糖酵解潜能(P<0.01),减少EC9706细胞上清乳酸含量(P<0.01),下调GLUT1的mRNA表达(P<0.05,P<0.01),下调p-PKM2、HK2、PKM2、MCT1蛋白表达(P<0.01);EAELD高剂量组能够下调EC9706细胞的线粒体耗氧与基础糖酵解比值(P<0.05),减少EC9706细胞葡萄糖摄取(P<0.05),下调p-PKM2、GLUT1的蛋白表达(P<0.01,P<0.05);EAELD低剂量组能够下调MCT1的mRNA表达(P<0.05)。结论六君子汤乙酸乙酯提取物能够干预CAFs条件培养基下EC9706细胞的能量代谢,其机制可能与EAELD调控HK2、PKM2、GLUT1、MCT1、MCT4的mRNA和蛋白表达相关。 展开更多

关键词 癌相关成纤维细胞 条件培养基 六君子汤乙酸乙酯提取物 能量代谢 食管癌

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几种培养方法对ES/GFP小鼠胚胎干细胞系增殖和分化能力作用比较 被引量：1

20

作者 曹娟 徐海伟 +2 位作者 唐军 范晓棠 吴旋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第19期1775-1777,共3页

目的　观察采用不同的饲养层和培养基对永久表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞系ES/GFP的增殖、分化和绿色荧光蛋白表达的影响。方法　分别采用小鼠胚胎成纤维细胞和人胚胎成纤维细胞为饲养层 ,采用含重组人白血病抑制因子的DMEM/FCS培... 目的　观察采用不同的饲养层和培养基对永久表达绿色荧光蛋白的小鼠胚胎干细胞系ES/GFP的增殖、分化和绿色荧光蛋白表达的影响。方法　分别采用小鼠胚胎成纤维细胞和人胚胎成纤维细胞为饲养层 ,采用含重组人白血病抑制因子的DMEM/FCS培养基和Buffalo条件培养基培养ES/GFP细胞系。N2 无血清培养基诱导ES/GFP小鼠胚胎干细胞为神经前体细胞 ,Nestin免疫组化染色。结果　小鼠胚胎成纤维细胞和人胚胎成纤维细胞为饲养层 ,常规LIF培养液和Buffalo条件培养基均能较好维持ES/GFP细胞的高增殖能力和全能分化能力 ,对绿色荧光蛋白的表达和胚体形成、神经前体细胞的分化无明显差异。结论　人胚胎成纤维细胞可替代小鼠胚胎成纤维细胞作为ES/GFP饲养层 ,减少饲养层制备的工作量和污染的机会。Buffalo条件培养基可完全替代LIF培养基 ,降低细胞培养的成本。 展开更多

关键词 干细胞 ES 饲养层 分化 增殖 表达 小鼠胚胎 GFP 人胚胎成纤维细胞 条件培养基

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