抗牛碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体的制备及初步鉴定 被引量：4

1

作者 刘士德 张建华 +2 位作者 秦志宏 余玉雯 邢苗 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期393-394,399,共3页

目的 :制备抗牛碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)单克隆抗体(mAb) ,并鉴定其亚类 ,建立ELISA检测bFGF含量的方法。方法 :应用基因重组的牛bFGF免疫BALB/c小鼠 ,通过细胞融合 ,建立分泌抗bFGFmAb的杂交瘤细胞株。应用免疫沉淀技术鉴定抗bFG... 目的 :制备抗牛碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)单克隆抗体(mAb) ,并鉴定其亚类 ,建立ELISA检测bFGF含量的方法。方法 :应用基因重组的牛bFGF免疫BALB/c小鼠 ,通过细胞融合 ,建立分泌抗bFGFmAb的杂交瘤细胞株。应用免疫沉淀技术鉴定抗bFGFmAb的亚类 ;应用基因重组的牛bFGF免疫青紫蓝兔 ,制备抗bFGF的多抗血清 ;将抗bFGFmAb及兔抗血清用ProteinA亲和层析纯化后 ,建立检测bFGF含量的ELISA方法。结果 :共获得 3株稳定分泌抗bFGFmAb的杂交瘤细胞株 ;它们所分泌的mAb均为IgG1;采用夹心ELISA法检测bFGF的敏感性达ng水平。 结论 :抗bFGFmAb(IgG1) 展开更多

关键词 喊性成纤维细胞生长因子 单克隆抗体 ELISA

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碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体ELISA微量检测技术 被引量：3

2

作者 向军俭 徐晓鹏 +2 位作者 王宏 邓宁 杨红宇 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期337-341,共5页

目的:用本室制备的单克隆抗体建立间接ELISA检测微量bFGF的技术。方法:将抗重组牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的杂交瘤细胞株,经再克隆化,选择高亲和力的抗bFGF杂交瘤细胞2H2。用ProteinA亲和层析法对2H2腹水型单抗进行纯化。结果:用2... 目的:用本室制备的单克隆抗体建立间接ELISA检测微量bFGF的技术。方法:将抗重组牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的杂交瘤细胞株,经再克隆化,选择高亲和力的抗bFGF杂交瘤细胞2H2。用ProteinA亲和层析法对2H2腹水型单抗进行纯化。结果:用2H2mAb建立了高灵敏度的间接、竞争ELISA检测bFGF方法,灵敏度分别达到10和1.0pg/孔,并用间接ELISA检测神经胶质瘤细胞SWO38上清中的bFGF含量。结论:为实验研究和临床应用提供了微量bFGF的检测方法。 展开更多

关键词 碱性成纤维细胞生长因子(bfgf) 酶联免疫吸附测定 单克隆抗体

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碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体联合洛铂对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响 被引量：2

3

作者 赵凤芝 赵建夫 +8 位作者 孙一帆 苏嘉敏 全强 罗镇明 向军俭 王宏 傅岳武 谭小玲 徐萌 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期783-788,共6页

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(monoclonal antibody to basic fibroblast growth factor,b FGF m Ab)联合洛铂(lobaplatin,LBP)对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法:CCK-8法检测药物对A549细胞活性的影响。... 目的:研究碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(monoclonal antibody to basic fibroblast growth factor,b FGF m Ab)联合洛铂(lobaplatin,LBP)对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法:CCK-8法检测药物对A549细胞活性的影响。Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率。激光共聚焦显微镜观察细胞核的形态。Western blotting检测细胞内凋亡相关蛋白表达。结果:CCK-8法检测结果显示,细胞培养48 h后,bFGF mAb组和LBP组的细胞增殖受到抑制,但两药联用后的增殖抑制作用明显高于单用LBP及bFGF mAb(P<0.05)。Annexin V-FITC/PI结果显示,联合组早期、晚期凋亡率分别为(27.83±1.23)%和(39.32±1.01)%,与b FGF mAb的(6.25±0.19)%、(14.54±0.25)%和LBP的(16.54±0.39)%、(21.02±0.98)%相比,明显高于单药组的抑制率(P<0.01)。激光共聚焦显微镜显示联合用药诱导的细胞核裂解率较单用b FGF m Ab及LBP的细胞核裂解率明显增多。Western blotting检测结果显示联合组BAX、Caspase-3、Caspase-9、PARP表达量较药物单用组明显增加,而Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、cleaved-PARP表达量明显降低。结论:b FGF m Ab联合LBP通过抑制Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、cleaved-PARP表达,上调BAX、Caspase-3、Caspase-9和PARP蛋白表达,对肺腺癌A549细胞起到抑制增殖和诱导凋亡的作用。 展开更多

关键词 碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体 洛铂 肺腺癌 细胞增殖 凋亡

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碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体在小鼠体内药代动力学研究 被引量：1

4

作者 潘兰红 徐萌 +6 位作者 曾世彬 陈文慧 李汉初 盛良翮 朱新海 向军俭 邓宁 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1582-1585,共4页

目的研究碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(basic fibroblast growth factor monoclonal antibody,bFGF-mAb)在小鼠体内的药代动力学特征。方法首先制备bF-GF-mAb并纯化,然后用氯胺T法制备125I-bFGF-mAb,γ放射免疫计数仪检测三氯醋酸(... 目的研究碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(basic fibroblast growth factor monoclonal antibody,bFGF-mAb)在小鼠体内的药代动力学特征。方法首先制备bF-GF-mAb并纯化,然后用氯胺T法制备125I-bFGF-mAb,γ放射免疫计数仪检测三氯醋酸(TCA)沉淀前后血浆、组织的放射性计数,用3P97软件拟合药代动力学房室模型,并计算相应药代动力学参数。结果氯胺T法制备的125I-bFGF-mAb,其放化纯度≥98%,TCA沉淀率(90.8±10.2)%。T12α为0.1～0.2 h,T12β为1.05～1.84 h和T 12γ为81.6～90.3 h。125 I-bFGF-mAb在小鼠的心、肝、肺等组织器官中有较高的放射性计数,在脑和眼中放射性计数较低。结论 125I-bFGF-mAb的药代动力学符合三室模型,且具有组织分布特异性。 展开更多

关键词 药代动力学 碱性成纤维细胞生长因子 单克隆抗体 同位素示踪法 血药浓度 组织分布 小鼠

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人成纤维细胞生长因子-21单克隆抗体的制备及抗原表位的确定 被引量：2

5

作者 郝智超 徐黎明 +3 位作者 白银 王琪 王文飞 李德山 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期834-837,共4页

目的 制备小鼠抗人成纤维细胞生长因子（hFGF）-21单克隆抗体（mAb）, 通过细菌展示确定该mAb的抗原表位。方法 用hFGF-21作为检测和免疫抗原, 间接ELISA筛选分泌抗人hFGF-21 mAb的杂交瘤细胞株; 用FITC标记该mAb, 并克隆hFGF-21的不同... 目的 制备小鼠抗人成纤维细胞生长因子（hFGF）-21单克隆抗体（mAb）, 通过细菌展示确定该mAb的抗原表位。方法 用hFGF-21作为检测和免疫抗原, 间接ELISA筛选分泌抗人hFGF-21 mAb的杂交瘤细胞株; 用FITC标记该mAb, 并克隆hFGF-21的不同片段到展示载体Apex上, 通过流式细胞仪筛选其抗原表位。结果 成功筛选出1株抗hFGF-21抗体的细胞株, 其分泌抗体重链的亚型为IgG 2b, 轻链为Kappa链; 该杂交瘤细胞株腹水的效价为1∶4.096×10^6; 传30代及液氮中保存3个月, 该细胞株能稳定分泌抗hFGF-21 mAb, 且效价稳定; Western blot法检测证明该抗体与人FGF-21有很好的特异性; 该mAb与小鼠FGF-21有交叉反应; 通过流式细胞仪对抗原表位的筛选, 该mAb可与hFGF-21下游的第107-121个氨基酸反应。结论 成功的制备出特异性、高稳定性的小鼠抗hFGF-21 mAb, 确定了该mAb的抗原表位在第107～121位氨基酸。 展开更多

关键词 人成纤维细胞生长因子-21 单克隆抗体 细菌展示 流式细胞术

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成纤维细胞生长因子20单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：1

6

作者 唐禄 董丽平 +3 位作者 尹茉莉 刘磊 董媛 王会岩 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期179-185,共7页

构建表达重组人成纤维细胞生长因子20(fibroblast growth factor 20,FGF20)原核表达载体,并制备抗FGF20单克隆抗体,为开发新的药物奠定基础。构建pET24a-SUMO-hFGF20原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。经镍NTA亲和层析... 构建表达重组人成纤维细胞生长因子20(fibroblast growth factor 20,FGF20)原核表达载体,并制备抗FGF20单克隆抗体,为开发新的药物奠定基础。构建pET24a-SUMO-hFGF20原核表达载体,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。经镍NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,SUMO酶酶切后,再次经镍NTA亲和层析柱纯化,SDS-PAGE法检测目的蛋白纯度。以重组FGF20蛋白免疫Balb/c小鼠,常规方法制备FGF20单克隆抗体,采用protein G柱分离纯化,SDS-PAGE法检测抗体纯度,ELISA法检测抗体效价和亚型,Western blot和SPR法测定抗体亲和力。成功构建pET24a-SUMO-hFGF20重组质粒。经分离纯化后获得FGF20蛋白相对分子质量为23 kD。得到1株ELISA检测强阳性杂交瘤细胞株,单克隆抗体纯化后,效价为1:25600,亚型为IgG1,可以与商品化抗原结合,亲和力为1.07×10^(-7)mol/L。通过构建、表达和纯化重组蛋白,成功制备出抗FGF20蛋白高亲和力单克隆抗体。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子20 原核表达 蛋白纯化 单克隆抗体

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碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)抗体研究进展 被引量：9

7

作者 刘李登 向军俭 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期379-381,共3页

关键词 碱性成纤维细胞生长因子 单克隆抗体 肿瘤 抗体药物

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碱性成纤维生长因子单克隆抗体联合伊立替康抑制小细胞肺癌H223细胞的增殖 被引量：3

8

作者 廖湘晖 徐萌 向军俭 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1535-1539,共5页

目的探讨碱性成纤维生长因子(bFGF)单克隆抗体与伊立替康联合应用体外对抑制小细胞肺癌细胞株增殖和凋亡的作用及可能机制。方法 CCK8检测bFGF单克隆抗体联合伊立替康对小细胞肺癌株H223增殖的抑制作用。Annegin V-FITC/PI染色流式细胞... 目的探讨碱性成纤维生长因子(bFGF)单克隆抗体与伊立替康联合应用体外对抑制小细胞肺癌细胞株增殖和凋亡的作用及可能机制。方法 CCK8检测bFGF单克隆抗体联合伊立替康对小细胞肺癌株H223增殖的抑制作用。Annegin V-FITC/PI染色流式细胞仪检测新型bFGF单克隆抗体联合伊立替康对小细胞肺癌株H223凋亡的影响。Western blotting分析bFGFm Ab联合CPT-11对AKT和ERK1/2磷酸化水平的影响。结果 bFGF单克隆抗体、伊立替康剂量依赖性抑制小细胞肺癌株H223的增殖,bFGF单克隆抗体组、伊立替康组及bFGF单克隆抗体联合伊立替康组对小细胞肺癌株H223的增殖抑制率分别为18.73%、21.96%、54.30%,联合用药组抑制率明显高于单药组(P<0.05)。bFGF单克隆抗体、伊立替康剂量依赖性诱导小细胞肺癌株H223的凋亡,bFGF单克隆抗体组、伊立替康组及bFGF单克隆抗体联合伊立替康组诱导小细胞肺癌株H223的早期凋亡率分别为2.7%、4.3%、6.5%,联合用药组凋亡率明显高于单药组(P<0.05)。bFGF单克隆抗体组、CPT-11组及bFGF单克隆抗体联合CPT-11组可明显抑制p-AKT蛋白和p-ERK1/2蛋白的水平,差异有显著性,而对AKT、ERK1/2蛋白则影响不大。bFGF抗体联合CPT-11一方面通过抑制p-AKT蛋白和p-ERK1/2蛋白的水平来抑制肿瘤细胞的增殖和转移。结论 bFGF单克隆抗体联合伊立替康对小细胞肺癌株H223具有协同抑制作用,其机制与抑制细胞增殖和促进细胞凋亡有关。信号通路分析结果表明bFGF单克隆抗体联合伊立替康能有效阻断与bFGF相关的MAPK/ERK和PI3K/AKT信号通路。 展开更多

关键词 碱性成纤维生长因子 bfgf单克隆抗体 伊立替康 小细胞肺癌 增殖 凋亡 MAPK/ERK1/2 PI3K/AKT

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双抗体夹心ELISA检测碱性成纤维细胞生长因子 被引量：2

9

作者 徐晓鹏 向军俭 +4 位作者 李贵生 邓宁 唐勇 王宏 杨红宇 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期268-269,共2页

关键词 碱性成纤维细胞生长因子 单克隆抗体 ELISA

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肺炎支原体肺部感染大鼠肺组织中碱性成纤维细胞生长因子表达的免疫组化研究 被引量：1

10

作者 刘建 彭东信 +3 位作者 刘晓晴 朱朝霞 车东媛 赵时宇 《中国人兽共患病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期507-510,共4页

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在反复肺炎支原体肺部感染导致肺间质纤维化的发病机制中的作用。方法 给大鼠于24周内反复9次经超声雾化吸入肺炎支原体以复制其慢性肺部感染模型,随后用bFGF单克隆抗体按SABC法行免疫组织化学染... 目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在反复肺炎支原体肺部感染导致肺间质纤维化的发病机制中的作用。方法 给大鼠于24周内反复9次经超声雾化吸入肺炎支原体以复制其慢性肺部感染模型,随后用bFGF单克隆抗体按SABC法行免疫组织化学染色,定量图像分析,以观察肺组织bFGF蛋白质水平表达的变化。结果(1)感染组动物(n=4)支气管肺泡灌洗液肺炎支原体-PCR检测均为阳性,而对照组(n=4)和感染加红霉素治疗组动物(n=4)均为阴性(均为P<0.05);三组动物的支气管和肺组织常规细菌培养结果均为阴性;感染组动物透射电镜检查见肺泡间隔增宽,其中有较多胶原纤维堆积。其余两组则未见明显异常。(2)感染组动物支气管上皮细胞胞浆内、支气管和肺小动脉肌层以及肺泡巨噬细胞胞浆内可见较多棕黄色细颗粒状bFGF阳性表达产物,其积分光密度为45.17±5.09(n=4),显著高于对照组者(10.77±3.66,n=4,P<0.05)和感染加红霉素治疗组者(16.32±3.58,n=4,P<0.05)。结论 反复肺炎支原体肺部感染时bFGF蛋白质水平表达增加,可能参与致肺间质纤维化的发病过程。 展开更多

关键词 肺炎支原体 肺间质纤维化 碱性成纤维细胞生长因子 单克隆抗体 免疫组织化学

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bFGF单抗联合放疗对小鼠B16移植瘤的协同抑制作用 被引量：6

11

作者 曾世彬 徐萌 +4 位作者 潘兰红 向军俭 邓宁 李丹 王盼盼 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期175-180,共6页

目的:探讨碱性成纤维细胞因子单克隆抗体(basic fibroblast growth factor monoclonal antibody,bFGF-mAb)联合放疗对小鼠B16移植瘤的抑制效应。方法:制备并提纯小鼠bFGF-mAb,建立荷B16黑素瘤小鼠模型并随机分为对照组、放疗组、bFGF-mA... 目的:探讨碱性成纤维细胞因子单克隆抗体(basic fibroblast growth factor monoclonal antibody,bFGF-mAb)联合放疗对小鼠B16移植瘤的抑制效应。方法:制备并提纯小鼠bFGF-mAb,建立荷B16黑素瘤小鼠模型并随机分为对照组、放疗组、bFGF-mAb组及联合治疗组。各组经相应治疗后,测量移植瘤体积;治疗20 d后处死小鼠,取移植瘤称瘤质量,计算抑瘤率。TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡率,免疫组化检测移植瘤组织bFGF、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达率及肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)。结果:bFGF-mAb治疗、放疗、联合治疗的抑瘤率分别为30.49%、12.17%和48.76%,联合治疗组的抑瘤率明显高于其他组(P<0.05);与放疗组比较,联合治疗组的放射增敏率为2.37。联合治疗组移植瘤细胞凋亡较放疗组、bFGF-mAb组及对照组明显增多[(58.56±6.47)%vs(17.21±2.86)%,(28.45±5.47)%,(10.62±1.73)%;P<0.05或P<0.01],其bFGF、VEGF表达水平下降,MVD明显减少(P<0.05)。结论:bFGF-mAb联合放疗对B16移植瘤具有协同抑瘤效应,通过降低肿瘤组织bFGF和VEGF表达、抑制血管新生、促进瘤细胞凋亡提高放疗敏感性。 展开更多

关键词 黑素瘤 成纤维细胞因子单克隆抗体(bfgf—mab) 放射治疗 血管内皮生长因子(VEGF) 肿瘤微血管密度 (MVD)

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噬菌体展示技术筛选bFGF抗原表位 被引量：5

12

作者 向军俭 钟振宇 +2 位作者 杨红宇 黄峙 黄竞荷 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期88-92,共5页

目的:以抗-bFGF单克隆抗体GF22为目标,用噬菌体随机七肽库进行筛选。经三轮筛选后的噬菌体阳性克隆能特异地抑制bFGF与CF22结合。测序结果表明与CF22结合的序列高度保守,为LP(P/L)GH(F/I)K,LPPGHFK与bFGF分子(155氨基酸)上22-27位氨基... 目的:以抗-bFGF单克隆抗体GF22为目标,用噬菌体随机七肽库进行筛选。经三轮筛选后的噬菌体阳性克隆能特异地抑制bFGF与CF22结合。测序结果表明与CF22结合的序列高度保守,为LP(P/L)GH(F/I)K,LPPGHFK与bFGF分子(155氨基酸)上22-27位氨基酸一致,表明该序列在bFGF上是一个主要的抗原表位。用此序列的阳性噬菌体克隆免疫小鼠,发现此序列摸拟肽能诱导抗bFGF抗体反应,且序列LPLGHIK诱导的抗体反应比LPPCHFK序列强三倍,序列LPLGHIK可能作为一种有价值的肽疫苗诱导抗bFGF抗体的产生。 展开更多

关键词 碱性成纤维细胞生长因子 单克隆抗体 GF22 噬菌体展示技术 抗原表位 LPLGHIK序列 疫苗

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FGF2人源化单抗E12及其联合顺铂/紫杉醇体外抑制乳腺癌细胞增殖作用的研究 被引量：3

13

作者 张宇 黄建芳 +2 位作者 徐萌 王宏 向军俭 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期1187-1194,共8页

目的:研究人源化FGF2单抗体E12体外联合化疗药物抑制乳腺癌肿瘤细胞增殖的作用。方法:分析人源化FGF2单抗可变区人源氨基酸序列比率;SDS-PAGE和HPLC检测单抗纯度;ELISA测定单抗效价;BSA法检测单抗浓度;CCK-8法检测单抗联合化疗药物对乳... 目的:研究人源化FGF2单抗体E12体外联合化疗药物抑制乳腺癌肿瘤细胞增殖的作用。方法:分析人源化FGF2单抗可变区人源氨基酸序列比率;SDS-PAGE和HPLC检测单抗纯度;ELISA测定单抗效价;BSA法检测单抗浓度;CCK-8法检测单抗联合化疗药物对乳腺癌肿瘤细胞株的细胞增殖抑制作用;流式细胞术检测FGF2单抗联合化疗药物对乳腺癌细胞株的促凋亡作用;使用Discovery Studio 4.5软件对单抗的表位进行分析。结果:单抗可变区人源氨基酸序列比率重链为98.89%,轻链为100.00%;单抗纯度为99.02%;单抗ELISA效价为1/243 000;单抗浓度为8.74 mg/ml;CCK-8结果表明顺铂为10、5、2.5、0.625μg/ml时,单抗+顺铂组比顺铂组对MCF-7细胞抑制率提高了14.5%、10.4%、1.5%、0.5%;对MDAMB453细胞抑制率提高了15.5%、14.8%、13.0%、6.8%,紫杉醇为1.0、0.1、0.01μg/ml时,单抗+紫杉醇组比紫杉醇组对MCF-7细胞抑制率提高了14.5%、11.1%、9.3%,紫杉醇为0.1、0.01、0.001μg/ml时,单抗+紫杉醇组比紫杉醇组对MDAMB453细胞的抑制率提高了18.6%、19.9%、6.8%;流式结果表明,单抗、紫杉醇及单抗+紫杉醇组的MCF-7细胞在Annexin V/PI双阳性区所占比例提高了6.13%、7.36%和12.83%,同理MDA-MB453细胞所占比例提高了4.86%、7.1%和14.1%,单抗、顺铂及单抗+顺铂组MCF-7细胞在Annexin V/PI双阳性区所占比例提高了6.39%、9.46%和17.76%,同理MDA-MB453细胞所占比例提高了5.38%、9.06%和19.39%;表位分析结果表明FGF2单抗有效封闭FGF2与受体结合的部分位点。结论:FGF2人源单抗E12人源化程度较高;FGF2人源化单抗联合化疗药物相对单药组可较明显地提高肿瘤细胞增殖抑制作用以及促细胞凋亡作用;本研究为FGF2抗体药物研发提供了前期基础。 展开更多

关键词 碱性成纤维细胞生长因子 人源化单克隆抗体 E12 MCF-7 MDA-MB453 顺铂 紫杉醇 联合用药

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