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甘草次酸对胶原诱导性关节炎滑膜成纤维样细胞炎症细胞因子表达和分泌的影响 被引量：3
1
作者 桂明 李扬 +3 位作者 伍婷 李英 黄莹 张浩 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期915-919,922,共6页
目的:观察甘草次酸(GA)对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜成纤维样细胞(CIA-FLS)TNF-α、IL-1β表达分泌的影响,并观测与传统治疗药物MTX联合应用后的效果。方法:组织块培养法体外分离纯化CIA大鼠膝关节滑膜组织中CIA-FLS细胞。实验分为空白组... 目的:观察甘草次酸(GA)对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜成纤维样细胞(CIA-FLS)TNF-α、IL-1β表达分泌的影响,并观测与传统治疗药物MTX联合应用后的效果。方法:组织块培养法体外分离纯化CIA大鼠膝关节滑膜组织中CIA-FLS细胞。实验分为空白组、MTX组、GA组和GA+MTX组4组,分别对CIA-FLS细胞进行体外药物干预实验。每组分别干预1、3、5 d。Real time qPCR法检测各组CIA-FLS细胞TNF-α、IL-1β mRNA表达水平,ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α、IL-1β水平。结果:药物干预1 d,CIA-FLS TNF-α、IL-1β表达均降低,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。药物干预3 d,CIA-FLS TNF-α、IL-1β表达均降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),3组组间差异无统计学意义(P>0.05)。药物干预5 d,CIA-FLS MTX、GA、GA+MTX均可明显抑制TNF-α、IL-1β表达(P<0.05),处理组间差异有统计学意义,按照强弱依次是GA+MTX>MTX>GA(P<0.05)。MTX、GA、GA+MTX抑制TNF-α、IL-1β表达均呈时效依赖性,作用时间延长,抑制作用越明显(P<0.05)。结论:GA、MTX、GA+MTX对CIA-FLS炎症因子TNF-α、IL-1β表达和分泌的抑制作用依次递增,并呈时间依赖性。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 胶原诱导性关节炎 甘草次酸 滑膜成纤维样细胞 白介素-1 肿瘤坏死因子Α
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类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞自噬相关长链非编码RNA筛选和分析 被引量：4
2
作者 尚华 彭清 +2 位作者 刘佳君 刘焱 龙丽 《中南大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1071-1079,共9页
目的:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)已成为调控基因表达和影响多种生物学过程的关键表观遗传调控因子。在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发生发展中,lncRNA发挥着重要作用,有关lncRNA在RA患者外周血细胞中的研... 目的:长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)已成为调控基因表达和影响多种生物学过程的关键表观遗传调控因子。在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)的发生发展中,lncRNA发挥着重要作用,有关lncRNA在RA患者外周血细胞中的研究已有报道。然而,目前尚无lncRNA在RA患者中对于自噬调控的研究。本研究通过筛选RA滑膜成纤维样细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLSs)自噬前后差异表达的lncRNAs,寻找调节RA-FLSs自噬的关键lncRNAs,旨在为RA的诊断和治疗提供新方向。方法:获取6例RA患者膝关节或髋关节术后的滑膜组织,原代培养(组织块法)RA-FLSs至第5代,用mTOR抑制剂PP242处理后,通过蛋白质印迹法检测细胞自噬水平标记蛋白LC3-II表达水平的变化。其中3例采用TRIzol提取PP242处理前后RA-FLSs总RNA,应用Agilent Human ceRNA Microarray 2019(4×180 K,Design ID:086188)芯片检测,发现表达量显著改变的lncRNAs(差异倍数≥2.0,P<0.05)。利用生物信息学技术,对获得的差异表达的lncRNAs进行基因本体(gene ontology,GO)分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析,以发现差异表达的lncRNAs可能参与的生物学通路,探索差异表达的lncRNAs在RA发病机制中的作用。在前期芯片筛选出的lncRNAs差异表达的基础上,结合GO富集分析和KEGG分析,筛选出ENST00000584721.1、ENST00000615939.1,对全部6例RA-FLSs进行real-time RT-PCR验证。结果:从患者膝关节或髋关节滑膜组织中成功分离、培养出RAFLSs。6例RA-FLSs经过PP242处理后,自噬水平标记蛋白LC3-II表达水平升高(P<0.05),PP242诱导RA-FLSs发生自噬。芯片筛选共有591个差异表达的lncRNAs,其中表达上调的有428个,表达下调的有163个。GO分析显示这些差异表达的lncRNAs与Th17功能、T细胞相关细胞因子生成及TGF-β受体信号通路的负性调节,以及I型TGF-β受体结合和IL-6受体复合物形成等相关。KEGG分析显示自噬通路、TGF-β、TNF-α、IL-17信号通路以及Th17、Th1、Th2、破骨细胞分化通路是富集差异lncRNAs最多的几条信号通路。Real-time RT-PCR验证在RA-FLSs自噬后ENST00000584721.1表达上调(P<0.05),ENST00000615939.1表达下调(P<0.05),与芯片结果一致,证实芯片筛选差异基因可靠。GO分析显示ENST00000584721.1、ENST00000615939.1分别与核糖体转运和自噬体组装相关。KEGG分析显示ENST00000584721.1与丝裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶信号通路相关,ENST00000615939.1与FoxO信号通路相关。结论:通过基因芯片分析发现了RA-FLSs中差异表达的lncRNAs。在RA中,这些差异表达的lncRNAs参与RA-FLSs自噬的发生过程。生物信息学分析显示其作用机制可能包括调节多种细胞因子(IL-6、TGF-β、TNF-α、IL-17等)分泌和免疫细胞(Th17细胞、Th1细胞、Th2细胞、破骨细胞等)分化,调控自噬通路、丝裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶、FoxO等多种信号通路等。其中在RA-FLSs自噬后ENST00000584721.1表达上调,ENST00000615939.1表达下调,这为后续进一步深入研究lncRNA在RA-FLSs自噬中的作用机制提供了良好的实验基础。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 滑膜成纤维样细胞 长链非编码RNA 自噬 芯片
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杜仲皮水提取物调节circFADS2靶向miR-491-5p干预类风湿性关节炎滑膜成纤维样细胞生长与凋亡 被引量：5
3
作者 郑国洪 孙斌 +1 位作者 王晶晶 杨正明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期2044-2049,共6页
目的:探讨杜仲皮水提取物(water extract of Eucommia cortex,WEEC)对类风湿性关节炎滑膜成纤维样细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)生长与凋亡的影响及分子机制。方法:采用不同浓度WEEC(0.1、0.3、0.9和... 目的:探讨杜仲皮水提取物(water extract of Eucommia cortex,WEEC)对类风湿性关节炎滑膜成纤维样细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA-FLS)生长与凋亡的影响及分子机制。方法:采用不同浓度WEEC(0.1、0.3、0.9和2.7 g/L)处理RA-FLS,CCK-8法检测细胞活力,选取最适WEEC浓度进行后续实验。细胞分别转染pcDNA-circFADS2和/或anti-miR-491-5p,探讨WEEC对RA-FLS生长与凋亡的影响及分子机制:用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测cleaved caspase-3的蛋白水平;RT-qPCR检测环状RNA-FADS2(circular RNA-FADS2,circFADS2)和miR-491-5p的表达水平;双萤光素酶基因报告实验检测circ-FADS2和miR-491-5p的靶向关系。结果:不同浓度WEEC处理后,RA-FLS的活力降低,凋亡率升高,cleaved cas-pase-3蛋白水平升高,circFADS2表达水平降低,miR-491-5p表达水平升高(P<0.05)。过表达circFADS2或抑制miR-491-5p表达后,WEEC处理的细胞活力升高,凋亡率及cleaved caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)。circFADS2靶向调控miR-491-5p,过表达miR-491-5p逆转了circFADS2质粒对WEEC处理的RA-FLS活力与凋亡的影响。结论:杜仲皮水提取物通过调节circFADS2/miR-491-5p抑制类风湿性关节炎滑膜成纤维样细胞生长并促进其凋亡。 展开更多
关键词 杜仲皮水提取物 环状RNA-FADS2 微小RNA-491-5p 类风湿性关节炎滑膜成纤维样细胞 细胞活力 细胞凋亡
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TIPE2过表达质粒转染大鼠佐剂型关节炎滑膜成纤维样细胞及分析 被引量：3
4
作者 石春燕 何琼 +1 位作者 杨晶晶 庄国洪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1240-1243,1253,共5页
目的:通过TIPE2表达质粒转染大鼠佐剂型关节炎(AA)成纤维样滑膜细胞(FLS),体外研究AA的发病中TIPE2对DR5介导细胞凋亡的作用。方法:应用MIGR1/TIPE2+/+表达质粒,经脂质体法导入AA-FLS细胞中,转染72小时后,荧光显微镜检测质粒自带GFP基... 目的:通过TIPE2表达质粒转染大鼠佐剂型关节炎(AA)成纤维样滑膜细胞(FLS),体外研究AA的发病中TIPE2对DR5介导细胞凋亡的作用。方法:应用MIGR1/TIPE2+/+表达质粒,经脂质体法导入AA-FLS细胞中,转染72小时后,荧光显微镜检测质粒自带GFP基因的表达情况确认转染效率,以未作处理的AA-FLS为对照组,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TIPE2 mRNA的表达,用Western blot法检测TIPE2蛋白的表达变化,MTT法以及流式细胞术检测抗DR5功能性单链抗体ZF1对两组细胞生长的影响。结果:成功获得荧光强度90%的TIPE2过表达AA-FLS细胞,TIPE2 mRNA及蛋白表达显著提高。抗DR5单链抗体ZF1对TIPE2+/+的FLS组细胞具有明显生长抑制及凋亡诱导作用,与不作处理的FLS组相比差异显著。结论:TIPE2+/+表达质粒明显提升AA-FLS的TIPE2蛋白表达水平,TIPE2对DR5介导细胞凋亡有重要作用。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 佐剂型关节炎 成纤维样滑膜细胞 DR5 TIPE2
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类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞特征基因TNFAIP6的鉴定及验证 被引量：1
5
作者 雷蕾 吕玉欣 +1 位作者 张晶 陈陵 《陆军军医大学学报》 北大核心 2025年第3期234-242,共9页
目的鉴定类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞的特征基因,并验证其对增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库下载4个独立的滑膜组织微阵列转录组测序数据集(GSE1919... 目的鉴定类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞的特征基因,并验证其对增殖、迁移、侵袭能力的影响。方法从基因表达综合(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库下载4个独立的滑膜组织微阵列转录组测序数据集(GSE1919、GSE55235、GSE55457、GSE77298)和1个滑膜细胞单细胞测序数据集(GSE192504),利用差异基因分析、加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)、单细胞测序数据分析等多种生物信息学分析方法鉴定RA成纤维样滑膜细胞的特征基因。利用RT-qPCR和Western blot检测肿瘤坏死因子α诱导蛋白6(TNF alpha induced protein 6,TNFAIP6)在人RA成纤维样滑膜细胞系MH7A体外模拟炎症环境下的表达水平。MH7A转染si-TNFAIP6进行基因沉默,采用CCK-8和Transwell实验检测沉默TNFAIP6对MH7A细胞增殖、迁移、侵袭能力的影响。结果联合差异基因分析、WGCNA和单细胞测序数据分析,确定了1个RA成纤维样滑膜细胞特征基因(TNFAIP6)。RT-qPCR和Western blot显示,与无菌磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)处理比较,10 ng/mL浓度的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)显著上调MH7A细胞TNFAIP6的mRNA和蛋白表达(P<0.05)。CCK-8和Transwell实验显示,在MH7A细胞敲低TNFAIP6的表达后,敲低组(si-TNFAIP6)的细胞增殖、迁移和侵袭能力相较于对照组(FAM-si-NC)有显著的降低(P<0.05)。结论TNFAIP6在RA成纤维样滑膜细胞中特异性高表达,促进其增殖、迁移、侵袭能力,可能是RA成纤维样滑膜细胞异常活化的主要贡献者。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 成纤维样滑膜细胞 肿瘤坏死因子α诱导蛋白6
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白藜芦醇对类风湿性关节炎患者成纤维样滑膜细胞cGAS-STING信号通路的影响 被引量：1
6
作者 汪陶荣 邵玉宝 +3 位作者 刘楠楠 李文昊 李梦 陈晓宇 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第1期73-78,共6页
目的探究白藜芦醇(Res)对类风湿性关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)的影响,并初步分析Res抑制FLS释放炎症因子的可能机制。方法体外培养RA患者FLS细胞,采用不同浓度的Res(0、20、40、80、160、320μmol/L)进行处理,12、24 h后CCK-8... 目的探究白藜芦醇(Res)对类风湿性关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)的影响,并初步分析Res抑制FLS释放炎症因子的可能机制。方法体外培养RA患者FLS细胞,采用不同浓度的Res(0、20、40、80、160、320μmol/L)进行处理,12、24 h后CCK-8法分别检测FLS细胞活力;采用不同浓度的Res(0、40、80、160μmol/L)进行处理FLS细胞24 h后,ELISA法分析FLS细胞分泌的炎症因子白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,Western blot测定细胞中环磷酸鸟苷-腺苷酸合成酶(cGAS)、干扰素刺激因子(STING)蛋白的表达水平;慢病毒感染FLS使其过表达cGAS,将细胞分为Control(对照)组、cGAS组(cGAS过表达)、Res+cGAS组(Res 160μmol/L+cGAS过表达)、Res组(Res 160μmol/L)。Western blot测定各组细胞中STING蛋白的表达水平,CCK-8法检测各组FLS细胞活力,ELISA法检测各组细胞上清液中炎症因子IL-6和TNF-α含量。结果CCK-8实验结果显示,与0μmol/L Res组比较,使用40、80、160μmol/L的Res处理24 h后的三组FLS细胞活力下降(P<0.01);ELISA结果也表明与0μmol/L Res组比较,使用40、80、160μmol/L的Res处理后的三组FLS细胞上清液中IL-6和TNF-α含量也降低(P<0.01)。同时,Western blot结果显示,与0μnmol/L的Res组相比,经过40、80、160μnmol/L的Res处理后的三组FLS细胞中STING和cGAS蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与Control组相比,过表达cGAS后,CGAS组中FLS中STING蛋白表达水平增加(P<0.05),与Res组相比,Res+cGAS组中FLS细胞上清液中炎症因子含量及FLS中STING蛋白表达水平显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论适当剂量的Res能有效减少FLS细胞分泌炎症因子,而这一抑制作用机制可能源于其对cGAS-STING信号传导途径的阻断作用。 展开更多
关键词 类风湿性关节炎 成纤维样滑膜细胞 白藜芦醇 cGAS-STING信号通路 白介素-6 肿瘤坏死因子-α
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LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴促进类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞的恶性病理学过程
7
作者 曹周芳 汪元 +2 位作者 王梦娜 孙玥 刘菲菲 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第2期371-378,共8页
目的探讨LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)病理学过程的影响。方法选用正常成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)和RA-FLS,构建LINC00837的过表达质粒和干扰质粒转染至RA-FLS中,实验分为对照组(FLS)、... 目的探讨LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)病理学过程的影响。方法选用正常成纤维细胞样滑膜细胞(FLS)和RA-FLS,构建LINC00837的过表达质粒和干扰质粒转染至RA-FLS中,实验分为对照组(FLS)、模型组(RA-FLS)、pcDNA3.1-NC组、pcDNA3.1-LINC00837组、siRNA-NC组、siRNA-LINC00837组。采用双荧光素酶验证LINC00837靶向miR-671-5p及miR-671-5p靶向SERPINE2关系;使用qRT-PCR实验检测各组细胞LINC00837、miR-671-5p、SERPINE2表达量;Edu法检测细胞增殖情况,划痕愈合实验检测RA-FLS迁移数,Western blotting法检测细胞增殖、迁移相关蛋白表达水平;ELISA法检测炎性细胞因子分泌情况。结果双荧光素酶报告基因结果显示,LINC00837与miR-671-5p的3'非翻译区(3'UTR)结合,而miR-671-5p与SERPINE2的3'非翻译区(3'UTR)结合,两两之间具有结合位点(P<0.01)。同一时间段,与对照组相比,模型组LINC00837和SERPINE2表达量升高,而miR-671-5p表达量降低,细胞增殖、迁移能力提高,促炎细胞因子表达升高,抑炎细胞因子表达降低(P<0.01);与模型组相比,pcDNA-LINC00837组细胞增殖、迁移活跃,促炎细胞因子表达升高,抑炎细胞因子表达降低(P<0.01);与模型组相比,siRNA-LINC00837组细胞增殖、迁移能力下降,促炎细胞因子表达下降,抑炎细胞因子水平升高(P<0.01)。结论RA-FLS中存在LINC00837/miR-671-5p/SERPINE2功能轴,该功能轴促进RA-FLS增殖、迁移及炎症因子分泌等恶性病理学过程,干预LINC00837有望成为调控RA-FLS病理学过程的潜在策略。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 成纤维细胞样滑膜细胞 LINC00837 增殖迁移 炎症因子
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温阳通络方调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞上皮间质转化的机制研究
8
作者 田亚丹 李冬艳 +2 位作者 罗定霞 宋佳欣 吴晶金 《辽宁中医杂志》 北大核心 2025年第8期167-170,I0001,I0002,共6页
目的研究温阳通络方对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synovial cells,FLS)上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的调控作用,探讨其作用机制。方法CCK-8实验筛选温阳通络方最... 目的研究温阳通络方对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synovial cells,FLS)上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的调控作用,探讨其作用机制。方法CCK-8实验筛选温阳通络方最佳含药血清浓度;将细胞分为正常关节成纤维样滑膜细胞(human fibroblast-like synovial cells,HFLS)组、人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(human rheumatoid arthritis synovial fibroblasts,MH7A)组、MH7A+温阳通络方含药血清(medicated serum,MS)组,Western Blot检测EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和波形蛋白(vimentin,VM)的表达;CCK-8实验检测各组细胞活性;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力。结果96 h时15%温阳通络方含药血清干预后MH7A细胞活性最接近正常细胞的一半,即半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50);MH7A细胞中E-cad的表达水平降低(P<0.05)、FN和VM的表达水平升高(P<0.05),细胞的活性、迁移和侵袭能力增强(P<0.05);温阳通络方含药血清干预MH7A细胞后,细胞中E-cad的表达水平升高(P<0.05)、FN和VM的表达水平降低(P<0.05),细胞的活性、迁移和侵袭能力减弱(P<0.05)。结论温阳通络方可能通过抑制MH7A的EMT现象,抑制滑膜细胞的活性、迁移和侵袭,从而发挥对RA的治疗作用。 展开更多
关键词 温阳通络方 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 上皮间质转化
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丹参素对缺氧诱导成纤维样滑膜细胞损伤的影响及作用机制研究
9
作者 杨帆 曹姗 +1 位作者 吕章明 李云海 《世界中医药》 北大核心 2024年第23期3625-3631,共7页
目的:探讨丹参素对缺氧诱导的成纤维样滑膜细胞损伤的作用机制。方法:将大鼠成纤维样滑膜细胞按照简单随机法分为对照组、缺氧组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,检测丹参素对成纤维样滑膜细胞的影响。另取同代大鼠细胞按照简单随机法... 目的:探讨丹参素对缺氧诱导的成纤维样滑膜细胞损伤的作用机制。方法:将大鼠成纤维样滑膜细胞按照简单随机法分为对照组、缺氧组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,检测丹参素对成纤维样滑膜细胞的影响。另取同代大鼠细胞按照简单随机法分为对照组、缺氧组、高剂量组、BAY11-7082组,检测核因子κB p65(NF-κB p65)抑制剂BAY11-7082对成纤维样滑膜细胞损伤的影响。以5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(Edu)法检测各组细胞增殖,蛋白质印迹法检测细胞蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞细胞基质金属蛋白酶(MMP)及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达。结果:缺氧组细胞Edu阳性细胞率、增殖细胞核抗原(Ki67)、细胞周期素蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达和MMP-1、MMP-9、MMP-3、VEGF mRNA及磷酸化(p)-NF-κB p65、低氧诱导因子1α(HIF-1α)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-8蛋白表达高于对照组;与缺氧组比较,低、中、高剂量组细胞Edu阳性细胞率及Ki67、PCNA、CyclinD1蛋白表达及MMP-1、MMP-9、MMP-3、VEGF mRNA、p-NF-κB p65、HIF-1α、IL-6、IL-8蛋白表达低(P<0.05);与高剂量组比较,BAY11-7082组细胞p-NF-κB p65、HIF-1α、IL-6、IL-8蛋白表达、Edu阳性细胞率及MMP、VEGF mRNA低(P<0.05)。结论:丹参素可能通过抑制NF-κB/HIF-1α信号通路改善缺氧诱导的大鼠成纤维样滑膜细胞损伤。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 丹参素 缺氧 成纤维样滑膜细胞 核因子κB/低氧诱导因子1α信号通路 细胞增殖 细胞损伤 大鼠
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红景天苷调控miR-20a-5p/TIMP2轴对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和迁移的影响 被引量：3
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作者 朱光昭 方璐 +1 位作者 严婕 李琴 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第5期803-809,共7页
目的探讨红景天苷调控miR-20a-5p/金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP2)轴对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)功能和活化的影响。方法以HFLS-RA细胞为研究对象,将HFLS-RA细胞分为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、对照组、红景天苷组、miR-... 目的探讨红景天苷调控miR-20a-5p/金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP2)轴对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(HFLS-RA)功能和活化的影响。方法以HFLS-RA细胞为研究对象,将HFLS-RA细胞分为肿瘤坏死因子-α(TNF-α)组、对照组、红景天苷组、miR-20a-5p抑制物阴性对照(inhibitor NC)组、miR-20a-5p抑制物组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物阴性对照(mimic NC)组、红景天苷+miR-20a-5p模拟物组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测HFLS-RA细胞中miR-20a-5p表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HFLS-RA细胞上清液中白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)染色检测HFLS-RA细胞增殖;划痕实验检测HFLS-RA细胞迁移;免疫印迹实验(Western blot)检测HFLS-RA细胞中TIMP2、细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达;双荧光素酶验证miR-20a-5p与TIMP2的关系。结果与对照组比较,TNF-α组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、吸光度(OD_(450))值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白上调,TIMP2蛋白下调(P<0.05);与TNF-α组相比,红景天苷组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与inhibitor NC组、TNF-α组相比比较,miR-20a-5p抑制物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白下调,TIMP2蛋白上调(P<0.05);与红景天苷+mimic NC组、红景天苷组相比,红景天苷+miR-20a-5p模拟物组miR-20a-5p表达、IL-1β、IL-6水平、OD_(450)值、EdU阳性细胞率、划痕愈合率及CyclinD1、MMP-9蛋白表达升高,TIMP2蛋白表达降低(P<0.05)。miR-20a-5p与TIMP2存在靶向调控关系。结论红景天苷可能通过调控miR-20a-5p/TIMP2抑制TNF-α诱导的HFLS-RA细胞增殖、迁移及炎症反应。 展开更多
关键词 红景天苷 miR-20a-5p 金属蛋白酶组织抑制剂-2 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 增殖 迁移
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独活寄生汤对TNF-α诱导的类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡和炎症的影响 被引量：14
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作者 吴婧若 步亚男 +3 位作者 岳进茹 陈佳 王桂宇 张育敏 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1665-1673,共9页
目的探究独活寄生汤含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、凋亡和炎症的影响及作用机制。方法将MH7A细胞分为正常组(10%空白血清)、模型组(10μg·L^(-1) TNF-α+10%空白血清)、... 目的探究独活寄生汤含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、凋亡和炎症的影响及作用机制。方法将MH7A细胞分为正常组(10%空白血清)、模型组(10μg·L^(-1) TNF-α+10%空白血清)、独活寄生汤低(10μg·L^(-1) TNF-α+2.5%含药血清+7.5%空白血清)、中(10μg·L^(-1) TNF-α+5%含药血清+5%空白血清)、高(10μg·L^(-1) TNF-α+10%含药血清)剂量组共5组;MTT法筛选独活寄生汤含药血清给药浓度;EdU染色检测细胞增殖情况;免疫荧光染色检测增殖标志物Ki67表达情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA法检测细胞中IFN-γ、IL-4、IL-6和IL-10的含量;RT-qPCR和Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3及TLR4/MyD88/NF-κB信号通路mRNA和蛋白的表达情况。结果与正常组比较,模型组细胞增殖水平明显上升,凋亡水平明显减弱,IFN-γ和IL-6的含量升高,IL-4和IL-10的含量减少,TLR4/MyD88/NF-κB信号通路被激活;经独活寄生汤含药血清低、中、高剂量组干预后,均能有效改善细胞异常增殖情况,增强细胞凋亡,抑制炎性反应和TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的激活。结论独活寄生汤含药血清能够抑制TNF-α诱导的RA-FLS异常增殖和促炎因子的分泌,增强细胞凋亡和抗炎水平,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 独活寄生汤 类风湿性关节炎 成纤维样滑膜细胞 增殖 凋亡 炎症因子 TLR4/MyD88/NF-κB信号通路
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成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞Ahr入核的比较
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作者 程梦 王燚 +2 位作者 董伟波 魏伟 常艳 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第9期1524-1528,共5页
目的探究成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞中Ahr入核的差别。方法用15%的DMEM培养人来源的成纤维样滑膜细胞细胞株MH7A,分别用激光共聚焦显微镜和量化成像流式细胞仪(ImageStreamX MarkⅡ)检测空白对照组、Kyn组和Kyn+... 目的探究成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞中Ahr入核的差别。方法用15%的DMEM培养人来源的成纤维样滑膜细胞细胞株MH7A,分别用激光共聚焦显微镜和量化成像流式细胞仪(ImageStreamX MarkⅡ)检测空白对照组、Kyn组和Kyn+CH223191组对MH7A中Ahr的入核水平,并采用非参数检验比较两种检测技术检测结果的相关性。结果与空白对照组相比,免疫荧光技术和成像流式细胞术测得的MH7A细胞中Kyn组和Kyn+CH223191组Ahr入核能力增加(P<0.05),两种实验方法测得的三组结果相关性良好,R 2值分别是0.8638、0.9287和0.9018,差异有统计学意义(P<0.05)。结论相较于免疫荧光技术的操作和结果,成像流式细胞术数据处理比较复杂,但所得结果精确度高,避免了实验者的主观性,减少实验误差。 展开更多
关键词 免疫荧光技术 成像流式细胞术 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 芳香烃受体 入核 相关性
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湖北枫杨总黄酮通过调控PI3K/AKT信号通路抑制成纤维细胞样滑膜细胞的迁移和侵袭 被引量：3
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作者 吴昊 陈国庆 +5 位作者 卢曼 高瑛 江蕲玲 罗豪楠 袁林 向阳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期134-140,共7页
目的:观察湖北枫杨总黄酮(PHSTF)对人类风湿成纤维细胞样滑膜细胞(MH7A细胞)迁移和侵袭的抑制作用并初步探讨其可能作用机制。方法:将MH7A细胞分为分为对照组(不做任何处理)、低剂量(6.25 mg/L)PHSTF组、中剂量(12.5 mg/L)PHSTF组、高剂... 目的:观察湖北枫杨总黄酮(PHSTF)对人类风湿成纤维细胞样滑膜细胞(MH7A细胞)迁移和侵袭的抑制作用并初步探讨其可能作用机制。方法:将MH7A细胞分为分为对照组(不做任何处理)、低剂量(6.25 mg/L)PHSTF组、中剂量(12.5 mg/L)PHSTF组、高剂量(25 mg/L)PHSTF组、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)激动剂740Y-P(10μmol/L)组和740Y-P(10μmol/L)+高剂量(25 mg/L)PHSTF组。采用CCK-8法检测MH7A细胞活力;划痕实验和Transwell实验检测MH7A细胞的迁移和侵袭;Western blot检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT蛋白水平。结果:与对照组相比,各剂量PHSTF组MH7A细胞活力显著降低(P<0.05),划痕愈合面积显著减小(P<0.01),迁移和侵袭至下室的细胞显著减少(P<0.01),MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著降低(P<0.01)。与高剂量PHSTF组相比,PI3K激动剂740Y-P显著提高了PHSTF处理下MH7A细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01),也使得MMP-2和MMP-9蛋白表达水平及p-PI3K/PI3K和p-AKT/AKT比值显著升高(P<0.01)。结论:PHSTF能通过调控PI3K/AKT信号通路抑制MH7A细胞迁移和侵袭。 展开更多
关键词 湖北枫杨总黄酮 成纤维细胞样滑膜细胞 类风湿关节炎 PI3K/AKT信号通路
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lncRNA SNHG16通过miR-182-5p/PPARG轴调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖和侵袭
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作者 周文煜 陈文莉 +1 位作者 甘文渊 申江曼 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1147-1152,共6页
目的:确定小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)在类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达及其在RA发展中的作用。方法:RT-qPCR用于测量SNHG16、miR-182-5p和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARG) mRNA表达;双荧光素酶实验用于检测... 目的:确定小核仁RNA宿主基因16(SNHG16)在类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)中的表达及其在RA发展中的作用。方法:RT-qPCR用于测量SNHG16、miR-182-5p和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPARG) mRNA表达;双荧光素酶实验用于检测SNHG16、miR-182-5p和PPARG mRNA的相互作用关系;EdU和Transwell用于检测细胞增殖、侵袭;Western blot用于检测PPARG蛋白水平。结果:RA滑膜组织和人RA-FLS系(HFLS-RA)中SNHG16和PPARG mRNA表达上调,miR-182-5p表达下调。SNHG16负靶向调节miR-182-5p表达,正调节PPARG(miR-182-5p靶标)表达。沉默SNHG16抑制HFLS-RA增殖、侵袭;下调miR-182-5p部分逆转SNHG16沉默对细胞增殖、侵袭的抑制作用;过表达PPARG部分逆转miR-182-5p上调对HFLS-RA增殖、侵袭的抑制作用。结论:沉默SNHG16靶向miR-182-5p/PPARG轴抑制HFLS-RA的增殖、侵袭。 展开更多
关键词 类风湿关节炎 成纤维样滑膜细胞 lncRNA SNHG16 miR-182-5p PPARG
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从G-CSF动员的外周血细胞悬液培养的成纤维细胞样细胞的特性分析 被引量：2
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作者 史敦云 张琼丽 +5 位作者 李玉珠 李明 许蕴 卓家才 杜新 汪明春 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期2264-2267,共4页
目的研究从G-CSF动员的外周血细胞(PBC)悬液培养的成纤维细胞样(F-L)细胞的特性。方法取PBC中贴壁细胞分4组培养①RPMI-1640组;②L-DMEM组;③粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组;④白细胞介素-3(IL-3)组。流式细胞仪分析各组培养的F-L细胞特... 目的研究从G-CSF动员的外周血细胞(PBC)悬液培养的成纤维细胞样(F-L)细胞的特性。方法取PBC中贴壁细胞分4组培养①RPMI-1640组;②L-DMEM组;③粒细胞集落刺激因子(G-CSF)组;④白细胞介素-3(IL-3)组。流式细胞仪分析各组培养的F-L细胞特性。结果培养2-3周后,4组均能收获到F-L细胞,细胞贴壁生长,但不融合,不能连续传代培养,③④组细胞数量明显多于①②组,4组F-L细胞表型相似CD33+、CD11c+、CD64+、CD14+、CD45+、HLA-DR+、CD86+、CD34-、CD38-、CD3-、CD19-、CD56-、CD29-、CD44-、CD105-;与单核细胞(PB-M)表型差异仅CD38表达不同而与间质干细胞(MSC)或树突状细胞(DC)表型明显不同。结论从PBC培养的F-L细胞为巨噬细胞,不是MSC或DC;G-CSF、IL-3能提高F-L细胞培养数量,不改变PB-M向巨噬细胞分化的分化方向。 展开更多
关键词 树突细胞 间质干细胞 单核细胞 成纤维样细胞 巨噬细胞
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白芍总苷对IL-1α诱导胶原性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞功能的影响 被引量：25
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作者 常艳 魏伟 +1 位作者 张磊 徐红梅 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期185-188,共4页
目的研究白芍总苷(TGP)对rIL-1α诱导胶原性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)的影响,并探讨其部分机制。方法鸡Ⅱ型胶原(CCⅡ)诱导大鼠胶原性关节炎(CIA);MTT法检测FLS的增殖反应;放射免疫法(RIA)测定FLS产生PGE2和cAMP的水平。结果在rI... 目的研究白芍总苷(TGP)对rIL-1α诱导胶原性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞(FLS)的影响,并探讨其部分机制。方法鸡Ⅱ型胶原(CCⅡ)诱导大鼠胶原性关节炎(CIA);MTT法检测FLS的增殖反应;放射免疫法(RIA)测定FLS产生PGE2和cAMP的水平。结果在rIL-1α(0.01、0.1、1、10μg.L-1)和1μg.L-1rIL-1α(3、6、12、24h)体外刺激下,CIA大鼠FLS产生的PGE2和cAMP水平均升高;TGP(2.5、12.5、62.5、125、250mg.L-1)体外给药可不同程度地抑制FLS的增殖反应和PGE2产生,而进一步升高cAMP水平。结论在不同浓度同一时间和同一浓度不同时间的rIL-1α体外刺激下,FLS产生PGE2和cAMP水平均升高;TGP体外作用FLS可抑制其增殖和产生PGE2,进一步升高cAMP的水平。 展开更多
关键词 胶原性关节炎 成纤维样滑膜细胞 白芍总苷 rIL-1α cAMP
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人成纤维样基质细胞系对HL-60细胞增殖和VEGF表达的影响 被引量：11
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作者 梁蓉 黄高 +5 位作者 陈协群 王哲 冯骥良 张伟平 郭英 杨国嵘 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期476-479,共4页
为了观察正常人骨髓成纤维样细胞系 (HFCL)对白血病细胞系HL 60细胞增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响 ,用免疫组织化学对HFCL细胞进行组织学鉴定 ;建立HL 60细胞和HFCL细胞共培养体系 ,台盼蓝拒染法测定生长曲线 ;HE染色和瑞 ... 为了观察正常人骨髓成纤维样细胞系 (HFCL)对白血病细胞系HL 60细胞增殖和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响 ,用免疫组织化学对HFCL细胞进行组织学鉴定 ;建立HL 60细胞和HFCL细胞共培养体系 ,台盼蓝拒染法测定生长曲线 ;HE染色和瑞 姬姆萨染色后进行分裂指数 (MI)测定 ;流式细胞术检测细胞周期的变化 ;Westernblot检测增殖细胞核抗原 (PCNA)表达 ;ELISA双抗体夹心法检测HL 60细胞表达VEGF水平。结果发现 ,与HFCL细胞共培养后HL 60细胞生长受抑 ,且与HFCL细胞直接接触组的抑制作用大于用跨室共培养组 ,其分裂指数表现为单独HL 60细胞组大于用跨室共培养组 ,更大于与HFCL细胞直接接触组。同时发现HL 60细胞与HFCL细胞共培养后G1期细胞增多 ,S期细胞减少 ,且PCNA表达下调 ,以直接接触组为甚。HL 60细胞与HFCL细胞共培养后 ,培养上清的VEGF水平减低 ,直接接触组和跨室共培养组下降程度一样 ,而与HL 60细胞共培养 ,HFCL细胞增殖无明显变化。结论 :正常人骨髓成纤维样细胞能抑制白血病细胞系HL 60的增殖 ,抑制细胞周期 。 展开更多
关键词 成纤维样基质细胞 HL-60细胞 VEGF
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改良组织块法培养细针活检滑膜组织成纤维样滑膜细胞 被引量：14
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作者 李婷 戴冽 +4 位作者 杨斌 郑东辉 朱浪静 莫颖倩 张白玉 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期567-571,576,共6页
【目的】探讨体外分离培养细针活检滑膜组织成纤维样滑膜细胞(FLS)的方法。【方法】滑膜组织来自接受盲式细针滑膜活检术的活动期类风湿关节炎患者,分别采用消化酶培养法、组织块培养法和改良组织块培养法分离培养FLS。采用台盼蓝染色... 【目的】探讨体外分离培养细针活检滑膜组织成纤维样滑膜细胞(FLS)的方法。【方法】滑膜组织来自接受盲式细针滑膜活检术的活动期类风湿关节炎患者,分别采用消化酶培养法、组织块培养法和改良组织块培养法分离培养FLS。采用台盼蓝染色进行细胞计数及活性鉴定,并应用倒置相差显微镜、透射电镜、免疫细胞化学染色、流式细胞术对第3～4代FLS进行鉴定。【结果】3种原代分离培养的方法均可成功培养出FLS。台盼蓝染色示FLS细胞计数约(8.30±1.65)×105/瓶,活细胞百分率>95%。传代可使FLS达到形态学上的纯化要求,倒置相差显微镜、透射电镜观察均符合FLS的形态结构特征,免疫细胞化学染色示Vimentin阳性、CD68阴性、CK阳性,流式细胞术检测示CD55+细胞占(95.34±2.47)%。改良组织块法培养FLS成功率较高,细胞游出时间较早,所需传代时间较短。【结论】改良组织块法特别适合于细针滑膜活检标本FLS的培养,第3～4代细胞的数目、活性及纯度符合进一步实验的要求。 展开更多
关键词 成纤维样滑膜细胞 细胞培养 细针活检
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TWEAK诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞合成MMP-3的实验研究 被引量：10
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作者 夏丽萍 肖卫国 +2 位作者 李俊松 丁爽 鲁静 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期46-48,共3页
目的:通过观察TWEAK在不同浓度下对RAFLS诱导合成MMP-3的影响,探讨TWEAK参与类风湿关节炎(RA)关节骨及软骨破坏的相关机制,进而寻求治疗RA的新途径。方法:将rhTWEAK与成纤维样滑膜细胞(FLS)共培养,应用ELISA法检测细胞培养液中MMP-3水平... 目的:通过观察TWEAK在不同浓度下对RAFLS诱导合成MMP-3的影响,探讨TWEAK参与类风湿关节炎(RA)关节骨及软骨破坏的相关机制,进而寻求治疗RA的新途径。方法:将rhTWEAK与成纤维样滑膜细胞(FLS)共培养,应用ELISA法检测细胞培养液中MMP-3水平;用反转录-聚合酶反应(RT-PCR)检测FLS中MMP-3mRNA的表达水平。结果:TWEAK终浓度为50、100μg/L组诱导RAFLS合成MMP-3的水平明显高于对照组,具有显著的统计学意义(P<0.05);TWEAK终浓度为100μg/L诱导RAFLS的MMP-3mRNA表达水平为对照组的1.26倍,具有显著的统计学意义(P<0.05);TNF-α和IL-1β对TWEAK诱导RAFLS合成MMP-3及MMP-3mRNA表达具有协同作用,协同作用组MMP-3的水平及MMP-3mRNA表达水平明显高于单纯TWEAK组,具有显著的统计学意义(P<0.05)。结论:TWEAK通过诱导RAFLS合成MMP-3,直接参与RA的关节损伤,TNF-α和IL-1β在此过程中发挥协同作用。 展开更多
关键词 关节炎 类风湿 TWEAK 成纤维样滑膜细胞 基质金属蛋白酶3
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芍药苷对重组人白细胞介素1α诱导的人成纤维样滑膜细胞功能的影响 被引量：18
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作者 郭晓蓉 戴杏 +1 位作者 张玲玲 魏伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期465-469,共5页
目的研究芍药苷(Paeoniflorin,Pae)对重组人白细胞介素1α(rhIL-1α)诱导的人成纤维样滑膜细胞(FLS)功能的影响。方法采用组织块培养法分离培养正常人FLS,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测FLS的增殖能力,放射免疫法(RIA)检测FLS产生的TNF-α含... 目的研究芍药苷(Paeoniflorin,Pae)对重组人白细胞介素1α(rhIL-1α)诱导的人成纤维样滑膜细胞(FLS)功能的影响。方法采用组织块培养法分离培养正常人FLS,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测FLS的增殖能力,放射免疫法(RIA)检测FLS产生的TNF-α含量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测FLS产生的PGE2和cAMP水平。结果在rhIL-1α(0.01、0.1、1、10、100μg.L-1)的刺激下FLS增殖能力增强,产生的TNF-α和PGE2水平均不同程度升高,cAMP水平下降。Pae(10-8、10-7、10-6、10-5、10-4mol.L-1)体外作用可不同程度抑制由rhIL-1α诱导的FLS增殖,降低FLS产生的TNF-α和PGE2水平,升高cAMP水平。结论rhIL-1α体外刺激可以促进正常人FLS的增殖和分泌功能;Pae可以逆转rhIL-1α对人FLS功能的影响。 展开更多
关键词 成纤维样滑膜细胞 芍药苷 重组人白细胞介素1α
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