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E3泛素连接酶March6抑制成牙本质细胞分化以及牙本质生成
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作者 冯豪 袁国华 《口腔医学研究》 2025年第8期657-663,共7页
目的:明确膜相关的RING-CH型E3泛素连接酶6(membrane-associated RING finger protein 6, March6)在成牙本质细胞分化以及牙本质生成中的作用。方法:采用免疫组织化学染色(immunohistochemistry, IHC)分析不同发育阶段小鼠牙齿切片,分析... 目的:明确膜相关的RING-CH型E3泛素连接酶6(membrane-associated RING finger protein 6, March6)在成牙本质细胞分化以及牙本质生成中的作用。方法:采用免疫组织化学染色(immunohistochemistry, IHC)分析不同发育阶段小鼠牙齿切片,分析March6的时空表达特征。体外敲低小鼠牙乳头细胞(mouse dental papilla cells, mDPCs)中的March6,并进行矿化诱导,分别使用实时定量PCR、Western bolt、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色以及茜素红染色,评估March6对mDPCs成牙本质细胞向分化潜能的影响。将Prx1cre与March6flox/flox小鼠配繁,获得牙齿间充质中特异性敲除March6的小鼠(March6 cKO,Prx1cre;March6flox/flox)。通过IHC验证March6被特异性敲除。随后,对出生后10 d的March6 cKO及其同窝对照小鼠的下颌行切片苏木素-伊红染色、显微CT(micro-computed tomography, Micro-CT)观察,以确定March6在体内对牙本质生成的影响。结果:March6在胚胎时期小鼠牙齿间充质中表达水平较低,而在成牙本质细胞形成后,March6在成牙本质细胞中高表达。体外敲低mDPCs中的March6,并诱导其向成牙本质细胞分化,牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1,Dmp1)和牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, Dspp)的mRNA以及蛋白水平相较于对照显著上调。同时,细胞ALP活性和钙化结节生成能力在敲低组中也明显增强。组织学形态观察以及Micro-CT分析结果显示,March6 cKO小鼠的牙本质层相较于同窝对照明显增厚。结论:E3泛素连接酶March6对成牙本质细胞分化以及牙本质生成发挥抑制作用。 展开更多
关键词 March6 成牙本质细胞分化 本质生成 基因敲除
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转化生长因子β1(TGF-β1)和骨形成蛋白2(BMP2)体外联合诱导成牙本质细胞样细胞分化 被引量:2
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作者 朱奇 樊明文 +2 位作者 张旗 陈智 边专 《口腔医学研究》 CAS CSCD 2005年第4期357-360,共4页
目的:观察转化生长因子β1(transform ing growth factorβ1,TGF-β1)和骨形成蛋白2(bone morphogeneticprote in 2,BMP2)联合应用对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响。方法:取17 d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚,胰蛋白酶消化分离... 目的:观察转化生长因子β1(transform ing growth factorβ1,TGF-β1)和骨形成蛋白2(bone morphogeneticprote in 2,BMP2)联合应用对体外培养的鼠牙乳头成牙本质细胞分化的影响。方法:取17 d胎龄小鼠下颌第一磨牙牙胚,胰蛋白酶消化分离牙乳头,置半固态培养基培养6 d,半固态培养基中单独加入重组TGFβ1、BMP2,或分别与肝素联合,或TGFβ1和BMP2联合,组织学观察牙乳头的形态学变化。结果:TGF-β1或BMP2单独加入时未见细胞极化,但基质分泌增加。TGF-β1或BMP2加肝素可诱导牙乳头周边细胞发生极化,并分泌胞外基质。半固态培养基中同时加入TGF-β1和BMP2的牙乳头培养6 d后,牙乳头周边细胞出现极化和功能性分化,牙乳头周边胞外基质沉积明显,且可见牙乳头尖形态的维持及从牙乳头尖至牙乳头基底部成牙本质细胞分化梯度的维持。结论:本研究结果证实,在没有内釉上皮和完整的基底膜存在的情况下,TGF-β1和BMP2加肝素可诱导培养的牙乳头出现成牙本质细胞分化,并促进胞外基质的分泌。TGF-β1和BMP2均能诱导成牙本质细胞的细胞学分化和分泌功能,二者联合应用可协同发挥作用增强诱导效果。 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 骨形成蛋白 成牙本质细胞分化 牙乳头
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小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化过程中环状RNA的表达谱研究 被引量:4
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作者 占云燕 张皓 +1 位作者 杨国斌 樊明文 《口腔医学研究》 CAS 北大核心 2018年第4期371-374,共4页
目的:探讨环状RNA(circle RNA,circRNA)在小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化前后的表达差异,研究circRNA在成牙本质细胞发育过程中发挥的作用。方法:利用circRNA芯片技术检测矿化诱导组与未矿化组原代小鼠牙乳头细胞的circRNA表达谱,... 目的:探讨环状RNA(circle RNA,circRNA)在小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化前后的表达差异,研究circRNA在成牙本质细胞发育过程中发挥的作用。方法:利用circRNA芯片技术检测矿化诱导组与未矿化组原代小鼠牙乳头细胞的circRNA表达谱,经过对原始数据进行预处理,均一化后,找出差异表达的circRNA。根据表达差异倍数较高和样本间一致性较好的原则筛选circRNA。结果:与未矿化组相比,矿化诱导组小鼠牙乳头细胞中2倍以上表达,并且差异具有统计学意义(P≤0.01)的circRNA定义为差异表达的circRNA。在经矿化诱导的牙乳头细胞中,差异表达circRNA共4064条,其中上调表达3255条,下调表达809条。结论:circRNA芯片可用于筛选牙乳头细胞向成牙本质细胞分化过程中差异表达的circRNA,在小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化过程中,circRNA表达谱发生了显著变化,说明circRNA在成牙本质细胞发育过程中发挥着重要的调控作用。 展开更多
关键词 成牙本质细胞分化 环状RNA 环状RNA芯片
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微小RNA-1895参与小鼠牙乳头细胞成牙本质向分化的研究 被引量:1
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作者 张皓 杨国斌 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期28-32,共5页
目的:研究微小RNA(miRNA,miR)-1895在小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化过程中的功能。方法:建立小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化的模型,检测miR-1895在此过程中的表达。使用生物信息学分析miR-1895在Klf4 mRNA中的结合位点。向... 目的:研究微小RNA(miRNA,miR)-1895在小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化过程中的功能。方法:建立小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化的模型,检测miR-1895在此过程中的表达。使用生物信息学分析miR-1895在Klf4 mRNA中的结合位点。向细胞内转染miR-1895 inhibitor,利用Western blot和Real-time PCR检测抑制miR-1895后,对小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化的影响。结果:在小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化过程中miR-1895表达降低。Klf4 mRNA中存在miR-1895结合位点。抑制细胞内miR-1895表达后,细胞内成牙本质细胞相关基因表达增加。结论:在小鼠牙乳头细胞向成牙本质细胞向分化的过程中,miR-1895抑制细胞分化,可能参与分化调节过程。 展开更多
关键词 牙乳头细胞 成牙本质细胞分化 微小RNA-1895
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半固态培养基法培养鼠磨牙牙胚的实验观察 被引量:5
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作者 朱奇 樊明文 +2 位作者 张旗 边专 陈智 《口腔医学纵横》 CSCD 2000年第4期254-256,共3页
目的 :观察体外培养的鼠磨牙牙胚发育过程的组织学变化。方法 :用 16d胎龄的昆明小鼠下颌第一磨牙牙胚置于RPMI- 16 40半固态培养基上培养 ,常规组织学观察。结果 :体外培养的牙胚可由帽状期进入钟状期 ,出现成牙本质细胞和成釉细胞的... 目的 :观察体外培养的鼠磨牙牙胚发育过程的组织学变化。方法 :用 16d胎龄的昆明小鼠下颌第一磨牙牙胚置于RPMI- 16 40半固态培养基上培养 ,常规组织学观察。结果 :体外培养的牙胚可由帽状期进入钟状期 ,出现成牙本质细胞和成釉细胞的分化及前期牙本质的形成。结论 :半固态培养基法培养牙胚可保持其发育过程。 展开更多
关键词 牙胚 器官培养 成牙本质细胞分化
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