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TAZ诱导性过表达慢病毒载体的构建、鉴定及诱导过表达TAZ神经母细胞瘤细胞株的建立
被引量：
2
1
作者
阮红峰
应忠明
罗环
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第7期1035-1036,共2页
神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童最常见且致死性极高的实体肿瘤之一[1]。由NB所致死亡人数占所有儿童肿瘤死亡总数的15%[2]。分子靶向治疗是近年肿瘤领域研究的热点[3]。TAZ是一个包含WW-domain结构域的转录共激活子,参与多种肿...
神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童最常见且致死性极高的实体肿瘤之一[1]。由NB所致死亡人数占所有儿童肿瘤死亡总数的15%[2]。分子靶向治疗是近年肿瘤领域研究的热点[3]。TAZ是一个包含WW-domain结构域的转录共激活子,参与多种肿瘤细胞的增殖、调控肿瘤转移,并能预测部分肿瘤患者的预后情况[4]。针对Oncomine肿瘤数据库NB肿瘤组织的生物信息学分析发现,TAZ基因在NB肿瘤组织中呈高表达,且随着NB的恶化,表达逐渐升高。而TAZ是否参与NB的形成及恶化尚未完全明确。
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关键词
TAZ基因
神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y
诱导
过
表达
慢
病毒
载体
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职称材料
含人FcγRⅡB基因慢病毒的制备及其在HT-1080细胞中的表达
被引量：
2
2
作者
刘慧宇
曹秀琴
杨志伟
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第6期561-564,568,共5页
目的构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,并鉴定其在细胞中的表达。方法以人mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒TRE,构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可诱导...
目的构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,并鉴定其在细胞中的表达。方法以人mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒TRE,构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可诱导质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和可诱导病毒,分别测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和可诱导病毒共感染HT-1080细胞,经梯度浓度强力霉素(Dox)诱导,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,免疫荧光染色检测HT-1080细胞FcγRⅡB表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定,测序结果显示插入片段碱基序列与GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100%。表达病毒滴度达106TU/mL,可诱导病毒滴度达105TU/mL,感染性良好。HT-1080细胞被病毒感染后经Dox诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示FcγRⅡB能够在HT-1080细胞中表达;实时荧光定量PCR和Western blot法结果显示FcγRⅡB表达水平与诱导剂浓度正相关。结论成功制备了FcγRⅡB慢病毒,感染HT-1080细胞后可实现FcγRⅡB的诱导表达。
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关键词
FcγRⅡB
慢病毒诱导表达载体
调控
表达
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职称材料
上调巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能
被引量：
4
3
作者
郑修军
王琦
+1 位作者
曹秀琴
杨志伟
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第8期1022-1026,共5页
目的构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用。方法以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表...
目的构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用。方法以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒调节质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和调节病毒,测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和调节病毒共感染巨噬细胞,经梯度浓度强力霉素(DOX)诱导,免疫荧光技术检测巨噬细胞FcγRⅡB表达,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。经不同浓度DOX诱导后的腹腔巨噬细胞分别检测吞噬和趋化功能。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确。表达和调节病毒滴度均达到106转导单位/m L。巨噬细胞被病毒感染后经DOX诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示,FcγRⅡB能够在巨噬细胞表达;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示FcγRⅡB表达水平与DOX浓度呈正相关。巨噬细胞的吞噬和趋化功能与FcγRⅡB表达呈负相关。结论调节巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能。
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关键词
FcγRⅡB
慢病毒诱导表达载体
抑制性受体
巨噬细胞
吞噬和趋化
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职称材料
题名
TAZ诱导性过表达慢病毒载体的构建、鉴定及诱导过表达TAZ神经母细胞瘤细胞株的建立
被引量：
2
1
作者
阮红峰
应忠明
罗环
机构
浙江中医药大学附属第一医院骨伤研究所
台州中西医结合医院神经内科
浙江大学医学院附属第二医院
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第7期1035-1036,共2页
基金
国家自然科学基金项目(81804121)
浙江省自然科学基金(LQ17H270005)
+5 种基金
国家博士后基金面上项目(No.2018M632154)
省中医药卫生科技计划项目(No.2017ZB026)
浙江省医药卫生科技项目(No.2018269058)
浙江省医学会临床科研基金项目(No.2017ZYC-A16,2017ZYC-A121)
台州市科技局项目(No.1802ky76)
温岭市科技项目(No.2017C311128)。
文摘
神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童最常见且致死性极高的实体肿瘤之一[1]。由NB所致死亡人数占所有儿童肿瘤死亡总数的15%[2]。分子靶向治疗是近年肿瘤领域研究的热点[3]。TAZ是一个包含WW-domain结构域的转录共激活子,参与多种肿瘤细胞的增殖、调控肿瘤转移,并能预测部分肿瘤患者的预后情况[4]。针对Oncomine肿瘤数据库NB肿瘤组织的生物信息学分析发现,TAZ基因在NB肿瘤组织中呈高表达,且随着NB的恶化,表达逐渐升高。而TAZ是否参与NB的形成及恶化尚未完全明确。
关键词
TAZ基因
神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y
诱导
过
表达
慢
病毒
载体
Keywords
TAZ gene
neuroblastoma cell SH-SY5Y
inducible over-expressed lentivirus vector
分类号
R329.24 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R373.9 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
含人FcγRⅡB基因慢病毒的制备及其在HT-1080细胞中的表达
被引量：
2
2
作者
刘慧宇
曹秀琴
杨志伟
机构
宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系
生育力保持省部级共建教育部重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第6期561-564,568,共5页
基金
国家自然科学基金(81160375)
宁夏教育厅高等学校科学研究(NGY2011053)
文摘
目的构建FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,并鉴定其在细胞中的表达。方法以人mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒TRE,构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒可诱导质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和可诱导病毒,分别测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和可诱导病毒共感染HT-1080细胞,经梯度浓度强力霉素(Dox)诱导,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,免疫荧光染色检测HT-1080细胞FcγRⅡB表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定,测序结果显示插入片段碱基序列与GenBank提供FcγRⅡB基因序列同源性100%。表达病毒滴度达106TU/mL,可诱导病毒滴度达105TU/mL,感染性良好。HT-1080细胞被病毒感染后经Dox诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示FcγRⅡB能够在HT-1080细胞中表达;实时荧光定量PCR和Western blot法结果显示FcγRⅡB表达水平与诱导剂浓度正相关。结论成功制备了FcγRⅡB慢病毒,感染HT-1080细胞后可实现FcγRⅡB的诱导表达。
关键词
FcγRⅡB
慢病毒诱导表达载体
调控
表达
Keywords
FcγRⅡB
lentiviral inducible expression vector
inducible expression
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
上调巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能
被引量：
4
3
作者
郑修军
王琦
曹秀琴
杨志伟
机构
宁夏医科大学基础医学院病原生物学与免疫学系
生育力保持省部级共建教育部重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第8期1022-1026,共5页
基金
国家自然科学基金(81160375)
文摘
目的构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用。方法以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒调节质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和调节病毒,测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和调节病毒共感染巨噬细胞,经梯度浓度强力霉素(DOX)诱导,免疫荧光技术检测巨噬细胞FcγRⅡB表达,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。经不同浓度DOX诱导后的腹腔巨噬细胞分别检测吞噬和趋化功能。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确。表达和调节病毒滴度均达到106转导单位/m L。巨噬细胞被病毒感染后经DOX诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示,FcγRⅡB能够在巨噬细胞表达;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示FcγRⅡB表达水平与DOX浓度呈正相关。巨噬细胞的吞噬和趋化功能与FcγRⅡB表达呈负相关。结论调节巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能。
关键词
FcγRⅡB
慢病毒诱导表达载体
抑制性受体
巨噬细胞
吞噬和趋化
Keywords
FcγRⅡB
inducible lentiviral expression vector
inhibitory receptors
macrophages
phagocytosis and chemotaxis
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
TAZ诱导性过表达慢病毒载体的构建、鉴定及诱导过表达TAZ神经母细胞瘤细胞株的建立
阮红峰
应忠明
罗环
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
含人FcγRⅡB基因慢病毒的制备及其在HT-1080细胞中的表达
刘慧宇
曹秀琴
杨志伟
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
上调巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能
郑修军
王琦
曹秀琴
杨志伟
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
4
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职称材料
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