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鸡斑联蛋白基因的慢病毒干扰载体的构建及筛选
被引量：
2
1
作者
戴国俊
孙大辉
+7 位作者
林雨鑫
孙明明
王翔
王金玉
张跟喜
谢恺舟
施会强
侍苗苗
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期1330-1336,共7页
本试验旨在构建4条鸡斑联蛋白(zyxin)基因的RNAi慢病毒载体,对其进行滴度测定,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后开展鸡zyxin基因抗球虫机理的研究奠定基础。提取鸡胸腺组织的RNA,反转录,扩增zyxin基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体...
本试验旨在构建4条鸡斑联蛋白(zyxin)基因的RNAi慢病毒载体,对其进行滴度测定,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后开展鸡zyxin基因抗球虫机理的研究奠定基础。提取鸡胸腺组织的RNA,反转录,扩增zyxin基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体Pex-6上。设计针对zyxin的shRNA序列,应用基因重组技术插入到Lv3慢病毒表达载体中,将lv3-shRNA载体与包装质粒pGag/Pol、pRev、Pvsv-G共转染293T细胞,进行病毒包装。将得到的病毒原液10倍稀释6个梯度,分别转染293T细胞,进行滴度的测定。将构建好的4条慢病毒载体与Pex-6-zyxin真核表达载体共转染293T细胞,运用RT-PCR和Western-blot方法进行有效干扰靶点的筛选。构建4条针对目的基因zyxin的RNAi慢病毒穿梭质粒表达载体CO1、CO2、CO3、CO4和1个阴性对照质粒,经测序鉴定正确;共转染293T细胞包装病毒并浓缩后滴度达1×108 TU·mL-1,适合感染目的细胞,经过筛选,CO3对zyxin在293T细胞中的表达干扰效果最佳。成功构建了zyxin基因RNA干扰慢病毒表达载体,并进行了有效干扰靶点的筛选,为进一步研究zyxin基因的功能奠定了基础。
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关键词
zyxin基因
RNAI
慢病毒干扰载体
真核表达
载体
鸡
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职称材料
鸡MAPK8生物信息学分析及慢病毒干扰载体效率检测
2
作者
胡菜
王颖洁
+4 位作者
靳锴
吴宇慧
赵宗仪
李熠
张亚妮
《中国家禽》
北大核心
2022年第3期17-22,共6页
研究旨在对鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)向鸡精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSC)分化过程中显著差异基因——丝裂原活化蛋白激酶8(Mitogen-activated protein kinase 8,MAPK8)进行生物信息学分析,验证MAPK8慢病毒干...
研究旨在对鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)向鸡精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSC)分化过程中显著差异基因——丝裂原活化蛋白激酶8(Mitogen-activated protein kinase 8,MAPK8)进行生物信息学分析,验证MAPK8慢病毒干扰载体活性及干扰效率,为后期验证MAPK8在ESC向SSC分化过程中的调控方式以及功能研究奠定基础。试验采用RNA-seq和qRT-PCR分析和检测鸡ESC、PGC和SSC的差异表达基因;利用生物信息学在线预测软件对其进行理化性质及结构特征分析;比较鸡MAPK8基因序列与其它物种的同源性并进行组织表达谱检测;验证MAPK8慢病毒干扰载体的活性与干扰效率。结果显示:MAPK8在SSC上特异高表达;生物信息学分析显示鸡MAPK8是一种亲水性的无信号脂溶性蛋白,存在2个N-糖基化位点、13个O-糖基化位点和45个磷酸化位点,与其它物种高度同源(序列一致性达到80%),保守性较高;表达谱分析发现其在性腺中高表达;MAPK8慢病毒干扰载体能够稳定表达EGFP荧光蛋白且shRNA-1干扰效率最佳。该结果为深入探究MAPK8在鸡ESC向SSC分化过程中的功能奠定了基础。
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关键词
鸡
MAPK8
生物信息学分析
慢病毒干扰载体
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职称材料
题名
鸡斑联蛋白基因的慢病毒干扰载体的构建及筛选
被引量：
2
1
作者
戴国俊
孙大辉
林雨鑫
孙明明
王翔
王金玉
张跟喜
谢恺舟
施会强
侍苗苗
机构
扬州大学动物科学与技术学院
江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室
江苏京海禽业集团有限公司
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第8期1330-1336,共7页
基金
国家肉鸡产业技术体系(nyctx-42-G1-05)
江苏省高校自然科学研究重大项目(11KJA230001)
江苏高校优势学科建设工程资助项目(PAPD)
文摘
本试验旨在构建4条鸡斑联蛋白(zyxin)基因的RNAi慢病毒载体,对其进行滴度测定,并进行有效干扰靶点的筛选,为以后开展鸡zyxin基因抗球虫机理的研究奠定基础。提取鸡胸腺组织的RNA,反转录,扩增zyxin基因的编码区,并将其克隆到真核表达载体Pex-6上。设计针对zyxin的shRNA序列,应用基因重组技术插入到Lv3慢病毒表达载体中,将lv3-shRNA载体与包装质粒pGag/Pol、pRev、Pvsv-G共转染293T细胞,进行病毒包装。将得到的病毒原液10倍稀释6个梯度,分别转染293T细胞,进行滴度的测定。将构建好的4条慢病毒载体与Pex-6-zyxin真核表达载体共转染293T细胞,运用RT-PCR和Western-blot方法进行有效干扰靶点的筛选。构建4条针对目的基因zyxin的RNAi慢病毒穿梭质粒表达载体CO1、CO2、CO3、CO4和1个阴性对照质粒,经测序鉴定正确;共转染293T细胞包装病毒并浓缩后滴度达1×108 TU·mL-1,适合感染目的细胞,经过筛选,CO3对zyxin在293T细胞中的表达干扰效果最佳。成功构建了zyxin基因RNA干扰慢病毒表达载体,并进行了有效干扰靶点的筛选,为进一步研究zyxin基因的功能奠定了基础。
关键词
zyxin基因
RNAI
慢病毒干扰载体
真核表达
载体
鸡
Keywords
zyxin
RNAi
recombinant lenti-virus interference vectors
eukaryotic expression vector
chicken
分类号
S813.3 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
鸡MAPK8生物信息学分析及慢病毒干扰载体效率检测
2
作者
胡菜
王颖洁
靳锴
吴宇慧
赵宗仪
李熠
张亚妮
机构
扬州大学动物科学技术学院
扬州大学
温州肯恩大学理工学院
出处
《中国家禽》
北大核心
2022年第3期17-22,共6页
基金
江苏高校优势学科建设工程资助项目。
文摘
研究旨在对鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)向鸡精原干细胞(Spermatogonial stem cells,SSC)分化过程中显著差异基因——丝裂原活化蛋白激酶8(Mitogen-activated protein kinase 8,MAPK8)进行生物信息学分析,验证MAPK8慢病毒干扰载体活性及干扰效率,为后期验证MAPK8在ESC向SSC分化过程中的调控方式以及功能研究奠定基础。试验采用RNA-seq和qRT-PCR分析和检测鸡ESC、PGC和SSC的差异表达基因;利用生物信息学在线预测软件对其进行理化性质及结构特征分析;比较鸡MAPK8基因序列与其它物种的同源性并进行组织表达谱检测;验证MAPK8慢病毒干扰载体的活性与干扰效率。结果显示:MAPK8在SSC上特异高表达;生物信息学分析显示鸡MAPK8是一种亲水性的无信号脂溶性蛋白,存在2个N-糖基化位点、13个O-糖基化位点和45个磷酸化位点,与其它物种高度同源(序列一致性达到80%),保守性较高;表达谱分析发现其在性腺中高表达;MAPK8慢病毒干扰载体能够稳定表达EGFP荧光蛋白且shRNA-1干扰效率最佳。该结果为深入探究MAPK8在鸡ESC向SSC分化过程中的功能奠定了基础。
关键词
鸡
MAPK8
生物信息学分析
慢病毒干扰载体
Keywords
MAPK8
bioinformatics analysis
lentiviral interference vector
分类号
S831.2 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸡斑联蛋白基因的慢病毒干扰载体的构建及筛选
戴国俊
孙大辉
林雨鑫
孙明明
王翔
王金玉
张跟喜
谢恺舟
施会强
侍苗苗
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
鸡MAPK8生物信息学分析及慢病毒干扰载体效率检测
胡菜
王颖洁
靳锴
吴宇慧
赵宗仪
李熠
张亚妮
《中国家禽》
北大核心
2022
0
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职称材料
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