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猫视神经慢性损伤相关差异表达基因消减cDNA文库的构建 被引量：2
1
作者 吕立权 楼美清 +5 位作者 董艳 蔡如珏 胡国汉 骆纯 侯立军 卢亦成 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期550-554,共5页
目的:构建猫视神经慢性损伤相关差异表达基因消减cDNA文库。方法:15只成年家猫随机分为正常对照组、视神经压迫4周组和视神经压迫8周组(n=5),压迫4周组和压迫8周组猫利用球囊植入法建立慢性视神经损伤模型。取各组动物视神经,TRIzol法... 目的:构建猫视神经慢性损伤相关差异表达基因消减cDNA文库。方法:15只成年家猫随机分为正常对照组、视神经压迫4周组和视神经压迫8周组(n=5),压迫4周组和压迫8周组猫利用球囊植入法建立慢性视神经损伤模型。取各组动物视神经,TRIzol法提取总RNA.SMART技术合成cDNA,随后利用抑制消减杂交方法分离受压4周和8周视神经中差异表达基因的cDNA片段,将其与T载体进行T/A连接构建文库,将连接产物用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行文库扩增和蓝白斑筛选。随机挑取300个白色克隆进行菌落PCR鉴定。结果:菌落PCR扩增显示每个文库80%的克隆中均有200～800 bp的插入片段。结论:成功构建猫视神经慢性损伤相关差异表达基因消减cDNA文库,为进一步筛选、克隆慢性视神经损伤相关差异表达基因奠定了基础。 展开更多
关键词 慢性视神经损伤 抑制消减杂交 基因文库
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视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库的鉴定与分析 被引量：1
2
作者 吕立权 楼美清 +5 位作者 董艳 蔡如珏 胡国汉 骆纯 侯立军 卢亦成 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期934-939,共6页
目的：对构建的猫视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库进行初步克隆、鉴定和分析。方法：用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行cDNA文库扩增和蓝白斑筛选，每个文库随机挑取300个白色克隆用菌落PCR进行鉴定。对阳性克隆菌落进行DNA测序以获... 目的：对构建的猫视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库进行初步克隆、鉴定和分析。方法：用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行cDNA文库扩增和蓝白斑筛选，每个文库随机挑取300个白色克隆用菌落PCR进行鉴定。对阳性克隆菌落进行DNA测序以获得差异表达基因片段序列。将测序所得的序列通过互联网用Blast程序查找日本国家DNA数据库进行同源性分析。用实时定量PCR验证差异克隆。结果：PCR鉴定获得1000个阳性菌落，测序获得674个EST片段，序列长度在200～800bp之间。同源性分析结果提示4周正向文库得到14个同源基因，4周反向文库得到20个同源基因，8周正向文库得到23个同源基因，8周反向文库得到19个同源基因。这些基因可归类于能量代谢、物质转运、信号转导、基因转录、细胞损伤与修复、MHC分子等。实时定量PCR检测的4个克隆证实是差异表达序列。结论：本研究构建的视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库为进一步鉴定和研究慢性视神经损伤相关基因提供了实验基础。 展开更多
关键词 慢性视神经损伤 CDNA文库 基因表达
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视神经慢性受压后视神经胶质细胞的病理变化
3
作者 吕立权 楼美清 +5 位作者 董艳 蔡如珏 胡国汉 骆纯 侯立军 卢亦成 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期694-698,共5页
目的:观察视神经慢性受压后视神经胶质细胞的病理改变,探讨胶质细胞与神经元的相互作用,为慢性视神经损伤的修复研究提供基础。方法:30只成年家猫随机等分为正常对照组、假手术组、压迫1周组、压迫2周组、压迫4周组和压迫8周组(n=5)。后... 目的:观察视神经慢性受压后视神经胶质细胞的病理改变,探讨胶质细胞与神经元的相互作用,为慢性视神经损伤的修复研究提供基础。方法:30只成年家猫随机等分为正常对照组、假手术组、压迫1周组、压迫2周组、压迫4周组和压迫8周组(n=5)。后4组利用球囊植入法建立慢性视神经损伤模型。各组动物灌注固定,取视神经组织,行透射电镜观察和免疫组织化学染色,观察胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、髓磷脂碱性蛋白(MBP)、碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)和ED-1的表达变化。结果:电镜下正常视神经髓鞘结构完整,各髓板清晰、排列紧密;受压2周后见轻微脱髓鞘;4周后出现板层分离、髓鞘泡状解离,并可见变性的胶质细胞;8周后髓鞘崩解更为明显,大部分髓鞘明显变薄,并可见凋亡小体形成。免疫组化染色在受压2周后无明显改变;4周后视神经MBP染色出现排列紊乱,有缺失现象;8周后染色缺失更为明显。受压4周后视神经压迫区出现CAⅡ染色紊乱,有缺失现象;8周后更为明显。非压迫区在受压8周后CAⅡ染色仍基本正常。受压4周后视神经直接受压区GFAP染色强度下降,损伤区近侧端染色强度增加;至8周时更为明显。正常视神经内可见散在的ED-1染色阳性细胞;受压4周后损伤区周围ED-1染色阳性细胞明显增多;8周后更为明显。结论:视神经慢性受压后损伤区出现胶质细胞变性和坏死,损伤区周围出现星形胶质细胞增殖和小胶质细胞激活,提示胶质细胞改变参与了慢性视神经损伤的病理过程。 展开更多
关键词 慢性视神经损伤 少突胶质细胞 星形胶质细胞 小胶质细胞 病理学
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