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用花粉管通道法将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻获得转基因植株 被引量：5
1
作者 王才林 朱镇 +8 位作者 赵凌 张亚东 林静 张所兵 陈涛 刘贤进 王冬兰 黄骏麒 龚蓁蓁 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2005年第4期245-248,共4页
采用花粉管通道法遗传转化技术,将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻品系9311中,获得了转基因植株。抗虫性鉴定结果表明:部分转基因植株对水稻螟虫的抗性比对照明显提高;PCR扩增获得了与引物扩增片段长度相同的DNA片段,证实API基因已... 采用花粉管通道法遗传转化技术,将慈姑蛋白酶抑制剂基因(API)导入水稻品系9311中,获得了转基因植株。抗虫性鉴定结果表明:部分转基因植株对水稻螟虫的抗性比对照明显提高;PCR扩增获得了与引物扩增片段长度相同的DNA片段,证实API基因已整合到受体植株的基因组中。遗传分析表明,API基因能在有性生殖过程中传递给后代,并于T4代分离出抗性纯合的株系。 展开更多
关键词 水稻 抗虫 慈姑蛋白酶抑制剂基因 转基因植株 花粉管通道法
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慈姑蛋白酶抑制剂基因转化小白菜获抗虫转基因植株 被引量：28
2
作者 张智奇 周音 +7 位作者 钟维瑾 张建军 殷丽青 陈全庆 龚蓁蓁 谢伟军 叶俊强 邹振 《上海农业学报》 CSCD 1999年第4期4-9,共6页
通过根癌农杆菌的介导将慈姑蛋白酶抑制剂基因（ＡＰＩ）导入小白菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍ ｐｅｓｔｒｉｓｓｓｐ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓＬ．）。Ｋａｎａｍ ｙｃｉｎ 筛选浓度为１０～１５ ｍ ｇ·Ｌ－ １，抑制农杆菌生长的... 通过根癌农杆菌的介导将慈姑蛋白酶抑制剂基因（ＡＰＩ）导入小白菜（Ｂｒａｓｓｉｃａ ｃａｍ ｐｅｓｔｒｉｓｓｓｐ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓＬ．）。Ｋａｎａｍ ｙｃｉｎ 筛选浓度为１０～１５ ｍ ｇ·Ｌ－ １，抑制农杆菌生长的抗生素选用Ｃａｒｂｅｎｉｃｉｌｌｉｎ，浓度为３００～５００ ｍ ｇ·Ｌ－ １。小白菜带柄子叶被农杆菌感染后，抗性芽的诱导频率为０．２％ ～２．０％ 。加入适量的ＡｇＮＯ３ 不仅可以抑制过度生长的农杆菌，还可以使抗性芽的诱导频率约提高到５％ 。试验获得转基因植株９７ 株。其中８１ 株ＰＣＲ 检测为阳性。部分转基因植株经ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ 及ＲＴＰＣＲ 的进一步分子检测分析，证明ＡＰＩ基因已被整合进小白菜植株的基因组中。转基因小白菜的叶片离体饲虫初步试验结果表明：对鳞翅目害虫菜青虫的生长发育有一定的抑制作用，其幼虫摄食转基因植株叶片后，平均体重、体长均分别比对照（摄食非转基因植株叶片）减轻和短小，且约有２７．８％ 的幼虫不能正常羽化，而对照全部正常羽化。 展开更多
关键词 小白菜 慈姑蛋白酶 抑制剂 抗虫性 转基因植株
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慈姑蛋白酶抑制剂(API)基因导入棉花获得转基因植株 被引量：4
3
作者 黄骏麒 龚蓁蓁 +5 位作者 吴敬音 陈松 束春娥 谢伟军 周宝良 沈新莲 《江苏农业学报》 CSCD 2001年第2期65-68,共4页
通过花粉管通道技术将慈姑蛋白酶抑制剂API(ArrowheadProteinaseInhibitor)基因转入棉花 ,获得了转基因植株。经对棉铃虫抗虫性鉴定和PCR、RT PCR、Southernblotting分析 。
关键词 慈姑蛋白酶抑制剂 API基因 棉花 转基因植株
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大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的克隆及其转基因烟草抗虫性初探 被引量：19
4
作者 高越峰 朱祯 +2 位作者 朱玉 肖桂芳 李向辉 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第9期5-9,共5页
从未成熟的大豆子叶中提取总RNA，利用RT－PCR方法扩增出大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因单一目的片段，克隆到pBluescriptKS（＋）SmaI位点上。序列分析表明，该基因与报导的序列高度同源：其核苷酸序列及推论的编码氨基酸序列的同源... 从未成熟的大豆子叶中提取总RNA，利用RT－PCR方法扩增出大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因单一目的片段，克隆到pBluescriptKS（＋）SmaI位点上。序列分析表明，该基因与报导的序列高度同源：其核苷酸序列及推论的编码氨基酸序列的同源率分别为99．5％和98．2％。由此，构建了大豆Kunitz型胰蛋白酶抑制剂基因的植物高效表达载体pBinSKTI。并采用农杆菌介导的叶盘法转化了烟草，获得的转基因烟草再生植株经抗虫测试表明：与对照烟草相比，具有明显的抗棉铃虫能力。 展开更多
关键词 大豆胰蛋白酶 抑制剂 抗虫基因 转基因烟草
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家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂4(serpin-4)的基因克隆、原核表达和多克隆抗体制备 被引量：14
5
作者 查宏贤 刘罡 +6 位作者 张晨 王彦云 卫正国 李兵 陈玉华 许雅香 沈卫德 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期642-647,共6页
丝氨酸蛋白酶抑制剂4(serpin-4)为丝氨酸蛋白酶抑制剂家族中的一员。本研究旨在研制高效价的家蚕Bombyxmoriserpin-4多克隆抗体,为深入研究serpin-4基因的生理功能打下物质基础。首先于家蚕脂肪体中克隆了serpin-4基因,利用基因重组技... 丝氨酸蛋白酶抑制剂4(serpin-4)为丝氨酸蛋白酶抑制剂家族中的一员。本研究旨在研制高效价的家蚕Bombyxmoriserpin-4多克隆抗体,为深入研究serpin-4基因的生理功能打下物质基础。首先于家蚕脂肪体中克隆了serpin-4基因,利用基因重组技术构建了pET28a-serpin-4原核表达载体,经IPTG诱导,获得原核表达重组融合蛋白,利用镍柱回收纯化技术,获得目的蛋白;经SDS-PAGE和抗His多抗检测,纯化蛋白的分子量大小与预测的一致,即获得了高纯度的目的蛋白,以此蛋白为免疫抗原,采用4次免疫方式对昆明小鼠进行抗原免疫,最终获得抗serpin-4的多克隆抗体血清;该血清经ELISA和Westernblot验证,效价达到1:20000,特异性较好。家蚕serpin-4多克隆抗体的成功制备,一方面表明应用于其他生物的多克隆抗体制备所采用的方法对于家蚕serpin基因的研究同样适用;另一方面,也为深入研究家蚕serpin-4的生理功能打下了物质基础。 展开更多
关键词 家蚕 丝氨酸蛋白酶抑制剂 基因克隆 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
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水稻巯基蛋白酶抑制剂基因在烟草叶绿体中的表达 被引量：7
6
作者 苏宁 冯丽 +3 位作者 杨波 孟昆 李轶女 沈桂芳 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期301-304,共4页
将水稻巯基蛋白酶抑制剂 (Oryzacystatin,OC) c DNA基因克隆、测序分析后 ,与烟草 (N icotiana tabacum L .)叶绿体 16 S r DNA基因启动子和 T393终止子构建表达盒 ,与抗壮观霉素选择标记基因 aad A表达盒相连 ,以烟草叶绿体基因组同源... 将水稻巯基蛋白酶抑制剂 (Oryzacystatin,OC) c DNA基因克隆、测序分析后 ,与烟草 (N icotiana tabacum L .)叶绿体 16 S r DNA基因启动子和 T393终止子构建表达盒 ,与抗壮观霉素选择标记基因 aad A表达盒相连 ,以烟草叶绿体基因组同源片段 rbc L和 ORF5 12一起构建成叶绿体转化载体 p ZOC。通过基因枪轰击烟草幼苗叶片 ,壮观霉素筛选 ,获得转化再生植株。经 Southern、 Western检测及子代遗传学分析实验证明 OC基因已整合到烟草叶绿体中 ,并且可以遵循非孟德尔的母性遗传规律稳定遗传给后代。 展开更多
关键词 水稻 巯基蛋白酶 抑制剂 基因 烟草 叶绿体 抗虫作用
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茶树巯基蛋白酶抑制剂基因的cDNA克隆与序列分析(英文) 被引量：12
7
作者 王朝霞 李叶云 +1 位作者 江昌俊 余有本 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期177-182,共6页
对多种已知植物巯基蛋白酶抑制剂(cystatin)基因的氨基酸序列进行比对分析,根据其高度保守的氨基酸序列设计一对简并引物,并从茶树品种龙井43鲜叶中提取总RNA,用RT-PCR法扩增出-204 bp的cDNA特异片段,然后通过3'/5'RACE的方法,... 对多种已知植物巯基蛋白酶抑制剂(cystatin)基因的氨基酸序列进行比对分析,根据其高度保守的氨基酸序列设计一对简并引物,并从茶树品种龙井43鲜叶中提取总RNA,用RT-PCR法扩增出-204 bp的cDNA特异片段,然后通过3'/5'RACE的方法,分别扩增出3'端和5'端的序列,从而获得茶树巯基蛋白酶抑制剂基因的cDNA全长序列,所得序列全长627 bp,编码101个氨基酸,分子量约11.062 KDa.该基因在推测的氨基酸序列中含有巯基蛋白酶抑制剂家族中高度保守的、与其活性有关的QXVXG结构,且经Blast分析表明,该基因序列与其他植物巯基蛋白酶抑制剂基因的氨基酸序列同源性为54%～77%. 展开更多
关键词 茶树 巯基蛋白酶抑制剂基因 CDNA 克隆
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豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因转化欧美杨的研究 被引量：11
8
作者 赵强 赵志文 +2 位作者 张廷婷 崔德才 王斌 《生物技术通报》 CAS CSCD 2005年第4期54-58,共5页
本研究建立了欧美107杨的高频再生体系,用改良的根癌农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入107杨中。经过严格的卡那霉素(Km)筛选,得到了Km抗性(Kmr)植株。对部分Kmr植株进行PCR及PCR-Southern杂交鉴定,证实CpTI基因已整合进... 本研究建立了欧美107杨的高频再生体系,用改良的根癌农杆菌介导法将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入107杨中。经过严格的卡那霉素(Km)筛选,得到了Km抗性(Kmr)植株。对部分Kmr植株进行PCR及PCR-Southern杂交鉴定,证实CpTI基因已整合进杨树基因组中。转基因植株的饲虫实验表明,其中部分株系的叶片可在一定程度上抑制扁刺蛾幼虫的生长。 展开更多
关键词 豇豆 胰蛋白酶抑制剂 CPTI 基因转化 欧美杨 转基因植株
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水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转化桑树获得转基因植株的初报 被引量：12
9
作者 王洪利 楼程富 +2 位作者 张有做 谈建中 焦锋 《蚕业科学》 CAS CSCD 2003年第3期291-294,共4页
利用基因枪法将水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因 (OC)导入桑树组织 ,经抗性筛选和组织培养获得再生植株 ,通过对转基因植株的PCR Southern杂交及RNA点杂交等检测 ,证实OC基因转化桑树成功 ,为选育抗虫性桑树品种奠定了基础。
关键词 水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因 桑树 遗传转化 基因枪 抗虫育种 转基因植株
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豇豆胰蛋白酶抑制剂基因的克隆 被引量：6
10
作者 杨朝辉 雷建军 +3 位作者 曹必好 宋明 王亚培 王进 《西北植物学报》 CAS CSCD 2002年第5期1050-1055,共6页
利用 RT- PCR的方法 ,从豇豆种子、子叶及成熟叶片中分别提取 RNA,反转录后以该基因两端的保守序列为引物进行 PCR扩增 ,PCR产物与 p UCm- T载体连接进行克隆 ,蓝白筛选重组子 ,经测序 ,其核苷酸同源性高达 1 0 0 % ,蛋白质同源性达 91 ... 利用 RT- PCR的方法 ,从豇豆种子、子叶及成熟叶片中分别提取 RNA,反转录后以该基因两端的保守序列为引物进行 PCR扩增 ,PCR产物与 p UCm- T载体连接进行克隆 ,蓝白筛选重组子 ,经测序 ,其核苷酸同源性高达 1 0 0 % ,蛋白质同源性达 91 %。本试验同时对该基因的表达时期差异进行了大致检测 ,结果是种子的表达量最高 ,子叶其次 。 展开更多
关键词 抗虫基因 反转录 测序 豇豆 胰蛋白酶 抑制剂基因 克隆
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农杆菌介导豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(cpti)在玉米中的遗传转化 被引量：8
11
作者 伍晓丽 朱祯 +3 位作者 李晚忱 潘光堂 曹墨菊 荣廷昭 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期297-298,共2页
关键词 农杆菌介导 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 玉米 遗传转化 抗虫性
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蛇毒金属蛋白酶抑制剂基因的合成及杆状病毒表达载体的构建 被引量：7
12
作者 徐剑文 林建银 +2 位作者 林旭 齐元麟 张晓艳 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期755-764,共10页
研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建。根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)... 研究蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a)基因的合成及杆状病毒表达载体的构建。根据GenBank中查找的BJ46a基因序列(AF294836),将其分为20个片段,通过缓慢退火PCR法使之拼接为完整的BJ46a基因,经SacⅠ及XhoⅠ双酶切后定向克隆到载体pET-42a(+)中,PCR扩增、酶切及测序鉴定;根据测序结果用定点突变法逐一改正错误位点。随后将该基因插入到转座载体pFastBac HT C的MCS中,转化大肠杆菌DH5-αT1,以LB/AP平板筛选阳性重组子,PCR扩增、酶切鉴定,提取pFastBac HT C-BJ46a重组体进一步转化DH10Bac感受态细胞,48h后通过蓝白筛选,挑取单个白色菌落划线,证实所得菌落均为白斑,挑克隆PCR鉴定。结果表明成功构建杆状病毒重组转座载体、重组穿梭载体。含BJ46a基因的重组杆状病毒感染Sf 9昆虫细胞,获得目的蛋白的表达。BJ46a基因的合成及杆状病毒表达载体的成功构建,为进一步研究其生物学功能奠定了坚实的基础。 展开更多
关键词 蛇毒金属蛋白酶抑制剂(BJ46a) 基因合成 基因克隆 基因突变 重组杆状病毒载体
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新疆杨胰蛋白酶抑制剂基因的克隆与表达 被引量：5
13
作者 梁文星 范在丰 +3 位作者 李永 宋丽敏 李怀方 田国忠 《林业科学研究》 CSCD 北大核心 2006年第4期446-451,共6页
杨树受损伤后能诱导一些基因的表达,其编码的蛋白质可能在杨树的防卫反应中起一定作用。用PCR方法从新疆杨叶片中克隆出一个损伤诱导型Kun itz胰蛋白酶抑制剂基因PaTI1。序列分析表明:此基因不含内含子,其翻译起点上游具有‘TATA’和‘C... 杨树受损伤后能诱导一些基因的表达,其编码的蛋白质可能在杨树的防卫反应中起一定作用。用PCR方法从新疆杨叶片中克隆出一个损伤诱导型Kun itz胰蛋白酶抑制剂基因PaTI1。序列分析表明:此基因不含内含子,其翻译起点上游具有‘TATA’和‘CCAAT’等转录控制元件,包含的阅读框架能编码一个长为213个氨基酸的多肽。此多肽与克隆自美洲山杨的PtTI2和PtTI1氨基酸序列同源性最高,分别为95%和80%,其N端存在一长度为27个氨基酸的信号肽。将此基因以融合蛋白的形式在大肠杆菌中进行表达,纯化后的融合蛋白对胰蛋白酶的活性有抑制作用,每8.5μg融合蛋白可完全抑制1μg牛胰蛋白酶的活性。W estern b lot分析表明融合蛋白与PtTI2特异的抗体之间有明显的血清学反应。 展开更多
关键词 蛋白酶抑制剂基因 新疆杨 损伤诱导
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豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化花椰菜的研究 被引量：5
14
作者 吕玲玲 雷建军 +3 位作者 宋明 曹必好 陈国菊 曾国平 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期78-82,共5页
通过根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入花椰菜无菌苗的下胚轴和子叶中,卡那霉素(Kan)的筛选质量浓度为15 mg/L,抑制农杆菌生长的抗生素选用羧苄青霉素(carbencillin),质量浓度为500mg/L.对... 通过根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens介导,将豇豆胰蛋白酶抑制剂(CpTI)基因导入花椰菜无菌苗的下胚轴和子叶中,卡那霉素(Kan)的筛选质量浓度为15 mg/L,抑制农杆菌生长的抗生素选用羧苄青霉素(carbencillin),质量浓度为500mg/L.对所获得的转基因植株进行PCR扩增,结果显示大多数为阳;PCR-Southern及Southern分子检测分析,结果证明CpTI基因已被整合到花椰菜植株的基因组中.转基因植株叶片的离体饲虫初步试验结果表明,对鳞翅目害虫菜青虫的生长发育有一定的抑制作用. 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂 基因转化 花椰菜 农杆菌介导
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蛋白酶抑制剂抗虫基因工程研究进展 被引量：8
15
作者 肖怀秋 林亲录 +1 位作者 李玉珍 赵明谋 《生物技术通报》 CAS CSCD 2004年第6期22-25,共4页
综述了蛋白酶抑制剂分类、作用机理、自身优势以及研究进展。根据当前的研究现状、存在问题 ,提出了解决措施 。
关键词 蛋白酶抑制剂 抗虫基因工程 分类 作用机理
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家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂基因Bmserpin-6的特异性表达分析 被引量：6
16
作者 王彦云 何渐鸣 +3 位作者 李国胜 王明慧 沈卫德 许雅香 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期257-260,共4页
丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)在昆虫的先天性免疫及生长发育中发挥重要作用。为研究家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂6(Bmserpin-6)在家蚕表皮黑化反应、蜕皮变态和先天性免疫等生理过程中的功能作用,采用实时荧光定量PCR方法,检测Bm-serpin-6 mRN... 丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin)在昆虫的先天性免疫及生长发育中发挥重要作用。为研究家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂6(Bmserpin-6)在家蚕表皮黑化反应、蜕皮变态和先天性免疫等生理过程中的功能作用,采用实时荧光定量PCR方法,检测Bm-serpin-6 mRNA在家蚕幼虫组织和蜕皮过程以及免疫刺激处理后的转录特征。结果表明:Bmserpin-6 mRNA在4龄幼虫的头部、表皮、中肠、丝腺和脂肪体中有转录,其中在表皮中高水平转录,但在眠中的转录水平下调;在5龄幼虫头部的转录水平随发育时间呈先升后降的趋势;脂多糖(LPS)刺激5龄第3天幼虫后,Bmserpin-6 mRNA在血液和脂肪体中的转录水平上升,其中在脂肪体中的转录水平自刺激后6 h达到最高值,在血液中的转录水平自刺激后9 h达到最高值。结果提示,Bmserpin-6可能与家蚕的表皮黑化反应及蜕皮有一定关系。 展开更多
关键词 家蚕 丝氨酸蛋白酶抑制剂 实时荧光定量PCR 基因转录
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蛋白酶抑制剂及其在抗虫基因工程中的应用 被引量：63
17
作者 柳武革 薛庆中 《生物技术通报》 CAS CSCD 2000年第1期20-25,共6页
蛋白酶抑制剂可以抑制昆虫的生长和发育，近年来在抗虫基因工程得到了广泛的应用。本文综述了蛋白酶抑制剂及其抗虫性，蛋白酶抑制剂转基因植物的研究概况，同时探讨了蛋白酶抑制剂在抗虫基因工程中的利用前景、存在问题和解决途径。
关键词 蛋白酶抑制剂 抗虫转基因植物 基因工程
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家蚕Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂基因BmSPI3的克隆与表达特征分析 被引量：5
18
作者 郑青亮 须苏菊 +2 位作者 周方平 吕正兵 张耀洲 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期496-502,共7页
Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)在机体的发育、免疫等生理过程中发挥重要的作用。从家蚕蛹cDNA文库中获得一条全长为728bp的基因序列,对该基因编码的氨基酸序列进行同源性比对,发现其蛋白具有保守的Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域(C... Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂(SPI)在机体的发育、免疫等生理过程中发挥重要的作用。从家蚕蛹cDNA文库中获得一条全长为728bp的基因序列,对该基因编码的氨基酸序列进行同源性比对,发现其蛋白具有保守的Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂结构域(CⅠ-X3-CⅡ-X8-CⅢ-X14-CⅣ-X6-CⅤ-X13-CⅥ),且P1活性位点为赖氨酸(K),因此将该基因命名为BmSPI3(Gen-Bank登录号:DN237641)。通过PCR扩增BmSPI3基因,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后成功构建了重组表达质粒pGEX-4T-1-BmSPI3,并转化到E.coliBL21(DE3)表达,经SDS-PAGE电泳检测在约36kD处有明显的蛋白表达条带。提取各发育时期蚕体和5龄幼虫各个组织的总RNA进行荧光定量PCR,检测结果表明:BmSPI3在5龄幼虫期表达量最高,卵期最低;在5龄幼虫表皮中的表达量最高,在马氏管的表达量最低。推测BmSPI3对胰蛋白酶和类胰蛋白酶具有抑制作用。 展开更多
关键词 Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂 家蚕 基因克隆 原核表达 荧光定量PCR
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蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因转染对小鼠黑色素瘤B16细胞蛋白质表达谱的影响 被引量：5
19
作者 齐元麟 纪明开 +2 位作者 谢群 黄清玲 林建银 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期791-797,共7页
目的研究蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)基因转染对小鼠黑素瘤细胞B16F1的蛋白表达谱的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法采用双向电泳-质谱的蛋白质组学研究策略,分析稳定表达sv-cystatin的B16F1细胞系B16F1/cystatin与转染空载体... 目的研究蛇毒半胱氨酸蛋白酶抑制剂(sv-cystatin)基因转染对小鼠黑素瘤细胞B16F1的蛋白表达谱的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法采用双向电泳-质谱的蛋白质组学研究策略,分析稳定表达sv-cystatin的B16F1细胞系B16F1/cystatin与转染空载体的对照细胞B16F1/pcDNA3.1的蛋白表达谱的差别,筛选鉴定差异表达蛋白;用实时定量PCR和Western blot进一步确定实验结果;对蛋白组数据和前期基因组数据进行比较分析。结果 B16F1/cystatin和B16F1/pcDNA3.1细胞总蛋白的双向电泳图谱上共有匹配蛋白点(412±20)个,其中有11个蛋白的表达差异在2倍以上,5个上调,6个下调。这11个蛋白和1个仅在B16F1/cystatin中表达的蛋白经MALDI-TOF-MS分析,其中10个蛋白得到了鉴定,它们分属于代谢酶系、小G蛋白Ran调控分子、真核翻译因子、核苷酸激酶等。Western blot显示NM23和RhoGDI-beta的蛋白表达分别上调了(2.23±0.34)倍和(1.57±0.11)倍;实时定量PCR结果显示NM23、RhoGDI-beta、RANBP1的mRNA表达上调,eIF5A、eEF1-beta2、MDH1表达下调;与蛋白质组学研究结果一致。基于Gene Ontology的分析提示sv-cystatin作用的靶分子主要定位于细胞外周、质膜和细胞核,与转录、半胱氨酸蛋白酶活性、细胞凋亡等过程有关。结论 sv-cystatin可能通过调控抑癌基因NM23、RhoGDI等蛋白质发挥其抗肿瘤作用。sv-cystatin的主要靶分子可能是转录因子、分泌蛋白和质膜受体。 展开更多
关键词 蛇毒 半胱氨酸蛋白酶抑制剂 黑色素瘤 小鼠 蛋白质组学 基因本体学
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豇豆胰蛋白酶抑制剂基因转化芥菜及抗虫鉴定 被引量：6
20
作者 杨朝辉 宋洪元 何凤田 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期731-735,共5页
用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入芥菜 ,获得了Kan抗性植株 .经PCR扩增、PCR Southern印迹和Northern印迹分析 ,转化再生植株大部分呈阳性 ,而非转化的再生植株均为阴性 ,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中 .在室内进... 用农杆菌介导将豇豆胰蛋白酶抑制剂 (CpTI)基因导入芥菜 ,获得了Kan抗性植株 .经PCR扩增、PCR Southern印迹和Northern印迹分析 ,转化再生植株大部分呈阳性 ,而非转化的再生植株均为阴性 ,证明CpTI基因已存在于芥菜基因组中 .在室内进行了喂虫试验 ,结果表明转基因芥菜抗虫性明显高于对照 。 展开更多
关键词 豇豆胰蛋白酶抑制剂基因 转化 芥菜 抗虫鉴定 农杆菌介导
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