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CAR的表达调节对肝癌基因治疗中腺病毒载体感染效率的影响 被引量:2
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作者 吴赟 郑辉 +3 位作者 陈宏新 黄孝天 沈佐君 刘晶星 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2008年第3期205-209,共5页
目的:通过抑制Raf-MEK-ERK信号转导途径调节肝癌细胞表面柯萨奇病毒和腺病毒受体(coxsackie-adenovirus receptor,CAR)的表达,探索肝癌基因治疗中CAR表达与腺病毒(adenovirus,Ad)感染效率之间的关系。方法:选择两株人肝癌细胞株SMMC-772... 目的:通过抑制Raf-MEK-ERK信号转导途径调节肝癌细胞表面柯萨奇病毒和腺病毒受体(coxsackie-adenovirus receptor,CAR)的表达,探索肝癌基因治疗中CAR表达与腺病毒(adenovirus,Ad)感染效率之间的关系。方法:选择两株人肝癌细胞株SMMC-7721及HepG2,以Raf-MEK-ERK信号转导抑制剂U0126作用后,应用Western blotting检测细胞表面CAR蛋白的表达水平。选用能表达GFP的非复制型E_1A缺陷的Ad感染人肝癌细胞SMMC-7721及HepG_2,应用FACS分析U0126处理前后Ad感染效率的变化。结果:细胞经MEK抑制剂U0126处理后,细胞膜表面CAR的表达呈明显上调趋势。FACS检测显示,经U0126处理后,在相同感染复数(10 MOI)Ad-GFP的感染下,GFP^+细胞率明显升高,SMMC-7721细胞由(71.65±6.21)%上升至(86.54±5.70)%;HepG_2细胞由(77.53±4.62)%上升至(87.06±2.83)%(均P<0.05)。结论:抑制剂U0126抑制Raf-MEK-ERK信号转导途径后,可上调肝癌细胞膜表面CAR的表达,从而导致Ad在肝癌细胞感染效率的提高。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒和腺病毒受体 U0126 腺病毒 感染效率 肝细胞癌 基因治疗
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提高树突状细胞腺病毒感染效率的融合蛋白的表达及活性鉴定
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作者 田仁礼 殷小涛 +7 位作者 王伟 林晓亮 朱晓明 徐元基 阎瑾琦 张巍 高江平 于继云 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期476-479,484,共5页
目的构建表达靶向树突状细胞融合蛋白CT40L的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对CT40L融合蛋白进行纯化鉴定及功能验证。方法从GenBank上查找柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)、T4噬菌体fibritin和小鼠CD40L的基因序列,并将其主要功能区域... 目的构建表达靶向树突状细胞融合蛋白CT40L的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对CT40L融合蛋白进行纯化鉴定及功能验证。方法从GenBank上查找柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)、T4噬菌体fibritin和小鼠CD40L的基因序列,并将其主要功能区域连接形成拼接序列;序列进行原核表达密码子优化后将其克隆至原核表达载体pET42a(+),构建重组表达载体pET42a-CT40L,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达CT40L/GST融合蛋白,并采用GST琼脂糖凝胶纯化重组蛋白。纯化后的重组蛋白经Western blot法、间接ELISA鉴定其免疫活性。结果重组表达载体经NcoⅠ和EcoRⅠ酶切鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(Mr)78 000大小的重组蛋白;纯化后的蛋白纯度达到90%。Western blot法和ELISA检测证实纯化的CT40L分子能够与特异性抗体及相应受体发生反应,表明该融合蛋白具有良好的免疫学活性。结论成功构建了原核表达载体pET42a-CT40L,利用大肠杆菌表达系统实现了融合分子的可溶性表达,纯化后CT40L融合蛋白经检测具备较高的免疫学活性。 展开更多
关键词 CD40L 靶向治疗 原核表达 腺病毒感染效率
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慢病毒载体pITA-HBP1的制备及感染效率的测定
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作者 陈月萍 杜毅聪 +2 位作者 董威 王维斌 张晓伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1044-1049,共6页
慢病毒载体是目前基因治疗中研究较多的载体,与通常使用的逆转录病毒载体和腺病毒载体比较,它有感染非分裂期细胞及容纳大片段外源性目的基因等优点.本文应用基因重组的方法,构建了1种新型的慢病毒载体,并将转录因子HBP1基因插入到这一... 慢病毒载体是目前基因治疗中研究较多的载体,与通常使用的逆转录病毒载体和腺病毒载体比较,它有感染非分裂期细胞及容纳大片段外源性目的基因等优点.本文应用基因重组的方法,构建了1种新型的慢病毒载体,并将转录因子HBP1基因插入到这一载体上,成为pITA-HBP1.检测其在人的肿瘤细胞和正常细胞中的转染效率,发现转染效率明显增加,Western印迹证实外源基因得到高效表达.这一结果,对今后实验室提高基因的转染效率、表达水平,以及研究基因的表达调控,都提供了重要的技术方案. 展开更多
关键词 慢病毒载体 转录因子HBP1 感染效率
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AD5/F35腺病毒载体对不同来源造血系统恶性细胞转染效率的研究 被引量:6
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作者 王凯 彭建强 +1 位作者 袁振华 吴小兵 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第3期525-528,共4页
本研究比较AD5/F35腺病毒载体对不同来源的血液系统恶性细胞系感染效率的差异和细胞毒性反应。用AD5/F35-EGFP以不同MOI(感染复数)感染不同来源的血液恶性细胞系并用AD5-EGFP作为对照;用流式细胞术检测荧光阳性细胞比例,进行荧光显微镜... 本研究比较AD5/F35腺病毒载体对不同来源的血液系统恶性细胞系感染效率的差异和细胞毒性反应。用AD5/F35-EGFP以不同MOI(感染复数)感染不同来源的血液恶性细胞系并用AD5-EGFP作为对照;用流式细胞术检测荧光阳性细胞比例,进行荧光显微镜照相并用MTT法检测病毒对感染靶细胞的杀伤作用。结果表明:对于髓系来源的细胞在MOI为30时,AD5/F35载体的感染效率大于99%,AD5载体在MOI为1000时感染效率为26.4%;对于B系来源的细胞在MOI为1000时,AD5/F35载体感染效率为11.7%,AD5载体为5.7%;AD5/F35和AD5载体都不能有效地感染T系来源细胞,在MOI达到1000也未检测到荧光阳性细胞。在MOI为1000的情况下AD5/F35载体对感染靶细胞也无明显杀伤作用。结论:AD5/F35载体对不同来源的血液恶性细胞的感染具有一定的选择性,对髓系来源细胞感染能力强,对B系来源细胞有一定感染能力,而且对感染靶细胞毒性小。AD5/F35载体优于常用的5型腺病毒载体,在以髓系细胞为靶细胞的基因治疗中有着较好的应用前景。 展开更多
关键词 AD5/F35型腺病毒载体 AD5型腺病毒载体 感染效率 细胞毒作用 造血系统肿瘤细胞
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MaMV-DH01对不同生长时期宿主的感染性研究
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作者 孟丽慧 《河北渔业》 2025年第9期9-11,共3页
为探究噬藻体(Cyanophage)MaMV-DH01对铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)FACHB-524在不同生长阶段的感染特性,分别于对数期与稳定期进行感染试验,并监测宿主细胞密度及胞外子代噬藻体基因拷贝数变化。结果显示,对数期宿主在感染12 h... 为探究噬藻体(Cyanophage)MaMV-DH01对铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)FACHB-524在不同生长阶段的感染特性,分别于对数期与稳定期进行感染试验,并监测宿主细胞密度及胞外子代噬藻体基因拷贝数变化。结果显示,对数期宿主在感染12 h后即出现明显裂解,24 h内基本清除,此时,胞外噬藻体拷贝数达7.9×10~8 copies/mL;稳定期宿主裂解延迟至36 h,且24 h时拷贝数仅为2.45×10~8 copies/mL。表明MaMV-DH01在对数期宿主中具有更高的感染效率与裂解能力,凸显了宿主生理状态对感染过程具有重要影响。 展开更多
关键词 噬藻体(Cyanophage)MaMV-DH01 感染效率 蓝藻细胞 裂解特性 基因拷贝数
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