Mixture与响应面法结合开发BHK-21细胞无血清悬浮培养基 被引量：2

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作者 汪梁 刘旭平 谭文松 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期70-78,共9页

采用Mixture与响应面实验设计相结合的方法开发BHK-21细胞无血清悬浮培养基。在实验室已知配方的6种培养基A-F的基础上,通过Mixture实验筛选出BHK-21细胞无血清培养基的最优组合为A∶B∶C∶D∶E∶F=0∶0∶11∶0∶9∶0。利用响应面法针... 采用Mixture与响应面实验设计相结合的方法开发BHK-21细胞无血清悬浮培养基。在实验室已知配方的6种培养基A-F的基础上,通过Mixture实验筛选出BHK-21细胞无血清培养基的最优组合为A∶B∶C∶D∶E∶F=0∶0∶11∶0∶9∶0。利用响应面法针对培养基中的几种关键组分进行浓度优化,确定谷氨酰胺、酪氨酸、牛血清白蛋白和钙离子的最优浓度分别为3 mmol/L、2.5 g/L、0 g/L和0 mmol/L。该无血清悬浮培养基能很好地支持BHK细胞悬浮生长,培养时细胞最大活细胞密度可达140.21×105个/m L,比商业培养基提高了1.95倍。采用Mixture试验设计和响应面分析法能够在较短的时间内开发出适合BHK-21细胞生长的无血清悬浮培养基,为采用BHK-21细胞大规模工业化生产口蹄疫疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 BHK-21细胞 无血清悬浮培养基 Mixture实验设计 响应面分析

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MDCK细胞无血清悬浮培养技术在流感疫苗研究与生产中的应用进展 被引量：2

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作者 靳莉武 张震宇 +4 位作者 靳冬武 马花 马玉梅 乔自林 王家敏 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期38-47,共10页

流感是一种常见的呼吸道疾病,由流感病毒引起,接种疫苗是预防流感的有效手段。MDCK细胞(Madin-Darby Canine Kidney Cells)具有易于培养和高产量的特点,可以支持流感病毒的复制和增殖,被广泛用于流感疫苗的研究和生产。随着对流感病毒... 流感是一种常见的呼吸道疾病,由流感病毒引起,接种疫苗是预防流感的有效手段。MDCK细胞(Madin-Darby Canine Kidney Cells)具有易于培养和高产量的特点,可以支持流感病毒的复制和增殖,被广泛用于流感疫苗的研究和生产。随着对流感病毒研究的不断深入,为了进一步拓展MDCK细胞用于流感病毒研究和工业应用的能力,研究人员开始发展MDCK细胞无血清全悬浮培养技术。通过长期的培养和优化,驯化的MDCK悬浮细胞株可以更好地适应流感病毒的生长环境,提高流感病毒的产量和感染性。总之,MDCK细胞无血清悬浮培养技术在流感病毒研究和工业应用中发挥着重要作用,为流感疫苗生产和抗流感药物研发提供更好的工具。同时也必须重视MDCK细胞的安全性,采取合适的措施来确保其应用的安全性和可靠性。 展开更多

关键词 MDCK细胞 细胞悬浮驯化 无血清培养基 流感疫苗 安全性

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rCHO细胞无血清适应及悬浮培养 被引量：5

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作者 黄斌 牛红星 +3 位作者 朱明龙 金秀杰 谭文松 戴干策 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期38-42,共5页

考察了血清对rCHO(C28)细胞生长与产物(HBsAg)表达的影响,发现φ血清<0.01时细胞出现明显的代谢转换;考察了微量元素、氢化可的松、混合脂类与短多肽混合物(TL混合物)对细胞的影响,建立了适于rCHO(C28株)生长的无血清培养基MT-SFM;... 考察了血清对rCHO(C28)细胞生长与产物(HBsAg)表达的影响,发现φ血清<0.01时细胞出现明显的代谢转换;考察了微量元素、氢化可的松、混合脂类与短多肽混合物(TL混合物)对细胞的影响,建立了适于rCHO(C28株)生长的无血清培养基MT-SFM;在将细胞从有血清转到无血清状态时,阶段性降血清比直接降血清更有利于rCHO(C28)细胞的无血清适应;当细胞适应了MT-SFM无血清培养基后,批培养中细胞的最大平均比生长速率可达0.65d-1,产物HBsAg的滴度在32～64之间。 展开更多

关键词 RCHO细胞 无血清培养基 无血清适应 乙肝表面抗原 HBSAG 悬浮培养

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昆虫细胞无血清培养基的研究

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作者 王家敏 马桂兰 +4 位作者 冯玉萍 马伟 马祺 马忠仁 乔自林 《甘肃畜牧兽医》 2019年第11期44-46,共3页

为开发昆虫细胞无血清悬浮培养基,以基础培养基Grace’s Insect medium为基础,添加葡萄糖、水解乳蛋白、酵母粉和PF-68等组份后,分别接种Sf-21、Hi-five两种昆虫细胞进行无血清悬浮培养。结果显示:两株昆虫细胞生长均较好,均能够很好的... 为开发昆虫细胞无血清悬浮培养基,以基础培养基Grace’s Insect medium为基础,添加葡萄糖、水解乳蛋白、酵母粉和PF-68等组份后,分别接种Sf-21、Hi-five两种昆虫细胞进行无血清悬浮培养。结果显示:两株昆虫细胞生长均较好,均能够很好的全悬浮生长,Sf-21细胞最高密度可达(39.8±2.6)×105/ml,Hifive细胞最高密度可达(44.4±1.0)×105/ml。本研究为昆虫细胞培养提供一种无血清悬浮培养基配方,为我国利用昆虫细胞杆状病毒表达系统生产生物制品提供基础保障。 展开更多

关键词 昆虫细胞 无血清培养基 悬浮培养 生长曲线

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支持高密度BHK-21细胞培养和高产FMD病毒的无血清培养基开发与优化 被引量：3

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作者 陈敏 刘旭平 赵亮 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期62-71,共10页

优化无血清培养基,以实现BHK-21悬浮细胞的超高密度生长和口蹄疫病毒高效扩增。依据BHK-21细胞的代谢特点和动力学分析识别无血清培养基中的关键营养成分,优化组分浓度,对比优化前后细胞的生长和产毒能力,并在生物反应器中验证。优化后... 优化无血清培养基,以实现BHK-21悬浮细胞的超高密度生长和口蹄疫病毒高效扩增。依据BHK-21细胞的代谢特点和动力学分析识别无血清培养基中的关键营养成分,优化组分浓度,对比优化前后细胞的生长和产毒能力,并在生物反应器中验证。优化后的无血清培养基支持批培养模式下最高活细胞密度达到1.78×107 cells/mL,代谢副产物积累的情况得到改善;口蹄疫病毒TCID50与含低比例血清的培养基相比具有相似水平,约为7.25 lgTCID50/0.1mL;146s含量与低血清培养基相比提高50.7%,达到15.6μg/mL。以细胞的生长需求和代谢规律为基础,优化营养成分和降低代谢副产物积累能有效解除“细胞密度效应”,实现超高细胞密度接毒和高产口蹄疫病毒。 展开更多

关键词 BHK-21悬浮细胞 无血清培养基 高细胞密度 高产口蹄疫病毒

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用BHK—21悬浮细胞培养法生产试验狂犬病疫苗 被引量：2

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作者 李凯年 《畜牧兽医科技信息》 1997年第8期7-7,共1页

最近,法国巴斯德研究所的研究人员用适于生物反应器悬浮培养的BHK-21细胞系制备了一种试验狂犬病疫苗。

关键词 悬浮细胞 生产试验 培养法 狂犬病疫苗 生物反应器 无血清培养基 细胞系 悬浮培养 狂犬病病毒 生物制剂

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建立能用无血清培养基增殖的血管内皮细胞株,分析增殖因子

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作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第8期18-19,共2页

工业技术院微生物工业技术研究所首席研究官三井洋司等开发了能用无血清培养基增殖的人血管内皮细胞的细胞株。另外还从开发的细胞株发现了几种未知的细胞增殖因子。

关键词 无血清培养基 血管内皮细胞 增殖因子 工业技术研究 血清浓度 内皮细胞增殖 技术院 铁传递蛋白 淋巴瘤 悬浮培养

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神经干细胞提取与培养方法的比较研究 被引量：9

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作者 吴增 李媛 +2 位作者 靳晓飞 周晓红 高维娟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期729-734,共6页

目的探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)提取、培养的最佳方法,为NSCs的基础研究提供技术参考。方法对NSCs的不同提取、培养方法进行比较:提取胎鼠与乳鼠的大脑皮质、采用不同类型培养基、不同接种密度、不同培养方法、不同换液方... 目的探讨神经干细胞(neural stem cells,NSCs)提取、培养的最佳方法,为NSCs的基础研究提供技术参考。方法对NSCs的不同提取、培养方法进行比较:提取胎鼠与乳鼠的大脑皮质、采用不同类型培养基、不同接种密度、不同培养方法、不同换液方法、不同传代方法,观察NSCs的成球率和NSCs未分化状态的稳定性。用多功能微孔板读数仪检测NSCs活性。结果 (1)胎龄14 d胎鼠较新生24 h内乳鼠的大脑皮质提取NSCs的比例高,杂细胞少,形成的神经球数量多。(2)采用无血清培养基,NSCs可以稳定在未分化状态;而采用含血清培养基,NSCs多数分化为神经元和胶质细胞。(3)以1.0×109·L^(-1)密度接种的NSCs,培养形成的神经球数量多,且状态良好。(4)悬浮培养法较贴壁培养法,可以形成稳定的神经球,有利于保持NSCs处于未分化的状态。(5)半量换液法和只加液不弃液法培养形成的神经球的状态优于全量换液法。(6)原代和1代的神经球用机械吹打法传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好,且较其他两种方法简便;2代及以后的神经球用Accutase酶传代后,NSCs的活细胞比例高,再次形成的神经球状态好。(7)14 d胎鼠Accutase酶消化组的NSCs活性高于另外3组,差异均具有显著性(P<0.05)。结论提取胎龄14 d胎鼠的大脑皮质,采用无血清培养基,以1.0×10~9·L^(-1)1的密度接种于25 cm^2培养瓶,采取悬浮培养法,每2~3 d加液1~1.5m L,每6~7 d传代1次,所得到的NSCs增殖分裂旺盛,成球率高,神经球状态良好,可以保持稳定的未分化状态。 展开更多

关键词 神经干细胞 细胞提取 悬浮培养法:无血清培养基 细胞活性 巢蛋白

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人鼻咽癌干细胞微球体培养并鉴定其生物特性 被引量：4

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作者 李亚军 郭颖 +3 位作者 吴顺龙 甘生敏 陆松梅 李少林 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2014年第11期1133-1138,共6页

目的目前分离和鉴定鼻咽癌干细胞的方法仍不成熟。探索鼻咽癌细胞系干细胞微球体培养方法,并对CNE-2细胞微球体是否具有肿瘤干细胞生物特性(干性)进行鉴定。方法人鼻咽癌细胞CNE2、C666-1细胞在含生长因子的无血清培养基(serum-free med... 目的目前分离和鉴定鼻咽癌干细胞的方法仍不成熟。探索鼻咽癌细胞系干细胞微球体培养方法,并对CNE-2细胞微球体是否具有肿瘤干细胞生物特性(干性)进行鉴定。方法人鼻咽癌细胞CNE2、C666-1细胞在含生长因子的无血清培养基(serum-free medium,SFM)中悬浮培养。流式细胞术、Transwell小室实验、裸鼠成瘤实验、分别检测CNE2贴壁细胞(CNE2 monolayer,CNE2-MN)及CNE2微球体细胞(CNE2 sphere cells,CNE2-SC)CD133+标记细胞比例,体外侵袭能力、体内成瘤能力;CNE2-SC在含血清培养基中贴壁培养观察其分化能力;实时荧光定量PCR分析CNE2-MN及CNE2-SC相关干性基因Bmi-1、Oct4、Twist1RNA的表达。结果 2种细胞系均能在特殊配制的SFM中形成可以稳定传代的微球体,SFM新鲜配制、用细胞分离剂Accutase替代胰酶传代以及保持细胞的悬浮状态均有利于微球体的形成和增殖;在含血清培养基中培养能贴壁分化成CNE2-MN而无明显差异;CNE2-SC中CD133+细胞比例(98.79%)显著高于CNE2-MN(0.98%),差异有统计学意义(P<0.01);与CNE2-MN相比,CNE2-SC高表达干细胞相关基因Bmi-1、Oct4、Twist1及EMT标志物N-cadherin、Vimentin。Transwell小室实验示CNE2-SC与CNE2-MN的穿膜细胞数分别为(122±6)个/视野及(36±7)个/视野(P<0.05);裸鼠成瘤实验示1×104个CNE2-SC 3周内即能成瘤,成瘤率33.3%,而CNE2-MN不能成瘤,1×105个CNE2-SC与CNE2-MN成瘤体积比为(1.750±0.613)cm3vs(0.457±0.291)cm3(P<0.05),而1×106个以上2种细胞成瘤体积比为(2.332±0.549)cm3vs(0.669±0.278)cm3(P<0.01)。结论利用特制SFM悬浮培养法可得到鼻咽癌CNE2-SC,这种微球体富集了肿瘤干细胞,将为后续鼻咽癌干细胞研究打下基础。 展开更多

关键词 鼻咽癌 肿瘤干细胞 微球体 悬浮培养 无血清培养基

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动物细胞大规模培养的主流技术 被引量：10

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作者 魏明旺 张淑香 《生物产业技术》 2009年第4期85-89,共5页

随着对单克隆抗体等产品需求量的不断增加，2000年以后，动物细胞培养的产能迅速增加．现在全球的反应器总容量超过2000000L，比8年前增加了约4倍。产物浓度也比15年前提高了约100倍。达到了5g／L以上。动物细胞大规模培养产业，在规模... 随着对单克隆抗体等产品需求量的不断增加，2000年以后，动物细胞培养的产能迅速增加．现在全球的反应器总容量超过2000000L，比8年前增加了约4倍。产物浓度也比15年前提高了约100倍。达到了5g／L以上。动物细胞大规模培养产业，在规模和技术方法上，越来越与微生物发酵产业类似。在重组蛋白的生产中，当今的主流技术是．在大型机械搅拌式反应器中，用无血清培养基和流加培养工艺悬浮培养细胞， 展开更多

关键词 动物细胞培养 大规模培养 流技术 搅拌式反应器 悬浮培养细胞 无血清培养基 单克隆抗体 微生物发酵

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产孢子较差曲菌株的孢子生成法

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作者 楠木宪一 宋钢（译） 《中国酿造》 CAS 北大核心 2008年第3期106-106,共1页

制曲时会产生大量曲菌孢子，在分析曲菌繁殖速度与孢子形成水活度的关系时，使用了蒸饭中添加木灰的培养基，让曲菌在该培养基上繁殖后制作孢子悬浮液，以此测定曲菌孢子形成能力。但该法在制作蒸饭培养基时所需时间较长，并非简便。

关键词 孢子形成 生成法 菌株 繁殖速度 孢子悬浮液 培养基 形成能力 曲菌

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应用离体接种技术鉴定稻瘟病菌生理小种 被引量：1

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作者 林代福 《耕作与栽培》 1999年第S1期70-70,共1页

关键词 稻瘟病菌 离体接种 技术鉴定 病菌生理小种鉴定 培养基 孢子萌发率 接种法 接种技术 孢子悬浮液 叶片离体培养

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犬肾细胞MDCK研究进展 被引量：2

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作者 万玉林 陶世宇 +4 位作者 武发菊 柴立丽 安芳兰 杨进才 刘学荣 《安徽农业科学》 CAS 2017年第23期96-98,共3页

综述了MDCK细胞的来源、生物学特性及培养方式,旨在为今后MDCK细胞的培养及流感病毒细胞介质疫苗的大规模生产提供理论基础与依据。

关键词 MDCK细胞 生物学特性 无血清培养基 微载体 悬浮培养

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