Chemerin对恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞血管形成的影响及其机制研究

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作者 朱红军 赵萌 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2021年第10期939-942,共4页

目的探究Chemerin对恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞RF/6A血管形成的影响及其可能作用机制。方法RF/6A细胞随机分为3组,其中CO组正常培养RF/6A细胞24 h;CH组RF/6A细胞与10μg·L^(-1) Chemerin混合培养24 h;CN组在CH组基础上+200μmol&... 目的探究Chemerin对恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞RF/6A血管形成的影响及其可能作用机制。方法RF/6A细胞随机分为3组,其中CO组正常培养RF/6A细胞24 h;CH组RF/6A细胞与10μg·L^(-1) Chemerin混合培养24 h;CN组在CH组基础上+200μmol·L^(-1)N-乙酰半胱氨酸混合培养24 h。通过荧光探针-二氢乙啶(DHE)法、MTT法、细胞划痕实验、基质胶(Matrigel)法、Western blot等检测CO组、CH组、CN组RF/6A细胞活性氧(ROS)表达水平、增殖情况、迁移能力、管腔形成、p38MAPK蛋白表达的差异。结果CH组RF/6A细胞中ROS表达水平、细胞增殖数量均显著高于CO组、CH组(均为P<0.05)。CO组、CH组、CN组RF/6A细胞迁移面积(像素)分别为31268±1397、56489±2653、39684±1864,细胞管腔形成数量分别为(1.06±1.12)个、(6.04±2.24)个、(3.08±3.67)个,3组间细胞迁移面积、管腔形成数量比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,CH组RF/6A细胞中p38MAPK蛋白相对表达量显著高于CO组、CN组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论Chemerin对RF/6A细胞血管形成有促进作用,其机制与ROS介导的MAPK通路激活有关。 展开更多

关键词 CHEMERIN 活性氧 恒河猴脉络膜-视网膜内皮细胞 血管形成

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水蛭提取液对恒河猴视网膜血管内皮细胞增殖和细胞周期的影响 被引量：12

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作者 郑燕林 刘聪慧 谭笑彦 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2010年第5期413-417,共5页

目的观察渗滤法水蛭提取液对恒河猴视网膜血管内皮细胞RF/6A细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用MTT法观察不同浓度水蛭提取液(0g.L-1、8g.L-1、16g.L-1、32g.L-1、64g.L-1、128g.L-1)对RF/6A细胞增殖的影响,筛选最佳抑制浓度,应用流式... 目的观察渗滤法水蛭提取液对恒河猴视网膜血管内皮细胞RF/6A细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用MTT法观察不同浓度水蛭提取液(0g.L-1、8g.L-1、16g.L-1、32g.L-1、64g.L-1、128g.L-1)对RF/6A细胞增殖的影响,筛选最佳抑制浓度,应用流式细胞仪观察水蛭提取液对凝血酶诱导的RF/6A细胞周期的影响。结果8g.L-1、16g.L-1浓度组水蛭提取液对血管内皮细胞RF/6A有促进生长作用,与空白对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);32g.L-1、64g.L-1、128g.L-1浓度组水蛭提取液对血管内皮细胞RF/6A均有明显抑制作用,与空白对照组相比差异也均有统计学意义(均为P<0.05);24hIC50为97g.L-1;64g.L-1为水蛭提取液的最佳抑制浓度,用于后期实验。流式细胞仪检测发现:水蛭提取液组G1期细胞比例(91.95±1.69)%高于其他各组,合药组(83.60±1.88)%高于凝血酶组(77.78±3.22)%,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。凝血酶组S期细胞比例(21.75±2.94)%高于其他各组,水蛭提取液组(7.55±2.45)%低于合药组(14.42±1.48)%,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论不同浓度的水蛭提取液对视网膜血管内皮细胞RF/6A的增殖产生不同作用,64g.L-1水蛭提取液可以抑制血管内皮细胞的增殖,将细胞阻滞在G1期,可能是一种潜在的抗新生血管药物。 展开更多

关键词 水蛭提取液 恒河猴 视网膜血管内皮细胞 细胞增殖 细胞周期

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CCN1siRNA对视网膜血管内皮细胞活性的抑制及其机制 被引量：2

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作者 底煜 张轶欧 +1 位作者 王爱媛 陈晓隆 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期24-29,共6页

背景富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）/CCN1在早产儿视网膜病变（ROP）的视网膜新生血管（RNV）形成中发挥重要作用，但目前国内外关于CCN1小干扰RNA（CCN1 siRNA）对ROP有无延缓和治疗作用的研究较少。 目的探讨特异性抑制CCN1的表达对视... 背景富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）/CCN1在早产儿视网膜病变（ROP）的视网膜新生血管（RNV）形成中发挥重要作用，但目前国内外关于CCN1小干扰RNA（CCN1 siRNA）对ROP有无延缓和治疗作用的研究较少。 目的探讨特异性抑制CCN1的表达对视网膜血管内皮细胞的调控作用。 方法恒河猴脉络膜－视网膜内皮细胞株（RF/6A）分别于常氧（正常对照组）和低氧环境（体积分数1%O2、5%CO2和94%N2的混合气体）中培养，低氧环境培养的细胞分别采用脂质体Lipofectamine？2000介导转染空载体质粒（低氧对照组）和CCN1 siRNA表达质粒（CCN1 siRNA转染组），于细胞转染后24 h采用逆转录PCR法检测细胞中CCN1 siRNA重组质粒的表达情况；分别于培养后0、24、48、72和96 h采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法测定各组细胞活性并绘制细胞生长曲线；于培养后24 h采用流式细胞术检测各组培养细胞的增生和凋亡情况；于培养后24 h采用免疫荧光技术和Western blot法检测各组RF/6A细胞中CCN1和血管内皮生长因子（VEGF）蛋白的表达。 结果细胞转染后24 h用逆转录法检测到细胞中CCN1 siRNA的表达条带。CCK-8检测显示随着培养时间的延长，RF/6A细胞增生值（吸光度，A值）均明显增加，但CCN1 siRNA转染组各时间点细胞增生值均明显低于正常对照组和低氧对照组，总体比较差异均有统计学意义（F组别＝198.45，P〈0.05；F时间＝39.26，P〈0.05）；CCN1 siRNA转染组、正常对照组和低氧对照组细胞的凋亡率分别为（68.9±1.1）%、（18.9±1.3）%和（39.6±1.8）%，其中CCN1 siRNA转染组细胞的凋亡率明显高于正常对照组和低氧对照组，差异均有统计学意义（t＝2.93、2.56，均P〈0.05）；CCN1和VEGF蛋白在正常对照组细胞中呈弱表达，在低氧对照组细胞中表达均明显增强，CCN1 siRNA转染组细胞中CCN1和VEGF的相对表达量较低氧对照组均明显下降（均P〈0.05）。 结论CCN1 siRNA转染后能抑制RF/6A细胞的增生并促进其凋亡，CCN1 siRNA可下调缺氧环境下RF/6A细胞中CCN1和VEGF蛋白的表达水平，可能是抑制RNV形成的主要机制。 展开更多

关键词 富含半胱氨酸蛋白61/生理 视网膜新生血管/预防及控制 早产儿视网膜病变/治疗 缺 氧 RNA干扰 血管内皮生长因子 恒河猴脉络膜一视网膜内皮细胞

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槲皮素通过整合素信号通路调控视网膜脉络膜新生血管生成的机制研究 被引量：6

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作者 岳岩坤 王海伟 +3 位作者 邓禹 田沫 王寅琳 张恩魁 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期602-607,共6页

目的探讨槲皮素体外、体内抑制视网膜新生血管及脉络膜新生血管（CNV）生成及发展的作用机制。方法体外研究采用人脐静脉内皮细胞（HUVECs），体内研究采用氧诱导视网膜病变（OIR）动物模型及激光诱导的CNV动物模型。细胞学研究中分为... 目的探讨槲皮素体外、体内抑制视网膜新生血管及脉络膜新生血管（CNV）生成及发展的作用机制。方法体外研究采用人脐静脉内皮细胞（HUVECs），体内研究采用氧诱导视网膜病变（OIR）动物模型及激光诱导的CNV动物模型。细胞学研究中分为正常对照组、血管内皮生长因子165（VEGF-165）处理组和VEGF-165＋槲皮素处理组。利用细胞计数试剂盒8（CCK8）及Transwell法检测HUVECs的增生及迁移能力，采用Western blot法检测整合素α5及整合素β3蛋白的表达。体内研究中利用OIR动物模型及激光诱导的CNV动物模型评估腹腔内注射槲皮素在抑制视网膜新生血管及CNV中的效果，C57乳母鼠和6～8周龄C57小鼠各18只，均采用随机数字表法随机分为正常对照组、模型对照组和槲皮素处理组，每组6只，采用Western blot法检测各组视网膜中整合素α5和整合素β3蛋白的表达。结果在体外研究中，20 ng/ml VEGF-165可以促进HUVECs的增生及迁移，而50 μmol/L槲皮素可以抑制HUVECs的增生及迁移，正常对照组、VEGF-165处理组以及VEGF-165＋槲皮素处理组细胞增生值和穿过Boyden小室的细胞数量整体比较，差异均有统计学意义（F分组＝18.51，P＝0.00；F＝85.74，P＝0.00）。在体内研究中，槲皮素连续腹腔内注射20 mg/（kg·d）可以减少OIR模型视网膜无血管灌注区面积，并减少激光诱导的CNV面积，与模型对照组相比，差异均有统计学意义（t＝6.02，P＝0.00；t＝5.79，P＝0.00）。Western blot检测显示，VEGF-165＋槲皮素处理24 h组整合素α5和整合素β3蛋白表达量均较VEGF-165处理组明显降低，差异均有统计学意义（t＝4.46，P〈0.05；t＝5.18，P〈0.01）。VEGF-165＋槲皮素处理48 h组整合素α5和整合素β3蛋白的表达量较VEGF-165＋槲皮素处理24 h组有所升高，但与VEGF-165处理组相比仍降低，差异均有统计学意义（t＝6.54，P〈0.05；t＝7.17，P〈0.01）。在OIR及CNV模型中，槲皮素可以抑制模型对照组中整合素α5及整合素β3的表达，差异均有统计学意义（t＝5.44、13.52，均P＝0.00）。结论槲皮素可以通过调控整合素抑制视网膜新生血管的形成，为新生血管的治疗提供新的途径。 展开更多

关键词 槲皮素 视网膜新生血管 脉络膜新生血管 脐静脉内皮细胞 整合素

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重组人血管抑制因子Vasostatin对视网膜血管内皮细胞增殖的影响 被引量：1

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作者 李光宇 范斌 +3 位作者 徐立 吴雅臻 何立洁 吴家祥 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期351-354,共4页

目的　探讨重组人血管抑制因子Vasostatin对体外培养的恒河猴视网膜血管内皮细胞 (RF/6A)增殖的影响。方法　以bFGF刺激增殖 ,体外培养恒河猴视网膜血管内皮细胞 (RF/6A)至 4代 ,分别加入不同质量浓度的重组人Vasostatin蛋白 ,并采用MT... 目的　探讨重组人血管抑制因子Vasostatin对体外培养的恒河猴视网膜血管内皮细胞 (RF/6A)增殖的影响。方法　以bFGF刺激增殖 ,体外培养恒河猴视网膜血管内皮细胞 (RF/6A)至 4代 ,分别加入不同质量浓度的重组人Vasostatin蛋白 ,并采用MTT法、3 H TdR法检测 2、4、6d时其对血管内皮细胞增殖抑制的作用 ,同时利用流式细胞仪对重组人Vasostatin蛋白是否诱导细胞凋亡进行了探讨。结果　MTT法、3 H TdR两种方法均显示重组人Vasostatin蛋白以质量浓度依赖的方式抑制bFGF刺激的恒河猴视网膜血管内皮细胞 (RF/6A)的增殖。流式细胞仪检测显示加入重组人Vasostatin蛋白后 ,G0 /G1期无明显的亚二倍体核形峰出现 ,其不是通过诱导细胞凋亡的方式来抑制细胞增殖的。结论　重组人Vasostatin蛋白在体外具有抑制bFGF诱导的血管内皮细胞增殖的作用 ,其有可能成为一种有效的血管新生抑制剂。 展开更多

关键词 血管抑制因子 恒河猴视网膜血管内皮细胞(RF/6A) 新生血管 钙网蛋白

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恒河猴和树鼩角膜内皮细胞的比较分析 被引量：6

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作者 吴敏 李娜 +1 位作者 孙晓梅 胡竹林 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期164-168,共5页

目的对比分析恒河猴和树鼩角膜内皮细胞的特点和差异。方法利用非接触式自动角膜内皮细胞仪SP3000P分别对6只恒河猴（12眼）和20只树鼩（40眼）进行角膜内皮细胞测量,并获得角膜的8个相关参数：中央角膜厚度（CCT）、最小细胞面积（Smi... 目的对比分析恒河猴和树鼩角膜内皮细胞的特点和差异。方法利用非接触式自动角膜内皮细胞仪SP3000P分别对6只恒河猴（12眼）和20只树鼩（40眼）进行角膜内皮细胞测量,并获得角膜的8个相关参数：中央角膜厚度（CCT）、最小细胞面积（Smin）、最大细胞面积（Smax）、平均细胞面积（Savg）、细胞面积标准差（SSD）、细胞面积变异系数（CV）、细胞密度（CD）和六边形细胞百分比（HG）,并结合文献与人眼的相关参数进行对比分析。结果 SP3000P角膜内皮细胞仪能在较短时间内完成恒河猴和树鼩角膜内皮的图像采集和参数的检查,耗时差异无显著性。恒河猴和树鼩CCT分别为（449.2±12.8）μm和（262.4±24.6）μm;Smin分别为（120.4±26.3）S/μm^2和（153.2±42.9）S/μm^2;Smax分别为（705.0±130.8）S/μm^2和（468.7±109.3）S/μm^2;Savg分别为（351.1±26.1）和（295.4±18.9）S/μm^2;SSD分别为（113.1±27.4）和（75.9±27.3）S/μm^2;CV分别为（31.9±6.0）和（25.3±8.3）;CD分别为（2874.2±203.8）p/cell·mm^-2和（3399.3±224.7）p/cell·mm^-2;HG%分别为（58.6±9.1）和（94.0±9.7）。二者的上述参数差异均有显著性（P〈0.05）。树鼩角膜厚度比恒河猴小,内皮细胞面积、变异系数也较恒河猴小,但是角膜内皮细胞密度和六边形细胞比例显著高于恒河猴。恒河猴角膜厚度、角膜内皮细胞变异系数和六边形细胞比例与人眼高度相似,但内皮细胞密度低于人眼;树鼩角膜厚度为恒河猴的60%、人眼的50%,但角膜内皮细胞密度和平均细胞面积更接近于10-20岁人眼。结论恒河猴和树鼩角膜内皮细胞的形态和各项参数均有显著差异,各自与人眼角膜内皮细胞既有相似之处,也有不同点,恒河猴和树鼩均是研究人类角膜内皮疾病可以选择的合适实验动物。 展开更多

关键词 角膜内皮细胞 恒河猴 树鼩 人类

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恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞后房水血管内皮生长因子水平的变化 被引量：3

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作者 朱勤 胡竹林 杨忠昆 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2012年第1期8-10,共3页

目的探索恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞后房水血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度的变化。方法实验组将体外培养增殖的恒河猴视网膜-脉络膜血管内皮细胞通过离心沉淀法移植到撕除后弹力层的恒河... 目的探索恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞后房水血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度的变化。方法实验组将体外培养增殖的恒河猴视网膜-脉络膜血管内皮细胞通过离心沉淀法移植到撕除后弹力层的恒河猴角膜内表面;对照组撕除角膜内皮层后,不做任何处理,直接原位缝合角膜植片。分别于术前及术后1周、2周、3周、4周、6周、8周、12周抽取房水,通过ELISA方法检测其中VEGF浓度,并进行统计分析。结果实验组和对照组术后1周时VEGF浓度差异无统计学意义(P>0.05),术后2周、3周、4周时实验组VEGF浓度分别为(374.74±3.30)ng·L-1、(419.06±1.39)ng·L-1、(481.83±3.36)ng·L-1,同时间点对照组分别为(271.11±1.12)ng·L-1、(345.18±3.27)ng·L-1、(380.33±5.03)ng·L-1,差异均具有统计学意义(均为P<0.05),相应时间点实验组显著高于对照组。实验组术后1周、2周、3周、4周VEGF浓度的差异均有统计学意义(均为P<0.05),各时间点与术前(128.75±3.83)ng·L-1差异均有统计学意义(均为P<0.05)。对照组术后各时间点VEGF浓度与术前差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论血管内皮细胞移植到角膜内表面后,房水VEGF浓度在术后4周内持续升高,之后稳定在一较高水平。 展开更多

关键词 恒河猴 血管内皮细胞生长因子 房水 角膜移植

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恒河猴静脉内皮细胞衬里ePTFE人工血管的实验研究 被引量：1

8

作者 潘明新 何红兵 +2 位作者 潘玉先 王晓阳 杨继震 《第一军医大学学报》 CSCD 1998年第4期292-293,共2页

按原位获取法获取恒河猴表浅静脉内皮细胞，在体外培养扩增。制备成内皮细胞悬液（2×109／L）。用纤维蛋白胶和纤维连接蛋白联合预衬各ePTFE人工血管腔（长10cm，直径3mm），将内皮细胞灌入此人工血管。结果内皮细胞的贴壁率明显... 按原位获取法获取恒河猴表浅静脉内皮细胞，在体外培养扩增。制备成内皮细胞悬液（2×109／L）。用纤维蛋白胶和纤维连接蛋白联合预衬各ePTFE人工血管腔（长10cm，直径3mm），将内皮细胞灌入此人工血管。结果内皮细胞的贴壁率明显提高［（94．62±2．84）％］；内皮细胞高密度种植入工血管后2h，扫描电镜下见人工血管腔表面已形成完整的内皮细胞单层；孵育9d后，透射电镜见内皮细胞骨架已分化成熟，表明此时人工血管腔内皮细胞具有良好的抗切应能力。 展开更多

关键词 静脉 内皮细胞 人工血管 恒河猴 血管移植

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恒河猴自体静脉内皮细胞种植ePTFE人工血管后置换髂总动脉的实验研究

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作者 潘明新 王晓阳 +2 位作者 何红兵 潘玉先 杨继震 《第一军医大学学报》 CSCD 1999年第6期534-536,共3页

:15只恒河猴随机分为 2组 :实验组 10例 ,其人工血管均经自体静脉内皮细胞种植 ;对照组 5例 ,其人工血管均未经任何处理。实验组、对照组手术方法相同。将长 6cm、直径 3mmePTFE(膨体聚四氟乙烯 )人工血管近端与腹主动脉行端 -侧吻合、... :15只恒河猴随机分为 2组 :实验组 10例 ,其人工血管均经自体静脉内皮细胞种植 ;对照组 5例 ,其人工血管均未经任何处理。实验组、对照组手术方法相同。将长 6cm、直径 3mmePTFE(膨体聚四氟乙烯 )人工血管近端与腹主动脉行端 -侧吻合、远端与髂总动脉行端 -端吻合。术后当日、1周及 4周 ,所有恒河猴均行静脉法数字减影造影术 ,术后 4周行彩色B型超声波检查 ,然后取出所有对照组及 9例实验组恒河猴腹腔内之人工血管 ,标本送光镜、扫描电镜及透射电镜检查。结果表明 ,术后 4周 ,对照组人工血管均不通畅 ,而实验组有 8条人工血管通畅良好。B超见全部对照组及 1例实验组人工血管腔内形成血栓 ,实验组 8条通畅之人工血管均保持较高的血流量。扫描电镜见实验组全部人工血管腔内均有一层完整融合的内皮细胞单层 ,而对照组人工血管腔内未见有内皮细胞。 展开更多

关键词 恒河猴 静脉内皮细胞 人工血管 髂总动脉

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腺病毒介导slit2基因转染人视网膜色素上皮细胞对RF/6A细胞迁移及管腔形成的影响 被引量：4

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作者 张明慧 周希瑗 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第16期1619-1623,共5页

目的观察共培养模型下,腺病毒介导的slit2基因转染人视网膜色素上皮细胞(RPE)对猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移及管腔形成的影响。方法用腺病毒介导的slit2基因(Ad-slit2)转染RPE细胞,同时设空载体腺病毒转染组(Ad-null)及空白... 目的观察共培养模型下,腺病毒介导的slit2基因转染人视网膜色素上皮细胞(RPE)对猴脉络膜视网膜血管内皮细胞(RF/6A)迁移及管腔形成的影响。方法用腺病毒介导的slit2基因(Ad-slit2)转染RPE细胞,同时设空载体腺病毒转染组(Ad-null)及空白对照组。转染24 h及48 h后,采用RT-PCR及Western blot法分别检测RPE细胞中slit2、VEGF的mRNA及蛋白表达情况;ELISA法检测RPE细胞培养基上清液中VEGF的分泌水平;建立RPE&RF/6A共培养模型,采用Transwell小室法及Matrigel胶体外三维成型法分别检测过表达slit2基因的RPE细胞对RF/6A细胞迁移能力及管腔形成能力的影响,并计算迁移数目及管腔形成长度、管腔数。结果 Ad-slit2转染24、48 h后,RPE细胞在基因及蛋白水平表达slit2、VEGF均有明显增高;ELISA结果显示过表达slit2基因的RPE细胞其培养基上清液中分泌型VEGF水平增高;在RPE&RF/6A共培养下,空白对照组、Ad-null转染24 h组、Ad-slit2转染24 h组、Ad-null转染48 h组、Ad-slit2转染48 h组中,RF/6A细胞迁移数目分别是(40.6±4.5)、(36.7±3.5)、(67.7±4.2)、(36.0±3.6)、(79.7±3.5);管腔形成长度分别是(3.95±0.31)、(4.53±0.26)、(6.04±0.34)、(4.09±0.18)、(7.27±0.45)mm,管腔数分别是(8.7±3.2)、(8.9±3.6)、(15.9±4.2)、(8.3±2.4)、(23.3±4.5)。Ad-slit2转染24 h及48 h组与空白对照组比较,差异具有统学意义(P<0.05)。结论腺病毒介导的slit2基因转染RPE细胞可促进RF/6A细胞的迁移及管腔形成。RPE细胞中的slit2可能参与脉络膜新生血管形成过程。 展开更多

关键词 slit2基因 脉络膜新生血管 脉络膜视网膜血管内皮细胞 迁移 管腔形成

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改良揭膜消化法分离培养恒河猴角膜内皮细胞 被引量：1

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作者 马瑞杰 李妍 +1 位作者 孙晓梅 胡竹林 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2016年第7期618-621,共4页

目的分析改良揭膜消化法分离培养恒河猴角膜内皮细胞的可行性。方法揭取恒河猴角膜后弹力层和内皮层,反复剪碎,用1 mg·m L^(-1)胶原酶A消化15 min,离心后重悬接种。待原代细胞长满80%~90%时,以40×106个·L^(-1)的密度传... 目的分析改良揭膜消化法分离培养恒河猴角膜内皮细胞的可行性。方法揭取恒河猴角膜后弹力层和内皮层,反复剪碎,用1 mg·m L^(-1)胶原酶A消化15 min,离心后重悬接种。待原代细胞长满80%~90%时,以40×106个·L^(-1)的密度传代。观察记录原代及传代细胞生长情况、传代时间,进行细胞鉴定,并与组织贴壁法相比较。结果改良揭膜消化法获取的原代细胞生长较慢,21 d融合成单层铺路石样结构,无基质细胞污染;传代细胞生长较快,5~6 d可传一代;神经元特异烯醇化酶表达阳性。组织贴壁法分离组织24h后组织片体积变小,透亮度明显下降,疑似溶解,高倍镜下观察显示,后弹力层纤维排列紊乱,细胞观察不清;继续培养至第5天,细胞完全溶解,组织片碎裂,轮廓不清,未见角膜内皮细胞爬出。结论改良揭膜消化法能简易高效地获得大量恒河猴角膜内皮细胞。 展开更多

关键词 角膜内皮细胞 改良揭膜消化法 体外培养 恒河猴

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腺病毒介导的Slit2及Slit2 ShRNA转染缺氧诱导的人RPE细胞对人脉络膜微血管内皮细胞增殖的影响

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作者 汤艳玲 周希瑗 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1590-1593,共4页

目的:观察腺病毒介导的Slit2及Slit2 ShRNA转染缺氧诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial cells,RPE)细胞对人脉络膜微血管内皮细胞(human choroidal microvascular endothelial cell,HCMEC)增殖的影响,探讨Slit2在脉络... 目的:观察腺病毒介导的Slit2及Slit2 ShRNA转染缺氧诱导的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial cells,RPE)细胞对人脉络膜微血管内皮细胞(human choroidal microvascular endothelial cell,HCMEC)增殖的影响,探讨Slit2在脉络膜新生血管中的可能作用,为脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)提供新的治疗思路。方法:体外培养并鉴定人RPE细胞、HCMEC;200μmol/L氯化钴建立化学缺氧模型,Transwell小室建立细胞共培养模型;将缺氧的RPE细胞随机分为Slit2组(加入Slit2)、Slit2 ShRNA组(加入Slit2 ShRNA)、空腺病毒组(加入空腺病毒)、缺氧组,12、24、48 h后采用CCK 8(Cell Counting Kit-8,CCK 8)法检测HCMEC的增殖。结果:不同组别存在组间差别,差异均有统计学意义(F=98.122,P=0.000),不同时间点存在差别(F=3388.913,P=0.000),组别与时间点的交互作用(F=82.863,P=0.000)。Slit2组吸光度(absorbance,A)值在24 h、48 h均高于其他组(与缺氧组P=0.001,其余P=0.000),Slit2 ShRNA组A值在24 h、48 h均低于其他组(48 h与缺氧组P=0.003,与空腺病毒组P=0.008,其余P=0.000)。结论:Slit2的高表达可明显促进HCMEC的增殖,沉默RPE细胞中的Slit2的表达后,会明显抑制HCMEC的增殖。 展开更多

关键词 SLIT2 人视网膜色素上皮细胞 人脉络膜微血管内皮细胞 Transwell共培养

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恒河猴血管内皮细胞原位获取的实验研究 被引量：5

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作者 潘明新 潘玉先 +1 位作者 何红兵 杨继震 《第一军医大学学报》 CSCD 1996年第4期317-318,共2页

应用原位获取法从５６条恒河猴中的５４条血管中获取了内皮细胞。Ａ组用０．１％Ⅱ型胶原酶消化２５ｍｉｎ，Ｂ组用０．１％Ⅱ型胶原酶消化１５ｍｉｎ。结果表明，Ａ组的内皮细胞获取率明显高于Ｂ组。Ａ组及Ｂ组中颈外静脉，上肢浅静脉... 应用原位获取法从５６条恒河猴中的５４条血管中获取了内皮细胞。Ａ组用０．１％Ⅱ型胶原酶消化２５ｍｉｎ，Ｂ组用０．１％Ⅱ型胶原酶消化１５ｍｉｎ。结果表明，Ａ组的内皮细胞获取率明显高于Ｂ组。Ａ组及Ｂ组中颈外静脉，上肢浅静脉，髂总动脉的内皮细胞获取率明显高于既往的机械获取法，灌注酶解消化法，外翻酶解消化法（ｐ＜０．０１）。Ｂ组中，下腔静脉及腹主动脉组因在消化过程中出现胶原酶自血管壁渗出，使得内皮细胞获取率明显下降，但与既往方法比较却无明显差异（ｐ＞０．０５）。经因子Ⅷ相关抗原检测证明所获取的细胞为内皮细胞，纯度达９９％以上。原位获取法操作简单，结果稳定，重复性好。 展开更多

关键词 恒河猴 内皮细胞 两位获取 人工血管 动物模型

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超声乳化致恒河猴角膜内皮损伤动物模型的建立 被引量：4

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作者 朱勤 胡敏 +3 位作者 刘海 胡竹林 肖中男 孙晓梅 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第2期110-112,共3页

目的建立超声乳化致恒河猴角膜内皮损伤的动物模型。方法健康成年恒河猴4只,右眼用于实验。术中超声头斜面向角膜内表面,负压150mmHg(1kPa=7.5mm-Hg)、流量25mL·min-1、能量80%、距离角膜内表面0.1～0.2mm的条件下持续5min,并不断... 目的建立超声乳化致恒河猴角膜内皮损伤的动物模型。方法健康成年恒河猴4只,右眼用于实验。术中超声头斜面向角膜内表面,负压150mmHg(1kPa=7.5mm-Hg)、流量25mL·min-1、能量80%、距离角膜内表面0.1～0.2mm的条件下持续5min,并不断摆动超声头破坏角膜内表面,位置为角膜中央直径7～9mm处。用I/A吸出透明晶状体皮质。术后当时、1周、2周、3周、4周行术眼前段照相后分别摘除术眼角膜,行扫描电镜观察角膜内皮细胞形态。结果超声乳化损伤角膜内皮细胞后,角膜透明度随时间延长逐渐下降,术后4周时出现明显角膜混浊水肿。扫描电镜下可见随着时间推移,受损角膜内皮细胞逐渐水肿,并从后弹力层脱落,术后4周时角膜内皮细胞已基本脱落,见裸露的后弹力层。结论本实验通过超声乳化仪建立了恒河猴角膜内皮损伤的动物模型,并且本模型具有可重复性、对内皮以外组织损伤小及简单易行的特点。 展开更多

关键词 超声乳化 角膜内皮细胞 扫描电镜 恒河猴

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人脐静脉血管内皮细胞在体移植替代猴角膜内皮细胞的形态学分析 被引量：3

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作者 张文佳 胡竹林 +5 位作者 朱勤 韦春玲 孙晓梅 代解杰 刘海 杨忠昆 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2014年第11期1020-1024,共5页

目的使用去除后弹力层的恒河猴自体角膜为细胞载体,将培养的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)种植到角膜内表面,观察HUVEC替代恒河猴角膜内皮细胞的功能情况以及HUVEC在恒河猴眼内生长的情况。方法... 目的使用去除后弹力层的恒河猴自体角膜为细胞载体,将培养的人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)种植到角膜内表面,观察HUVEC替代恒河猴角膜内皮细胞的功能情况以及HUVEC在恒河猴眼内生长的情况。方法取恒河猴6只随机分为3组:实验组(3只)、实验对照组(2只)、空白对照组(1只)。实验组:用离心沉淀法将培养的HUVEC移植到去除后弹力层的恒河猴自体角膜内表面,之后将自体角膜缝回植床;实验对照组:将撕除部分后弹力层的术眼角膜植片原位缝回植床;空白对照组:取下术眼角膜植片不做任何处理原位缝回植床。术后观察各组角膜植片透明情况;实验组及实验对照组于术后30 d及60 d、空白对照组于术后60 d行术眼摘除,标本做病理切片、CD34免疫组化及扫描电镜,观察房角结构及HUVEC在角膜植片内表面形态分布。结果实验组角膜植片维持了一定的厚度和透明性,而实验对照组角膜植片发生严重大泡性改变。病理切片示实验组角膜内表面可见一层细胞生长,CD34染色阳性,提示为血管内皮细胞;实验对照组角膜内表面未见任何细胞生长;空白对照组角膜植片保留完整后弹力层及内皮细胞层。扫描电镜示实验组有HUVEC单层在角膜内表面生长但有大量白细胞聚集及少量细胞碎片嵌顿于小梁网;实验对照组角膜内表面残留胶原纤维样物质,无细胞生长;空白对照组见完整六边形角膜内皮细胞层。结论 HUVEC能够在撕除后弹力层的恒河猴角膜内表面生长并发挥一定的屏障作用,维持角膜的厚度和透明性,但会产生较重的排斥反应。 展开更多

关键词 血管内皮细胞 角膜内皮细胞 恒河猴

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影响息肉状脉络膜血管病变抗VEGF治疗后OCTA指标变化的房水靶细胞因子分析 被引量：5

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作者 徐青 乔磊 +5 位作者 宫朝举 冯瑞芳 刘亚鲁 孙永承 张翼鹏 李甦雁 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期632-639,共8页

目的探讨影响息肉状脉络膜血管病变(PCV)患者抗血管内皮生长因子(VEGF)治疗后光相干断层扫描血管成像(OCTA)影像指标的房水可预测细胞因子。方法采用横断面方法,纳入2017年7月至2020年7月于徐州市第一人民医院眼科确诊的PCV患者20例20眼... 目的探讨影响息肉状脉络膜血管病变(PCV)患者抗血管内皮生长因子(VEGF)治疗后光相干断层扫描血管成像(OCTA)影像指标的房水可预测细胞因子。方法采用横断面方法,纳入2017年7月至2020年7月于徐州市第一人民医院眼科确诊的PCV患者20例20眼,均采用康柏西普3+PRN方案玻璃体腔注射治疗,分别于治疗前及第3次注射前收集患眼房水各100μl,用Luminex平台检测房水中13种细胞因子水平,并纳入同期行白内障超声乳化摘出术、年龄及性别匹配的白内障患者16例16眼作为对照。采用OCTA系统对PCV患眼黄斑中心凹视网膜厚度(CMT)、视网膜下液高度(SRFH)、视网膜色素上皮脱离高度(PEDH)、视网膜色素上皮脱离直径(PEDD)进行测定,分析影响PCV治疗前后OCTA相关指标变化的房水细胞因子。结果与白内障组比较,治疗前PCV组患眼房水中白细胞介素8(IL-8)、瘦素、肝细胞生长因子(HGF)、成纤维细胞生长因子2(FGF-2)、血管生成素2(Ang-2)、内皮素1和血管内皮细胞生长因子A(VEGF-A)质量浓度明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗后PCV患眼房水中VEGF-A质量浓度显著低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.001);治疗后患眼CMT、SRFH、PEDH、PEDD值均明显低于治疗前,差异均有统计学意义(均P<0.05)。治疗前PCV患眼房水中VEGF-A质量浓度与治疗前后CMT的变化值呈正相关(r=0.592,P<0.05);内皮素1质量浓度与治疗前后CMT的变化值呈负相关(r=-0.485,均P<0.05);IL-8和HGF质量浓度与治疗前后SRFH的变化值均呈正相关(r=0.492、0.466,均P<0.05)。治疗前房水中VEGF-A和IL-8质量浓度分别影响CMT和SRFH变化量,基线VEGF-A每增加1 pg/ml,CMT降低0.836μm(P=0.006);基线IL-8每增加1 pg/ml,SRFH降低12.522μm(P=0.028)。结论PCV患眼房水中VEGF-A和IL-8浓度明显升高,其基线水平可能分别是评估PCV患者抗VEGF药物治疗后CMT和SRFH改善的预测因子。 展开更多

关键词 生物学测定 息肉状脉络膜血管病变 血管内皮生长因子-A 白细胞介素-8 光相干断层扫描血管成像 黄斑中心凹视网膜厚度 视网膜下液高度

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脉络膜新生血管的生成和抑制 被引量：48

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作者 朱洁 王雨生 惠延年 《眼科新进展》 CAS 2004年第1期57-60,共4页

脉络膜新生血管 (choroidalnoevascularization ,CNV)与眼部许多疾病有关 ,是引起视力障碍的重要原因之一。近来关于CNV的研究已成为热点 ,但其形成机制尚未阐明。目前已证实 ,CNV是由多种可以产生细胞因子的细胞组成。许多CNV的刺激剂... 脉络膜新生血管 (choroidalnoevascularization ,CNV)与眼部许多疾病有关 ,是引起视力障碍的重要原因之一。近来关于CNV的研究已成为热点 ,但其形成机制尚未阐明。目前已证实 ,CNV是由多种可以产生细胞因子的细胞组成。许多CNV的刺激剂和抑制剂已被发现 ,其中血管生长因子和血管抑制因子之间的不平衡是CNV生成的关键启动因素。另外 。 展开更多

关键词 脉络膜新生血管 视网膜色素上皮细胞 巨噬细胞 血管内皮细胞 血管生成刺激剂 血管生成抑制剂

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恒河猴慢性青光眼模型的建立及相关生物学特性 被引量：9

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作者 戴毅 孙兴怀 +5 位作者 郭文毅 杨幼明 余晓波 钱韶红 沈颖 金晓红 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2005年第2期68-71,F007,共5页

目的建立两种激光光凝的恒河猴慢性高眼压性青光眼模型,评价模型眼的相关生物学特性。方法成年恒河猴15只,分别采用半导体倍频532激光和氩激光,在房角镜下对功能小梁网区行360°光凝。对其中7只恒河猴分别采用A超、视网膜断层成像... 目的建立两种激光光凝的恒河猴慢性高眼压性青光眼模型,评价模型眼的相关生物学特性。方法成年恒河猴15只,分别采用半导体倍频532激光和氩激光,在房角镜下对功能小梁网区行360°光凝。对其中7只恒河猴分别采用A超、视网膜断层成像仪和视网膜血流仪进行模型眼和另侧对照眼的眼球及视盘形态、血流参数的检测。结果两种光凝模式相比,眼压升高后第4周,倍频532激光组平均眼压为48.4±10.3mmHg,氩激光组平均眼压为44.2±7.0mmHg,倍频532激光组与氩激光组的三次光凝成功率的差异无显著性意义。除视盘面积外,恒河猴模型眼的视杯形态指数、杯盘面积比、盘沿面积、视网膜神经纤维层的平均厚度,与对照眼相比差异有极显著性意义。眼轴和前房深度与对照眼相比差异有显著性意义。筛板血流量、血流速度和红细胞移动速率与对照眼相比差异无显著性意义。结论两种激光光凝恒河猴小梁网均可用以建立慢性高眼压性青光眼模型,模型眼出现青光眼眼底特征性的形态学改变。 展开更多

关键词 生物学特性 恒河猴 青光眼 慢性 相关 显著性 视网膜 评价模型 形态指数 血流速度 激光 对照 倍频 半导体 成像仪 眼压 平均 面积比 纤维层 比差 血流量 红细胞 形态学 特征性 压性 小梁 视盘 眼球 神经 眼底

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不同类型脉络膜新生血管患者对抗VEGF药物治疗应答的差异性 被引量：3

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作者 叶蓉 张秋阳 +2 位作者 张荟颖 曹原 蒋沁 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2022年第12期952-956,共5页

目的探讨不同类型脉络膜新生血管(CNV)患者对抗血管内皮生长因子(VEGF)药物治疗应答的差异性。方法本研究为回顾性研究。选取2016年10月至2021年9月在我院门诊确诊并接受康柏西普治疗的CNV患者50例68眼。依据CNV类型将患者分成3组,I型CN... 目的探讨不同类型脉络膜新生血管(CNV)患者对抗血管内皮生长因子(VEGF)药物治疗应答的差异性。方法本研究为回顾性研究。选取2016年10月至2021年9月在我院门诊确诊并接受康柏西普治疗的CNV患者50例68眼。依据CNV类型将患者分成3组,I型CNV组患者16例20眼,II型CNV组患者25例35眼,混合型CNV组患者9例13眼。采用德国海德堡公司共焦激光同步血管造影系统的增强扫描技术扫描获得患者黄斑中心凹脉络膜厚度(SFCT),记录患者治疗前后相应时间点的最佳矫正视力(BCVA)(logMAR),记录治疗后不同时间患者注药次数、需再治疗眼数和患者CNV复发率等。采用SPSS 23.0统计学软件对所得数据进行统计分析。结果II型CNV组患者治疗后1周、1个月及2个月的BCVA较基线提高量高于I型CNV组和混合型CNV组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);混合型CNV组患者治疗后6个月、8个月及12个月BCVA较基线提高量低于I型CNV组和II型CNV组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。三组患者治疗后SFCT较基线均有所提高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。混合型CNV组患者治疗后8个月、12个月的SFCT较基线恢复厚度低于I型CNV组和II型CNV组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。随访0~24个月,三组患者总注药次数差异有统计学意义(P<0.05),SNK-q检验结果显示:I型CNV组及II型CNV组患者注药次数少于混合型CNV组(均为P<0.05)。三组患者需再治疗眼率差异有统计学意义(P<0.05);混合型CNV组患者需再治疗眼率高于I型CNV组及II型CNV组[需再治疗眼数率差95%CI分别为(0.051,0.133)和(0.041,0.142)]。三组患者注药后复发率差异无统计学意义(P>0.05)。结论II型CNV在抗VEGF治疗早期应答更好,而II型CNV及I型CNV在治疗后期应答反应趋于相近;混合型CNV在治疗后期应答不良。 展开更多

关键词 病理性近视 脉络膜新生血管 视网膜色素上皮细胞 抗血管内皮生长因子

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细胞衰老在干性年龄相关性黄斑变性中的作用研究进展

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作者 蔡梦霞 魏婷婷 +1 位作者 朱凌鹏 姚勇 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第4期324-328,共5页

干性年龄相关性黄斑变性(AMD)是一种视网膜黄斑区域的退行性疾病,各种视网膜和脉络膜组织的衰老变化是AMD致病的重要因素之一。细胞衰老是细胞在某些生理过程中或受到应激性损伤时引发的不可逆的细胞周期停滞状态,影响多种生理和病理过... 干性年龄相关性黄斑变性(AMD)是一种视网膜黄斑区域的退行性疾病,各种视网膜和脉络膜组织的衰老变化是AMD致病的重要因素之一。细胞衰老是细胞在某些生理过程中或受到应激性损伤时引发的不可逆的细胞周期停滞状态,影响多种生理和病理过程。越来越多的研究表明,细胞衰老在AMD的发生发展中起重要作用。本文就细胞衰老的机制及其与干性AMD的关系进行综述,旨在为干性AMD治疗提供新思路。 展开更多

关键词 年龄相关性黄斑变性 细胞衰老 视网膜色素上皮细胞 小胶质细胞 脉络膜血管内皮细胞 线粒体 溶酶体 炎症

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