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42Sp50/eEF1a在正常和gsdf缺失型青鳉性腺中的表达差异
1
作者
武小雯
张新亭
+3 位作者
常宇阳
汪丝雨
陈良标
关桂君
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期49-53,81,共6页
青鳉(Oryzias latipes)性腺体细胞衍生因子gsdf敲除可导致XY雌性化,但Gsdf的生物学作用和靶基因仍不清楚。用Label Free蛋白组学结合MS质谱分析,定量比对正常的XX卵巢、XY精巢及gsdf缺失XY卵巢中的蛋白质表达谱,发现真核翻译延伸因子1(e...
青鳉(Oryzias latipes)性腺体细胞衍生因子gsdf敲除可导致XY雌性化,但Gsdf的生物学作用和靶基因仍不清楚。用Label Free蛋白组学结合MS质谱分析,定量比对正常的XX卵巢、XY精巢及gsdf缺失XY卵巢中的蛋白质表达谱,发现真核翻译延伸因子1(eEF1)的卵巢异构型42Sp50的表达量,在gsdf缺失卵巢中显著升高。通过实时定量PCR扩增,定量分析了42Sp50在正常XX gsdf^(+/+)卵巢、XX和XY型gsdf^(-/-)卵巢中的表达。用抗人EEF1A抗体的免疫荧光技术,鉴定了青鳉eEF1a和/或42Sp50在生殖细胞性分化及性成熟期,gsdf缺失卵巢同正常卵巢对照组的细胞内表达变化,验证了蛋白组学发现的在gsdf^(-/-)卵巢中有大量卵细胞高表达42Sp50。青鳉eEF1a和42Sp50氨基酸序列高度同源,但在氨基酰基结合囊和核糖体结合部位有显著差异,为此推测Gsdf信号可能直接或间接地影响XY生殖细胞表达42Sp50和雌性分化。同时建立了双色细胞荧光免疫技术用于鉴别青鳉XX型和gsdf缺失的XY型卵细胞,为研究脊椎动物配子发生的分子机制提供了新线索。
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关键词
性腺
体
细胞
衍生
因子
真核翻译延伸
因子
1
42Sp50
基因
卵巢发育
青鳉
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职称材料
斑马鱼Tg(Crystal-pro-gsdf-2A-egfp)质粒的构建及验证
2
作者
郭安宁
关桂君
+2 位作者
王映
孙凯庆
陈良标
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期683-689,共7页
为研究性腺体衍生因子基因(gsdf)在斑马鱼Danio rerio精巢发育过程中相关分子调控机制模型,提取了斑马鱼精巢总RNA,逆转录合成c DNA,并以其为模板,用RT-PCR法扩增得到gsdf基因,构建了以小鼠gamma-crystalin启动子启动的斑马鱼gsdf基因...
为研究性腺体衍生因子基因(gsdf)在斑马鱼Danio rerio精巢发育过程中相关分子调控机制模型,提取了斑马鱼精巢总RNA,逆转录合成c DNA,并以其为模板,用RT-PCR法扩增得到gsdf基因,构建了以小鼠gamma-crystalin启动子启动的斑马鱼gsdf基因与增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)融合的荧光素酶报告质粒Tg (Crystal-pro-gsdf-2A-egfp),采用显微注射技术注射该质粒至1细胞期的斑马鱼受精胚胎中。结果表明:在荧光显微镜下观察到19尾能在眼部晶状体中特异表达绿色荧光蛋白基因(gfp)的F0代斑马鱼,将表达了绿色荧光蛋白基因的斑马鱼同野生型(WT)非转基因斑马鱼杂交,最终获得能特异表达绿色荧光蛋白基因的F2代,且gsdf基因能在斑马鱼眼部晶状体中特异表达并稳定遗传。研究表明,在斑马鱼上建立的Tg (Crystal-pro-gsdf-2A-egfp)转基因品系,为研究和观察斑马鱼精巢发育的分子调控机制提供了新的方法。
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关键词
转
基因
斑马鱼
性腺
体
衍生
因子
基因
(
gsdf
)
精巢发育
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职称材料
题名
42Sp50/eEF1a在正常和gsdf缺失型青鳉性腺中的表达差异
1
作者
武小雯
张新亭
常宇阳
汪丝雨
陈良标
关桂君
机构
上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室
上海海洋大学水产种质资源发掘与利用教育部重点实验室
上海海洋大学水产科学国家实验教学示范中心
出处
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第4期49-53,81,共6页
基金
国家重点研发计划项目(2018YFD0900601)。
文摘
青鳉(Oryzias latipes)性腺体细胞衍生因子gsdf敲除可导致XY雌性化,但Gsdf的生物学作用和靶基因仍不清楚。用Label Free蛋白组学结合MS质谱分析,定量比对正常的XX卵巢、XY精巢及gsdf缺失XY卵巢中的蛋白质表达谱,发现真核翻译延伸因子1(eEF1)的卵巢异构型42Sp50的表达量,在gsdf缺失卵巢中显著升高。通过实时定量PCR扩增,定量分析了42Sp50在正常XX gsdf^(+/+)卵巢、XX和XY型gsdf^(-/-)卵巢中的表达。用抗人EEF1A抗体的免疫荧光技术,鉴定了青鳉eEF1a和/或42Sp50在生殖细胞性分化及性成熟期,gsdf缺失卵巢同正常卵巢对照组的细胞内表达变化,验证了蛋白组学发现的在gsdf^(-/-)卵巢中有大量卵细胞高表达42Sp50。青鳉eEF1a和42Sp50氨基酸序列高度同源,但在氨基酰基结合囊和核糖体结合部位有显著差异,为此推测Gsdf信号可能直接或间接地影响XY生殖细胞表达42Sp50和雌性分化。同时建立了双色细胞荧光免疫技术用于鉴别青鳉XX型和gsdf缺失的XY型卵细胞,为研究脊椎动物配子发生的分子机制提供了新线索。
关键词
性腺
体
细胞
衍生
因子
真核翻译延伸
因子
1
42Sp50
基因
卵巢发育
青鳉
Keywords
gsdf
eEF1a
42Sp50
oogenesis
medaka
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
S917.4 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
斑马鱼Tg(Crystal-pro-gsdf-2A-egfp)质粒的构建及验证
2
作者
郭安宁
关桂君
王映
孙凯庆
陈良标
机构
上海海洋大学教育部水产种质资源发掘与利用重点实验室
出处
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期683-689,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(31572611)
上海市教委水产高峰学科项目.
文摘
为研究性腺体衍生因子基因(gsdf)在斑马鱼Danio rerio精巢发育过程中相关分子调控机制模型,提取了斑马鱼精巢总RNA,逆转录合成c DNA,并以其为模板,用RT-PCR法扩增得到gsdf基因,构建了以小鼠gamma-crystalin启动子启动的斑马鱼gsdf基因与增强型绿色荧光蛋白基因(egfp)融合的荧光素酶报告质粒Tg (Crystal-pro-gsdf-2A-egfp),采用显微注射技术注射该质粒至1细胞期的斑马鱼受精胚胎中。结果表明:在荧光显微镜下观察到19尾能在眼部晶状体中特异表达绿色荧光蛋白基因(gfp)的F0代斑马鱼,将表达了绿色荧光蛋白基因的斑马鱼同野生型(WT)非转基因斑马鱼杂交,最终获得能特异表达绿色荧光蛋白基因的F2代,且gsdf基因能在斑马鱼眼部晶状体中特异表达并稳定遗传。研究表明,在斑马鱼上建立的Tg (Crystal-pro-gsdf-2A-egfp)转基因品系,为研究和观察斑马鱼精巢发育的分子调控机制提供了新的方法。
关键词
转
基因
斑马鱼
性腺
体
衍生
因子
基因
(
gsdf
)
精巢发育
Keywords
transgenic zebrafish
gsdf
testis development
分类号
S917.4 [农业科学—水产科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
42Sp50/eEF1a在正常和gsdf缺失型青鳉性腺中的表达差异
武小雯
张新亭
常宇阳
汪丝雨
陈良标
关桂君
《生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
0
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职称材料
2
斑马鱼Tg(Crystal-pro-gsdf-2A-egfp)质粒的构建及验证
郭安宁
关桂君
王映
孙凯庆
陈良标
《大连海洋大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
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