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牡荆素调控Epac1/Rap1通路介导H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用机制
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作者 甘琴 王鑫 +1 位作者 杨换花 董六一 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1091-1099,共9页
目的:研究Epac/Rap1信号通路在H9c2细胞缺氧复氧损伤中的作用,并探明牡荆素(vitexin,VT)调控Epac/Rap1信号通路保护心肌细胞缺氧复氧损伤的作用机制。方法:采用氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)构建H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤... 目的:研究Epac/Rap1信号通路在H9c2细胞缺氧复氧损伤中的作用,并探明牡荆素(vitexin,VT)调控Epac/Rap1信号通路保护心肌细胞缺氧复氧损伤的作用机制。方法:采用氧糖剥夺(oxygen glucose deprivation,OGD)构建H9c2心肌细胞缺氧复氧损伤模型。实验随机分为7组:正常对照组、OGD组、OGD+VT组、OGD+Epac1激动剂(8-CPT)+VT组、OGD+Epac1抑制剂(ESI-09)+VT组、OGD+8-CPT+VT+PKA抑制剂(H-89)组、OGD+ESI-09+VT+H-89组。MTT检测细胞活力;LDH检测细胞损伤;Western blot检测H9c2细胞中Epac1及其下游Rap1-GTP、CaMK II和ERK蛋白的表达量;免疫荧光检测H9c2心肌细胞中Epac1和Rap1蛋白的表达;PCR实时荧光定量检测H9c2心肌细胞中Rap1和Epac1的m RNA表达;钙离子荧光探针(Fluo-3 AM)检测细胞内[Ca^(2+)]i含量;Co-IP检测细胞中Epac1与Rap1的相互作用。结果:与正常对照组相比,OGD组H9c2心肌细胞在缺氧5 h复氧1 h后,LDH释放量显著升高,心肌细胞细胞活力显著降低,Epac1蛋白表达显著升高,Rap1活化,Rap1-GTP上调。VT(10μmol/L)可显著抑制OGD后H9c2心肌细胞Epac1的激活,继而抑制其下游Rap1活性形式Rap1-GTP的表达,另外CaMK II蛋白表达下调,但ERK磷酸化增加,同时减轻心肌细胞内钙超载;8-CPT可抵消VT的作用,ESI-09与VT联合处理后具有协同作用;H-89对心肌细胞Epac1及其下游相关蛋白表达无影响。结论:缺氧复氧可介导心肌细胞Epac1/Rap1信号通路激活,VT通过抑制Epac1/Rap1信号通路,下调CaMKⅡ蛋白表达,促进ERK磷酸化,对心肌细胞缺氧复氧损伤起保护作用。 展开更多
关键词 牡荆素 Epac1 Rap1 缺氧损伤
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Nrf2-ARE通路在缺氧/吡那地尔后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用 被引量:18
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作者 喻守佳 王海英 +1 位作者 喻田 刘兴奎 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期1696-1699,1703,共5页
目的:探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)通路在缺氧后处理和吡那地尔后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用。方法:建立成年大鼠心肌细胞缺氧复氧模型,分离、培养心肌细胞,随机分为6组(n=8):正常组(N组)、模型组(M... 目的:探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)通路在缺氧后处理和吡那地尔后处理减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用。方法:建立成年大鼠心肌细胞缺氧复氧模型,分离、培养心肌细胞,随机分为6组(n=8):正常组(N组)、模型组(M组)、缺氧后处理组(IPO组)和不同浓度吡那地尔后处理组(P25组、P50组和P100组)。分离后的心肌细胞培养20 h后,除N组继续培养外,其余各组均缺氧45 min,复氧60min。IPO组缺氧45 min后复氧、缺氧循环3次,每次各5 min,在继续复氧60 min;P25组、P50组和P100组缺氧45 min后分别以25、50和100μmol/L吡那地尔处理5 min,复氧60 min。采用real-time PCR及Western blotting技术检测复氧末心肌细胞中Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)、NAD(P)H:醌氧化还原酶1(NQO1)和超氧化物歧化酶1(SOD1)mRNA及蛋白表达水平。结果:与N组比较,其它各组与Nrf2、NQO1、SOD1及HO-1的mRNA及蛋白质表达均降低(P<0.05);与M组比较,其它各组mRNA及蛋白质表达均显著增高(P<0.05);其中IPO组和P50组mRNA转录量显著高于P25组和P100组(P<0.05);P25组SOD1 mRNA显著高于P100组(P<0.05)。IPO组和P50组Nrf2、SOD1和NQO1蛋白质表达显著高于P25和P100组(P<0.05);P50组HO-1蛋白质表达量显著高于IPO组、P25组和P100组(P<0.05);P25组HO-1和NQO1蛋白质表达显著高于P100组(P<0.05)。结论:缺氧后处理和吡那地尔后处理可能通过激活Nrf2-ARE通路减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤。 展开更多
关键词 核因子E2相关因子2 吡那地尔 缺氧损伤 心肌细胞 后处理
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氯离子参与心肌细胞缺氧复氧损伤机制的研究 被引量:13
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作者 陈杰 刘丹 +3 位作者 陈和平 廖章萍 赖仲方 何明 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期724-729,共6页
目的研究氯离子参加心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的机制。方法采用原代培养新生大鼠的心肌细胞A/R损伤模型,去除细胞外的氯离子(Cl--free),或分别给予Na+-K+-2Cl-共同转运体阻断剂bumetanide,Cl-/HCO3-离子交换系统抑制剂SITS和氯通道阻... 目的研究氯离子参加心肌细胞缺氧/复氧(A/R)损伤的机制。方法采用原代培养新生大鼠的心肌细胞A/R损伤模型,去除细胞外的氯离子(Cl--free),或分别给予Na+-K+-2Cl-共同转运体阻断剂bumetanide,Cl-/HCO3-离子交换系统抑制剂SITS和氯通道阻断剂9-AC,观察细胞存活率、MDA含量、LDH、SOD、GSH-Px酶活性变化及细胞内的钙含量、NF-κB活性变化。结果A/R组与对照组比,MDA含量、LDH活性、细胞内的钙含量、NF-κB活性升高,细胞存活率、SOD、GSH-Px活性降低;bumetanide及9-AC组与A/R组比,各项指标无统计学意义。Cl--free、SITS处理后较A/R组,MDA含量、LDH活性、细胞内的钙含量、NF-κB活性降低,而细胞存活率、SOD、GSH-Px明显升高。结论Cl-/HCO3-离子交换系统在心肌细胞A/R损伤中起了重要作用,Cl-参与心肌A/R损伤的机制与钙超载及NF-κB活性升高有关。 展开更多
关键词 氯离子 氯离子阻断剂 缺氧/损伤 心肌保护
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人参皂苷Rb1预适应对肥厚乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用 被引量:7
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作者 郭佳 刘小康 +1 位作者 武文 张晓文 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2005年第9期1010-1014,共5页
目的:研究人参皂苷Rb1对心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤的保护作用。方法:用血管紧张素II(AngII)刺激乳鼠心肌细胞肥厚,以0.01~10μmol·L-1Rb1对H/R损伤心肌细胞预适应给药48h,检测心肌细胞表面积(CSA)、细胞蛋白含量(TP)、细胞凋亡... 目的:研究人参皂苷Rb1对心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤的保护作用。方法:用血管紧张素II(AngII)刺激乳鼠心肌细胞肥厚,以0.01~10μmol·L-1Rb1对H/R损伤心肌细胞预适应给药48h,检测心肌细胞表面积(CSA)、细胞蛋白含量(TP)、细胞凋亡率、细胞生存率和乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量。结果:与H/R组相比,Rb1组CSA和TP分别减少41.56%和43.37%;细胞生存率增加2.28倍;凋亡率降低85.29%;LDH、MDA含量分别降低59.20%和72.03%;NO活性增加2.67倍(P<0.01)。结论:Rb1显著减轻肥厚心肌细胞H/R损伤,机制与抑制细胞凋亡、减少脂质过氧化和LDH释放、增强NO活性有关。 展开更多
关键词 人参皂苷RB1 心肌细胞肥厚 缺氧 细胞凋亡 丙二醛 化氮
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钙拮抗剂通过PKCα/ERK1/2通路拮抗心肌细胞缺氧复氧损伤 被引量:2
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作者 郑付春 陈高勇 +5 位作者 李振鹏 李伟秋 郑燕珊 徐涵 石刚刚 张艳美 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2015年第8期865-870,共6页
目的:观察新型钙拮抗剂碘化N-正丁基氟哌啶醇(N-n-butyl haloperidol iodide,F2)及经典钙拮抗剂维拉帕米对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)时心肌细胞PKCα/ERK1/2信号通路及损伤的作用。方法:建立新生大鼠心肌细胞H/R模型,于缺... 目的:观察新型钙拮抗剂碘化N-正丁基氟哌啶醇(N-n-butyl haloperidol iodide,F2)及经典钙拮抗剂维拉帕米对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)时心肌细胞PKCα/ERK1/2信号通路及损伤的作用。方法:建立新生大鼠心肌细胞H/R模型,于缺氧液和复氧液中加入F2(1×10-6mol/L)及维拉帕米(2×10-6mol/L)。采用Western Blot方法检测心肌细胞磷酸化PKCα(pPKCα)、总PKCα、磷酸化ERK(p-ERK1/2)和总ERK1/2蛋白表达的变化;双抗体夹心光化学测定法检测培养细胞上清液中肌钙蛋白(cardiac troponin I,c Tn I)的含量,Hoechst 33342染色法检测心肌细胞早中期凋亡情况,Cell Counting Kit-8比色法检测心肌细胞存活率。结果:H/R激活培养心肌细胞PKCα和ERK1/2,使细胞c Tn I浓度升高,早中期凋亡增加,存活率下降;PKCα抑制剂可下调H/R所致的PKCα和ERK1/2活化程度;ERK1/2抑制剂可抑制H/R所致心肌细胞c Tn I漏出,减少细胞凋亡,提高细胞存活率;F2及维拉帕米能够下调H/R所致PKCα和ERK1/2的活化程度,抑制细胞c Tn I漏出,减少细胞凋亡,提高细胞存活率;PKCα激动剂和ERK激动剂可拮抗F2对H/R心肌细胞PKCα和ERK1/2激活的抑制作用及对心肌细胞损伤的保护作用。结论:H/R可引起心肌细胞PKCα/ERK1/2通路激活,F2和维拉帕米均可通过调节PKCα/ERK1/2信号通路拮抗心肌细胞H/R损伤。 展开更多
关键词 碘化N-正丁基氟哌啶醇 维拉帕米 心肌细胞 缺氧 损伤
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miR-30a-3p靶向NOD1对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响 被引量:4
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作者 刘建花 雷大洲 +2 位作者 周凡 齐俊杰 李世勋 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第4期414-420,共7页
目的探究miR-30a-3p与NOD1的靶向关系,及其对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响和机制。方法将细胞分为Ctrl组、H/R组、miR-30a-3p mimic组和miR-30a-3p inhibitor组,经过缺氧复氧处理后,转染相应的miRNA处理细胞,RT-PCR检测miR-30a-3p和NOD1... 目的探究miR-30a-3p与NOD1的靶向关系,及其对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响和机制。方法将细胞分为Ctrl组、H/R组、miR-30a-3p mimic组和miR-30a-3p inhibitor组,经过缺氧复氧处理后,转染相应的miRNA处理细胞,RT-PCR检测miR-30a-3p和NOD1基因表达水平,荧光素酶报告检测miR-30a-3p和NOD1靶向关系,Western blot检测NOD1、p-RPI2、p38 MAPK、NF-κB(p65)、cl-caspase-3蛋白表达水平,CCK8法检测细胞活性,Hoechst检测细胞凋亡,试剂盒检测LDH、CK、MDA、T-SOD水平。结果 miR-30a-3p表达水平随缺氧复氧处理时间增长而下降,NOD1基因表达水平随缺氧复氧处理时间增长而升高。在荧光素酶报告实验中,NOD1 WT+miR-30a-3p mimic荧光素酶活性显著低于NOD1 WT+NC组。与Ctrl组比较,H/R组miR-30a-3p基因表达水平、细胞活性、T-SOD水平降低,NOD1、p-RPI2、p38MAPK、NF-κB(p65)、cl-caspase-3蛋白表达水平、LDH、CK、MDA水平、细胞凋亡率升高;与H/R组比较,miR-30a-3p mimic组miR-30a-3p基因表达水平、细胞活性、T-SOD水平升高,NOD1、p-RPI2、p38 MAPK、NF-κB(p65)、cl-caspase-3蛋白表达水平、LDH、CK、MDA水平、细胞凋亡率降低,miR-30a-3p inhibitor组miR-30a-3p基因表达水平、细胞活性、T-SOD水平降低,NOD1、p-RPI2、p38 MAPK、NF-κB(p65)、clcaspase-3蛋白表达水平、LDH、CK、MDA水平、细胞凋亡率升高。结论 miR-30a-3p可靶向作用于NOD1,缓解心肌细胞缺氧复氧造成的损伤,其作用机制可能与调控NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 缺氧损伤 心肌缺血再灌注 NOD1 miR-30a-3p
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预处理对乳兔心肌细胞缺氧复氧损伤的影响 被引量:2
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作者 刘秀华 武旭东 +3 位作者 陈魁 庞永政 苏静怡 唐朝枢 《北京医科大学学报》 CSCD 1997年第1期93-94,共2页
关键词 心肌缺血 缺氧损伤 预处理
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缺氧预处理对人心肌细胞缺氧复氧损伤的影响及其机制
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作者 刘秀华 费宇行 +2 位作者 庞永政 苏静怡 唐朝枢 《北京医科大学学报》 CSCD 1997年第6期493-496,共4页
探讨缺氧预处理(PC)对于人类心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤的影响及其机制。方法:在体外分离的人心房和心室肌细胞的H/R模型上观察缺氧PC的作用,及蛋白激酶C(PKC)抑制剂与蛋白磷酸酶激动剂和抑制剂对PC现象的影响。结果:缺氧PC... 探讨缺氧预处理(PC)对于人类心肌细胞缺氧复氧(H/R)损伤的影响及其机制。方法:在体外分离的人心房和心室肌细胞的H/R模型上观察缺氧PC的作用,及蛋白激酶C(PKC)抑制剂与蛋白磷酸酶激动剂和抑制剂对PC现象的影响。结果:缺氧PC明显减轻H/R造成的心肌细胞损伤,PKC抑制剂H_7和蛋白磷酸酶激动剂BDM分别完全消除PC的细胞保护,而蛋白磷酸酶抑制剂OA则能模拟PC的上述保护效应。结论:人类心肌细胞存在缺氧PC现象,其保护机制可能涉及PKC激活和蛋白磷酸化过程。 展开更多
关键词 心肌细胞 缺氧 预处理
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灵芝多糖肽对培养乳大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用 被引量:6
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作者 毛慧慧 游育红 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期398-403,共6页
目的研究灵芝多糖肽(GLPP)对培养乳大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法用出生1~3 d的SD乳大鼠进行心肌细胞原代培养,取培养3~4 d的心肌细胞分为正常对照组、H/R组和GLPP给药组(12.5,25,50和100 mg·L-1)。MTT法... 目的研究灵芝多糖肽(GLPP)对培养乳大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法用出生1~3 d的SD乳大鼠进行心肌细胞原代培养,取培养3~4 d的心肌细胞分为正常对照组、H/R组和GLPP给药组(12.5,25,50和100 mg·L-1)。MTT法检测细胞存活率;电镜检测细胞形态改变和线粒体损伤;用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率;以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,用激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞内钙离子荧光强度变化;以活性氧(ROS)敏感的荧光探针2,7-二氢二氯荧光素(DCFH-DA)标记细胞,激光共聚焦显微镜下观察ROS含量变化。结果与正常对照组比较,H/R组细胞存活率降低(P〈0.05);GLPP 12.5,25,50和100 mg·L-1组细胞存活率与H/R组比较明显增加(P〈0.01)。与正常对照组比较,H/R组可见线粒体损伤,GLPP给药组可以减轻线粒体损伤。流式细胞仪检测结果表明,与正常对照组比较,H/R组细胞凋亡率增加(P〈0.01);GLPP组与H/R组比较细胞凋亡率明显减小(P〈0.01)。与正常对照组比较,H/R组[Ca2+]i增加,细胞内ROS含量增高(P〈0.01);与H/R组比较,GLPP给药组细胞[Ca2+]i减少,细胞内ROS含量降低(P〈0.01)。结论GLPP对H/R损伤的乳大鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与减少细胞内自由基含量和减轻细胞内钙超负荷有关。 展开更多
关键词 灵芝多糖肽 心肌细胞 缺氧 细胞凋亡 细胞内钙离子 活性
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Sestrin2蛋白通过Nrf2/HO-1信号通路保护大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤 被引量:6
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作者 刘英存 李飞 +1 位作者 黄毅 司良毅 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第15期1536-1542,共7页
目的探讨Sestrin2蛋白在大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及其机制。方法体外培养H9C2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧模型。细胞分为对照组、缺氧4 h组、复氧2 h组和复氧4 h组。采用CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术结合Annexin V/7AA... 目的探讨Sestrin2蛋白在大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及其机制。方法体外培养H9C2心肌细胞,构建心肌细胞缺氧复氧模型。细胞分为对照组、缺氧4 h组、复氧2 h组和复氧4 h组。采用CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术结合Annexin V/7AAD荧光染色检测细胞凋亡;微量酶标法检测心肌细胞损伤标记物乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平。构建针对Sestrin2蛋白沉默的siRNA与其阴性对照(si-NC),利用脂质体转染法导入H9C2心肌细胞,后将H9C2心肌细胞分为对照组、缺氧4 h+si-NC组(阴性对照组)、缺氧4 h+siRNA组、复氧4 h+si-NC(阴性对照组)、复氧4 h+siRNA组。Western blot检测Sestrin2蛋白的表达;流式细胞术结合Annexin V/7AAD荧光染色检测细胞凋亡;Western blot检测Sestrin2蛋白、核转录相关因子2(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)及血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达。结果与对照组比较,复氧4 h组细胞存活率降低(P<0.01),细胞凋亡率增加(P<0.05),LDH水平明显升高(P<0.01)。与对照组比较,Sestrin2蛋白表达在缺氧组和缺氧复氧组均显著增高(P<0.01),且缺氧复氧组Sestrin2蛋白表达量显著高于单纯缺氧组(P<0.01)。转染siRNA特异有效地下调了Sestrin2蛋白表达(P<0.05),同时细胞凋亡率显著增加(P<0.05),Nrf2蛋白表达降低(P<0.01),HO-1蛋白表达降低(P<0.05)。结论Sestrin2蛋白对缺氧复氧诱导的H9C2心肌细胞氧化损伤有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/HO-1相关信号通路有关。 展开更多
关键词 Sestrin2蛋白 心肌缺氧损伤 凋亡
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麦冬皂苷D对大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制研究 被引量:32
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作者 赵玲琳 张勇 +1 位作者 薛慧 刘洁 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2022年第2期178-184,共7页
目的:探讨麦冬皂苷D对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制。方法:体外培养心肌细胞H9c2,实验分为心肌细胞未行任何干预的对照组、缺氧复氧组(H/R组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D组(H/R+OpD组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D+磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)... 目的:探讨麦冬皂苷D对心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制。方法:体外培养心肌细胞H9c2,实验分为心肌细胞未行任何干预的对照组、缺氧复氧组(H/R组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D组(H/R+OpD组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D+磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)过表达组(H/R+OpD+PI3K组)、缺氧复氧+麦冬皂苷D+pcDNA空载体对照组(H/R+OpD+pcDNA组)。噻唑蓝法检测心肌细胞存活率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率,试剂盒法检测丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)的活力,酶联免疫吸附试验检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的含量,实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测各组心肌细胞中PI3K的表达量。结果:与对照组相比,H/R组心肌细胞中CK-MB、TNF-α、IL-1β、LDH和MDA含量、凋亡率和PI3K的表达量均明显升高,心肌细胞存活率和SOD活力明显降低(P均<0.05);与H/R组相比,H/R+OpD组上述指标均发生逆转(P均<0.05);与H/R+OpD组比,H/R+OpD+PI3K组心肌细胞中CK-MB、TNF-α、IL-1β、LDH和MDA含量、凋亡率及PI3K的表达量升高,心肌细胞存活率和SOD活力降低(P均<0.05),而H/R+OpD+pcDNA组以上各指标均无明显变化(P均>0.05)。结论:麦冬皂苷D对心肌细胞缺氧复氧损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制PI3K基因的表达有关。 展开更多
关键词 麦冬皂苷D 磷脂酰肌醇-3激酶基因 缺氧 心肌细胞损伤 缺血再灌注损伤
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舒芬太尼通过调节HIF-1α-Kcnq1ot1影响缺氧-复氧导致的心肌细胞损伤 被引量:1
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作者 邓方方 李继勇 +4 位作者 张力 邹高锐 陈治军 辛欢 乐薇 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第3期500-507,共8页
目的探讨舒芬太尼(sufentanil,Suf)能否通过调节缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)-KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1 opposite strand/antisense transcript 1,Kcnq1ot1)改善缺氧-复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)导致的... 目的探讨舒芬太尼(sufentanil,Suf)能否通过调节缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)-KCNQ1重叠转录物1(KCNQ1 opposite strand/antisense transcript 1,Kcnq1ot1)改善缺氧-复氧(hypoxia-reoxygenation,H/R)导致的心肌细胞损伤。方法生物信息学分析预测HIF-1α与Kcnq1ot1的相互作用。将H9c2细胞分为Ctrl组、H/R组、Suf组;oe-HIF-1α组、oe-HIF-1α+Suf组、sh-HIF-1α组、sh-HIF-1α+Kcnq1ot1组。MTT法检测细胞活性,TUNEL法检测细胞凋亡,ELISA法检测细胞上清液中的CK-MB与HBDH浓度,Western blot分析细胞中HIF-1α蛋白表达,逆转录定量PCR(RT-qPCR)测定Kcnq1ot1的mRNA表达水平。构建心肌缺血/再灌注大鼠模型,评估Suf对体内心肌缺血/再灌注的治疗潜力。结果生物信息学分析发现,HIF-1α与Kcnq1ot1之间存在直接的相互作用。与Ctrl组相比,H/R组的H9c2细胞活性降低,细胞凋亡增加,CK-MB与HBDH浓度上调,HIF-1α与Kcnq1ot1的表达增强(均P<0.05)。转染oe-HIF-1α后,进一步加剧了上述结果(均P<0.05);而Suf干预抑制了以上结果(均P<0.05)。与H/R组相比,sh-HIF-1α组的细胞活性明显改善,凋亡减少,CK-MB与HBDH浓度降低(均P<0.05);转染Kcnq1ot1则部分逆转了这些结果(均P<0.05)。动物实验发现,Suf能够改善大鼠心肌缺血/再灌注损伤。结论Suf通过抑制HIF-1α-Kcnq1ot1改善心肌H/R损伤。 展开更多
关键词 舒芬太尼 缺氧诱导因子-Α KCNQ1重叠转录物1 心肌缺氧-损伤 缺血/再灌注损伤 心肌损伤
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司美格鲁肽通过调控AMPK/mTOR/ULK1通路介导的自噬减轻缺氧/复氧AC16人心肌细胞炎症损伤
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作者 靳丽丽 郄涛 李立琴 《中国临床药理学与治疗学》 北大核心 2025年第8期1058-1066,共9页
目的:观察司美格鲁肽对缺氧/复氧条件下人AC16心肌细胞炎症和自噬的影响。方法:取对数生长期的AC16细胞,随机分为4组:对照组(CON)、缺氧/复氧组(H/R)、缺氧/复氧+司美格鲁肽组(H/R+SEM)、缺氧/复氧+司美格鲁肽+3-MA组(H/R+SEM+3-MA)。... 目的:观察司美格鲁肽对缺氧/复氧条件下人AC16心肌细胞炎症和自噬的影响。方法:取对数生长期的AC16细胞,随机分为4组:对照组(CON)、缺氧/复氧组(H/R)、缺氧/复氧+司美格鲁肽组(H/R+SEM)、缺氧/复氧+司美格鲁肽+3-MA组(H/R+SEM+3-MA)。除对照组外,其余3组细胞均进行缺氧8 h、复氧12 h处理。CCK-8法检测细胞活性。ELISA试剂盒检测IL-1β及TNF-α。Western blot检测各组通路相关蛋白AMPK、p-AMPK、mTOR、p-mTOR、ULK1、p-ULK1及各组细胞自噬相关蛋白Beclin-1和LC3的表达。激光共聚焦显微镜观察各组mRFP-GFP-LC3腺病毒感染AC16细胞荧光图,并对细胞内的自噬体定量分析。透射电子显微镜观察各组AC16细胞自噬体及自噬溶酶体结构。结果:与CON组比较,H/R组IL-1β与TNF-α的表达显著增加(P<0.01);与H/R组比较,H/R+SEM组IL-1β与TNF-α的表达量明显降低(P<0.01);与H/R+SEM组比较,H/R+SEM+3-MA组炎症因子的表达量显著增加(P<0.05)。Western blot结果显示:与CON组比较,H/R组心肌细胞p-AMPK/AMPK表达明显升高(P<0.05),p-mTOR/mTOR表达明显降低(P<0.05),pULK1/UKL1表达明显升高(P<0.01);与H/R组比较,H/R+SEM组心肌细胞p-AMPK/AMPK表达明显升高(P<0.05),p-mTOR/mTOR表达明显降低(P<0.01),pULK1/UKL1表达明显升高(P<0.01);与H/R+SEM组比较,H/R+SEM+3-MA组心肌细胞p-AMPK/AMPK表达明显降低(P<0.01),p-mTOR/mTOR表达明显升高(P<0.05),pULK1/UKL1表达明显降低(P<0.05)。与CON组比较,H/R组心肌细胞Beclin1和LC3表达明显升高(P<0.05);与H/R组比较,H/R+SEM组心肌细胞Beclin1和LC3表达明显升高(P<0.01);与H/R+SEM组比较,H/R+SEM+3-MA组心肌细胞Beclin1和LC3表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。激光共聚焦显微镜观察各组mRFP-GFP-LC3腺病毒转染人AC16细胞荧光图,并对细胞内的自噬体定量分析:与CON组比较,H/R组心肌细胞自噬体显著增多(3.67±2.31 vs.9.67±1.53,P<0.05)。与H/R组比较,H/R+SEM组心肌细胞自噬体明显增多(9.67±1.53 vs.18.67±3.21,P<0.01)。与H/R+SEM组比较,H/R+SEM+3-MA组心肌细胞自噬体数量明显减少(18.67±3.21 vs.12.33±1.53,P<0.05)。结论:司美格鲁肽可能通过AMPK/mTOR/ULK1通路适度调节自噬,减少炎症因子释放,减轻缺氧/复氧导致的心肌炎症损伤。 展开更多
关键词 司美格鲁肽 缺氧/ 心肌细胞 炎症 自噬
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N-乙酰神经氨酸中通过抑制Nrf2轴促进缺氧/复氧损伤的H9C2心肌细胞发生铁死亡
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作者 季春斐 左宗超 +1 位作者 王钧 李妙男 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第1期72-79,共8页
目的基于铁死亡探讨N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)加剧H9C2大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤(H/RI)的影响及作用机制。方法以大鼠心肌细胞株H9C2细胞作为研究对象,将细胞分为Control组、H/R 0 h组、H/R 3 h组、H/R 6 h组、H/R 9 h组、H/R 12 h组和H/... 目的基于铁死亡探讨N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac)加剧H9C2大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤(H/RI)的影响及作用机制。方法以大鼠心肌细胞株H9C2细胞作为研究对象,将细胞分为Control组、H/R 0 h组、H/R 3 h组、H/R 6 h组、H/R 9 h组、H/R 12 h组和H/R 15 h组,在缺氧缺糖8 h,分别复氧复糖0、3、6、9、12、15 h建立细胞缺氧/复氧损伤模型模拟心肌缺血再灌注损伤,通过实验选择最佳复氧时间进行后续实验。根据最佳复氧时间,复氧时给予不同Neu5Ac浓度的完全培养基作为复氧液,将细胞分为Control、0、5、10、20、30、40、50、60 mmol/L组,通过实验选择最佳药物浓度进行后续实验。根据前述最佳复氧时间和最佳给药浓度探讨Neu5Ac对H9C2心肌细胞加剧损伤的机制,将H9C2心肌细胞分为5组:Control组、H/R组、H/R+Neu5Ac组、H/R+Fer-1(铁死亡抑制剂)组、H/R+Neu5Ac+Fer-1组。通过检测5组细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性,判断各组细胞氧化应激水平;使用FerroOrange荧光探针和C11 BODIPY 581/591荧光探针分别检测细胞内Fe^(2+)和脂质过氧化物(Lipid ROS)水平;此外,通过Western blotting检测Neu5Ac在H9C2心肌细胞H/RI中对核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、血红素加氧酶-1(HO-1)、铁死亡抑制蛋白1(FSP1)、胱氨酸/谷氨酸反向转运体(xCT)蛋白表达的影响。结果H9C2心肌细胞缺氧缺糖8 h后,H/R 6 h组和除H/R 9 h组之外的其他组相比,Nrf2、GPX4、HO-1、FSP1蛋白表达最少,且差异有统计学意义(P<0.001)。与Control组相比,不同浓度药物的实验组细胞活力均明显降低(P<0.0001),且随药物浓度逐渐增大,细胞活力逐渐减小,并测得该药物的半抑制浓度IC_(50)=30.07 mmol/L。选择心肌细胞未发生明显铁死亡的时间,即缺氧缺糖8 h合并复氧复糖3 h,且复氧复糖时Neu5Ac浓度为30 mmol/L进行后续实验。结果显示,Neu5Ac可以提高SOD活性,增加Fe^(2+)和Lipid ROS水平,降低Nrf2、GPX4、xCT、HO-1、FSP1等5种蛋白的表达(P<0.05)。在Neu5Ac的基础上使用Fer-1后,与H/R+Neu5Ac组相比,SOD活性下降,Fe^(2+)和Lipid ROS水平减少,Nrf2、GPX4、xCT、HO-1、FSP1等5种蛋白的表达升高(P<0.0001)。结论Neu5Ac在H/RI中加剧心肌细胞发生铁死亡可能是通过抑制Nrf2轴进而产生过多的活性氧和脂质活性氧而导致。 展开更多
关键词 N-乙酰神经氨酸 心肌细胞 缺氧/损伤 铁死亡
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白藜芦醇通过激活JAK2/STAT3信号通路抑制缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡
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作者 李金玉 黄丹梅 +2 位作者 张艳美 高分飞 汪彬 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第3期451-456,共6页
目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RSV)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法以H9c2心肌细胞为研究对象,建立H9c2心肌细胞H/R损伤模型,流式细胞术测定细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋... 目的探讨白藜芦醇(resveratrol,RSV)对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导的H9c2心肌细胞凋亡的保护作用及机制。方法以H9c2心肌细胞为研究对象,建立H9c2心肌细胞H/R损伤模型,流式细胞术测定细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3及JAK2/STAT3信号通路蛋白的表达水平;采用JAK2抑制剂AG490研究抑制JAK2/STAT3信号通路对RSV减轻H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响。结果RSV可有效抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡,并促进p-JAK2和p-STAT3蛋白表达,而AG490干预后明显拮抗RSV抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡作用。结论RSV通过激活JAK2/STAT3信号通路,抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 白藜芦醇 缺氧/ H9C2心肌细胞 JAK2/STAT3信号通路 细胞凋亡 AG490
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丹参提取物联合瑞芬太尼通过调控Nrf2信号通路减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤 被引量:1
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作者 刘海平 王岩英 +6 位作者 申娜 张路笛 孙贝贝 刘晶 张静 张光信 赵成秀 《特产研究》 2024年第4期98-103,109,共7页
为探讨丹参提取物联合瑞芬太尼在减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤中的作用及其机制。本研究将H9c2心肌细胞分为对照组、模型组、丹参提取物组(Tan I组)、瑞芬太尼组(RPC)组和联合组。对照组细胞不做处理,模型组缺氧/复氧(HR)诱导的心... 为探讨丹参提取物联合瑞芬太尼在减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤中的作用及其机制。本研究将H9c2心肌细胞分为对照组、模型组、丹参提取物组(Tan I组)、瑞芬太尼组(RPC)组和联合组。对照组细胞不做处理,模型组缺氧/复氧(HR)诱导的心肌细胞损伤模型,Tan I组在模型组的基础上给与1μmol/LTan I孵育24h,RPC组在模型组的基础上给与1μmol/LRPC孵育24h联合组在模型组的基础上同时给与1μmol/L Tan I和1μmol/L RPC孵育24 h。采用CCK-8测定各组细胞活力流式细胞术测定各组细胞凋亡率,采用Western blot测定各组细胞Nrf2和HO-1表达水平进一步转染Nrf2-siRNA分析Nrf2信号通路对Tan I联合RPC保护HR诱导H9c2心肌细胞损伤的影响。结果表明,HR诱导后H9c2心肌细胞的活力显著下降,药物处理后,Tan I组、RPC组和联合组H9c2细胞的细胞活力显著增加,且联合组的细胞活力改善与Tan I组和RPC组相比更显著;HR诱导后H9c2心肌细胞的凋亡率显著升高,药物处理后,Tan I组、RPC组和联合组H9c2细胞的细胞凋亡率显著下降,且联合组的细胞凋亡率下降水平与Tan I组和RPC组相比更显著;HR引起H9c2细胞Nrf2总蛋白表达和核Nrf2蛋白表达水平显著降低,各组给药后增加了总Nrf2蛋白和核Nrf2蛋白的表达,降低了细胞质中的Nrf2蛋白,且与Tan I组和RPC组相比联合组总Nrf2蛋白和核Nrf2蛋白的表达水平显著增高,细胞质中的Nrf2蛋白表达水平显著降低;转染Nrf2-siRNA后,Tan I联合RPC处理的H9c2心肌细胞中Nrf2和HO-1的表达均下降。丹参提取物联合瑞芬太尼可通过调控Nrf2信号通路减轻HR诱导的心肌细胞损伤。 展开更多
关键词 丹参提取物 瑞芬太尼 Nrf2信号通路 心肌细胞损伤 缺氧/
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交趾黄檀新黄酮类成分及其抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤活性研究
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作者 任佳慧 郑启万 +3 位作者 孟晓伟 庞妍 陈兰英 刘荣华 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期126-132,共7页
目的研究交趾黄檀Dalbergia cochinchinensis Pierre ex Laness的新黄酮类成分及其抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤活性。方法交趾黄檀70%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、反相制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得... 目的研究交趾黄檀Dalbergia cochinchinensis Pierre ex Laness的新黄酮类成分及其抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤活性。方法交趾黄檀70%乙醇提取物采用硅胶、Sephadex LH-20、反相制备HPLC进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构。采用CCK-8法检测其对H9c2心肌细胞的活性及对H9c2细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,并分析其构效关系。结果从中分离得到12个化合物,分别鉴定为阔叶黄檀酚(1)、5-O-methyllatifolin(2)、mimosifoliol(3)、5-O-methydalbergiphenol(4)、dalbergiphenol(5)、cearoin(6)、2,4-dihydroxy-5-methoxy-benzophenone(7)、2-hydroxy-4,5-dimethoxybenzophenone(8)、melannoin(9)、2,2′,5-trihydroxy-4-methoxybenzophenone(10)、黄檀素(11)、4-甲氧基黄檀醌(12)。黄檀酚及黄檀内酯类化合物对H9c2细胞毒性较小,黄檀酚类化合物抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤活性较强。结论化合物8为新天然产物,化合物4、9为首次从该植物中分离得到。黄檀酚类化合物可能是抗H9c2细胞缺氧/复氧损伤的主要新黄酮类成分。 展开更多
关键词 交趾黄檀 新黄酮 分离鉴定 H9C2心肌细胞 缺氧/损伤 构效关系
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南瓜多糖调控Nrf2/γ-GCS通路对缺氧/复氧心肌细胞损伤的影响 被引量:3
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作者 郑婉 杨珊珊 +2 位作者 林云 魏俊萍 颜亚妮 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1871-1875,共5页
目的:探讨南瓜多糖(PP)调控Nrf2/γ-GCS通路对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞(H9C2)损伤的影响。方法:建立HR细胞模型,确定PP给药浓度,将H9C2细胞分为Control组、H/R组、南瓜多糖组(PP组,2 mg/L PP)、Nrf2抑制剂组(ML385组,2.0μmol/L ML... 目的:探讨南瓜多糖(PP)调控Nrf2/γ-GCS通路对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞(H9C2)损伤的影响。方法:建立HR细胞模型,确定PP给药浓度,将H9C2细胞分为Control组、H/R组、南瓜多糖组(PP组,2 mg/L PP)、Nrf2抑制剂组(ML385组,2.0μmol/L ML385)、PP+ML385组(2.0 mg/L PP+2.0μmol/L ML385),分别检测H9C2细胞凋亡、线粒体膜电位变化、氧化应激(LDH、MDA、SOD、ROS)、炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)水平及Nrf2、γ-GCS蛋白表达。结果:与Control组比较,H/R组细胞形态发生变化,细胞损伤及线粒体膜电位下降,H9C2细胞活力、SOD及Nrf2、γ-GCS蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率、LDH、MDA、ROS及TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著升高(P<0.05);与H/R组比较,PP组细胞损伤减轻,线粒体膜电位恢复,H9C2细胞活力、SOD及Nrf2、γ-GCS蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、LDH、MDA、ROS及TNF-α、IL-6、IL-1β水平显著降低(P<0.05),而ML385与PP作用效果相反,ML385可逆转PP的抗氧化、抗炎作用。结论:PP上调Nrf2/γ-GCS通路发挥抗氧化、抗炎作用,减轻H/R诱导的H9C2细胞损伤。 展开更多
关键词 南瓜多糖 缺氧/ 心肌细胞损伤 Nrf2/γ-GCS通路
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小檗碱与5'-N-乙基甲酰胺基腺苷单独及联合给药对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响
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作者 贡美娜 高亚云 +3 位作者 张束滢 逄晓倩 田炜 徐菁蔓 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2311-2318,共8页
目的 探讨小檗碱(berberine,BBR)与5'-N-乙基甲酰胺基腺苷(5'-n-ethylformamidoadenosine,NECA)单独及联合给药对缺氧/复氧(H/R)诱发的心肌H9c2和HL-1细胞损伤的影响。方法 心肌H9c2和HL-1细胞分为Control组、BBR组、NECA组、... 目的 探讨小檗碱(berberine,BBR)与5'-N-乙基甲酰胺基腺苷(5'-n-ethylformamidoadenosine,NECA)单独及联合给药对缺氧/复氧(H/R)诱发的心肌H9c2和HL-1细胞损伤的影响。方法 心肌H9c2和HL-1细胞分为Control组、BBR组、NECA组、联合给药组、H/R组、BBR+H/R组、NECA+H/R组、联合给药+H/R组,CCK-8检测细胞活力;TMRE检测MMP;DCFH-DA检测ROS的含量;Mito SOX Red探针检测线粒体超氧化物;Western blot检测COXⅣ、Tom20、Tim23蛋白表达;qRT-PCR检测COXⅣ、Tom20基因表达。结果 在H9c2细胞中,与Control组相比,H/R组细胞活力、TMRE荧光强度明显降低,COXⅣ、Tom20和Tim23蛋白表达、COXⅣ和Tom20基因表达、ROS和线粒体超氧化物的含量均明显升高。与H/R组相比,BBR和NECA单独给药后细胞活力均增强;单独给药及联合给药后,ROS和线粒体超氧化物的含量明显降低。在HL-1细胞中,与Control组相比,H/R组细胞活力明显降低;ROS和线粒体超氧化物的含量均明显升高。与H/R组相比,BBR和NECA单独给药及联合给药后,细胞活力均增强;ROS和线粒体超氧化物的含量均明显降低。结论 BBR和NECA单独给药及联合给药是通过减少线粒体超氧化物和细胞ROS的生成,进而缓解线粒体损伤,减轻氧化应激损伤,最终降低H/R诱发的心肌细胞损伤。 展开更多
关键词 心肌缺氧/损伤 小檗碱 NECA 线粒体超化物 ROS 化应激
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棕榈油酸在缺氧/复氧心肌细胞焦亡中的作用及机制研究 被引量:1
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作者 李云权 段宗刚 +8 位作者 鲍海龙 王清腾 安洪鑫 夏侯鸾达 王旭 蒋孟庭 周海燕 罗振华 李伟 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第6期1006-1012,共7页
目的探讨棕榈油酸(POA)对心肌缺氧/复氧损伤后心肌细胞焦亡的影响。方法实验设置对照组(Control)、缺氧/复氧组(HR)、棕榈油酸处理组(HR+POA)、溶剂无水乙醇(ET)对照组(HR+ET);采用CCK-8法检测心肌细胞活力,Hoechst33342/PI双染和乳酸... 目的探讨棕榈油酸(POA)对心肌缺氧/复氧损伤后心肌细胞焦亡的影响。方法实验设置对照组(Control)、缺氧/复氧组(HR)、棕榈油酸处理组(HR+POA)、溶剂无水乙醇(ET)对照组(HR+ET);采用CCK-8法检测心肌细胞活力,Hoechst33342/PI双染和乳酸脱氢酶(LDH)试验检测心肌细胞焦亡水平。ELISA法检测细胞培养上清液中炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-18释放量,qRT-PCR法和Western blot分别检测细胞焦亡相关分子NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD、IL-1β及IL-18的mRNA和蛋白相对表达水平。结果CCK-8结果显示,与HR组相比,加入不同浓度POA干预,POA浓度在25~100μmol/L时能增加缺氧/复氧心肌细胞活力;构建心肌细胞缺氧/复氧模型,与对照组相比,HR组中NLRP3、ASC、Cleaved-caspase 1、GSDMD-N、IL-Iβ及IL-18基因的蛋白和mRNA表达增加(P<0.05),Hoechst33342/PI心肌细胞染色阳性百分比增加(P<0.05),且LDH、IL-Iβ及IL-18释放增加(P<0.05);100μmol/L POA干预后,与HR+ET组相比,HR+POA组中NLRP3、ASC、Cleaved-caspase 1、GSDMD-N、IL-Iβ及IL-18的蛋白和mRNA表达降低(P<0.05),Hoechst33342/PI心肌细胞染色阳性百分比降低,且LDH、IL-Iβ及IL-18水平降低(P<0.05)。结论棕榈油酸可能通过抑制缺氧/复氧后心肌细胞焦亡和炎症反应,改善心肌细胞缺氧/复氧损伤。 展开更多
关键词 棕榈油酸 心肌细胞 缺氧/损伤 细胞焦亡 炎症
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