微孔板法测定乳粉中叶酸含量的不确定度分析 被引量：1

1

作者 刘子音 卓一鸣 +2 位作者 刘腊兰 彭纳 吴后吕 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2024年第3期95-99,119,共6页

目的:对微孔板法测定乳粉中叶酸含量的不确定度进行分析评估。方法:按GB 5009.211—2022中微孔板法测定婴儿配方乳粉中叶酸含量,依据JJF 1059.1—2012、CNAS-CL01-G003:2021和CNAS-GL05:2011等不确定度评定方法和指南对影响检测结果的... 目的:对微孔板法测定乳粉中叶酸含量的不确定度进行分析评估。方法:按GB 5009.211—2022中微孔板法测定婴儿配方乳粉中叶酸含量,依据JJF 1059.1—2012、CNAS-CL01-G003:2021和CNAS-GL05:2011等不确定度评定方法和指南对影响检测结果的各种试验因素进行分析、计算,得到合成标准不确定度及扩展不确定度。结果:扩展不确定度U 95=22.08μg/100 g(k=2),样品中叶酸含量为(282.33±22.08)μg/100 g。不确定度主要来源于接种微孔板过程、标准曲线拟合和测量重复性。结论:移液器的准确度和微生物因素对试验结果影响较大,需保证仪器质量并严格按照标准化流程操作以降低不确定度。 展开更多

关键词 叶酸 乳粉 微孔板法 不确定度

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激光共聚焦显微镜和改良微孔板法观察细菌生物膜形成 被引量：17

2

作者 宋菲 向军 陆树良 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2010年第5期368-372,共5页

目的利用激光共聚焦显微镜(CLSM)和改良微孔板法观察细菌生物膜形成,探索细菌生物膜检测的有效手段。方法烧伤患者植入性导管分离的金葡菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌,经体外分别培育24、48、72h和5d后,先后用CLSM和改良微孔板法,观... 目的利用激光共聚焦显微镜(CLSM)和改良微孔板法观察细菌生物膜形成,探索细菌生物膜检测的有效手段。方法烧伤患者植入性导管分离的金葡菌、鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌,经体外分别培育24、48、72h和5d后,先后用CLSM和改良微孔板法,观察细菌生物膜形成和黏附的过程与特点。结果鲍曼不动杆菌、金葡菌、铜绿假单胞菌形成生物膜的时间、生物膜的形态与特点都有显著的差异。结论 CLSM和改良微孔板法是观察和检测细菌生物膜形成过程的有效手段。 展开更多

关键词 细菌生物膜 激光共聚焦显微镜 改良微孔板法

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刃天青微孔板法在本科实验教学中的应用

3

作者 肖琳 于晓凤 +5 位作者 赵晨 王进田 刘汉琳 曲田丽 张保华 杜丰玉 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2022年第8期185-188,共4页

刃天青微孔板法是一种新近开发的快速测定抑菌活性的方法,已广泛应用于杀菌剂的高通量筛选及活性评价。文章以代表性病原真菌灰霉病菌为供试菌,应用刃天青微孔板法,设计了嘧菌酯杀菌剂对灰霉病菌的抑菌活性测定实验。与传统菌丝生长速... 刃天青微孔板法是一种新近开发的快速测定抑菌活性的方法,已广泛应用于杀菌剂的高通量筛选及活性评价。文章以代表性病原真菌灰霉病菌为供试菌,应用刃天青微孔板法,设计了嘧菌酯杀菌剂对灰霉病菌的抑菌活性测定实验。与传统菌丝生长速率法相比,该方法具有样品消耗少、观察便捷、反应灵敏等优点,可用于杀菌剂活性定量测定实验,也可与农药化学、天然产物化学的杀菌剂合成或提取分离相关实验相结合,设计探究式实验,更好地培养学生的科研创新思维和综合实践能力,提高教学质量。 展开更多

关键词 刃天青 微孔板法 杀菌剂 抑菌活性 实验教学

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微孔板法筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂的条件优化 被引量：2

4

作者 王红月 陈中 简旭凤 《食品与机械》 CSCD 北大核心 2016年第11期13-16,共4页

研究以微孔板检测法为基础,对α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制能力进行检测,以达到有效筛选适宜浓度的α-葡萄糖苷酶抑制剂用于制备降血糖类功能性食品的目的。试验针对酶浓度、检测波长、蔗糖底物浓度及酶反应时间进行反应条件优化。结果表... 研究以微孔板检测法为基础,对α-葡萄糖苷酶抑制剂的抑制能力进行检测,以达到有效筛选适宜浓度的α-葡萄糖苷酶抑制剂用于制备降血糖类功能性食品的目的。试验针对酶浓度、检测波长、蔗糖底物浓度及酶反应时间进行反应条件优化。结果表明：试验中所用批次酶的最适浓度范围为2.0-3.0 mg/mL;在405,450,492,520,630nm 5种波长条件下,520nm和492nm波长检测信号最强;蔗糖底物浓度的合适范围应为20-40mmol/L;适宜的酶反应时间范围为20-30min。 展开更多

关键词 Α-葡萄糖苷酶抑制剂 血糖 微孔板法

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饮用水中亚硝酸盐高通量检测微孔板法的研究 被引量：4

5

作者 刘凤银 张媚健 +5 位作者 李轩 谢丽君 袁学文 黄燕璇 梁岳 穆洪涛 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期232-235,240,共5页

亚硝酸盐与间苯二胺在强酸性条件下发生重氮化偶联反应,生成橙红色偶联产物环偶氮亚氨基苯。本研究基于该原理,以微孔板为载体,确定最佳测定波长,通过单因素实验、正交实验优化工作条件,建立一种高通量检测饮用水中亚硝酸盐含量的方法... 亚硝酸盐与间苯二胺在强酸性条件下发生重氮化偶联反应,生成橙红色偶联产物环偶氮亚氨基苯。本研究基于该原理,以微孔板为载体,确定最佳测定波长,通过单因素实验、正交实验优化工作条件,建立一种高通量检测饮用水中亚硝酸盐含量的方法。结果表明,最佳测定波长为451 nm,最佳工作条件:盐酸浓度为0.4 mol/L、间苯二胺浓度为30 g/L、反应时间为10 min。该方法的检出限为0.017 mg/L,线性范围为0~5 mg/L,线性相关系数r为0.9997,空白加标回收率在95.24%~103.98%之间,变异系数小于5%。该方法快速、灵敏,抗干扰能力强,操作简便,可进行高通量筛选,用于饮用水等食品样品中亚硝酸盐残留量的定量测定。 展开更多

关键词 亚硝酸盐 间苯二胺 微孔板法 高通量 饮用水

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微孔板法测定功能性饮料中的维生素B_(12)

6

作者 张艳 王骏 +2 位作者 舒艳丽 郑世超 胡梅 《山东农业科学》 2014年第4期110-113,共4页

通过样品处理比较试验、色素影响评价、回收率试验和重复性试验，得到了微孔板法测定功能性饮料中维生素B12的有效方法。经测定，该方法测定限可达到0．005μg/L，1．0、2．0、20．0μg/L三个梯度水平的加标回收率为94．4％～101．8％... 通过样品处理比较试验、色素影响评价、回收率试验和重复性试验，得到了微孔板法测定功能性饮料中维生素B12的有效方法。经测定，该方法测定限可达到0．005μg/L，1．0、2．0、20．0μg/L三个梯度水平的加标回收率为94．4％～101．8％，实际样品测定中相对标准偏差为0．35％～4．34％（n＝6），灵敏度和重复性很高，可用于测定功能性饮料中微量的维生素B12。 展开更多

关键词 微孔板法 测定 功能性饮料 维生素B12 VITAMIN B12

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无需离心微孔板凝聚胺法应用于输血前检查效果评价

7

作者 刘景春 车嘉琳 +1 位作者 陆小梅 刘赴平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第17期1707-1709,共3页

目的评价无需离心的微孔板凝聚胺法在输血前检查中的应用效果。方法采用无需离心的微孔板凝聚胺法、传统的凝聚胺试管法和微柱凝胶卡技术3种方法同步对输血前检测标本按照规定进行相关检测,比较3种方法输血前检测时间的差异;对临床常见... 目的评价无需离心的微孔板凝聚胺法在输血前检查中的应用效果。方法采用无需离心的微孔板凝聚胺法、传统的凝聚胺试管法和微柱凝胶卡技术3种方法同步对输血前检测标本按照规定进行相关检测,比较3种方法输血前检测时间的差异;对临床常见的9种抗体血清进行滴度分析,以及对已经鉴定的21例不规则抗体标本和40例红细胞亚型标本进行检测,比较对已知抗体的检出能力。结果3种方法中,检测时间总体上都是微柱凝胶卡技术最长;进行单个交叉配血标本检测时,无需离心的微孔板凝聚胺法长于凝聚胺试管法(F=148.672,P<0.01),随着标本的增加,微孔板法明显短于其他2种方法(5个标本:F=310.661,P<0.01;9个标本:F=140.779,P<0.01);对抗体检出能力上,检测抗体滴度方面,3种方法两两比较均没有统计学差异(P>0.05);对以前鉴定的抗体,微孔板凝聚胺法具有很好的检出能力。结论无需离心的微孔板凝聚胺法无需试管及离心设备简便快速、经济有效,是一种可行的输血前检测方法。 展开更多

关键词 输血前检查 凝聚胺法 微孔板法 离心 检查效果 检测标本 输血前检测 抗体血清

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微孔板试剂盒法测定婴幼儿配方奶粉中的生物素含量 被引量：5

8

作者 周敏 许再元 +1 位作者 苏水娇 彭密军 《浙江农业科学》 2017年第12期2246-2248,共3页

基于植物乳杆菌(ATCC 8014)生长时的新陈代谢强度与生物素浓度的关系,定量测定婴幼儿配方奶粉中的生物素含量。将稀释了的提取物和生物素检测培养基加至包被有植物乳杆菌的微孔中,植物乳杆菌生长量与生物素浓度形成关系并可以绘制成多... 基于植物乳杆菌(ATCC 8014)生长时的新陈代谢强度与生物素浓度的关系,定量测定婴幼儿配方奶粉中的生物素含量。将稀释了的提取物和生物素检测培养基加至包被有植物乳杆菌的微孔中,植物乳杆菌生长量与生物素浓度形成关系并可以绘制成多项式拟合曲线,根据培养后菌悬液的吸光度值与生物素标准工作曲线进行比较,计算出婴幼儿配方奶粉中的生物素含量。微孔板试剂盒法测定生物素的线性范围为0.080~0.720μg·100 g-1,其标准曲线相关系数为0.998 9,测定婴幼儿配方奶粉中的生物素含量的相对标准偏差为2.5%,加标实验回收率为91.2%~99.3%。结果表明,微孔板试剂盒法具有快速、简便、准确度和重现性良好等优点,是测定婴幼儿配方奶粉中生物素的有效方法。 展开更多

关键词 微孔板试剂盒法 生物素 婴幼儿配方奶粉 植物乳杆菌

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疏水性农药对费氏弧菌毒性的微板发光测定法研究

9

作者 阳辛凤 葛会林 +2 位作者 李萍萍 张群 刘春华 《江苏农业科学》 2018年第23期203-207,共5页

以费氏弧菌(Vibrio fisheri) 1H00021为毒性作用生物,以微孔板检测仪为发光强度检测设备,初步建立疏水性农药对费氏弧菌1H00021短期微板发光毒性测定方法。以甲醇为疏水性农药溶剂,每个微孔的毒性测定体系为200μL,包括30μL农药溶液、... 以费氏弧菌(Vibrio fisheri) 1H00021为毒性作用生物,以微孔板检测仪为发光强度检测设备,初步建立疏水性农药对费氏弧菌1H00021短期微板发光毒性测定方法。以甲醇为疏水性农药溶剂,每个微孔的毒性测定体系为200μL,包括30μL农药溶液、170μL费氏弧菌菌悬液,最佳检测时间为20 min。应用该方法成功地测定多菌灵、毒死蜱和溴氰菊酯等3种疏水性农药对1H00021的发光抑制毒性效应,拟合得到疏水性农药对1H00021毒性的剂量-效应曲线(dose-response curve,简称DRC),相关系数均大于0. 97。通过拟合的DRC参数,获得疏水性农药的半数效应浓度EC50。3种疏水性农药对费氏弧菌1H00021的发光毒性存在良好的剂量-效应关系,可以利用费氏弧菌微板发光法快速评价疏水性农药的生物毒性。 展开更多

关键词 发光菌 费氏弧菌 疏水性农药 微孔板发光法 毒性 剂量-效应关系

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基于新国标的两种微生物法测定乳粉中叶酸的比对研究

10

作者 严家俊 姚丽锋 +3 位作者 綦艳 张娟 黄翠莉 吴思敏 《中国乳业》 2022年第11期76-80,共5页

[目的]对即将实施的《GB5009.211—2022食品安全国家标准食品中叶酸的测定》中两种微生物法测定乳粉中叶酸进行比对研究。[方法]验证试管法和微孔板法测定叶酸的准确度和重复性,根据数据的差异与试验操作过程对两种方法进行比较分析。[... [目的]对即将实施的《GB5009.211—2022食品安全国家标准食品中叶酸的测定》中两种微生物法测定乳粉中叶酸进行比对研究。[方法]验证试管法和微孔板法测定叶酸的准确度和重复性,根据数据的差异与试验操作过程对两种方法进行比较分析。[结果]由准确性试验可知,两种方法所测结果均与标准物质真值相符,相对标准偏差(RSD)分别为2.7%和2.9%,无明显差异。由重复性试验结果可知试管法RSD值为1.3%~3.1%,微孔板RSD值为1.6%~2.9%。[结论]新国标的两种微生物法的准确性和重复性都较好,均能对乳粉中叶酸进行有效测定;微孔板法效率更高,成本更低,适用于大批量样品的检测需求。 展开更多

关键词 叶酸 乳粉 试管法 微孔板法 新国标

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β-葡聚糖酶活力测定方法的研究进展 被引量：9

11

作者 张永勤 曾凡伟 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第19期316-320,共5页

本文综述了β-葡聚糖酶活力的测定方法,如黏度法、生色底物法、琼脂糖扩散法、酶联免疫吸附分析法(ELISA)和目前使用较多的还原端基法,如3,5-二硝基水杨酸(DNS)法、Somogyi-Nelson法、二金鸡纳酸(BCA)法和最新涌现的用于微量测定的3-甲... 本文综述了β-葡聚糖酶活力的测定方法,如黏度法、生色底物法、琼脂糖扩散法、酶联免疫吸附分析法(ELISA)和目前使用较多的还原端基法,如3,5-二硝基水杨酸(DNS)法、Somogyi-Nelson法、二金鸡纳酸(BCA)法和最新涌现的用于微量测定的3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)法,并就还原端基法介绍了其具体实验手段,如试管法、罐法、微孔板法、流动注射法(FIA)。分析了方法中存在的问题并展望了β-葡聚糖酶活力测定方法研究的发展趋势,如安培法和等温滴定量热法等。 展开更多

关键词 Β-葡聚糖酶 测定 DNS法 MBTH法 微孔板法 流动注射法 试管法 罐法

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荧光假单胞菌与红绒盖牛肝菌共接种对杨树根际土壤酶活性及微生物多样性的影响 被引量：16

12

作者 刘辉 吴小芹 +1 位作者 任嘉红 陈丹 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第1期22-30,共9页

【目的】探究荧光假单胞菌与红绒盖牛肝菌共接种条件下NL-895杨根际土壤酶活性和土壤微生物功能多样性的变化,从微生态水平揭示溶磷细菌与外生菌根真菌互作对NL-895杨的促生机制。【方法】采用盆栽试验考察荧光假单胞菌JW-JS1与红绒盖... 【目的】探究荧光假单胞菌与红绒盖牛肝菌共接种条件下NL-895杨根际土壤酶活性和土壤微生物功能多样性的变化,从微生态水平揭示溶磷细菌与外生菌根真菌互作对NL-895杨的促生机制。【方法】采用盆栽试验考察荧光假单胞菌JW-JS1与红绒盖牛肝菌(Xc)共接种后NL-895杨根际土壤酶(酸性磷酸酶、脱氢酶和转化酶)的活性变化,并通过BIOLOG微孔板法分析共接种对NL-895杨根际土壤微生物群落和功能多样性的影响。【结果】从整体趋势来看,不同接种处理后NL-895杨根际土壤酶活性均有所增强,土壤酸性磷酸酶、脱氢酶和转化酶活性均大于对照,其中,共接种JW-JS1+Xc处理对土壤酸性磷酸酶和转化酶活性的促进最为明显;接种150天后,不同接种处理土壤微生物的AWCD值均高于CK(培养24～48 h除外),且随着培养时间的延长呈先上升后稳定的趋势;培养96 h后,共接种JW-JS1+Xc处理土壤微生物McIntosh优势度指数和碳源利用丰富度指数显著高于单接种Xc或JW-JS1和CK(P<0.05),而Shannon丰富度指数和Simpson优势度指数显著低于单接种Xc或JW-JS1和CK(P<0.05);不同接种处理NL-895杨根际土壤微生物对BIOLOG微孔板中6大类碳源的利用能力差异显著(P<0.05)。【结论】荧光假单胞菌JW-JS1与外生菌根真菌Xc共接种对NL-895杨根际土壤酶活性和土壤微生物功能多样性的提高具有一定的促进作用,有利于其土壤肥力的改善,进而促进NL-895杨的生长。与单接种相比,溶磷细菌与外生菌根真菌共接种可更有效地提高杨树根际土壤酶活性和土壤微生物多样性。 展开更多

关键词 荧光假单胞菌 红绒盖牛肝菌 共接种 土壤酶活性 BIOLOG微孔板法 微生物多样性

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L-天冬氨酸-α-脱羧酶的重组表达、定点突变及高通量检测方法的建立

13

作者 朱秋雨 段绪果 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期269-278,共10页

将枯草芽孢杆菌L-天冬氨酸-α-脱羧酶基因进行了克隆和异源表达,并通过定点突变构建了2个突变体。针对该酶活力检测时存在的检测通量低、周期长和成本高等缺点,旨在建立一种简单高效的酶活力高通量检测方法。采用氯酚红(CPR)指示剂和4-... 将枯草芽孢杆菌L-天冬氨酸-α-脱羧酶基因进行了克隆和异源表达,并通过定点突变构建了2个突变体。针对该酶活力检测时存在的检测通量低、周期长和成本高等缺点,旨在建立一种简单高效的酶活力高通量检测方法。采用氯酚红(CPR)指示剂和4-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液体系,并对检测条件进行优化,提高检测的准确性和灵敏性,建立了基于比色法的微孔板高通量检测方法,然后以L-天冬氨酸-α-脱羧酶及其突变体作为模型酶,对高通量检测方法进行了验证。优化后的酶活检测条件为MES缓冲液2 mmol/L,CPR指示剂75 μmol/L,L-天冬氨酸75 mmol/L,pH 6.5,温度37℃,反应时间10 min,检测波长为567 nm。采用3种模型酶对微孔板高通量检测方法进行了验证,结果显示该方法与HPLC法测得的结果一致。高通量检测方法具有操作简便易行、灵敏度高等优点,能够用于L-天冬氨酸-α-脱羧酶的快速检测。该方法的建立将为L-天冬氨酸-α-脱羧酶进行定向进化及突变体的高通量筛选奠定基础。 展开更多

关键词 L-天冬氨酸-α-脱羧酶 定点突变 指示剂 微孔板法 高通量检测

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哈维氏弧菌生物被膜体外模型的建立及成膜特性研究 被引量：4

14

作者 李海平 鄢庆枇 +2 位作者 徐晓津 苏永全 覃映雪 《热带海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期99-104,共6页

采用改良微孔板法建立哈维氏弧菌Vibrio harveyi TS-628菌株生物被膜体外模型,并进一步研究环境因子对哈维氏弧菌体外形成生物被膜的影响。结果发现,哈维氏弧菌TS-628菌株可以在聚苯乙烯板中形成生物被膜,并且该菌生物被膜的形成受起始... 采用改良微孔板法建立哈维氏弧菌Vibrio harveyi TS-628菌株生物被膜体外模型,并进一步研究环境因子对哈维氏弧菌体外形成生物被膜的影响。结果发现,哈维氏弧菌TS-628菌株可以在聚苯乙烯板中形成生物被膜,并且该菌生物被膜的形成受起始菌液浓度、温度、pH等理化因子的显著影响。温度为30℃、NaCl质量分数为3%—6%、pH为7、孵育时间为36h是哈维氏弧菌形成生物被膜的最佳条件。此外哈维氏弧菌在分别经表皮黏液、鳃黏液、肠道黏液、肝脏提取液、脾脏提取液、肌肉提取液包被的基质上成膜效果显著,其中在经肝脏提取液包被的基质上形成的生物被膜量显著高于在其他生物基质上形成的生物被膜量(p<0.01)。 展开更多

关键词 哈维氏弧菌 生物被膜 环境因子 微孔板法 生物基质

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3种三七根腐病致病菌的抑菌植物筛选 被引量：2

15

作者 李纪潮 杨天梅 +5 位作者 杨绍兵 左应梅 杨美权 章朦玥 许宗亮 张金渝 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2205-2213,共9页

【目的】筛选出对3种三七根腐病致病菌具有强抑菌效果的拮抗植物,为制定三七根腐病绿色安全的防控措施提供科学依据。【方法】针对三七根腐病的3种致病菌[假单胞杆菌属(Pseudomonas sp.,菌株号B857)、无色杆菌(Achromobacter marplatens... 【目的】筛选出对3种三七根腐病致病菌具有强抑菌效果的拮抗植物,为制定三七根腐病绿色安全的防控措施提供科学依据。【方法】针对三七根腐病的3种致病菌[假单胞杆菌属(Pseudomonas sp.,菌株号B857)、无色杆菌(Achromobacter marplatensis,菌株号B562)和产碱菌属(Candidimonas sp.,菌株号B2681)],选用16种常见草本植物进行乙醇超声波提取,用二倍稀释法稀释成5个浓度梯度进行平板打孔抑菌试验,测量抑菌直径并计算毒力回归方程及致死中浓度(LC50),采用刃天青微孔板法观测16种植物提取液对3种病原菌的最小抑菌浓度(MIC),筛选出抑菌效果强的植物进行田间三七苗覆盖试验,观测其对三七出苗及农艺性状的影响。【结果】毒力测定结果显示,大狼毒对3种病原菌均非常敏感,LC50均小于0.100 g/mL;紫茎泽兰和黄花蒿对B857和B562非常敏感,LC50均小于0.100 g/mL;苦蒿、艾草和万寿菊对B857非常敏感,鬼针草对B562非常敏感,LC50均小于0.100 g/mL。MIC测定结果表明,万寿菊、苦蒿和紫茎泽兰对3种病原菌的抑菌效果较强,其中,万寿菊对3种病原菌的综合效果最强,对B562和B2681的MIC低至1.875 mg/mL,对B857的MIC为3.750 mg/mL;苦蒿对B857和B562的MIC为1.875 mg/mL;紫茎泽兰对B2681的MIC为1.875 mg/mL,对B562和B857的MIC为3.750 mg/mL。田间化感作用试验结果表明,万寿菊覆盖方式的三七出苗率最高,为75.86%,苦蒿覆盖方式的出苗率最低,为65.43%;3种植物覆盖方式对三七茎粗、叶长和叶面积无显著影响(P>0.05),对三七苗株高有显著促进作用(P<0.05,下同)。万寿菊和苦蒿覆盖方式致使三七苗叶宽变窄,且与对照差异显著。【结论】万寿菊和紫茎泽兰对3种三七根腐病致病菌的综合抑菌效果较强,且对三七生长无显著化感作用,万寿菊可直接采收后作为覆盖物返田利用,紫茎泽兰需烘干打粉后施用。刃天青微孔板法可作为植物源提取物最小抑菌浓度的测定方法。 展开更多

关键词 三七根腐病 致病菌 毒力测定 抑菌植物筛选 刃天青微孔板法

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桃软腐病的病原菌鉴定与高效防治药剂筛选 被引量：2

16

作者 蒋政华 王泽新 +3 位作者 张慧颖 范乐敏 曾文芳 刘普 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1136-1146,共11页

【目的】为明确早熟桃软腐病的病原菌种类,并评价其在不同桃品种中的致病力差异;筛选评价不同药剂对致病菌的毒力和活体接种防效。【方法】根据科赫式法则对病原菌进行分离、鉴定及致病性测定,采用室内离体接种法测定5个桃品种的果实对... 【目的】为明确早熟桃软腐病的病原菌种类,并评价其在不同桃品种中的致病力差异;筛选评价不同药剂对致病菌的毒力和活体接种防效。【方法】根据科赫式法则对病原菌进行分离、鉴定及致病性测定,采用室内离体接种法测定5个桃品种的果实对该病原菌的抗性。采用菌丝生长速率法和孢子萌发法测定15种药剂对桃软腐病病菌的毒力,通过贮藏试验验证药剂对桃软腐病的防效。【结果】分离获得了27株形态特征相同的菌株。结合rDNA-ITS和rDNALSU克隆与系统进化树分析明确病原菌为Gilbertella persicaria。室内离体接种48 h后,测量显示中油19号和中桃红玉的病斑直径最小。微孔板毒力测定结果表明,在供试的15种药剂中,吡唑醚菌酯抑制效果最明显,EC50为0.168mg·L^(-1)。采后贮藏试验结果显示苯醚甲环唑处理抑菌效果最好。【结论】引起桃软腐病的致病菌为Gilbertella persicaria,且中油19号和中桃红玉较抗病。吡唑醚菌酯和苯醚甲环唑对该菌有很好的防效,在桃软腐病田间防治中具有较大的应用潜力。 展开更多

关键词 桃软腐病 Gilbertella persicaria 病原鉴定 抗病性差异 微孔板法 药剂筛选

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牛呼吸道合胞体病毒G蛋白特异性核酸适配体的筛选及初步应用 被引量：1

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作者 甄思慧 程如楠 +3 位作者 宋想胜 李磊 张永红 王真 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期490-496,共7页

为筛选牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白特异性核酸适配体,本研究通过原核系统表达G蛋白,并利用软件设计引物,由公司合成初始寡核苷酸文库,并利用微孔板法,经过包被G蛋白、封闭后加入初始寡核苷酸文库、洗脱、酚抽取法提取、PCR扩增、胶... 为筛选牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)G蛋白特异性核酸适配体,本研究通过原核系统表达G蛋白,并利用软件设计引物,由公司合成初始寡核苷酸文库,并利用微孔板法,经过包被G蛋白、封闭后加入初始寡核苷酸文库、洗脱、酚抽取法提取、PCR扩增、胶回收以及反筛等操作经不同轮次筛选核酸适配体。在每轮筛选循环中,以回收产物为模板进行常规PCR扩增后再进行一轮非对称PCR扩增,获得目的条带大小为84 bp的单链核苷酸分子,用于下一轮筛选。共进行了11轮筛选,从第5轮开始反筛。将最后一轮筛选得到的对称PCR产物连接T载体后转化到DH5α感受态细胞中,经菌液PCR鉴定和测序后,利用间接酶联核酸适配体法(i-ELAA)选择测序结果出现频次较高的适配体,测定其与G蛋白的结合力,并利用软件预测其二级结构。结果显示,本实验表达了BRSV重组G蛋白,经微孔板法筛选出了98条适配体序列,其中G-6、G-13、G-39、G-55和G-72适配体出现频率最高;二级结构预测显示,5条核酸适配体均具有稳定的茎环状或发卡状结构,能与G蛋白特异、稳定的结合。本研究筛选出的5条核酸适配体为BRSV酶联核酸适配体法的建立奠定了基础。 展开更多

关键词 牛呼吸道合胞体病毒 G蛋白 微孔板法 核酸适配体

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牛冠状病毒N蛋白的原核表达及核酸适配体筛选 被引量：6

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作者 程如楠 孔梓安 +3 位作者 曹莉 孙路 岳亮 王真 《北京农学院学报》 2021年第1期27-32,共6页

【目的】对牛冠状病毒N蛋白进行原核表达,利用指数富集的配基系统进化技术筛选N蛋白的核酸适配体,为该病诊断方法的建立奠定基础。【方法】根据牛冠状病毒基因序列,设计N蛋白编码基因特异性引物,扩增目的基因并通过酶切、连接、转化构... 【目的】对牛冠状病毒N蛋白进行原核表达,利用指数富集的配基系统进化技术筛选N蛋白的核酸适配体,为该病诊断方法的建立奠定基础。【方法】根据牛冠状病毒基因序列,设计N蛋白编码基因特异性引物,扩增目的基因并通过酶切、连接、转化构建原核表达载体pET-28a-N,优化N蛋白表达条件,镍柱纯化获得高纯度高浓度的N蛋白。利用微孔板法,经过包被、封闭、加文库、洗脱、提取、PCR、胶回收和反筛等步骤从原始核酸适配体文库中筛选出N蛋白特异性适配体,连接T载体转入DH5а感受态细胞后,经菌落PCR鉴定和测序获得与N蛋白特异性结合的适配体序列,测定其结合常数,并利用在线软件预测其二级结构。【结果】成功表达出约55 kD的重组蛋白;经微孔板法筛选出67条适配体序列,其中N-12、N-33和N-45出现多次重复,经测定3条核酸适配体均具有环状、发卡结构,利于与目标蛋白稳定结合。【结论】筛选的3条核酸适配体有望用于牛冠状病毒病早期诊断用酶联适配体方法的建立。 展开更多

关键词 牛冠状病毒 N蛋白 微孔板法 核酸适配体

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黑曲霉高产纤维素酶菌株的高通量筛选 被引量：2

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作者 李兆周 王学红 +1 位作者 陈化靓 梁剑平 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期151-156,共6页

以黑曲霉GSICC 60108为出发菌株,经紫外和电子束诱变处理后,采用纤维素-刚果红平板初筛和新建立的高通量微孔板法进行复筛以获得高产纤维素酶菌株.结果表明:试验得到1株稳定高产的纤维素酶菌株黑曲霉EBR-106;所建立的复筛方法的标准曲... 以黑曲霉GSICC 60108为出发菌株,经紫外和电子束诱变处理后,采用纤维素-刚果红平板初筛和新建立的高通量微孔板法进行复筛以获得高产纤维素酶菌株.结果表明:试验得到1株稳定高产的纤维素酶菌株黑曲霉EBR-106;所建立的复筛方法的标准曲线在葡萄糖质量浓度为0～10mg/mL的范围内线性良好(r=0.999 75),孔间和板间酶活力值的变异系数均在5%以下,重现性和稳定性均能够满足高通量复筛的需要;经过对所得菌株固态发酵条件优化后发现,当碳源为稻草粉和麸皮的混合物,氮源为2.5%硫酸铵添加量为1.5%时的玉米浆作为生长促进剂,加水量为35mL/(100g)的培养基产酶效果最好.在最佳培养条件下,其分泌纤维素滤纸酶活力为378.11FPU/mL. 展开更多

关键词 黑曲霉 纤维素酶 纤维素-刚果红平板 微孔板筛选法

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一种最小抑菌浓度检测试剂盒检测结核分枝杆菌临床菌株药物敏感性的效果评价 被引量：2

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作者 曹滨 王泉 +12 位作者 于晋杰 邓乐乐 钱程宇 方丹昂 万康林 李马超 刘梦文 赵秀芹 赵丽丽 刘海灿 肖开提·米吉提 袁秀琴 李桂莲 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期827-836,共10页

目的评价一种最小抑菌浓度检测试剂盒检测结核分枝杆菌(MTB)临床分离菌株对11种一、二线抗结核药物敏感性的效能。方法从2017年1月至2018年12月期间来自新疆不同地区4家结核病院的住院/门诊结核病患者的847株MTB临床分离菌株中,随机选取... 目的评价一种最小抑菌浓度检测试剂盒检测结核分枝杆菌(MTB)临床分离菌株对11种一、二线抗结核药物敏感性的效能。方法从2017年1月至2018年12月期间来自新疆不同地区4家结核病院的住院/门诊结核病患者的847株MTB临床分离菌株中,随机选取188株,采用一种最小抑菌浓度检测试剂盒(MYCOTB)检测其对11种一、二线抗结核药物的耐药性,以常规微孔板微量肉汤稀释法为对照方法,结合全基因组测序技术,评估MYCOTB法检测药物耐药性的灵敏度、特异度及两种表型药敏方法的一致性。结果以常规微孔板微量肉汤稀释法为标准,MYCOTB检测RFP、ETH、RFB、SM、INH、PAS、OFX、AMK、MFX、EMB和KM等11种药物耐药性的灵敏度分别为92.0%、88.6%、86.7%、84.6%、84.3%、75.0%、67.7%、57.4%、56.7%、56.5%和40.0%,特异度分别为97.1%、96.7%、96.2%、97.3%、90.0%、95.6%、96.1%、99.5%、91.1%、96.4%和100.0%,符合率分别为95.7%、95.2%、94.7%、94.7%、87.2%、94.7%、91.0%、97.9%、85.6%、91.5%和96.8%,Kappa值分别为0.89、0.84、0.81、0.84、0.75、0.52、0.68、0.66、0.47、0.57和0.87。对于两种表型药敏方法结果不一致的菌株,基因测序结果更支持MYCOTB的检测结果。结论MYCOTB检测MTB对11种一、二线抗结核药物耐药性具有良好的灵敏度和特异度,可用于MTB菌株耐药性的检测。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 药物敏感性试验 MYCOTB 微孔板微量肉汤稀释法

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