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题名小反刍兽疫病毒原核表达体外转录系统的建立
被引量：2
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作者
高华峰
赵文华
高林
杨仕标
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机构
云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室
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出处
《动物医学进展》
北大核心
2016年第10期21-25,共5页
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基金
国家自然科学基金项目(31160499)
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文摘
构建了小反刍兽疫病毒(PPRV)辅助质粒和微型复制子(minireplicon)并进行功能学研究。RT-PCR克隆PPRV疫苗株N75/1N、P和L基因,亚克隆至有T7启动子的原核表达载体pGEM3Z构建完成3个辅助质粒,分别命名为pGEM3Z-N、pGEM3Z-P和pGEM3Z-L,并通过全基因合成构建含PPRV病毒5′端启动子序列(AGP)、3′端启动子序列(GP)、T7转录终止信号、丁型肝炎病毒核酶序列HamRZ及氯霉素乙酰转移酶(CAT),获得PPRV微型复制子重组质粒pGEM3Z-CAT。构建完成的微型复制子及辅助质粒在表达T7RNA多聚酶(T7RNP)感染痘病毒VTF7-3后,通过脂质体法优化4种质粒配比,并将其转染至Vero细胞,通过间接免疫荧光分析CAT的表达情况,荧光显微镜观察到荧光的表达,并通过免疫印迹分析CAT蛋白的表达,表明构建的PPRV微型复制子具有转录和复制功能,这将有助于进一步开展以PPRV反向遗传操作为基础的免疫学及蛋白功能研究。
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关键词
小反刍兽疫病毒
微型复制子
氯霉素乙酰转移酶
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Keywords
Peste-des-petits-ruminants virus
minireplicon
chlorarnphenicol acetyltransferase
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分类号
S852.659.5
[农业科学—基础兽医学]
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