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基于T7 RNA聚合酶的犬瘟热病毒微型基因组构建与拯救: 1; 作者王慧孙艺洋 +1 位作者王哲赵建军《中国动物传染病学报》北大核心 2024年第6期182-186,共5页; 为建立基于T7 RNA聚合酶的CDV反向遗传操作平台,以犬瘟热活疫苗CDV3弱毒株基因组序列为基础,人工合成CDV3株基因组3'-leader、5'-tailer序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,反向克隆入T7启动子调控的表达质粒pCRscript,同... 展开更多; 关键词犬瘟热病毒微型基因组病毒反向遗传技术; 在线阅读下载PDF 职称材料

小反刍兽疫病毒分离株China/Tib/07辅助质粒及微型基因组的构建和鉴定被引量：2: 2; 作者刘文华王志亮 +4 位作者包静月吴晓东刘华雷赵永刚刘秀梵《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1497-1502,共6页; 本研究旨在构建小反刍兽疫病毒(PPRV)的辅助质粒和微型基因组并验证其功能,为建立PPRV反向遗传操作平台奠定基础。首先构建表达PPRV分离株China/Tib/07的N、P和L蛋白的辅助质粒pCI-N、pCI-P和pCI-L。通过间接免疫荧光试验验证3个辅助质... 展开更多; 关键词小反刍兽疫病毒微型基因组 EGFP N蛋白 P蛋白 L蛋白; 在线阅读下载PDF 职称材料

新城疫病毒classⅠ和classⅡ微型基因组的构建及其复制效率差异性的比较被引量：1: 3; 作者于洋仇旭升 +5 位作者韦娜娜詹媛丁娜于圣青秦爱建丁铲《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期355-359,共5页; 为研究新城疫病毒(NDV)微型基因组的复制效率,本实验分别以NDV 9a5b(ClassⅠ)病毒株和La Sota(ClassⅡ)病毒株基因组骨架为平台,插入绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因替代病毒的整个编码区,只保留与病毒复制、转录和病毒包装相关的调控区... 展开更多; 关键词新城疫病毒微型基因组共转染; 在线阅读下载PDF 职称材料

Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定被引量：1: 4; 作者陈云霞管峰 +4 位作者赵云玲郑东霞张维刘华雷王志亮《中国动物检疫》 CAS 2011年第9期27-31,共5页; 目的本研究旨在构建Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的微型基因组和辅助质粒,为构建病毒拯救体系奠定基础。方法根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的全基因组序列,采用SOE方法将增强绿色荧光蛋白基因(eGFP)插入NDV08-004的3’-Leader和5’-Trailer... 展开更多; 关键词 Ⅰ类新城疫病毒辅助性质粒微型基因组病毒拯救; 在线阅读下载PDF 职称材料

A型塞尼卡病毒3′非编码区潜在吻环基序突变对微型基因组蛋白表达的影响被引量：2: 5; 作者刘拂晓王宁 +6 位作者赵地李静孟海蓝李紫薇于永乐董雅琴尼博《青岛农业大学学报（自然科学版）》 2022年第2期90-95,共6页; A型塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA),可导致猪的口吻部、口腔黏膜、蹄冠部出现水疱样病变,其临床症状与其他水疱型疫病所导致的症状难以区分。该病毒属于小RNA病毒科(Picornaviridae)、塞尼卡病毒属(Senecavirus)成员,其基因组含有5′非... 展开更多; 关键词 A型塞尼卡病毒 3′非编码区吻环微型基因组双荧光素酶报告分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

传染性造血器官坏死病毒微型基因组表达干扰素对病毒的抑制效应被引量：3: 6; 作者王会英蒋烨 +6 位作者赵丽丽唐丽杰乔薪瑗姜艳平崔文李一经刘敏《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2016年第1期3-8,17,共7页; 为构建传染性造血器官坏死病毒(IHNV HLJ-09)微型基因组并表达虹鳟IFN,采用RT-PCR扩增IHNV HLJ-09株的N、P、L、G和NV蛋白基因并亚克隆入真核表达载体pCI中,构建辅助质粒pCI-N、pCI-P、pCI-L、pCI-G和pCI-NV;将扩增获得的IHNV基因组两... 展开更多; 关键词传染性造血器官坏死病毒辅助质粒虹鳟Ⅰ型干扰素微型基因组; 在线阅读下载PDF 职称材料

新城疫P蛋白磷酸化位点的质谱分析和功能鉴定被引量：1: 7; 作者李继红徐腾飞 +8 位作者张耀丹汪伟孟春春孙英杰谭磊宋翠萍廖瑛仇旭升丁铲《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第5期1-6,共6页; 副黏病毒磷蛋白,即P蛋白(phosphoprotein),富含丝氨酸和苏氨酸,在自然条件下磷酸化水平较高。副黏病毒P蛋白的磷酸化对病毒的转录和复制具有重要的作用,但新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)P蛋白磷酸化位点及其功能依然尚不明确... 展开更多; 关键词新城疫病毒质谱微型基因组磷酸化位点; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于T7 RNA聚合酶的犬瘟热病毒微型基因组构建与拯救: 1; 作者王慧孙艺洋王哲赵建军; 机构黑龙江八一农垦大学动物科技学院; 出处《中国动物传染病学报》北大核心 2024年第6期182-186,共5页; 基金国家重点研发计划项目(2023YFD1800700) 黑龙江省大学生省级创新训练项目(s202310223041)。; 文摘为建立基于T7 RNA聚合酶的CDV反向遗传操作平台,以犬瘟热活疫苗CDV3弱毒株基因组序列为基础,人工合成CDV3株基因组3'-leader、5'-tailer序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因序列,反向克隆入T7启动子调控的表达质粒pCRscript,同时在微型基因组5'端和3'末端分别引入锤状核酶和丁肝核酶序列,构建犬瘟热病毒CDV3株微型基因组质粒pCR-mCDV3-EGFP。将pCR-mCDV3-EGFP质粒和表达麻疹病毒(MeV)N、P和L蛋白的3个辅助质粒共转染表达T7 RNA聚合酶BSR细胞后,通过荧光显微镜观察EGFP荧光。质粒共转染BSR细胞48 h后,在BSR细胞内可观察到特异绿色荧光成功拯救CDV微型基因组。本研究成功建立了基于CDV微型基因组的反向遗传操作平台,有望后期进行CDV的病毒拯救,为CDV新型疫苗研制和致病机理研究奠定基础。; 关键词犬瘟热病毒微型基因组病毒反向遗传技术; Keywords Canine distemper virus minigenome reverse genetics; 分类号 S851.3 [农业科学—预防兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名小反刍兽疫病毒分离株China/Tib/07辅助质粒及微型基因组的构建和鉴定被引量：2: 2; 作者刘文华王志亮包静月吴晓东刘华雷赵永刚刘秀梵; 机构扬州大学兽医学院中国动物卫生与流行病学中心国家外来动物疫病诊断中心青岛农业大学动物科技学院; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1497-1502,共6页; 基金农业部948项目(2006-G57(4)B); 文摘本研究旨在构建小反刍兽疫病毒(PPRV)的辅助质粒和微型基因组并验证其功能,为建立PPRV反向遗传操作平台奠定基础。首先构建表达PPRV分离株China/Tib/07的N、P和L蛋白的辅助质粒pCI-N、pCI-P和pCI-L。通过间接免疫荧光试验验证3个辅助质粒转染细胞后的蛋白表达情况,并从mRNA水平上验证蛋白表达的正确性;扩增PPRV基因组两末端序列和eGFP报告基因,三者通过overlap-PCR连接并克隆至转录载体pOL-TV5中构建微型基因组。将构建的微型基因组分别与辅助病毒和3个辅助质粒进行共转染。经鉴定各辅助质粒完全正确,构建的微型基因组不论与辅助病毒还是与3个辅助质粒共转染,报告基因均表达。本试验成功构建了PPRV分离株的表达N、P和L蛋白的3个辅助质粒以及微型基因组,并用微型基因组验证了3个辅助质粒可以作为PPRV反向遗传操作的辅助质粒,为该病毒感染性克隆的构建奠定了基础。; 关键词小反刍兽疫病毒微型基因组 EGFP N蛋白 P蛋白 L蛋白; Keywords Peste des petits ruminants virus minigenome eGFP N protein P protein L protein; 分类号 S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名新城疫病毒classⅠ和classⅡ微型基因组的构建及其复制效率差异性的比较被引量：1: 3; 作者于洋仇旭升韦娜娜詹媛丁娜于圣青秦爱建丁铲; 机构扬州大学兽医学院中国农业科学院上海兽医研究所国家家禽工程技术研究中心; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期355-359,共5页; 基金公益性行业(农业)专项(201003012) 863项目(2011AA10A209) 国家自然科学基金(31101822); 文摘为研究新城疫病毒(NDV)微型基因组的复制效率,本实验分别以NDV 9a5b(ClassⅠ)病毒株和La Sota(ClassⅡ)病毒株基因组骨架为平台,插入绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因替代病毒的整个编码区,只保留与病毒复制、转录和病毒包装相关的调控区域Leader和Trailer,构建获得的微型基因组DNA片段反向插入反向遗传载体TVT(0.0)中,从而构建了两株病毒的微型基因组质粒。同时,将相应病毒株的NP、P和L 3个基因分别克隆至pCI-neo载体中,构建3个辅助质粒的真核表达系统。通过将微型基因组和辅助质粒共转染BSR T7/5T7-5细胞,表明在相同转染条件下,无论使用哪一种辅助质粒,ClassⅡ型微型基因组的报告基因的表达效率均高于ClassⅠ型微型基因组。实验结果显示ClassⅠNDV转录复制系统的运行效率明显低于ClassⅡNDV。; 关键词新城疫病毒微型基因组共转染; Keywords Newcastle disease virus mini-genome helper plasmids; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定被引量：1: 4; 作者陈云霞管峰赵云玲郑东霞张维刘华雷王志亮; 机构中国动物卫生与流行病学中心广西大学动物科学学院; 出处《中国动物检疫》 CAS 2011年第9期27-31,共5页; 基金国家自然科学基金(30901079); 文摘目的本研究旨在构建Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的微型基因组和辅助质粒,为构建病毒拯救体系奠定基础。方法根据Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004的全基因组序列,采用SOE方法将增强绿色荧光蛋白基因(eGFP)插入NDV08-004的3’-Leader和5’-Trailer区域之间后反向插入转录载体pOLTV5中,构建了NDV08-004的微型基因组pLGT-03。将pLGT-03转染辅助病毒NDV08-004感染的表达T7RNA聚合酶BSRT7/5细胞进行功能鉴定。采用RT-PCR将NDV08-004的NP、P和L蛋白基因亚克隆入表达载体pCI-neo中,分别构建了三个辅助质粒pCI-NP、pCI-P、pCI-L。通过构建的微型基因组pLGT-03和三个辅助质粒按照一定的比例共转染BSRT7/5细胞来验证辅助质粒的功能。结果微型基因组pLGT-03转染辅助病毒感染的BSRT7/5细胞后可见明显荧光,表明微型基因组构建成功。微型基因组和辅助质粒共转染可见荧光表达,表明三个辅助质粒均具有相应的功能。结论表明微型基因组和辅助质粒均具有相应的功能,为建立NDV08-004的反向遗传操作平台奠定了基础。; 关键词 Ⅰ类新城疫病毒辅助性质粒微型基因组病毒拯救; Keywords Newcastle disease virus （NDV） class I help-plasmid mini-genome rescue of virus; 分类号 S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名A型塞尼卡病毒3′非编码区潜在吻环基序突变对微型基因组蛋白表达的影响被引量：2: 5; 作者刘拂晓王宁赵地李静孟海蓝李紫薇于永乐董雅琴尼博; 机构青岛农业大学动物医学院内蒙古农业大学兽医学院青岛市黄岛区市场监督管理局中国动物卫生与流行病学中心; 出处《青岛农业大学学报（自然科学版）》 2022年第2期90-95,共6页; 基金中国动物卫生与流行病学中心创新基金—猪群重大疫病新型疫苗研发。; 文摘 A型塞尼卡病毒(Senecavirus A,SVA),可导致猪的口吻部、口腔黏膜、蹄冠部出现水疱样病变,其临床症状与其他水疱型疫病所导致的症状难以区分。该病毒属于小RNA病毒科(Picornaviridae)、塞尼卡病毒属(Senecavirus)成员,其基因组含有5′非编码区(5′untranslated region,5′UTR)、多聚蛋白的开放阅读框及3′非编码区(3′untranslated region,3′UTR)。过去有报道预测该病毒的3′UTR含有一个三碱基配对的潜在RNA吻环结构,但未被试验证实。构建了7个不同吻环基序突变的SVA微型基因组,将其分别与另一荧光报告质粒共转染细胞后,进行双荧光素酶报告分析。结果证明潜在吻环结构的破坏未能干扰5′UTR启动蛋白的表达。; 关键词 A型塞尼卡病毒 3′非编码区吻环微型基因组双荧光素酶报告分析; Keywords Senecavirus A 3′untranslated region kissing-loop minigenome dual-luciferase reporter assay; 分类号 S852.23 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名传染性造血器官坏死病毒微型基因组表达干扰素对病毒的抑制效应被引量：3: 6; 作者王会英蒋烨赵丽丽唐丽杰乔薪瑗姜艳平崔文李一经刘敏; 机构东北农业大学动物医学学院东北农业大学动物科学与技术学院; 出处《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2016年第1期3-8,17,共7页; 基金国家自然科学基金(31372568) 东北农业大学博士启动基金项目(2012RCB66); 文摘为构建传染性造血器官坏死病毒(IHNV HLJ-09)微型基因组并表达虹鳟IFN,采用RT-PCR扩增IHNV HLJ-09株的N、P、L、G和NV蛋白基因并亚克隆入真核表达载体pCI中,构建辅助质粒pCI-N、pCI-P、pCI-L、pCI-G和pCI-NV;将扩增获得的IHNV基因组两末端序列、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因、虹鳟I型干扰素(IFN)基因克隆到真核表达载体pCI中构建出表达EGFP的IHNV微型基因组pCI-LFGT和表达IFN的IHNV微型基因组pCI-LFIT;将pCI-LFIT质粒转染已接种IHNV HLJ-09毒株的EPC细胞,实时荧光定量PCR法测定细胞中IHNV G基因RNA。结果显示:构建的微型基因组不论与辅助病毒还是与5个辅助质粒共转染,外源基因均能正确表达;pCI-LFIT质粒转染已接种病毒的EPC细胞组与对照组相比其中的病毒核酸显著减少。; 关键词传染性造血器官坏死病毒辅助质粒虹鳟Ⅰ型干扰素微型基因组; Keywords infectious haemopoietic necrosis virus support plasmids rainbow trout IFN-Ⅰ minigenome; 分类号 S917.4 [农业科学—水产科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名新城疫P蛋白磷酸化位点的质谱分析和功能鉴定被引量：1: 7; 作者李继红徐腾飞张耀丹汪伟孟春春孙英杰谭磊宋翠萍廖瑛仇旭升丁铲; 机构中国农业科学院上海兽医研究所; 出处《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第5期1-6,共6页; 基金国家重点研发计划重点专项(2016YFD0501603) 国家自然科学基金(31101822,31530074); 文摘副黏病毒磷蛋白,即P蛋白(phosphoprotein),富含丝氨酸和苏氨酸,在自然条件下磷酸化水平较高。副黏病毒P蛋白的磷酸化对病毒的转录和复制具有重要的作用,但新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)P蛋白磷酸化位点及其功能依然尚不明确。本研究通过LC-MS/MS质谱对NDV La Sota病毒P蛋白的磷酸化位点进行了检测,鉴定了Ser56、Ser77、Thr78、Thr82、Ser164和Ser141六个磷酸化位点。通过在线分析,预测这些磷酸化位点的磷酸化激酶分别是PKC、CKII和GSK3。为了鉴定6个磷酸化位点的生物学功能,在已建立的表达GFP基因的NDV微型基因组质粒pTVT-LGT基础上,用荧光素酶报告基因(luciferase)替换GFP报告基因,建立了表达荧光素酶的NDV微型基因组系统。利用“丙氨酸扫描”对6个磷酸化位点进行突变后,在NDV微型基因组平台中进行功能鉴定。结果显示,T78、T82和S164位磷酸化位点的缺失显著影响了病毒RNA依赖性RNA聚合酶复合体(RNA dependent RNA polymerase,RdRp)的复制,其生物学意义有待进一步的研究。; 关键词新城疫病毒质谱微型基因组磷酸化位点; Keywords Newcastle disease virus mass spectrometry minigenome phosphorylation; 分类号 S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	基于T7 RNA聚合酶的犬瘟热病毒微型基因组构建与拯救	王慧孙艺洋王哲赵建军	《中国动物传染病学报》北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	小反刍兽疫病毒分离株China/Tib/07辅助质粒及微型基因组的构建和鉴定	刘文华王志亮包静月吴晓东刘华雷赵永刚刘秀梵	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2011	2	在线阅读下载PDF 职称材料
3	新城疫病毒classⅠ和classⅡ微型基因组的构建及其复制效率差异性的比较	于洋仇旭升韦娜娜詹媛丁娜于圣青秦爱建丁铲	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2012	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	Ⅰ类新城疫病毒NDV08-004株微型基因组的构建及其功能鉴定	陈云霞管峰赵云玲郑东霞张维刘华雷王志亮	《中国动物检疫》 CAS	2011	1	在线阅读下载PDF 职称材料
5	A型塞尼卡病毒3′非编码区潜在吻环基序突变对微型基因组蛋白表达的影响	刘拂晓王宁赵地李静孟海蓝李紫薇于永乐董雅琴尼博	《青岛农业大学学报（自然科学版）》	2022	2	在线阅读下载PDF 职称材料
6	传染性造血器官坏死病毒微型基因组表达干扰素对病毒的抑制效应	王会英蒋烨赵丽丽唐丽杰乔薪瑗姜艳平崔文李一经刘敏	《淡水渔业》 CSCD 北大核心	2016	3	在线阅读下载PDF 职称材料
7	新城疫P蛋白磷酸化位点的质谱分析和功能鉴定	李继红徐腾飞张耀丹汪伟孟春春孙英杰谭磊宋翠萍廖瑛仇旭升丁铲	《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心	2019	1	在线阅读下载PDF 职称材料