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拟南芥异源过表达木薯MeNRT2.6基因对氮素利用效率的影响
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作者 翟敏 曹颖杰 +7 位作者 林晨俞 赵平娟 李文彬 于晓玲 廖文彬 阮孟斌 邹良平 李壮 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第4期459-470,共12页
【目的】高亲和硝酸盐转运蛋白家族2(Nitrate transporter 2,NRT2)基因在低氮条件下上调表达可促进植物对氮素的有效吸收,对提升植物耐低氮胁迫能力至关重要。本研究聚焦木薯Manihot esculenta Crantz的MeNRT2.6基因功能研究,通过在拟南... 【目的】高亲和硝酸盐转运蛋白家族2(Nitrate transporter 2,NRT2)基因在低氮条件下上调表达可促进植物对氮素的有效吸收,对提升植物耐低氮胁迫能力至关重要。本研究聚焦木薯Manihot esculenta Crantz的MeNRT2.6基因功能研究,通过在拟南芥Arabidopsis thaliana中异源过表达MeNRT2.6,解析MeNRT2.6在氮素利用效率方面的功能,为提高氮素利用效率的定向分子育种提供理论和技术支撑。【方法】以转录组筛选出的低氮条件下在木薯根、茎、叶中均具有较高表达的MeNRT2.6基因作为研究对象,以木薯C3品种的cDNA为模板进行PCR扩增获得MeNRT2.6基因片段。通过生物信息学和组织表达分析,并结合原生质体瞬时表达系统确定MeNRT2.6的表达组织和亚细胞定位模式。利用浸花法创制在拟南芥中异源过表达MeNRT2.6的转基因株系,测定转基因株系在低、高浓度硝态氮条件下生理指标以及4个氮代谢关键酶−硝酸还原酶(Nitrate reductase,NR)、亚硝酸还原酶(Nitrite reductase,NiR)、谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)和谷氨酸合成酶(Glutamate synthase,GOGAT)的活性。【结果】MeNRT2.6与毛果杨PtNRT2.7的亲缘关系最近,氨基酸序列相似性达74.5%;其启动子序列存在逆境和激素类顺式响应元件。MeNRT2.6蛋白定位于细胞膜。在0.5 mmol/L硝态氮处理下,MeNRT2.6根据不同处理方式分别在木薯根、茎、叶中被诱导表达;在39.5 mmol/L硝态氮处理下,MeNRT2.6基因只在叶中被诱导表达,而与处理方式无关。0.5 mmol/L硝态氮胁迫下异源过表达MeNRT2.6基因的拟南芥转基因株系的根长、株高、鲜质量增加,氮代谢关键酶GOGAT、NR活性显著提升。【结论】木薯MeNRT2.6基因启动子区域存在低氮响应元件,在拟南芥中异源表达MeNRT2.6基因能提高植株的氮素利用效率,对木薯氮高效种质的开发具有参考意义。 展开更多
关键词 木薯 MeNRT2.6基因 异源过表达 硝态氮胁迫 氮素利用 评价指标
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异源过表达高粱SbSnRK2.1增强拟南芥对盐胁迫的抗性
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作者 李雅琼 格桑拉毛 +3 位作者 陈启迪 杨宇环 何花转 赵耀飞 《生物技术通报》 北大核心 2025年第8期115-123,共9页
【目的】从高粱基因组中发掘调控植物响应盐胁迫的SNF1 RELATED KINASE 2(SnRK2s)基因,为高粱抗盐机制研究提供理论依据。【方法】运用生物信息学技术对高粱SnRK2基因家族成员(SbSnRK2s)进行鉴定和序列分析,利用定量PCR技术分析SbSnRK2... 【目的】从高粱基因组中发掘调控植物响应盐胁迫的SNF1 RELATED KINASE 2(SnRK2s)基因,为高粱抗盐机制研究提供理论依据。【方法】运用生物信息学技术对高粱SnRK2基因家族成员(SbSnRK2s)进行鉴定和序列分析,利用定量PCR技术分析SbSnRK2s在盐胁迫处理12 h内表达量的动态变化,将盐胁迫诱导显著高表达的基因在拟南芥中异源过表达,检测转基因拟南芥对盐胁迫抗性的变化。【结果】在高粱基因组中共鉴定到11个SbSnRK2s基因,不均匀地分布在7条染色体上,蛋白序列进化树结果表明,SbSnRK2s与同为C4植物的玉米SnRK2亲缘关系较近;启动子分析发现,SbSnRK2s基因启动子含有激素响应、应激响应等元件。盐胁迫处理后,11个SbSnRK2s均上调表达,其中,SbSnRK2.1的上调幅度最大,在盐胁迫处理9 h后上调幅度超过150倍,在拟南芥中异源过表达SbSnRK2.1,经盐胁迫处理,转基因植株的存活率、主根长度和鲜重均显著高于野生型。【结论】SbSnRK2.1在盐处理下的表达量显著升高,异源过表达SbSnRK2.1显著提高了拟南芥对盐胁迫的抗性,表明该基因在植物响应盐胁迫中具有重要作用。 展开更多
关键词 SnRK2 高粱 盐胁迫 异源过表达 拟南芥
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拟南芥中异源过表达CsLOX6和CsHPL2基因提高植株耐盐性和耐旱性
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作者 王聪 李强 +3 位作者 柴琳 王恒 余宏军 蒋卫杰 《湖北农业科学》 2024年第10期165-175,共11页
探究CsLOX6基因和CsHPL2基因对拟南芥(Arabidopsis thaliana)生长以及对干旱和盐胁迫抗性的影响,以野生型拟南芥(WT)、转基因型拟南芥(OE-CsLOX6、OE-CsHPL2)、突变体型拟南芥(TB-Atlox5)为材料,通过表型观察、转录组和代谢组学分析等... 探究CsLOX6基因和CsHPL2基因对拟南芥(Arabidopsis thaliana)生长以及对干旱和盐胁迫抗性的影响,以野生型拟南芥(WT)、转基因型拟南芥(OE-CsLOX6、OE-CsHPL2)、突变体型拟南芥(TB-Atlox5)为材料,通过表型观察、转录组和代谢组学分析等方法评估4种拟南芥的耐旱性、耐盐性。结果表明,OE-CsLOX6的地上部鲜重和根长均显著高于其他基因型植株,地下部鲜重明显高于其他基因型植株;OE-CsHPL2的地上部鲜重、地下部鲜重和根长明显低于其他基因型植株。OE-CsLOX6、OE-CsHPL2和WT的代谢物含量存在较大差异,OE-CsLOX6和WT有64个差异代谢物,其中有6个上调,58个下调;OE-CsHPL2和WT有63个差异代谢物,其中有9个上调,54个下调。过表达CsLOX6基因和CsHPL2基因可以提高拟南芥对盐胁迫和干旱胁迫的抗性。在盐胁迫和干旱胁迫下,OE-CsLOX6、OE-CsHPL2的丙二醛含量要显著低于野生型植株,膜质过氧化程度低,SOD、POD和CAT活性要明显高于野生型,提高了植株的抗氧化能力,叶片长势明显优于野生型植株。 展开更多
关键词 拟南芥(Arabidopsis thaliana) 异源过表达 CsLOX6基因 CsHPL2基因 耐盐性 耐旱性 胁迫
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杨树PtBBE9a基因异源过表达功能分析 被引量:1
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作者 施天元 程玉祥 《江苏农业科学》 2020年第23期66-70,共5页
小檗碱桥酶(berberine bridge enzyme,简称BBE)是一类典型的黄素双共价氧化酶家族,参与植物生长发育的多个生物过程。PtBBE9a是笔者所在课题组前期从杨树发育木质部分离、鉴定的糖蛋白。PtBBE9a基因表达在杨树木质部呈现高丰度水平,并... 小檗碱桥酶(berberine bridge enzyme,简称BBE)是一类典型的黄素双共价氧化酶家族,参与植物生长发育的多个生物过程。PtBBE9a是笔者所在课题组前期从杨树发育木质部分离、鉴定的糖蛋白。PtBBE9a基因表达在杨树木质部呈现高丰度水平,并且随着茎木质化程度的增强而升高。组织β-葡萄糖苷酸酶(GUS)活性染色结果显示,PtBBE9a启动子活性集中在ProPtBBE9a::GUS转基因拟南芥幼苗的顶端分生组织、成熟果荚皮及根组织。通过构建PtBBE9a-GFP过表达载体发现,PtBBE9a过表达拟南芥比野生型拟南芥早开花。进一步研究发现,转基因拟南芥的叶片数少于野生型拟南芥,而其茎木质素含量高于野生型拟南芥。推测PtBBE9a可能通过调控拟南芥生长发育周期而产生早花表型。 展开更多
关键词 杨树 PtBBE9a基因 异源过表达 启动子 转基因拟南芥 BBE
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异源过表达蒺藜苜蓿MtATG7基因促进拟南芥抵抗碳氮饥饿胁迫
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作者 朱晓洁 王贤杰 +2 位作者 杨明康 黄巍 陈亮 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期810-817,共8页
【目的】真核生物通过保守的自噬途径降解错误折叠的蛋白质或受损细胞器,实现对营养物质的循环再利用。本文旨在解析苜蓿自噬基因在植物应对营养胁迫中发挥的功能,为指导苜蓿的选育和改良提供参考。【方法】以自噬途径的关键限速基因ATG... 【目的】真核生物通过保守的自噬途径降解错误折叠的蛋白质或受损细胞器,实现对营养物质的循环再利用。本文旨在解析苜蓿自噬基因在植物应对营养胁迫中发挥的功能,为指导苜蓿的选育和改良提供参考。【方法】以自噬途径的关键限速基因ATG7(Autophagy-related gene 7)为切入点,分析ATG7氨基酸序列在不同植物中的相似性。利用蒺藜苜蓿Medicago truncatula的MtATG7基因过表达载体转化拟南芥植株,获得异源过表达植株35S::MtATG7和互补拟南芥突变体的atg7/35S::MtATG7植株,并对其抗胁迫表型和自噬活性进行分析。【结果】在碳饥饿条件下,atg7/35S::MtATG7能够挽救atg7突变体叶片早衰的表型;恢复到正常生长条件以后,35S::MtATG7和atg7/35S::MtATG7植株存活率和野生型相比都显著提高。GFP-ATG8e的剪切试验表明,atg7/35S::MtATG7能够恢复atg7突变体的自噬降解活性。在氮饥饿条件下过表达MtATG7同样能够减缓拟南芥叶片的衰老速度。【结论】异源过表达MtATG7能增强拟南芥碳氮饥饿抗性的生物学功能,本研究为进一步利用MtATG7基因改良苜蓿农艺性状提供了理论依据。 展开更多
关键词 细胞自噬 MtATG 缺碳胁迫 缺氮胁迫 蒺藜苜蓿 拟南芥 异源过表达
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葡萄风信子MaMYB114基因克隆及功能研究 被引量:2
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作者 史程程 陈鹏 +2 位作者 焦清正 刘艺平 刘红利 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期2039-2048,共10页
MYB转录因子在植物花青素生物合成过程中发挥主要调控作用。为探究MYB转录因子在葡萄风信子(Muscari spp.)蓝色花色形成中的作用,研究以葡萄风信子‘亚美尼亚’为试验材料,基于课题组前期转录组数据库深度挖掘,经本地Blast比对分析,采用... MYB转录因子在植物花青素生物合成过程中发挥主要调控作用。为探究MYB转录因子在葡萄风信子(Muscari spp.)蓝色花色形成中的作用,研究以葡萄风信子‘亚美尼亚’为试验材料,基于课题组前期转录组数据库深度挖掘,经本地Blast比对分析,采用RT-PCR方法克隆获得1个R2R3-MYB基因,命名为MaMYB114(GenBank登录号:OQ615377),对其进行生物信息学分析和异源转化烟草功能验证。结果表明,(1)MaMYB114开放阅读框全长为714 bp,编码237个氨基酸;MaMYB114蛋白含有R2R3保守结构域,属于R2R3-MYB家族AN2亚家族。(2)亚细胞定位及转录自激活结果显示基因定位于细胞核,且具有转录自激活活性,符合转录因子一般特征。(3)实时荧光定量分析显示MaMYB114基因主要在花中高表达,表达模式具有组织特异性。结合不同时期花青苷含量变化模式,发现MaMYB114在着色期花青素含量高的花蕾中高表达,表明MaMYB114可能参与了葡萄风信子花青苷合成过程。(4)过表达MaMYB114促进烟草花青苷积累,表明MaMYB114正向调控花青素合成。本研究表明,MaMYB114基因可能是参与葡萄风信子蓝色花色形成的重要调控基因。 展开更多
关键词 葡萄风信子 花青素苷 MYB转录因子 异源过表达 基因功能
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