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结核分枝杆菌ICL mRNA特异性10-23脱氧核酶切割活性的鉴定及其切割特点
被引量：
4
1
作者
李俊明
朱道银
+2 位作者
伊正君
江山
骆旭东
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期151-157,共7页
为鉴定结核分枝杆菌异柠檬酸裂合梅（ICL）特异性的10-23DRz在无细胞体系切割ICL mRNA的活性，并探讨其在不同条件下以及联合应用时对靶mRNA的切割特点，采用计算机软件模拟ICL mRNA的二级结构，据此选择适合的待切割靶点并设计针对相...
为鉴定结核分枝杆菌异柠檬酸裂合梅（ICL）特异性的10-23DRz在无细胞体系切割ICL mRNA的活性，并探讨其在不同条件下以及联合应用时对靶mRNA的切割特点，采用计算机软件模拟ICL mRNA的二级结构，据此选择适合的待切割靶点并设计针对相应靶点的特异性10—23DRz（DZ1～DZ5）．PCR法扩增获得纠基因并克隆入质粒pET32a＋．采用T7 RNA聚合酶体外转录法获取ICL全长mRNA后分别用DZ1～DZ5在无细胞体系中对ICL mRNA进行切割，切割产物经变性聚丙烯酰胺凝胺电泳后用银染法鉴定各DRzs的活性．选择切割活性最强的DZ4考察不同10—23DRz剂量、不同反应时间、不同镁离子浓度条件下及不同错配或突变10—23DRz的切割特点．联合应用DZ1、DZ4及DZ5在无细胞体系中对ICL mRNA进行切割。检测10—23DRz联合应用对切割效率的影响．结果表明，DZ1、DZ3、DZ4及DZ5可在无细胞体系中有效地切割ICL mRNA，其切割效率在30．8％～64．5％之间．对DZ4切割活性的检测发现，其对靶mRNA的切割具有剂量和时间的依赖性；在2—20μmol／L范围内，DZ4的切割活性与Mg^2＋浓度呈正相关；DZ4单侧底物结合臂上含一个不与靶mRNA配对的碱基时其切割效率大大降低，两侧底物结合臂上各含一个不配对的碱基或活性中心域第6位出现碱基突变（G—C）时，DZ4完全丧失切割活性．联合应用2种或2种以上10-23DRz可显著增强对底物RNA的切割效率．10-23DRz特异、有效地切割结核分枝杆菌ICL全长mRNA并显示一定的叠加效应，有望用于抗结核分枝杆菌潜伏感染的基因治疗．
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关键词
10—23脱氧核酶
结核分枝杆菌
异
柠檬酸
裂合酶
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职称材料
结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL的表达及鉴定
被引量：
5
2
作者
李俊明
朱道银
+2 位作者
伊正君
骆旭东
江山
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2005年第1期37-40,共4页
目的 表达结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL ,鉴定其生物学活性并制备其多克隆抗体。方法 采用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出icl基因片段 ,将其插入原核表达质粒pQE30 ,构建重组质粒 pQE30 icl。将pQE30 icl转化大肠杆...
目的 表达结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL ,鉴定其生物学活性并制备其多克隆抗体。方法 采用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出icl基因片段 ,将其插入原核表达质粒pQE30 ,构建重组质粒 pQE30 icl。将pQE30 icl转化大肠杆菌 ,用IPTG诱导目的基因表达。Western blot免疫印迹法鉴定后纯化该表达产物 ,测定其酶活性并用此纯化蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果 序列分析发现PCR扩得的icl有两个核苷酸突变 ,但均为无义突变。在大肠杆菌中表达的目的产物经SDS PAGE分析约为 4 7kDa。免疫印迹分析证实目的蛋白与阳性结核病患者抗血清产生特异性反应。纯化的目的蛋白异柠檬酸裂解酶的酶活性为 16 .7u/mg。双向免疫扩散法测定目的蛋白免疫兔血清的抗体效价为 1 32。结论 研制出的结核分枝杆菌重组ICL具有异柠檬酸裂解酶活性和抗原性 ,重组ICL和抗ICL免疫血清的制备为抗结核分枝杆菌潜伏感染的研究奠定了必要的物质基础。
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关键词
结核分枝杆菌
潜伏感染
异
柠檬酸
裂合酶
(
icl
)
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职称材料
科学家在美国航天飞机和苏联空间站上使蛋白结晶
3
作者
王旭宁
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1990年第8期7-8,共2页
在美国哥伦比亚号航天飞机上进行蛋白质结晶试验的首要研究者说,在重力接近于零的地球轨道上形成的蛋白质晶体比地球上形成的蛋白质晶体优越得多.与此同时,美国某家公司正在苏联空间站上试用相同设备在外层空间形成结晶蛋白.
关键词
美国航天飞机
地球轨道
异
柠檬酸
裂合酶
航天飞行
美国宇航局
发射失败
轨道飞行
生长基质
树枝状结晶
棱晶
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职称材料
题名
结核分枝杆菌ICL mRNA特异性10-23脱氧核酶切割活性的鉴定及其切割特点
被引量：
4
1
作者
李俊明
朱道银
伊正君
江山
骆旭东
机构
重庆医科大学微生物学与免疫学教研室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期151-157,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目(No.30270584)~~
文摘
为鉴定结核分枝杆菌异柠檬酸裂合梅（ICL）特异性的10-23DRz在无细胞体系切割ICL mRNA的活性，并探讨其在不同条件下以及联合应用时对靶mRNA的切割特点，采用计算机软件模拟ICL mRNA的二级结构，据此选择适合的待切割靶点并设计针对相应靶点的特异性10—23DRz（DZ1～DZ5）．PCR法扩增获得纠基因并克隆入质粒pET32a＋．采用T7 RNA聚合酶体外转录法获取ICL全长mRNA后分别用DZ1～DZ5在无细胞体系中对ICL mRNA进行切割，切割产物经变性聚丙烯酰胺凝胺电泳后用银染法鉴定各DRzs的活性．选择切割活性最强的DZ4考察不同10—23DRz剂量、不同反应时间、不同镁离子浓度条件下及不同错配或突变10—23DRz的切割特点．联合应用DZ1、DZ4及DZ5在无细胞体系中对ICL mRNA进行切割。检测10—23DRz联合应用对切割效率的影响．结果表明，DZ1、DZ3、DZ4及DZ5可在无细胞体系中有效地切割ICL mRNA，其切割效率在30．8％～64．5％之间．对DZ4切割活性的检测发现，其对靶mRNA的切割具有剂量和时间的依赖性；在2—20μmol／L范围内，DZ4的切割活性与Mg^2＋浓度呈正相关；DZ4单侧底物结合臂上含一个不与靶mRNA配对的碱基时其切割效率大大降低，两侧底物结合臂上各含一个不配对的碱基或活性中心域第6位出现碱基突变（G—C）时，DZ4完全丧失切割活性．联合应用2种或2种以上10-23DRz可显著增强对底物RNA的切割效率．10-23DRz特异、有效地切割结核分枝杆菌ICL全长mRNA并显示一定的叠加效应，有望用于抗结核分枝杆菌潜伏感染的基因治疗．
关键词
10—23脱氧核酶
结核分枝杆菌
异
柠檬酸
裂合酶
Keywords
10-23 deoxyribozyme
Mycobacterium tuberculosis
isocitrate lyase
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL的表达及鉴定
被引量：
5
2
作者
李俊明
朱道银
伊正君
骆旭东
江山
机构
重庆医科大学微生物学与免疫学教研室
出处
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2005年第1期37-40,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目 (No .3 0 2 70 5 84)
文摘
目的 表达结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL ,鉴定其生物学活性并制备其多克隆抗体。方法 采用PCR法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出icl基因片段 ,将其插入原核表达质粒pQE30 ,构建重组质粒 pQE30 icl。将pQE30 icl转化大肠杆菌 ,用IPTG诱导目的基因表达。Western blot免疫印迹法鉴定后纯化该表达产物 ,测定其酶活性并用此纯化蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结果 序列分析发现PCR扩得的icl有两个核苷酸突变 ,但均为无义突变。在大肠杆菌中表达的目的产物经SDS PAGE分析约为 4 7kDa。免疫印迹分析证实目的蛋白与阳性结核病患者抗血清产生特异性反应。纯化的目的蛋白异柠檬酸裂解酶的酶活性为 16 .7u/mg。双向免疫扩散法测定目的蛋白免疫兔血清的抗体效价为 1 32。结论 研制出的结核分枝杆菌重组ICL具有异柠檬酸裂解酶活性和抗原性 ,重组ICL和抗ICL免疫血清的制备为抗结核分枝杆菌潜伏感染的研究奠定了必要的物质基础。
关键词
结核分枝杆菌
潜伏感染
异
柠檬酸
裂合酶
(
icl
)
Keywords
Mycobacterium tuberculosis
latent infection
isocitrate lyase
分类号
R378.91 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
科学家在美国航天飞机和苏联空间站上使蛋白结晶
3
作者
王旭宁
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1990年第8期7-8,共2页
文摘
在美国哥伦比亚号航天飞机上进行蛋白质结晶试验的首要研究者说,在重力接近于零的地球轨道上形成的蛋白质晶体比地球上形成的蛋白质晶体优越得多.与此同时,美国某家公司正在苏联空间站上试用相同设备在外层空间形成结晶蛋白.
关键词
美国航天飞机
地球轨道
异
柠檬酸
裂合酶
航天飞行
美国宇航局
发射失败
轨道飞行
生长基质
树枝状结晶
棱晶
分类号
Q81 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
结核分枝杆菌ICL mRNA特异性10-23脱氧核酶切割活性的鉴定及其切割特点
李俊明
朱道银
伊正君
江山
骆旭东
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
4
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职称材料
2
结核分枝杆菌潜伏感染相关蛋白ICL的表达及鉴定
李俊明
朱道银
伊正君
骆旭东
江山
《中国人兽共患病杂志》
CSCD
北大核心
2005
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
科学家在美国航天飞机和苏联空间站上使蛋白结晶
王旭宁
《生物技术通报》
CAS
CSCD
1990
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