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猪CFTR基因特异性锌指核酸酶的筛选与鉴定
1
作者
王瑞
王令
+2 位作者
林娟
张存芳
张智英
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2012年第10期15-22,共8页
【目的】获得靶向猪囊性纤维化跨膜传导调节因子(Cystic fibrosis transmembrane conductance regu-lator,CFTR)基因的特异锌指核酸酶(Zinc finger nuclease,ZFN),为建立CFTR基因敲除猪细胞系提供技术支持。【方法】通过开源式(Oligomer...
【目的】获得靶向猪囊性纤维化跨膜传导调节因子(Cystic fibrosis transmembrane conductance regu-lator,CFTR)基因的特异锌指核酸酶(Zinc finger nuclease,ZFN),为建立CFTR基因敲除猪细胞系提供技术支持。【方法】通过开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选,首先以已知三锌指蛋白为框架,随机突变单个锌指关键位点氨基酸编码序列,建立人工三锌指蛋白随机库;然后应用细菌双杂交技术,从库中筛选出能够结合CFTR基因靶位点的三锌指蛋白;最后将获得的锌指蛋白与非限制性核酸内切酶FokⅠ组装成特异ZFN,通过酵母验证体系,检测ZFN靶向切割其识别序列的效率。【结果】获得3个人工三锌指蛋白随机库,每个库约含有2×106个单克隆,通过2轮细菌双杂交筛选,分别获得48个针对CFTR基因左右两侧靶位点的三锌指蛋白。ZFN活性验证结果表明,约90%的ZFN能够在酵母细胞内实现靶向切割,获得了高效特异的ZFN。【结论】获得了猪CFTR基因高效特异的ZFN。
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关键词
锌指核酸酶
囊性纤维化疾病
开源式方法
锌指蛋白
细菌双杂交
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职称材料
人工锌指蛋白随机库的构建及其在锌指核酸酶筛选中的应用
被引量：
3
2
作者
李战伟
王昕
+3 位作者
任刚
王令
杨涵江
张智英
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期1-10,共10页
利用开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选具有较高特异性和亲和性的锌指蛋白(Zinc finger protein,ZFP)。以已知三锌指蛋白为框架,使单个锌指关键位点氨基酸编码序列产生随机突变,构建3个人工锌指蛋白随机库,建立和完...
利用开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选具有较高特异性和亲和性的锌指蛋白(Zinc finger protein,ZFP)。以已知三锌指蛋白为框架,使单个锌指关键位点氨基酸编码序列产生随机突变,构建3个人工锌指蛋白随机库,建立和完善应用人工锌指蛋白随机库筛选特异性锌指蛋白的技术平台。以人DYRK1A基因为例,测试和验证该技术平台的可行性和效率,分别获得对DYRK1A基因靶序列中左侧和右侧位点具有较高亲和性的50个三锌指蛋白;然后将得到的锌指蛋白与非限制性核酸内切酶FokⅠ连接,构建DYRK1A锌指核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN),应用酵母验证系统测试DYRK1A锌指核酸酶的活性,结果表明,90%的组装锌指核酸酶能够在靶位点进行切割。
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关键词
开源式方法
锌指蛋白
细菌双杂交
锌指核酸酶
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职称材料
题名
猪CFTR基因特异性锌指核酸酶的筛选与鉴定
1
作者
王瑞
王令
林娟
张存芳
张智英
机构
西北农林科技大学动物科技学院陕西省农业分子生物学重点实验室
出处
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2012年第10期15-22,共8页
基金
国家"973"重大专项(2011CBA01002)
文摘
【目的】获得靶向猪囊性纤维化跨膜传导调节因子(Cystic fibrosis transmembrane conductance regu-lator,CFTR)基因的特异锌指核酸酶(Zinc finger nuclease,ZFN),为建立CFTR基因敲除猪细胞系提供技术支持。【方法】通过开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选,首先以已知三锌指蛋白为框架,随机突变单个锌指关键位点氨基酸编码序列,建立人工三锌指蛋白随机库;然后应用细菌双杂交技术,从库中筛选出能够结合CFTR基因靶位点的三锌指蛋白;最后将获得的锌指蛋白与非限制性核酸内切酶FokⅠ组装成特异ZFN,通过酵母验证体系,检测ZFN靶向切割其识别序列的效率。【结果】获得3个人工三锌指蛋白随机库,每个库约含有2×106个单克隆,通过2轮细菌双杂交筛选,分别获得48个针对CFTR基因左右两侧靶位点的三锌指蛋白。ZFN活性验证结果表明,约90%的ZFN能够在酵母细胞内实现靶向切割,获得了高效特异的ZFN。【结论】获得了猪CFTR基因高效特异的ZFN。
关键词
锌指核酸酶
囊性纤维化疾病
开源式方法
锌指蛋白
细菌双杂交
Keywords
zinc finger nucleases cystic fibrosis disease OPEN zinc finger proteins bacterial two hybrid
分类号
Q812 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
人工锌指蛋白随机库的构建及其在锌指核酸酶筛选中的应用
被引量：
3
2
作者
李战伟
王昕
任刚
王令
杨涵江
张智英
机构
西北农林科技大学动物科技学院
出处
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期1-10,共10页
基金
农业部转基因重大专项(2009ZX08010-023B)
文摘
利用开源式(Oligomerized pool engineering,OPEN)方法筛选具有较高特异性和亲和性的锌指蛋白(Zinc finger protein,ZFP)。以已知三锌指蛋白为框架,使单个锌指关键位点氨基酸编码序列产生随机突变,构建3个人工锌指蛋白随机库,建立和完善应用人工锌指蛋白随机库筛选特异性锌指蛋白的技术平台。以人DYRK1A基因为例,测试和验证该技术平台的可行性和效率,分别获得对DYRK1A基因靶序列中左侧和右侧位点具有较高亲和性的50个三锌指蛋白;然后将得到的锌指蛋白与非限制性核酸内切酶FokⅠ连接,构建DYRK1A锌指核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFN),应用酵母验证系统测试DYRK1A锌指核酸酶的活性,结果表明,90%的组装锌指核酸酶能够在靶位点进行切割。
关键词
开源式方法
锌指蛋白
细菌双杂交
锌指核酸酶
Keywords
Oligomerized pool engineering
Zinc finger protein
Bacterial two-hybrid
Zinc finger nuclease
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪CFTR基因特异性锌指核酸酶的筛选与鉴定
王瑞
王令
林娟
张存芳
张智英
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》
CSCD
北大核心
2012
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人工锌指蛋白随机库的构建及其在锌指核酸酶筛选中的应用
李战伟
王昕
任刚
王令
杨涵江
张智英
《西北农业学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
3
在线阅读
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职称材料
已选择
0
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