半滑舌鳎GAPDH基因开放读码框的克隆及序列分析 被引量：1

1

作者 陈蓉 饶颖竹 +1 位作者 梁静真 邓富琳 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第19期126-130,共5页

甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)广泛存在于真核生物中,对许多生理活动具有重要作用。参考金头鲷和斑马鱼的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因序列设计一对简并引物,提取半滑舌鳎肌肉组织总RNA,采用RT-PCR技术对GAPDH基因进行克隆测序及序列... 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)广泛存在于真核生物中,对许多生理活动具有重要作用。参考金头鲷和斑马鱼的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)基因序列设计一对简并引物,提取半滑舌鳎肌肉组织总RNA,采用RT-PCR技术对GAPDH基因进行克隆测序及序列分析。结果表明,从半滑舌鳎肌肉组织中成功克隆了GAPDH基因的开放读码框(ORF),序列全长1 002 bp,编码333个氨基酸,分子量为36.0235 ku,等电点PI为7.75。序列同源性分析显示,该序列与其他鱼类的GAPDH氨基酸序列具有较高的同源性。 展开更多

关键词 半滑舌鳎 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH) 开放读码框(orf) 克隆 序列分析

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单纯疱疹病毒2型潜伏相关转录子蛋白读码框2真核表达载体的构建及其在Vero细胞中的表达 被引量：4

2

作者 杨慧兰 赵举峰 +3 位作者 樊建勇 周翠 黄小晏 齐维 《医学研究生学报》 CAS 2008年第9期899-903,I0001,共6页

目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制。方法:以构建成功的pVAX-LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2LATO... 目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制。方法:以构建成功的pVAX-LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2LATORF2基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5′端分别引入KpnⅠ和PstⅠ酶切位点。用PCR特异性扩增LAT基因ORF2片段,PCR产物纯化回收后经KpnⅠ、PstⅠ双酶切,再次回收后产物与同样经双酶切的pcDNA 6/myc-His B质粒进行连接,Amp抗性筛选阳性重组子,双酶切及测序鉴定连接产物。在脂质体介导下瞬时转染Vero细胞,用RT-PCR及SDS-PAGE检测其在Vero细胞中的表达。结果:重组质粒经KpnⅠ和PstⅠ双酶切获得预期大小的两条片段,测序表明ORF2正确,RT-PCR及SDS-PAGE显示转染了重组质粒的Vero细胞内有目的基因及其编码蛋白的表达。结论:成功构建了ORF2-pcDNA6/myc-His B重组质粒,并可在Vero细胞内有效表达。 展开更多

关键词 单纯疱疹病毒2型 潜伏相关转录子 开放读码框 重组载体

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长链非编码RNA对免疫应答调节的研究进展 被引量：6

3

作者 安志远 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1878-1884,共7页

lncRNA是由RNA聚合酶Ⅱ转录生成,长度大于200个核苷酸的长链非编码RNA,它没有开放读码框,不能翻译成蛋白质,曾被认为是基因组中的＂暗物质＂。目前科学家们还没有精确掌握其功能信息以及全部的二维和三维结构,所以很难对lncRNA进行分类... lncRNA是由RNA聚合酶Ⅱ转录生成,长度大于200个核苷酸的长链非编码RNA,它没有开放读码框,不能翻译成蛋白质,曾被认为是基因组中的＂暗物质＂。目前科学家们还没有精确掌握其功能信息以及全部的二维和三维结构,所以很难对lncRNA进行分类,现在是通过lncRNA和蛋白编码基因的相对位置对其进行分类的。 展开更多

关键词 RNA 免疫应答调节 开放读码框 病毒复制 转录本 树突状细胞 宿主免疫 干扰素应答 固有免疫 多聚腺苷酸

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2株微孢子虫热激蛋白Hsp70的ORF研究

4

作者 马兰 李灿 《贵州农业科学》 CAS 北大核心 2013年第8期139-143,147,共6页

为探讨微孢子虫的起源、分类地位及亲缘关系,在系统发育分析的基础上,对家蚕微孢子虫(Nosema.bombycis)和柞蚕微孢子虫(N.antheraeae)Hsp70基因的ORF序列进行克隆、测序,同时将2种微孢子虫的Hsp70基因的ORF序列翻译成氨基酸序列,利用Exp... 为探讨微孢子虫的起源、分类地位及亲缘关系,在系统发育分析的基础上,对家蚕微孢子虫(Nosema.bombycis)和柞蚕微孢子虫(N.antheraeae)Hsp70基因的ORF序列进行克隆、测序,同时将2种微孢子虫的Hsp70基因的ORF序列翻译成氨基酸序列,利用Expasy蛋白质数据库的分析工具和DNAstar软件对其功能进行理论分析和预测。结果表明:家蚕微孢子虫和柞蚕微孢子虫的Hsp70氨基酸序列在N端均有一个高度保守的基序GIDLGTT,另外还有被作为线粒体Hsp70标志的2个保守的基序;氨基酸序列相似性比较结果发现,家蚕微孢子虫广东株Hsp70的蛋白氨基酸序列和家蚕微孢子虫日本株的相似性最近,约为96%。系统发育分析发现,微粒子属和变形虫属有较近的亲缘关系。功能预测表明,2种微孢子虫在信号肽剪切位点、跨膜结构域及糖基化位点、二级结构、亲水性、柔韧性等方面均存在异同。 展开更多

关键词 微孢子虫 热激蛋白70 开放读码框

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RT-nPCR检测屠宰场胆汁中猪戊型肝炎病毒 被引量：6

5

作者 张维谊 刘健 +1 位作者 鞠厚斌 周锦萍 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2009年第11期29-31,共3页

关键词 戊型肝炎病毒 PCR检测 屠宰场 中猪 胆汁 开放读码框架 virus orf2

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猪SRPK1基因的电子克隆 被引量：3

6

作者 俄广鑫 刘娣 +4 位作者 谢雨彤 祝继原 杨少成 王嘉博 赵金凤 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期101-104,共4页

用小鼠和人的SRPK1基因的编码区序列通过NCBI数据库进行比较和检索,得到一个高同源性的猪cDNA序列和4个猪SRPK1基因的ESTs。利用DNAMAN软件将以上片段进行拼接,得到了一条较长的拼接片段X-1。ORF finder和Blast 2 sequence程序分析。结... 用小鼠和人的SRPK1基因的编码区序列通过NCBI数据库进行比较和检索,得到一个高同源性的猪cDNA序列和4个猪SRPK1基因的ESTs。利用DNAMAN软件将以上片段进行拼接,得到了一条较长的拼接片段X-1。ORF finder和Blast 2 sequence程序分析。结果表明,X-1中包含一个完整的长为1 968 bp的编码区,编码656个氨基酸,且此编码区DNA序列与人的SRPK1基因有91.73%的一致性,氨基酸序列的一致性为92.93%。 展开更多

关键词 SRPK1 生物信息学 电子克隆 开放读码框查找

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黑麦草抗冻蛋白基因的cDNA克隆及序列分析 被引量：3

7

作者 邓顺阳 张党权 +5 位作者 樊绍刚 谷振军 黄青云 明付焕 祝全东 郭林林 《中南林业科技大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期18-22,共5页

对多年生黑麦草进行冷胁迫处理后,提取叶片总RNA,采用RT-PCR法获得了LpAFP成熟蛋白的cDNA克隆。序列分析结果表明,该成熟蛋白的开放读码框(ORF)长度为357 bp,编码一条由118个氨基酸组成的多肽。生物信息学分析结果表明,黑麦草成熟抗冻... 对多年生黑麦草进行冷胁迫处理后,提取叶片总RNA,采用RT-PCR法获得了LpAFP成熟蛋白的cDNA克隆。序列分析结果表明,该成熟蛋白的开放读码框(ORF)长度为357 bp,编码一条由118个氨基酸组成的多肽。生物信息学分析结果表明,黑麦草成熟抗冻蛋白与其他植物抗冻蛋白的同源性较低,与鱼类抗冻蛋白和昆虫抗冻蛋白则没有同源性。 展开更多

关键词 生物技术 黑麦草 抗冻蛋白 CDNA克隆 开放读码框 生物信息学

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登革热的实验室诊断 被引量：8

8

作者 赵慧 秦成峰 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第19期3466-3468,共3页

登革病毒是一种重要的虫媒病毒,主要通过白纹伊蚊和埃及伊蚊叮咬传播,其基因组为单股正链RNA,含单一的开放读码框依次编码3种结构蛋白（C、prM和E）和7种非结构蛋白（NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5）。

关键词 实验室诊断 登革热 单股正链RNA 非结构蛋白 开放读码框 虫媒病毒 登革病毒 埃及伊蚊

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鸡痘病毒282E_4株基因组末端非必需区的序列测定与分析

9

作者 金宁一 司兴奎 +3 位作者 顾万钧 郭志儒 罗坤石 毅殷震 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1999年第9期46-51,共6页

将鸡痘病毒（ｆｏｗｌｐｏｘ ｖｉｒｕｓ， ＦＰＶ）２８２Ｅ４ 株７３ｋｂ 的Ｂａｍ ＨＩ片段经亚克隆后，获得ｐＵＦａ、ｐＫＳＦｂ、ｐＵＦｃ和ｐＵＦｄ 四个重组策粒。采用ＡＢＩ３７７ＤＮＡ测序仪荧光标记法对上述质粒进行了序... 将鸡痘病毒（ｆｏｗｌｐｏｘ ｖｉｒｕｓ， ＦＰＶ）２８２Ｅ４ 株７３ｋｂ 的Ｂａｍ ＨＩ片段经亚克隆后，获得ｐＵＦａ、ｐＫＳＦｂ、ｐＵＦｃ和ｐＵＦｄ 四个重组策粒。采用ＡＢＩ３７７ＤＮＡ测序仪荧光标记法对上述质粒进行了序列测定， 并应用ＤＮＡｓｉｓ Ｖ７０ 同ＧｅｎＢａｎｋ 中已知的ＦＰＶ序列和痘苗病毒（ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｒｕｓ， ＶＶ） 的Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ 株的全序列进行同源性比较。此外， 对所测序列的开放读码框架（ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍ ｅｓ，ＯＲＦ） 的氨基酸序列同上述ＶＶ株中所有ＯＲＦ的氨基酸序列进行了同源性比较，并对各ＯＲＦ编码蛋白的疏水性、等电点。 展开更多

关键词 鸡痘病毒 序列分析 开放读码框架 FPV orf

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A型流感病毒PB1-F2研究进展

10

作者 赵朴 郑玉姝 +2 位作者 贾贝贝 刘兴友 李海燕 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期670-671,共2页

关键词 A型流感病毒 组织相容性复合体I类分子 LYMPHOCYTE 细胞毒T淋巴细胞 开放读码框 抗原肽 细胞表面 病毒感染

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小反刍兽疫病毒H蛋白原核表达的研究

11

作者 赵文华 杨仕标 +2 位作者 宋建领 李华春 张念祖 《中国动物保健》 2009年第7期38-40,共3页

小反刍兽疫病毒属副粘病毒科麻疹病毒属,为一不分节段的负链RNA病毒。本研究以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据Gen Bank下载的序列及载体的需要设计其主要的抗原基因H基因的编码序列的RT-PCR扩增引物;然后将扩增基... 小反刍兽疫病毒属副粘病毒科麻疹病毒属,为一不分节段的负链RNA病毒。本研究以灭活的检测用抗原为材料,抽提基因组RNA作为模板,根据Gen Bank下载的序列及载体的需要设计其主要的抗原基因H基因的编码序列的RT-PCR扩增引物;然后将扩增基因片段与T载体连接克隆测序,再与原核表达载体pET100/D-TOPO连接、诱导表达。结果显示所设计引物对模板有预期扩增,序列测定表明为正确片段;片段经纯化与表达载体连接,已挑到阳性克隆。H基因的表达菌经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳,结果显示:H基因有预期分子量大小的蛋白表达;用Anti-His抗体已检测到相应融合蛋白的表达,其原核表达的相应蛋白抗原性状况正在试验研究中,表达产物具有潜在的诊断抗原和免疫原价值。 展开更多

关键词 小反刍兽疫病毒 开放性读码框 H基因 H蛋白 原核表达

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