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DAPK1基因开放读码序列的克隆、序列分析及诱导Raji细胞凋亡
被引量：
9
1
作者
张海涛
朱振宇
+4 位作者
吉琼梅
李秀英
李民友
马涧泉
梁念慈
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期88-93,共6页
目的 :探讨死亡相关蛋白激酶 (DAPK1)在肿瘤的形成、转移中所起作用 ,克隆DAPK1基因的开放读码序列 (ORF)。方法 :根据GenBank提供的核苷酸序列 ,自行设计引物 ,用RT -PCR从K562细胞中扩增DAPK1基因的ORF ;用质脂体将pcDNA3 1(+ ) -DA...
目的 :探讨死亡相关蛋白激酶 (DAPK1)在肿瘤的形成、转移中所起作用 ,克隆DAPK1基因的开放读码序列 (ORF)。方法 :根据GenBank提供的核苷酸序列 ,自行设计引物 ,用RT -PCR从K562细胞中扩增DAPK1基因的ORF ;用质脂体将pcDNA3 1(+ ) -DAPK1转染到Raji细胞 ,Hoechst 3 3 2 58染色观察细胞凋亡 ,MTT法观察DAPK1基因对细胞生存的影响。结果 :DAPK1基因的ORF克隆到质粒pMD18-T ,测序鉴定 ;分析结果显示 ,从K562细胞成功扩增 43 0 0bp的DAPK1基因ORF有 7处突变 ,其中 6处是同义突变 ,1处是基因的单链核苷酸多态性 ;DAPK1基因的ORF克隆到真核表达载体pcDNA3 1(+ ) ,转化到Raji细胞 ;转染 48h后 ,可以检测到DAPK1的表达 ,并可以观察到细胞发生凋亡。结论 :大片段的基因可以采用RT -PCR法直接克隆 ,采用常规的转染技术可以将大片段基因转染到宿主细胞 ;成功克隆具有活性功能DAPK1基因ORF 。
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关键词
死亡相关蛋白激酶
细胞凋亡
甲基化
RAJI细胞
K562细胞
DAPKl基因
开放读码序列
基因克隆
序列
分析
抑癌基因
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题名
DAPK1基因开放读码序列的克隆、序列分析及诱导Raji细胞凋亡
被引量：
9
1
作者
张海涛
朱振宇
吉琼梅
李秀英
李民友
马涧泉
梁念慈
机构
中山大学中山医学院生化教研室
广东医学院生化教研室
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第1期88-93,共6页
基金
国家教委留学回国人员启动基金资助项目[2 0 0 0 ] 4 79
文摘
目的 :探讨死亡相关蛋白激酶 (DAPK1)在肿瘤的形成、转移中所起作用 ,克隆DAPK1基因的开放读码序列 (ORF)。方法 :根据GenBank提供的核苷酸序列 ,自行设计引物 ,用RT -PCR从K562细胞中扩增DAPK1基因的ORF ;用质脂体将pcDNA3 1(+ ) -DAPK1转染到Raji细胞 ,Hoechst 3 3 2 58染色观察细胞凋亡 ,MTT法观察DAPK1基因对细胞生存的影响。结果 :DAPK1基因的ORF克隆到质粒pMD18-T ,测序鉴定 ;分析结果显示 ,从K562细胞成功扩增 43 0 0bp的DAPK1基因ORF有 7处突变 ,其中 6处是同义突变 ,1处是基因的单链核苷酸多态性 ;DAPK1基因的ORF克隆到真核表达载体pcDNA3 1(+ ) ,转化到Raji细胞 ;转染 48h后 ,可以检测到DAPK1的表达 ,并可以观察到细胞发生凋亡。结论 :大片段的基因可以采用RT -PCR法直接克隆 ,采用常规的转染技术可以将大片段基因转染到宿主细胞 ;成功克隆具有活性功能DAPK1基因ORF 。
关键词
死亡相关蛋白激酶
细胞凋亡
甲基化
RAJI细胞
K562细胞
DAPKl基因
开放读码序列
基因克隆
序列
分析
抑癌基因
Keywords
Death associated protein kinase
Apoptosis
M ethylation
Raji cells
K562 cells
分类号
R394 [医药卫生—医学遗传学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
DAPK1基因开放读码序列的克隆、序列分析及诱导Raji细胞凋亡
张海涛
朱振宇
吉琼梅
李秀英
李民友
马涧泉
梁念慈
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
9
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