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基于序列特异扩增区域标记的栗疫菌巢式PCR检测技术
被引量：
3
1
作者
麻文建
郑磊
+2 位作者
张静
刘洋
朱天辉
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期25-33,共9页
为建立栗疫菌(Cryphonectria parasitica)快速、准确的检测技术,利用随机扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对不同来源地的栗疫菌和其他真菌分离物进行PCR扩增,筛选出栗疫菌的RAPD特异片段SCQ494。将特异RAPD片...
为建立栗疫菌(Cryphonectria parasitica)快速、准确的检测技术,利用随机扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对不同来源地的栗疫菌和其他真菌分离物进行PCR扩增,筛选出栗疫菌的RAPD特异片段SCQ494。将特异RAPD片段SCQ494进行分离、回收,与载体pMD19-T载体连接,转化至大肠埃希菌进行培养,对目标片段克隆测序。根据测序结果,用Primer 5.0软件设计了序列特异扩增区域(sequence characterized amplified region,SCAR)引物CQ1/CQ2和巢式PCR引物CR1/CR2。利用引物CQ1/CQ2通过常规PCR对不同来源地供试栗疫菌可扩增出1条约1 420bp的条带,对其他供试菌株DNA的PCR产物均无此条带,检测灵敏度为3pg/μL的基因组DNA;而以引物CQ1/CQ2为外圈引物和引物CR1/CR2为内圈引物进行的巢式PCR可从栗疫菌基因组DNA中扩增出1条大小约875bp的条带,灵敏度达到30fg/μL,是常规PCR的1000倍。验证实验表明巢式PCR可以从发病程度不同的栗树枝干和在自然感染的栗树枝条中检测出栗疫菌。
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关键词
栗疫菌
随机
扩
增
多态性DNA技术
序列特异扩增区域
巢式PCR
分子检测
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职称材料
利用小麦SSR标记追踪大赖草染色体Lr.2、Lr.7、Lr.14及其片段
被引量：
3
2
作者
吴彬
周波
陈佩度
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第3期1-6,共6页
定位于小麦 7个部分同源群上的 337对SSR引物中有 113对SSR引物可检测到大赖草与普通小麦基因组间多态性 ,对小麦大赖草Lr 2、Lr 7和Lr 14的异附加系和易位系的进一步分析表明 ,小麦 7BL上的SSR引物 gwm112在大赖草染色体Lr 2上具有特...
定位于小麦 7个部分同源群上的 337对SSR引物中有 113对SSR引物可检测到大赖草与普通小麦基因组间多态性 ,对小麦大赖草Lr 2、Lr 7和Lr 14的异附加系和易位系的进一步分析表明 ,小麦 7BL上的SSR引物 gwm112在大赖草染色体Lr 2上具有特异扩增位点 ,可用来追踪Lr 2 ;5AS上的SSR引物 gwm2 0 5、 5AL的 gwm15 6和 5DL上的gwm2 12在Lr 7和Lr 14中均有特异扩增产物 ,可用于追踪Lr 7和Lr 14 ;而 7AL上的SSR引物 gwm6 3仅在大赖草染色体Lr 7上具有扩增位点。这不仅揭示了Lr 7可能存在第 5和第 7部分同源群染色体重排 ,而且也表明将引物gwm2 0 5、gwm15 6、gwm2 12与 gwm6 3相结合可分别追踪大赖草Lr 7和Lr 14染色体及其片段。利用这些SSR引物可追踪同一植株中不同的大赖草染色体 ;与簇毛麦染色体 6V上的SCAR标记相结合 。
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关键词
小麦
大赖草
簇毛麦
简单重复
序列
特异
序列
扩
增
区域
标记
染色体
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职称材料
题名
基于序列特异扩增区域标记的栗疫菌巢式PCR检测技术
被引量：
3
1
作者
麻文建
郑磊
张静
刘洋
朱天辉
机构
四川农业大学林学院
出处
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期25-33,共9页
基金
教育部博士点基金资助项目(00329701)
文摘
为建立栗疫菌(Cryphonectria parasitica)快速、准确的检测技术,利用随机扩增多态性DNA技术(random amplified polymorphic DNA,RAPD)对不同来源地的栗疫菌和其他真菌分离物进行PCR扩增,筛选出栗疫菌的RAPD特异片段SCQ494。将特异RAPD片段SCQ494进行分离、回收,与载体pMD19-T载体连接,转化至大肠埃希菌进行培养,对目标片段克隆测序。根据测序结果,用Primer 5.0软件设计了序列特异扩增区域(sequence characterized amplified region,SCAR)引物CQ1/CQ2和巢式PCR引物CR1/CR2。利用引物CQ1/CQ2通过常规PCR对不同来源地供试栗疫菌可扩增出1条约1 420bp的条带,对其他供试菌株DNA的PCR产物均无此条带,检测灵敏度为3pg/μL的基因组DNA;而以引物CQ1/CQ2为外圈引物和引物CR1/CR2为内圈引物进行的巢式PCR可从栗疫菌基因组DNA中扩增出1条大小约875bp的条带,灵敏度达到30fg/μL,是常规PCR的1000倍。验证实验表明巢式PCR可以从发病程度不同的栗树枝干和在自然感染的栗树枝条中检测出栗疫菌。
关键词
栗疫菌
随机
扩
增
多态性DNA技术
序列特异扩增区域
巢式PCR
分子检测
Keywords
Cryphonectria parasitica
random amplified polymorphic DNA （RAPD）
sequence characterizedamplified region （SCAR）
nested-PCR
molecular detection
分类号
Q939.95 [生物学—微生物学]
S432.44 [农业科学—植物病理学]
在线阅读
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职称材料
题名
利用小麦SSR标记追踪大赖草染色体Lr.2、Lr.7、Lr.14及其片段
被引量：
3
2
作者
吴彬
周波
陈佩度
机构
南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室
出处
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第3期1-6,共6页
基金
国家高技术研究发展计划 (863 )项目 (2 0 0 1AA2 110 5 1)
国家自然科学基金项目(3 0 2 70 82 7)
美国McKnight基金作物研究计划项目资助
文摘
定位于小麦 7个部分同源群上的 337对SSR引物中有 113对SSR引物可检测到大赖草与普通小麦基因组间多态性 ,对小麦大赖草Lr 2、Lr 7和Lr 14的异附加系和易位系的进一步分析表明 ,小麦 7BL上的SSR引物 gwm112在大赖草染色体Lr 2上具有特异扩增位点 ,可用来追踪Lr 2 ;5AS上的SSR引物 gwm2 0 5、 5AL的 gwm15 6和 5DL上的gwm2 12在Lr 7和Lr 14中均有特异扩增产物 ,可用于追踪Lr 7和Lr 14 ;而 7AL上的SSR引物 gwm6 3仅在大赖草染色体Lr 7上具有扩增位点。这不仅揭示了Lr 7可能存在第 5和第 7部分同源群染色体重排 ,而且也表明将引物gwm2 0 5、gwm15 6、gwm2 12与 gwm6 3相结合可分别追踪大赖草Lr 7和Lr 14染色体及其片段。利用这些SSR引物可追踪同一植株中不同的大赖草染色体 ;与簇毛麦染色体 6V上的SCAR标记相结合 。
关键词
小麦
大赖草
簇毛麦
简单重复
序列
特异
序列
扩
增
区域
标记
染色体
Keywords
T.aestivum
L.racemosus
Haynaldia villosa
simple sequence repeat(SSR)
sequence characterized amplification region(SCAR)
分类号
S512 [农业科学—作物学]
Q74 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于序列特异扩增区域标记的栗疫菌巢式PCR检测技术
麻文建
郑磊
张静
刘洋
朱天辉
《浙江大学学报（农业与生命科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2015
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
利用小麦SSR标记追踪大赖草染色体Lr.2、Lr.7、Lr.14及其片段
吴彬
周波
陈佩度
《南京农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2004
3
在线阅读
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职称材料
已选择
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