无精子症患者Y染色体序列标签位点-聚合酶链反应与二代测序检测的比较 被引量：1

1

作者 张帆 刘永杰 代良 《临床检验杂志》 CAS 2021年第5期350-353,共4页

目的观察无精子症患者Y染色体序列标签位点-聚合酶链反应(STS-PCR)与二代测序(NGS)检测的差异。方法对133例无精子症患者,采用STS-PCR检测Y染色体AZF微缺失的15个STS位点,包括AZF a区的sY84/sY86、AZF b区的sY124/sY127/sY128/sY133/sY1... 目的观察无精子症患者Y染色体序列标签位点-聚合酶链反应(STS-PCR)与二代测序(NGS)检测的差异。方法对133例无精子症患者,采用STS-PCR检测Y染色体AZF微缺失的15个STS位点,包括AZF a区的sY84/sY86、AZF b区的sY124/sY127/sY128/sY133/sY134/sY143/sY1192、AZF c区的sY152/sY239/sY242/sY254/sY255、AZF b/c区的sY145,同时采用NGS检测Y染色体基因组拷贝数变异(CNVs),并统计分析两种检测方法的差异。结果133例无精子症患者中,Y染色体AZF微缺失异常17例(12.78%),其中缺失14个STS 1例,占5.88%;缺失12个STS 3例,占17.65%;缺失11个STS 1例,占5.88%;缺失6个STS 1例,占5.88%;缺失5个STS 1例,占5.88%;缺失4个STS 2例,占11.76%;缺失2个STS 1例,占5.88%;缺失1个STS 7例,占41.18%。Y染色体CNVs异常12例(9.02%),其中既重复又缺失3例,占25%;重复(dup)4例,占33.33%;缺失(del)5例,占41.67%。Y染色体AZF(15个STS)微缺失的结果与CNVs缺失结果相比,差异有统计学意义(P<0.05),而Y染色体AZF(经典6个STS)微缺失的结果与CNVs缺失结果相比,差异无统计学意义(P=0.357)。结论STS-PCR和NGS互有补充,前者不能检测出重复,后者可能漏检小片段缺失。在无精子症遗传因素的实验室检查中,可以考虑采用NGS作为筛选,而采用STS-PCR作为验证。 展开更多

关键词 序列标签位点-聚合酶链反应 二代测序 无精子因子 拷贝数变异 Y染色体

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创造酶切位点PCR-RFLP检测PON2(rs12026)基因多态性 被引量：2

2

作者 王威 姚武 +4 位作者 周舫 李春阳 燕贞 吴拥军 吴逸明 《河南医学研究》 CAS 2010年第3期278-280,共3页

目的:建立简便易用的PON2基因单核苷酸多态(rs12026)的检测方法。方法:应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP技术判断PON2基因SNP位点多态性。结果:设计一对特异引物并PCR扩增含PON2多态位点的DNA片段,根据限制性内切酶BsmAI酶切... 目的:建立简便易用的PON2基因单核苷酸多态(rs12026)的检测方法。方法:应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP技术判断PON2基因SNP位点多态性。结果:设计一对特异引物并PCR扩增含PON2多态位点的DNA片段,根据限制性内切酶BsmAI酶切结果判断PON2位点多态性,PCR和酶切效果均较好。结论:应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的PON2多态位点的检测方法具备简便、经济、快速的特点。 展开更多

关键词 创造酶切位点 聚合酶链反应-限制性酶切片段多态性 单核苷酸多态性 PON2 引物设计

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创造酶切位点与PCR-RFLP原理在基因多态检测中的应用探讨

3

作者 孙东杰 岳馨培 +2 位作者 师乐 孙成林 王威 《河南医学研究》 CAS 2011年第3期267-268,共2页

目的:探讨创造酶切位点与PCR-RFLP原理在基因多态检测中的应用及其注意事项。方法:应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP技术判断多个基因多态性。结果:共对MGMT、ADH2、MTH-FR和PON2基因多种多态位点进行了实验研究,均成功完成... 目的:探讨创造酶切位点与PCR-RFLP原理在基因多态检测中的应用及其注意事项。方法:应用创造酶切位点原理设计引物,通过PCR-RFLP技术判断多个基因多态性。结果:共对MGMT、ADH2、MTH-FR和PON2基因多种多态位点进行了实验研究,均成功完成检测。结论:应用创造酶切位点PCR-RFLP原理建立的检测方法具备简便、经济、快速的特点,适宜推广应用。 展开更多

关键词 创造酶切位点 聚合酶链反应-限制性酶切片段多态性 单核苷酸多态性 MTHFR 引物设计

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靶序列富集多重PCR-液相芯片联合检测4种常见呼吸道病毒的初步应用 被引量：7

4

作者 王洁 王卫萍 +4 位作者 胡毓安 孙宁 杨波 夏正坤 李晓军 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2016年第9期958-963,共6页

目的呼吸道病毒是引起婴幼儿呼吸道感染的最主要病原体,为快速准确诊断其感染,文中建立一种基于液相芯片系统的4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法,为有效防控其发生和流行提供有力手段。方法采集南京总医院儿科就诊的有急性呼吸道感染... 目的呼吸道病毒是引起婴幼儿呼吸道感染的最主要病原体,为快速准确诊断其感染,文中建立一种基于液相芯片系统的4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法,为有效防控其发生和流行提供有力手段。方法采集南京总医院儿科就诊的有急性呼吸道感染症状的患儿咽拭子标本120例及30例正常对照标本,分别纳入患儿组和对照组。针对A型流感病毒(Flu A)、B型流感病毒(Flu B)、呼吸道合胞病毒A型(RSVA)和B型(RSVB)的保守区序列分别设计并合成了特异性引物、探针和通用引物,构建4种病原体阳性参比品,通过对扩增和杂交条件的优化,建立了靶序列富集多重PCR(Tem-PCR)和Luminex液相芯片(x MAP)技术相结合的检测系统,并对该检测系统进行了特异性、灵敏度评价。收集以急性上呼吸道感染为主要表现的患儿咽拭子标本,用上述建立的方法进行检测分析,分别与单病毒基因荧光定量PCR检测方法及x TAG液相芯片法进行比对检测。结果建立了Flu A、Flu B、RSVA和RSVB4种呼吸道病毒的特异性快速分子检测方法且灵敏度可达10拷贝/μL。用快速分子检测方法和单病毒基因荧光定量PCR法对120例疑似患儿咽拭子标本进行检测,快速法阳性检出率为31.7%(38/120),荧光定量法阳性检出率为29.2%(35/120)。经一致性检验分析提示2种方法一致性较强(k>0.7)。部分标本同时采用x TAG液相芯片试剂盒进行检测,经一致性检验分析提示2种方法一致性较好(k>0.6)。结论临床的初步应用证实了4种常见呼吸道病毒快速分子检测方法具备灵敏、特异、快速等优点,为临床早期、准确判断呼吸道感染的病原体提供实验依据。 展开更多

关键词 呼吸道病毒 靶序列富集多重-聚合酶链反应 液相芯片技术[

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浙江省嘉兴地区多重耐药肺炎克雷伯菌β-内酰胺酶编码基因分子生物学研究 被引量：1

5

作者 俞云松 吕芳芳 +3 位作者 宋秀兰 陈亚岗 周伟琳 马亦林 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2002年第6期457-460,共4页

目的 :确定浙江省嘉兴地区临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌 E3株所产β-内酰胺酶编码基因序列及亚型。方法 :肺炎克雷伯菌 E3株经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为产 ESBL s细菌 ,PCR扩增其β-内酰胺酶编码基因片段 ,克隆后双脱氧链终止... 目的 :确定浙江省嘉兴地区临床分离的多重耐药肺炎克雷伯菌 E3株所产β-内酰胺酶编码基因序列及亚型。方法 :肺炎克雷伯菌 E3株经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为产 ESBL s细菌 ,PCR扩增其β-内酰胺酶编码基因片段 ,克隆后双脱氧链终止法测定核苷酸序列并确定亚型 ,重组细菌表型鉴定。结果 :E3株同时产 SHV和TEM型两种β-内酰胺酶 ,其中 SHV基因片段含 812个核苷酸 ,编码 2 6 6个氨基酸 ,为 SHV- 11型β-内酰胺酶 ;TEM基因片段含 973个核苷酸 ,编码 2 88个氨基酸 ,为 TEM- 1型β-内酰胺酶。含 TEM- 1和 SHV- 11编码基因的重组细菌经酶抑制剂增强的肉汤稀释法鉴定为阴性。结论 :E3株肺炎克雷伯菌同时产生 SHV- 11和 TEM- 1两种广谱β-内酰胺酶 ,广谱β-内酰胺酶的种类和数量可影响 ESBL 展开更多

关键词 肺炎克雷伯氏菌 酶学 Β-内酰胺酶类 遗传学 超广谱Β-内酰胺酶 聚合酶链反应 序列分析

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藏羊IFN-γ基因的扩增、序列分析及蛋白结构预测 被引量：1

6

作者 张晓芬 冶贵生 +1 位作者 文熙萍 祁秀清 《动物医学进展》 北大核心 2016年第11期8-13,共6页

为了研究藏羊IFN-γ基因的功能,提取藏羊脾脏总RNA,通过RT-PCR扩增藏羊IFN-γ基因并测序,应用DNA Star软件进行序列分析及编码蛋白结构预测。结果表明,藏羊IFN-γ基因长度为429bp,其中腺嘌呤和胸腺嘧啶含量较高,该基因编码143个氨基酸,... 为了研究藏羊IFN-γ基因的功能,提取藏羊脾脏总RNA,通过RT-PCR扩增藏羊IFN-γ基因并测序,应用DNA Star软件进行序列分析及编码蛋白结构预测。结果表明,藏羊IFN-γ基因长度为429bp,其中腺嘌呤和胸腺嘧啶含量较高,该基因编码143个氨基酸,其中疏水性氨基酸和亲水性氨基酸的含量较高。藏羊IFN-γ基因与参考绵羊、山羊、藏羚羊和牛IFN-γ基因的核苷酸序列同源性依次为100%、99.3%、99.1%和97.2%,氨基酸序列同源性依次为100%、99.3%、99.3%和95.8%。IFN-γ蛋白主要由α螺旋组成,亲水性较高,含有5种蛋白质功能位点,分别为1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点、1个酰胺化位点、2个N-糖基化位点、2个cAMP和cGMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点和3个蛋白激酶C磷酸化位点。 展开更多

关键词 藏羊 IFN-Γ基因 反转录-聚合酶链反应 序列分析 蛋白结构预测

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上海地区汉族健康人群PAF乙酰水解酶基因4号外显子275位点G/A单核苷酸多态性

7

作者 夏天保 毕新岭 +2 位作者 缪明永 顾军 李素玲 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期263-265,共3页

目的了解血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)基因4号外显子275位点G/A位点单核苷酸多态性(SNP)在中国上海地区汉族健康人群中的分布及与其他种族比较的特点。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,对100名上海地区... 目的了解血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)基因4号外显子275位点G/A位点单核苷酸多态性(SNP)在中国上海地区汉族健康人群中的分布及与其他种族比较的特点。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法,对100名上海地区汉族健康者PAF-AH4号外显子275位点G/A位点的SNP进行了检测,计算其基因型和等位基因频率,并结合文献进行了不同种族间的分析比较。结果上海地区汉族健康人群GG基因型频率最高(88%),GA基因型次之(12%),未发现AA基因型。与英国人相比,上海地区汉族人群G等位基因频率较高。结论上海地区汉族健康人群G→A位点碱基突变率较低,其SNP与英国人相比分布存在明显差异。 展开更多

关键词 汉族健康人群 上海地区 外显子 聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 水解酶基因 位点 单核苷酸多态性(SNP) 血小板活化因子乙酰水解酶 PAF 等位基因频率 基因型频率 AA基因型 分析比较 汉族人群 英国人 健康者 未发现 突变率

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山乌桕叶片DNA提取及ISSR-PCR反应体系优化 被引量：9

8

作者 黄旭萍 黄一航 +3 位作者 黄敏 王建超 陈孝丑 陈发兴 《森林与环境学报》 CSCD 北大核心 2021年第2期164-171,共8页

为研究南方优良乡土彩叶树种山乌桕的遗传多样性,并为山乌桕种质培育研究提供技术参考。以山乌桕叶片为试验材料,对山乌桕ISSR-PCR反应体系进行优化,比较试剂盒法、改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和十二烷基硫酸钠(SDS)法对山乌桕叶... 为研究南方优良乡土彩叶树种山乌桕的遗传多样性,并为山乌桕种质培育研究提供技术参考。以山乌桕叶片为试验材料,对山乌桕ISSR-PCR反应体系进行优化,比较试剂盒法、改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和十二烷基硫酸钠(SDS)法对山乌桕叶片DNA的提取效果,并利用单因素试验和L 25(53)正交试验对DNA模板用量、引物浓度、2×Taq Master Mix添加量、退火温度和循环次数进行优化。结果表明,试剂盒法和改良CTAB法均可获得较高浓度和质量的DNA,都是提取山乌桕叶片DNA的良好方法;山乌桕叶片ISSR-PCR反应体系中,DNA模板用量对扩增效果影响最大,2×Taq Master Mix添加量的影响最小;山乌桕叶片ISSR-PCR的最优反应体系为:总体积20μL,其中含20 ng DNA模板1.5μL、2×Taq Master Mix 8.0μL、引物浓度0.8μmol·L^(-1)。山乌桕叶片ISSR-PCR的反应程序为:94℃预变性5 min、94℃变性30 s、51.9℃退火45 s、72℃延伸90 s、40个循环,72℃延伸10 min、4℃保存。 展开更多

关键词 山乌桕 DNA提取 简单重复序列区间-聚合酶链式扩增反应 体系优化

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虻虫的PCR-RFLP鉴别研究 被引量：6

9

作者 蒋超 李军德 +2 位作者 袁媛 金艳 赵玉洋 《中国现代中药》 CAS 2017年第1期16-20,共5页

目的:建立简单、准确的虻虫DNA分子标记鉴别方法。方法:扩增并分析虻虫及7种常见伪品的细胞色素C氧化酶I亚基基因(CO I)序列,根据差异片段设计聚合酶链反应-限制性内切酶酶切长度多态性(PCR-RFLP)引物,使用限制性内切酶进行酶切鉴别。结... 目的:建立简单、准确的虻虫DNA分子标记鉴别方法。方法:扩增并分析虻虫及7种常见伪品的细胞色素C氧化酶I亚基基因(CO I)序列,根据差异片段设计聚合酶链反应-限制性内切酶酶切长度多态性(PCR-RFLP)引物,使用限制性内切酶进行酶切鉴别。结果:引物对Meng Chong-Dig.F/Meng Chong-Dig.R可扩增虻虫及其伪品CO I序列,产生约490 bp条带,限制性内切酶Dra I可以识别虻虫及其伪品的差异序列,仅虻虫的CO I片段可被酶切形成两个片段,从而特异性鉴别是否为虻虫。结论:本实验建立的PCR-RFLP可以作为虻虫的DNA鉴定方法。 展开更多

关键词 虻虫 聚合酶链反应-限制性内切酶酶切长度多态性 分子鉴定 CO I序列

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南昌地区多重耐药肺炎链球菌的分子分型 被引量：2

10

作者 胡晓彦 桂炳东 +3 位作者 王伶 胡龙华 贾坤如 章白苓 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期434-436,共3页

目的了解南昌地区多重耐药肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,SP)的分子流行病学特征。方法收集南昌地区3家教学医院临床分离的SP 66株,用盒式聚合酶链反应(BOX-PCR)对23株临床分离的SP进行基因分析;用多位点序列分型(multilocus sequ... 目的了解南昌地区多重耐药肺炎链球菌(Streptococcus pneumonia,SP)的分子流行病学特征。方法收集南昌地区3家教学医院临床分离的SP 66株,用盒式聚合酶链反应(BOX-PCR)对23株临床分离的SP进行基因分析;用多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)对其中7株多重耐药SP进行分子遗传学分析,了解其与国际流行株关系。结果 23株SP用BOX-PCR检测共分为11型,15个亚型。7株多重耐药SP MLST分型共检出7种序列型,分别为ST320、ST236、ST983、ST790、ST5747、ST5748、ST5749,其中ST5747、ST5748、ST5749为国际上首次发现。结论南昌地区多重耐药SP增加是由于耐药克隆株的播散,主要克隆株来自国际流行克隆CC236(Taiwan19F-14 Clone)的传播。 展开更多

关键词 肺炎链球菌 多重耐药 多位点序列分型 盒式聚合酶链反应

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乙型脑炎病毒SA14-14-2株prM基因的克隆与测序 被引量：1

11

作者 王祥 陈焕春 +3 位作者 何启盖 吴斌 贾杏林 吴美洲 《动物医学进展》 CSCD 2003年第1期87-89,共3页

以我国乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2的基因组RNA为模板,设计1对包含prM基因完整编码区的引物,采用一步法RT-PCR技术扩增其prM基因,扩增出大小约558bp特异性带。将其克隆到pMD18-T载体中,用双脱氧末端终止法进行全序列测定,序列分析表明... 以我国乙型脑炎病毒疫苗株SA14-14-2的基因组RNA为模板,设计1对包含prM基因完整编码区的引物,采用一步法RT-PCR技术扩增其prM基因,扩增出大小约558bp特异性带。将其克隆到pMD18-T载体中,用双脱氧末端终止法进行全序列测定,序列分析表明我国疫苗株SA14-14-2的prM基因核苷酸序列与GenBank收录的完全一致。prM基因的获得为进一步研究该基因的免疫原性以及乙型脑炎病毒基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 乙型脑炎 乙型脑炎病毒 SAl4-14-2株 prM基因 基因克隆 序列分析 反转录-聚合酶链反应

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广东汉族SLE患者HLA-DR、DQ、DP基因多态性研究 被引量：2

12

作者 禤国维 范瑞强 +2 位作者 吴元胜 陈红 查旭山 《岭南皮肤性病科杂志》 2003年第4期225-228,共4页

目的 :研究广东汉族SLE患者与HLA -DQ、DR、DP的相关性。方法 :采用聚合酶链反应一序列特异性引物 (PCR -SSP)技术 ,对 48例广东籍汉族SLE患者和 1 0 2例健康对照者静脉血样本HLA -DQ、DR、DP等位基因多态性进行研究。结果 :SLE患者DQA1... 目的 :研究广东汉族SLE患者与HLA -DQ、DR、DP的相关性。方法 :采用聚合酶链反应一序列特异性引物 (PCR -SSP)技术 ,对 48例广东籍汉族SLE患者和 1 0 2例健康对照者静脉血样本HLA -DQ、DR、DP等位基因多态性进行研究。结果 :SLE患者DQA1 0 1 0 1等位基因频率显著升高 (RR =8 1 2 ,P =0 0 0 4) ,DQA1 0 3 0 2的明显低于正常组 (RR =0 0 9,P =0 0 0 5 )。DQB1 0 3 0 1基因频率明显低于正常组 ,两者比较有显著性差异 (P <0 0 1 )。SLE患者DR3 (DRB1 0 3 0 1 -DRB1 0 3 0 2 )基因频率显著高于正常组 ( χ2 =1 4 2 4,P <0 0 1 ,RR =2 0 2 0 ) ;DRw5 2 (DRB3 0 1 0 1 -DRB3 0 3 0 1 )基因频率显著高于正常组 ( χ2 =2 0 3 46,P <0 0 1 ) ;DRW1 4:DRB1 1 40 2 ,DRB1 1 40 3基因频率也显著高于正常组 (P <0 0 5 ) ;DR4(DRB1 0 40 1 -DRB1 0 41 1 )基因频率明显低于正常组 (P <0 0 1 ) ,DR9(DRB1 0 90 1 ) ,DRw1 1(DRB1 1 1 0 1 -DRB1 1 1 0 4)基因频率也显著低于正常组 (P <0 0 1 ) ,DPA1 0 2 0 2等位基因频率显著高于正常组 ( χ2 =4 1 2 4,P <0 0 5 ,RR =3 5 4) ,SLE患者DPA1 0 2 0 1等位基因频率显著低于正常组 ( χ2 =4 5 95 ,P <0 0 5 ,RR =0 3 7)。结论 :提示HLA -DQA1 展开更多

关键词 广东汉族 SLE HLA-DR基因 DQ基因 DP基因 系统性红斑狼疮 聚合酶链反应-序列特异性引物技术

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新疆地区维吾尔族寻常型银屑病与HLA-DRB1~＊ 07等位基因的关联研究 被引量：6

13

作者 蒋建华 多兰 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2012年第1期54-57,共4页

目的银屑病是慢性炎症性、增生性皮肤病,可分为Ⅰ型和Ⅱ型2种亚型,发病机制尚不清楚,与遗传、免疫、感染等因素有关。近年来,国内外对银屑病发病与人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)相关性的研究积累了一些资料。目前认为HLA... 目的银屑病是慢性炎症性、增生性皮肤病,可分为Ⅰ型和Ⅱ型2种亚型,发病机制尚不清楚,与遗传、免疫、感染等因素有关。近年来,国内外对银屑病发病与人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)相关性的研究积累了一些资料。目前认为HLA-DRB1*07是与寻常型银屑病最为密切相关的基因位点。尚未见有维吾尔族银屑病患者HLA-DRB1*07频率的研究报道。文中探讨新疆地区维吾尔族寻常型银屑病与HLA-DRB1*07等位基因的相关性。方法用聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)对200例维吾尔族寻常型银屑病患者HLA-DRB1*07等位基因进行检测,并与200例健康人群进行对照,分析了携带该基因的银屑病患者与其家族史的相关性。结果寻常型银屑病患者组HLA-DRB1*07等位基因频率显著高于对照组。Ⅰ型寻常型银屑病HLA-DRB1*07等位基因频率显著高于对照组。有银屑病家族史患者与无银屑病家族史的患者HLA-DRB1*07等位基因频率无显著性差异。结论 HLA-DRB1*07等位基因可能是新疆维吾尔族寻常型银屑病患者的易感基因。 展开更多

关键词 寻常型银屑病 HLA-DRB1 等位基因 聚合酶链反应-序列特异性引物

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4株NDV分离株F基因的克隆与序列分析 被引量：7

14

作者 沈志强 管宇 +7 位作者 刘吉山 李峰 吴信明 赵蕾 王艳 徐守振 鲍卫超 王辉暖 《动物医学进展》 CSCD 2005年第4期78-83,共6页

对4 株具有一定代表性的NDV(新城疫病毒)分离株的F基因进行RT PCR(反转录聚合酶链反应)扩增和序列分析,根据基因裂解位点的氨基酸序列推测,其中1 株属于弱毒株,3 株属于强毒株;核苷酸序列及其推导的氨基酸序列比较结果表明,3株强毒株与C... 对4 株具有一定代表性的NDV(新城疫病毒)分离株的F基因进行RT PCR(反转录聚合酶链反应)扩增和序列分析,根据基因裂解位点的氨基酸序列推测,其中1 株属于弱毒株,3 株属于强毒株;核苷酸序列及其推导的氨基酸序列比较结果表明,3株强毒株与Clone30 基因核苷酸序列的同源性在83.6%~84.0%之间,与F48 E9典型NDV强毒株同源性在86.5.6%~88.3%之间,推导的氨基酸序列同源性与Clone 30 株在85.9%~87.0%之间,与F48E9典型NDV强毒株在89.1%~91.3%之间;利用MegAlign软件绘制了NDV 的系统发育进化树,结果表明, 3株分离强毒株为Ⅶ基因型,弱毒株为基因Ⅱ型。 展开更多

关键词 序列分析 NDV F基因 分离株 反转录-聚合酶链反应 系统发育进化树 核苷酸序列 克隆 RT-PCR 新城疫病毒 氨基酸序列 强毒株 序列同源性 裂解位点 序列比较 弱毒株 代表性 基因型 推导

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PCR-SSP/PCR-SSO两种KIR基因分型方法的比较 被引量：2

15

作者 李娟 慕力 +6 位作者 韩兴乔 张华 孙乐静 暨波 魏博 杨俊晔 韩俊领 《生物医学工程与临床》 CAS 2021年第2期225-231,共7页

目的杀伤细胞免疫蛋白样受体(KIR)基因在自然杀伤细胞活性调节、机体抗感染、移植免疫过程中发挥重要作用。在脐带血移植中,KIR基因分型的效率和准确关系到移植的成败。为了满足临床上对KIR基因分型的要求,对比分析聚合酶链反应-序列特... 目的杀伤细胞免疫蛋白样受体(KIR)基因在自然杀伤细胞活性调节、机体抗感染、移植免疫过程中发挥重要作用。在脐带血移植中,KIR基因分型的效率和准确关系到移植的成败。为了满足临床上对KIR基因分型的要求,对比分析聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)和聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSO)两种方法,试图建立一个高效便捷检测KIR基因分型的方法学体系。方法从2018年到2019年已外送到第三方检测实验室(北京博富瑞医学检验实验室有限公司)做过KIR基因分型检测的脐带血样本中随机取出12份,分别用PCR-SSP及PCR-SSO商品化试剂盒进行KIR基因分型检测,并通过凝胶电泳分析或MATCH IT!DNA软件分析,获取KIR基因分型结果。结果12例脐带血样本中,PCR-SSO方法学检测的结果与原PCR-SSO方法检测结果完全一致,PCR-SSP方法学检测的结果与原PCR-SSO方法检测结果9例相同,有2例因出现漏孔而无法判读,有1例出现了假阳性带。结论PCR-SSO方法学检测KIR基因效果优于PCR-SSP,但是PCR-SSO方法学也存在当微珠的荧光校准值接近于临界值时,结果出现错判的现象;为保证KIR基因分型的准确度,建议PCR-SSP方法出现漏孔或者PCR-SSO方法荧光校准值接近于临界值时两种方法相互验证。 展开更多

关键词 KIR基因 基因分型 聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP) 聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSO) 荧光校准值 相互验证

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对HLA-B座位中低分辨中模棱两可基因分型的调查分析

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作者 鞠瑞青 《中国实用医药》 2014年第4期255-255,共1页

人类白细胞抗原（HLA）是目前所知的最具有多态性的遗传系统之一,它位于人类第6号染色体短臂上,总长度3600 kb,约占人类基因组总长度的1/3000。整个HLA复合体共有数十个基因座,可分为HLA-Ⅰ类、HLA-Ⅱ类、HLA-Ⅲ类基因。HLA-B基因座属于... 人类白细胞抗原（HLA）是目前所知的最具有多态性的遗传系统之一,它位于人类第6号染色体短臂上,总长度3600 kb,约占人类基因组总长度的1/3000。整个HLA复合体共有数十个基因座,可分为HLA-Ⅰ类、HLA-Ⅱ类、HLA-Ⅲ类基因。HLA-B基因座属于HLA-Ⅰ类基因,它是HLA编码系统中最复杂,多态性最多的区域,由于其高变区各个等位基因差异仅在几个碱基,且只有极少等位基因某个高变区具有独立的碱基序列,因而交叉反应众多,故B位点往往出现定型困难［1］。尽管现有特异性寡核苷酸探针技术已经达到了中等分辨水平,但对于HLA-B座位上有些模棱两可的基因型尚不能分辨识别。作者所在实验室采用特异性寡核苷酸探针（PCR-SSO）技术对13485例HLA-B座位进行中低分辨调查分析,并对筛选出的模棱两可等位基因通过采用聚合酶链反应-序列特异性引物扩增（PCR-SSP）技术进行进一步确认。 展开更多

关键词 HLA-B 聚合酶链反应-序列特异性引物扩增 特异性寡核苷酸探针 基因分型 调查 人类白细胞抗原 HLA-Ⅰ类 人类基因组

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RhD血型基因定型在新生儿溶血病产前诊断的应用 被引量：4

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作者 田爱民 孙启俊 +1 位作者 Helen Davies YW Liew 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期194-195,209,共3页

目的检测血液RhD血型基因型并应用于新生儿溶血病(HDN)的产前诊断。方法采用聚合酶链反应序列特异性引物(PCR SSP)方法,根据PCR产物的强弱判定RhD基因型。结果36名个体血液样本中,10名为RhD-/RhD-纯合子,3名为RhD+/RhD-杂合子,23名为RhD... 目的检测血液RhD血型基因型并应用于新生儿溶血病(HDN)的产前诊断。方法采用聚合酶链反应序列特异性引物(PCR SSP)方法,根据PCR产物的强弱判定RhD基因型。结果36名个体血液样本中,10名为RhD-/RhD-纯合子,3名为RhD+/RhD-杂合子,23名为RhD+/RhD+纯合子。结论该方法可以准确检测出RhD血型基因型,并可用于RhD血型不合引起HDN的产前诊断。 展开更多

关键词 RHD血型 RhD基因型 聚合酶链反应-序列特异性引物 新生儿溶血病 产前诊断

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无精子症患者的遗传学诊断 被引量：1

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作者 崔英霞 王咏梅 +3 位作者 姚兵 张丽 强宏娟 黄宇烽 《医学研究生学报》 CAS 2003年第12期908-910,共3页

目的 :了解精子发生障碍的遗传学原因。　方法 :对 1 0 7例无精子症患者进行染色体核型分析及Y染色体微缺失的检测。　结果 :检出染色体异常核型 1 3例 (1 2 .1 % ) ,均涉及性染色体数目、结构畸变 ,其中 1 0例为 4 7,XXY ,1例为 4 7,XX... 目的 :了解精子发生障碍的遗传学原因。　方法 :对 1 0 7例无精子症患者进行染色体核型分析及Y染色体微缺失的检测。　结果 :检出染色体异常核型 1 3例 (1 2 .1 % ) ,均涉及性染色体数目、结构畸变 ,其中 1 0例为 4 7,XXY ,1例为 4 7,XXY ,t(4 ;1 2 ) ,1例为 4 6X ,del(Y) ,1例为 4 6 ,XX。 4 6X ,del(Y)和 4 6 ,XX除检出SRY外 ,未检出Y染色体上与精子发生相关的其他DNA片段。检出 8例患者有Y染色体微缺失 ,AZFb +AZFc缺失 2例 ,AZFc缺失 6例 ,共占 7.5 % (8/ 1 0 7)。 1例AZFb +AZFc缺失患者 ,睾丸活检病理显示唯支持细胞综合征 ,1例生精阻滞在初级精母细胞阶段。 6例AZFc缺失患者精液细胞学检测 ,1例见初级精母细胞 ,5例见各级生精细胞。　结论 :染色体核型分析和Y染色体微缺失的检测有助于无精子症的遗传学病因诊断。 展开更多

关键词 无精子症 染色体核型分析 Y染色体微缺失 序列标记点-聚合酶链反应

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新乡市某猪场猪瘟病毒的鉴别检测 被引量：4

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作者 孔令芸 陈玲丽 +4 位作者 李冲 孙相和 李鹏 王选年 银梅 《动物医学进展》 北大核心 2015年第3期120-123,共4页

新乡市某猪场发生疑似猪瘟病例,为了鉴别其为疫苗毒还是野毒,采用细胞免疫化学方法和RT-PCR,并对其NS5B基因进行序列测定,序列比对并构建进化树,结果表明,猪只为猪瘟野毒感染,且分离的猪瘟病毒与石门(Shimen)株在基因序列上未发生大的... 新乡市某猪场发生疑似猪瘟病例,为了鉴别其为疫苗毒还是野毒,采用细胞免疫化学方法和RT-PCR,并对其NS5B基因进行序列测定,序列比对并构建进化树,结果表明,猪只为猪瘟野毒感染,且分离的猪瘟病毒与石门(Shimen)株在基因序列上未发生大的变异。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 免疫细胞化学 反转录-聚合酶链反应 序列分析

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多杀性巴氏杆菌分型方法研究进展 被引量：9

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作者 祁鑫 蒋桃珍 李伟杰 《动物医学进展》 北大核心 2018年第8期89-92,共4页

多杀性巴氏杆菌是一种人兽共患病病原菌,可引起多种动物及人类疾病。目前临床上对多杀性巴氏杆菌的分型多采用基于免疫试验为基础的血清学分型和基于基因特征为依据的分子分型。血清学方法操作繁琐,对抗血清的特异性有很高的要求,不适... 多杀性巴氏杆菌是一种人兽共患病病原菌,可引起多种动物及人类疾病。目前临床上对多杀性巴氏杆菌的分型多采用基于免疫试验为基础的血清学分型和基于基因特征为依据的分子分型。血清学方法操作繁琐,对抗血清的特异性有很高的要求,不适宜临床大规模快速进行流行病学调查。分子分型具有分辨力高和重复性好等优点,因而在临床中得到了广泛应用。分子分型方法主要包括荚膜多重PCR分型、脂多糖多重PCR分型、多位点序列分型、脉冲场凝胶电泳、全基因组序列分析等。论文就每种分型方法的原理、优缺点和适用范围进行介绍,以期为临床上开展多杀性巴氏杆菌的流行病学调查,特别是分子流行病学调查提供参考。 展开更多

关键词 多杀性巴氏杆菌 血清学分型 多重聚合酶链反应 多位点序列分型 脉冲场凝胶电泳 全基因组序列

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