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广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂基因的克隆表达及免疫保护作用研究 被引量:8
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作者 潘智华 何蔼 +4 位作者 程梅 李卓雅 于彦杰 贺华良 詹希美 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期534-538,共5页
目的对广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)基因进行克隆、原核表达,并对表达产物的免疫保护作用作出初步鉴定。方法将广州管圆线虫cystatin基因克隆入载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。用纯化融合蛋白隔周免疫小... 目的对广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin)基因进行克隆、原核表达,并对表达产物的免疫保护作用作出初步鉴定。方法将广州管圆线虫cystatin基因克隆入载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21进行诱导表达。用纯化融合蛋白隔周免疫小鼠1次,共3次,设GST免疫及未免疫对照组,末次免疫后1w用广州管圆线虫Ⅲ期幼虫攻击感染,3w后剖杀小鼠,计算减虫率及保护率,并测定小鼠特异性IgG抗体水平变化。结果成功构建了pGEX-4T-1/cystatin重组表达质粒,并在大肠杆菌中得以高效可溶性表达,融合蛋白免疫小鼠后诱导产生了58.1%的减虫率及20%的保护率,与对照组相比减虫效果显著(P<0.01)。结论广州管圆线虫cystatin基因能在大肠杆菌中高效表达并可诱导小鼠产生一定水平的保护性免疫力。 展开更多
关键词 广州管圆线 蛋白酶抑制 分子克隆 免疫保护
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RNA干扰AC-cathB-1基因对广州管圆线虫Ⅰ期幼虫发育的影响
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作者 王兵丽 刘琪龙 《动物医学进展》 北大核心 2021年第12期1-5,共5页
明确广州管圆线虫组织蛋白酶B样基因1(AC-cathB-1)功能,为揭示广州管圆线虫致病机制及生物防治提供理论依据。利用RNA干扰技术抑制广州管圆线虫Ⅰ期幼虫AC-cathB-1基因的表达,测定该基因被干扰后对福寿螺的感染率、死亡率、虫体活力、... 明确广州管圆线虫组织蛋白酶B样基因1(AC-cathB-1)功能,为揭示广州管圆线虫致病机制及生物防治提供理论依据。利用RNA干扰技术抑制广州管圆线虫Ⅰ期幼虫AC-cathB-1基因的表达,测定该基因被干扰后对福寿螺的感染率、死亡率、虫体活力、发育成Ⅲ期幼虫的数量及虫体长度的影响。real-time PCR检测结果显示,AC-cathB-1干扰组基因相对表达量明显下调,AC-cathB-1干扰组与生理盐水对照组的差异显著(P<0.05);与Rubisco干扰组、生理盐水对照组相比,AC-cathB-1干扰组福寿螺的感染率分别降低了10%和16.67%,死亡率分别降低了16.67%和13.34%,虫体活力减弱;AC-cathB-1干扰组的Ⅲ期幼虫的数量分别减少了11.4条和15.1条,发育率降低了34.97%和41.60%。与生理盐水对照组均差异显著(P<0.05)。AC-cathB-1干扰组的Ⅲ期幼虫体长有所减短,但与生理盐水对照组差异不显著(P>0.05)。结果表明,RNA干扰广州管圆线虫Ⅰ期幼虫AC-cathB-1基因可一定程度上抑制Ⅰ期幼虫在中间宿主福寿螺体内发育成Ⅲ期幼虫。证明了AC-cathB-1基因在寄生虫入侵宿主和宿主的相互作用等方面发挥着重要的作用。 展开更多
关键词 广州管圆线 蛋白酶 组织蛋白酶B样基因1 RNA干扰
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AcCystatin减轻卵清蛋白诱导的小鼠变应性鼻炎病变和促炎细胞因子分泌 被引量:6
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作者 王黎源 袁圆 +12 位作者 王伟 李徽徽 吴玥 李坤龙 李丁茹 徐宇 梁金宝 郑欣 王娅 王馨 徐伟 孙永诚 杨小迪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期391-395,共5页
目的观察广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(AcCystatin)对卵清蛋白(OVA)诱导的变应性鼻炎小鼠的影响。方法将24只8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、OVA变应性鼻炎致敏组和AcCystatin治疗组。OVA组以OVA为变应原,氢氧化铝为佐剂... 目的观察广州管圆线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(AcCystatin)对卵清蛋白(OVA)诱导的变应性鼻炎小鼠的影响。方法将24只8周龄雌性BALB/c小鼠随机分为空白对照组、OVA变应性鼻炎致敏组和AcCystatin治疗组。OVA组以OVA为变应原,氢氧化铝为佐剂进行腹腔注射,第15天后OVA滴鼻建立小鼠AR模型;AcCystatin组在致敏时腹腔注射30μg AcCystatin,并在第15天后将含有OVA的混悬液中溶入AcCystatin滴鼻治疗;对照组均以PBS替代OVA。末次滴鼻激发后,按照生物学评分标准对3组小鼠的症状进行评分,HE染色观察小鼠鼻黏膜的病变情况,ELISA检测小鼠血清OVA-IgE、白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-6、IL-10和γ干扰素(IFN-γ)的分泌水平。结果与对照组相比,OVA组小鼠生物学评分明显增加,AcCystatin组小鼠生物学评分较OVA组明显降低。镜下观察OVA组小鼠鼻黏膜纤毛明显脱落,杯状细胞增生,基底膜增厚、组织水肿且黏膜下小血管扩张,而AcCystatin组小鼠鼻黏膜病变明显减轻。同时OVA组血清中OVA-IgE、IL-4、IL-5、IL-6水平较对照组明显升高,IL-10水平降低;与OVA组相比,AcCystatin组OVA-IgE、IL-4、IL-5、IL-6和IL-10水平显著降低。结论AcCystatin减轻OVA诱导的小鼠变应性鼻炎病变和炎性细胞因子分泌。 展开更多
关键词 变应性鼻炎 广州管圆线蛋白酶抑制(accystatin) 卵清蛋白 细胞因子
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水稻抗干尖线虫基因OC-XⅡ的克隆及表达研究
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作者 王峰 陈俏丽 +7 位作者 李丹蕾 零雅茗 王博文 张瑞芝 贾岩岩 李永航 裴雨滢 逯昕明 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期658-664,共7页
抗性验证试验表明籼稻大白谷抗水稻干尖线虫侵染。为进一步探究此抗性与病程相关蛋白——半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)的相关性,基于水稻基因组数据克隆籼稻大白谷Cystatin家族的OC-XII基因,分别进行OC-XII、JaponicaOC-XII和Indica-... 抗性验证试验表明籼稻大白谷抗水稻干尖线虫侵染。为进一步探究此抗性与病程相关蛋白——半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Cystatin)的相关性,基于水稻基因组数据克隆籼稻大白谷Cystatin家族的OC-XII基因,分别进行OC-XII、JaponicaOC-XII和Indica-OC-XII蛋白质三维结构构建,并与水稻干尖线虫组织蛋白酶B(Cathepsin B)进行分子对接以验证OC-XII基因编码蛋白对Cathepsin B的抑制功能。通过荧光定量qPCR验证OC-XII基因在线虫侵染前后的表达特性,OC-XII蛋白可以与水稻干尖线虫Cathepsin B蛋白质特异结合,线虫侵染后OC-XII基因在浸染12h^2d期间表达量持续上调,侵染3d后下调。表明OC-XII基因在大白谷抗水稻干尖线虫侵染过程中发挥功能,具有对植物寄生线虫进行生物防治的潜力,有必要对其进行深入研究。 展开更多
关键词 蛋白酶 抑制 水稻干尖线 组织蛋白酶B
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