我国幽门螺旋杆菌感染人群基数大,开发安全有效的新型功能食品原料用于拮抗幽门螺旋杆菌感染具有重要意义。本研究以玉米蛋白粉为原料,通过酶水解法制备了中性蛋白酶(Corn Protein Hydrolysates by Neutrase,CPN)和中性蛋白酶+碱性蛋白...我国幽门螺旋杆菌感染人群基数大,开发安全有效的新型功能食品原料用于拮抗幽门螺旋杆菌感染具有重要意义。本研究以玉米蛋白粉为原料,通过酶水解法制备了中性蛋白酶(Corn Protein Hydrolysates by Neutrase,CPN)和中性蛋白酶+碱性蛋白酶(Corn Protein Hydrolysates by Neutrase and Alcalase,CPNA)两种玉米蛋白水解物,并进一步对水解物的分子量分布、氨基酸组成等性质进行了分析。结果表明:中性蛋白酶水解玉米蛋白粉制备具有抗幽门螺旋杆菌黏附作用水解物的最佳条件为底物浓度15%(蛋白基)、pH7.0、温度45℃、加酶量400 U/g和水解时间150 min,此条件下制备的玉米蛋白水解物CPN在蛋白浓度4 mg/mL条件下,体外幽门螺旋杆菌黏附抑制率为54.83%±0.56%。在此基础上,采用双酶协同方式进行水解,发现双酶协同水解产物CPNA的幽门螺旋杆菌黏附抑制率显著降低(P<0.05)。与CPNA相比,CPN的分子量较小,疏水性氨基酸比例高4.76%,表面疏水性增加28.03%。此外,CPN还具有良好的体外抗氧化活性,表明其可以作为一种功能食品基料,用于预防幽门螺旋杆菌感染。本研究为玉米蛋白的高值化利用提供新思路和理论依据。展开更多
目的:探讨幽门螺旋杆菌毒力因子细胞毒素相关基因A蛋白(CagA)对细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的作用,阐明CagA的致癌机制。方法:构建pcDNA3.1/CagA真核表达载体,将胃癌AGS细胞分为空白对照组(空载体转染)、CagA转染组(GZ7/CagA转染)...目的:探讨幽门螺旋杆菌毒力因子细胞毒素相关基因A蛋白(CagA)对细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的作用,阐明CagA的致癌机制。方法:构建pcDNA3.1/CagA真核表达载体,将胃癌AGS细胞分为空白对照组(空载体转染)、CagA转染组(GZ7/CagA转染)和CagA + ERKi组(ERK1/2抑制剂预处理+GZ7/CagA转染),采用Western blotting法测定各组细胞中CagA、磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK (T-ERK)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和激活型caspase-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平,采用CCK-8法检测各组胃癌AGS细胞活性,采用流式细胞术检测胃癌AGS细胞凋亡率。结果:与空白对照组比较,CagA转染组胃癌细胞中CagA、p-ERK和Bcl-2蛋白表达水平明显升高( P <0.01),Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低( P <0.01);与CagA转染组比较,CagA+ERKi组胃癌细胞中p-ERK和Bcl-2蛋白表达水平明显降低( P <0.01),Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高( P <0.01);与CagA转染组比较,CagA+ERKi组各时间点胃癌细胞活性明显降低( P <0.01);与CagA转染组比较,CagA+ERKi 组胃癌细胞凋亡率明显升高( P <0.05)。结论:幽门螺旋杆菌毒力因子CagA可抑制胃癌细胞凋亡,促进胃癌细胞增殖,其机制可能与CagA活化ERK信号通路有关。展开更多
文摘我国幽门螺旋杆菌感染人群基数大,开发安全有效的新型功能食品原料用于拮抗幽门螺旋杆菌感染具有重要意义。本研究以玉米蛋白粉为原料,通过酶水解法制备了中性蛋白酶(Corn Protein Hydrolysates by Neutrase,CPN)和中性蛋白酶+碱性蛋白酶(Corn Protein Hydrolysates by Neutrase and Alcalase,CPNA)两种玉米蛋白水解物,并进一步对水解物的分子量分布、氨基酸组成等性质进行了分析。结果表明:中性蛋白酶水解玉米蛋白粉制备具有抗幽门螺旋杆菌黏附作用水解物的最佳条件为底物浓度15%(蛋白基)、pH7.0、温度45℃、加酶量400 U/g和水解时间150 min,此条件下制备的玉米蛋白水解物CPN在蛋白浓度4 mg/mL条件下,体外幽门螺旋杆菌黏附抑制率为54.83%±0.56%。在此基础上,采用双酶协同方式进行水解,发现双酶协同水解产物CPNA的幽门螺旋杆菌黏附抑制率显著降低(P<0.05)。与CPNA相比,CPN的分子量较小,疏水性氨基酸比例高4.76%,表面疏水性增加28.03%。此外,CPN还具有良好的体外抗氧化活性,表明其可以作为一种功能食品基料,用于预防幽门螺旋杆菌感染。本研究为玉米蛋白的高值化利用提供新思路和理论依据。
文摘目的:探讨幽门螺旋杆菌毒力因子细胞毒素相关基因A蛋白(CagA)对细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的作用,阐明CagA的致癌机制。方法:构建pcDNA3.1/CagA真核表达载体,将胃癌AGS细胞分为空白对照组(空载体转染)、CagA转染组(GZ7/CagA转染)和CagA + ERKi组(ERK1/2抑制剂预处理+GZ7/CagA转染),采用Western blotting法测定各组细胞中CagA、磷酸化ERK(p-ERK)、总ERK (T-ERK)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和激活型caspase-3(cleaved caspase-3)蛋白表达水平,采用CCK-8法检测各组胃癌AGS细胞活性,采用流式细胞术检测胃癌AGS细胞凋亡率。结果:与空白对照组比较,CagA转染组胃癌细胞中CagA、p-ERK和Bcl-2蛋白表达水平明显升高( P <0.01),Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低( P <0.01);与CagA转染组比较,CagA+ERKi组胃癌细胞中p-ERK和Bcl-2蛋白表达水平明显降低( P <0.01),Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高( P <0.01);与CagA转染组比较,CagA+ERKi组各时间点胃癌细胞活性明显降低( P <0.01);与CagA转染组比较,CagA+ERKi 组胃癌细胞凋亡率明显升高( P <0.05)。结论:幽门螺旋杆菌毒力因子CagA可抑制胃癌细胞凋亡,促进胃癌细胞增殖,其机制可能与CagA活化ERK信号通路有关。
