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题名猪α干扰素基因的克隆、原核表达及生物学活性鉴定
被引量：10
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作者
夏俊保
赵俊
汤仁树
崔寰
陈伟
王明丽
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机构
安徽医科大学微生物学教研室
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出处
《安徽医科大学学报》
CAS
北大核心
2009年第1期53-56,共4页
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基金
安徽省教育厅自然科学基金重点项目(编号:KJ2008A085)
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文摘
目的构建稳定、高效表达的重组猪α干扰素(rpoIFN-α)大肠杆菌表达菌株,并纯化鉴定该菌株表达的目的蛋白,进行生物学活性检测。方法提取猪肝脏细胞基因组DNA,PCR扩增猪α干扰素(poIFN-α)基因,克隆到pMD18-T载体上,测序鉴定后再亚克隆到pGEX-5X-1载体上,转化入E.coliBL21中后得到表达菌株,用IPTG诱导表达,收集的菌体超声破碎后取上清得粗制蛋白,用GST亲和层析法进行纯化,产物用Western blot进行鉴定,并在Hep-2/VSV系统上滴定效价。结果重组质粒pGEX-5X-1/poIFN-α经过EcoRⅠ和XhoⅠ限制性酶切后可见501bp的目的片段,提取质粒测序鉴定,结果与GeneBank中的序列一致。转化入E.coliBL21中32℃条件下经IPTG诱导5h,提取总蛋白,SDS-PAGE检测显示带有GST标记的rpoIFN-α能高效表达,分子量约45ku,可溶性rpoIFN-α约占菌体蛋白的0.35,Western-blot鉴定显示有特异性条带。效价滴定结果表明该rpoIFN-α具有抗病毒活性,纯化后效价为7.5×106IU/ml,比活性达到1.1×107IU/mg。结论成功克隆了poIFN-α基因,并可在大肠杆菌中高效表达具有抗病毒活性的rpoIFN-α。
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关键词
干拢素α/遗传学
重组
遗传
猪
大肠杆菌/遗传学
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Keywords
interfemon-alpha/genetics
recombination
genetic
swine
Escherichia coli/genetics
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分类号
R978.7
[医药卫生—药品]
R394-3
[医药卫生—医学遗传学]
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