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日本鳗鲡Ⅱ型干扰素基因(IFN-γ和IFN-γrel)的原核表达与纯化研究 被引量：1
1
作者 李想 黄文树 +5 位作者 黄贝 徐继松 翟少伟 梁英 张婉婷 刘海姿 《海洋渔业》 CSCD 北大核心 2019年第5期567-577,共11页
分别以日本鳗鲡(Anguilla japonica)pMD19-T-IFNγ和pMD19-T-IFN-γrel重组克隆质粒为模板,采用PCR方法扩增日本鳗鲡IFN-γ和IFN-γrel基因,而后分别将IFN-γ和IFN-γrel成熟肽的编码序列克隆至原核表达载体pQE30和pET32a上,成功构建了... 分别以日本鳗鲡(Anguilla japonica)pMD19-T-IFNγ和pMD19-T-IFN-γrel重组克隆质粒为模板,采用PCR方法扩增日本鳗鲡IFN-γ和IFN-γrel基因,而后分别将IFN-γ和IFN-γrel成熟肽的编码序列克隆至原核表达载体pQE30和pET32a上,成功构建了重组表达载体pQE30-IFN-γ和pET32a-IFN-γrel。将重组表达载体pQE30-IFN-γ和pET32a-IFN-γrel分别转化入Escherichia coli M15和Escherichia coli BL21感受态细胞进行表达,并优化IPTG诱导表达体系后用SDS-PAGE电泳鉴定IFN-γ与IFN-γrel重组蛋白表达形式。IFN-γ与IFN-γrel重组蛋白经镍柱纯化后进行SDS-PAGE电泳检测和Western blot鉴定。结果显示,重组表达载体pQE30-IFN-γ与pET32a-IFN-γrel分别在E.coli M15和E.coli BL21中得以正确表达。重组IFN-γ蛋白分子量为21 kD左右,表达的融合蛋白以可溶性形式存在;重组IFN-γrel蛋白分子量为31 kD左右,以包涵体形式存在。且两者均在1.0 mmol·L^-1 IPTG诱导6 h时表达量最高。经镍柱纯化和Western blot检测,成功获得高纯度的IFN-γ和IFN-γrel重组蛋白。建立了日本鳗鲡IFN-γ和IFN-γrel基因的原核表达系统,为进一步研究日本鳗鲡干扰素系统的功能及调控机制奠定了基础。 展开更多
关键词 日本鳗鲡 ⅱ型干扰素 原核表达
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脐血来源或自体细胞因子诱导的杀伤细胞联合干扰素治疗慢性乙型肝炎的安全性和有效性分析 被引量：1
2
作者 刘波 董静 +2 位作者 张骏飞 宋海燕 陈从新 《临床肝胆病杂志》 CAS 2014年第9期869-872,共4页
目的观察应用脐血和自体细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）联合干扰素治疗慢性乙型肝炎（CHB）的安全性和有效性。方法 30例CHB患者均为解放军第一○五医院感染科2010年10月-2013年6月住院患者,签署临床实验研究入组同意书后随机分为3... 目的观察应用脐血和自体细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK细胞）联合干扰素治疗慢性乙型肝炎（CHB）的安全性和有效性。方法 30例CHB患者均为解放军第一○五医院感染科2010年10月-2013年6月住院患者,签署临床实验研究入组同意书后随机分为3组,每组10例,治疗组分别给予脐血或自体CIK细胞移植,同时给予干扰素治疗,对照组仅接受干扰素治疗,观察治疗后4、12周患者外周血ALT、HBV血清学标志物（HBV M）、HBV DNA对数值和CD4＋/CD8＋水平的变化。两样本均数比较采用配对t检验或成组t检验。结果脐血或自体CIK细胞移植后12周,患者外周血ALT、HBeAg、HBV DNA对数值分别为（22.6±14.4）和（32.9±15.3）U/L;（12.5±5.8）和（18.4±8.8）PEIU/ml;（3.2±0.7）和（3.7±0.6）,与对照组相比均明显降低（t=2.80～5.45,P〈0.05）。两治疗组治疗4周后CD4＋和CD4＋/CD8＋水平均较对照组明显升高（t=2.21～2.43,P〈0.05）;两组移植患者术中均未出现严重不良反应,无与移植相关的严重并发症发生。结论人脐血和自体CIK细胞移植治疗CHB,短期内可明显抑制病毒复制,改善患者肝功能和临床症状,并能提高患者细胞免疫水平,具有良好的安全性。 展开更多
关键词 肝炎 乙型 慢性 杀伤细胞 干扰素ⅱ型
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γ-干扰素基因pIRES改进型黄色荧光蛋白载体的构建
3
作者 蓝育青 葛坚 +4 位作者 卓业鸿 林明楷 王金林 刘海泉 李艳艳 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第3期197-199,共3页
【目的】构建携带γ 干扰素基因 (ifn γ)的pIRES改进型黄色荧光蛋白载体 (pIRES EYFPIFN γ) ,为γ 干扰素基因的体内外表达及蛋白定位提供理想的标记。【方法】根据已知γ 干扰素基因序列 ,设计在目的片段两端分别带EcoRⅤ和NotⅠ酶... 【目的】构建携带γ 干扰素基因 (ifn γ)的pIRES改进型黄色荧光蛋白载体 (pIRES EYFPIFN γ) ,为γ 干扰素基因的体内外表达及蛋白定位提供理想的标记。【方法】根据已知γ 干扰素基因序列 ,设计在目的片段两端分别带EcoRⅤ和NotⅠ酶切位点序列的 2条引物 ,用PCR技术从质粒 pcDNA3IFN γ中扩增出ifn γ(499bp) ,PCR产物用 EcoRⅤ和 NotⅠ双酶切后回收纯化 ,定向克隆至商品质粒 pIRES EYFP ,重组质粒 pIRES EYFPIFN γ用限制性内切酶酶切和DNA序列分析鉴定。同时以脂质体为介导 ,将 pIRES EYFPIFN γ转染正常人眼Tenon囊成纤维细胞 ,4 8h后于荧光倒置显微镜下观察基因的表达。【结果】DNA序列分析证明PCR产物为ifn γ ,将重组质粒转染正常人眼Tenon囊成纤维细胞 ,荧光倒置显微镜下可见黄色荧光蛋白的表达 ,转染率约为 4 3%。【结论】成功构建 pIRES EYFPIFN γ载体为利用黄色荧光蛋白标记在体内外进行γ 展开更多
关键词 干扰素ⅱ型 遗传学 黄色荧光蛋白 遗传载体 克隆 分子 序列分析 DNA
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转γ-干扰素基因大鼠肝细胞模型的建立
4
作者 王坤 郭英 +1 位作者 闵军 陈积圣 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 1999年第S1期1-3,共3页
目的：使用多聚阳离子脂质体载体（ｌｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ）在体外建立转γ干扰素（ＩＦＮγ） 基因的大鼠肝细胞模型。方法：利用ｌｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ在体外将ＩＦＮγ基因转染大鼠肝细胞。分别以ＲＴＰＣＲ 和Ｅ... 目的：使用多聚阳离子脂质体载体（ｌｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ）在体外建立转γ干扰素（ＩＦＮγ） 基因的大鼠肝细胞模型。方法：利用ｌｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ在体外将ＩＦＮγ基因转染大鼠肝细胞。分别以ＲＴＰＣＲ 和ＥＬＩＳＡ方法检测所转ＩＦＮγ基因在大鼠肝细胞的转录和表达情况。结果：以ｌｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ为载体的ＩＦＮγ基因转染大鼠肝细胞后，可被有效的转录并产生具有生物活性的ＩＦＮγ。结论：ＩＦＮγ基因可被成功转染入大鼠肝细胞并可有效表达。这可能为细胞因子的免疫治疗提供一种新途径。 展开更多
关键词 转染 脂质体 干扰素ⅱ型
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鸡传染性支气管炎病毒S1基因和鸡II型干扰素基因在重组鸡痘病毒中的共表达 被引量：10
5
作者 孙永科 田占成 +5 位作者 王云峰 童光志 智海东 刘胜旺 王玫 杨增岐 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期800-806,共7页
将鸡II型干扰素(ChIFNγ)基因和鸡传染性支气管炎病毒S1基因同时插入到鸡痘病毒转移载体中,构建含有这2个基因的鸡痘病毒转移载体pSY-ChIFNγS1。采用脂质体法将该质粒转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),经过8轮蓝斑筛选,得到纯化... 将鸡II型干扰素(ChIFNγ)基因和鸡传染性支气管炎病毒S1基因同时插入到鸡痘病毒转移载体中,构建含有这2个基因的鸡痘病毒转移载体pSY-ChIFNγS1。采用脂质体法将该质粒转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF),经过8轮蓝斑筛选,得到纯化的能够同时表达鸡II型干扰素和鸡传染性支气管炎病毒S1基因的重组鸡痘病毒rFPV-ChIFNγS1。rFPV-ChIFNγS1接种28日龄的SPF鸡1周后,可以检测到针对传染性支气管炎病毒S1基因的ELISA抗体,重组病毒接种鸡的CD4+、CD8+和γδTCR阳性T淋巴细胞的百分比含量显著高于非免疫对照鸡(P<0.05);免疫4周后用传染性支气管炎LX4强毒株攻击,rFPV-ChIFNγS1免疫组仅有1只出现轻微的呼吸道症状(1/16),而非免疫对照组则有16只发病(16/16),并有2只出现死亡(2/16),表明rFPV-ChIFNγS1对接种鸡可以产生良好的保护效果。 展开更多
关键词 传染性支气管炎病毒 鸡ⅱ型干扰素 重组鸡痘病毒
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重症肺炎大鼠干扰素-γ、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α含量变化 被引量：36
6
作者 陈业民 黄文杰 +1 位作者 李胜利 梁坤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期492-494,共3页
目的:研究SD大鼠细菌性重症肺炎模型中的IFN-γ、IL-6、TNF-α含量变化。方法:SD大鼠随机分为模型Ⅱ组、模型Ⅰ组和对照组,每组分为3小组,前两组每小组8只,对照组每小组4只。其中,模型Ⅱ组和模型Ⅰ组分别接种相同浓度不同剂量的肺炎克... 目的:研究SD大鼠细菌性重症肺炎模型中的IFN-γ、IL-6、TNF-α含量变化。方法:SD大鼠随机分为模型Ⅱ组、模型Ⅰ组和对照组,每组分为3小组,前两组每小组8只,对照组每小组4只。其中,模型Ⅱ组和模型Ⅰ组分别接种相同浓度不同剂量的肺炎克雷伯菌菌液,对照组接种剂量相同的生理盐水。分别与接种后的第2、4、6d分批处死动物,动态观察动物的干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化情况。结果:模型Ⅱ组和模型Ⅰ组的IL-6、TNF-α于接种后第2、4、6d呈逐渐升高的趋势,尤以接种高剂量菌液模型Ⅱ组升高明显;IFN-γ呈逐渐下降的趋势,尤以接种高剂量菌液模型Ⅱ组下降明显;而模型Ⅰ组则无明显变化。结论:诸多细胞因子可能参与重症肺炎发病的病理生理过程。随着接种一定浓度菌液剂量的增加,致使大鼠肺炎明显加重,IL-6、TNF-α、IFN-γ较一般肺炎变化更显著。 展开更多
关键词 肺炎 克雷伯菌 白细胞介素6 肿瘤坏死因子 干扰素ⅱ型
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宫颈癌组织白介素10和干扰素γ基因表达及其启动子区甲基化状态研究 被引量：9
7
作者 马冬 杨艳艳 +3 位作者 赵力 金玉兰 王洋 李鸥 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第23期2718-2721,共4页
目的探讨宫颈癌组织白介素10(IL-10)和干扰素γ(IFN-γ)基因表达及其启动子区甲基化状态。方法选取2011年3月—2012年5月在唐山市工人医院住院部就诊的宫颈癌患者43例为宫颈癌组、宫颈上皮内瘤变(CIN)患者62例为CIN组,另选取同期行全子... 目的探讨宫颈癌组织白介素10(IL-10)和干扰素γ(IFN-γ)基因表达及其启动子区甲基化状态。方法选取2011年3月—2012年5月在唐山市工人医院住院部就诊的宫颈癌患者43例为宫颈癌组、宫颈上皮内瘤变(CIN)患者62例为CIN组,另选取同期行全子宫切除的子宫肌瘤患者43例为对照组。采用亚硫酸氢盐测序法(BSP)、甲基化特异性PCR(MSP)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测三组患者宫颈组织中IL-10和IFN-γ基因的启动子甲基化状态和mRNA表达。结果三组IL-10和IFN-γmRNA水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中宫颈癌组和CIN组IL-10 mRNA水平均高于对照组,IFN-γmRNA水平均低于对照组(P<0.01)。三组IL-10基因启动子区-110、-185位点甲基化率比较,差异均有统计学意义(P<0.05),其中宫颈癌组和CIN组IL-10基因启动子区-110位点甲基化率均高于对照组,宫颈癌组IL-10基因启动子区-185位点甲基化率低于对照组(P<0.05)。宫颈癌组IFN-γ基因启动子甲基化率高于CIN组,CIN组高于对照组(P<0.05)。结论 IL-10和IFN-γ基因启动子区甲基化状态影响其在宫颈组织中的表达,宫颈癌患者处于Th2极化状态,可能与宫颈癌的发生有关。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 DNA甲基化 干扰素ⅱ型 白细胞介素10
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脑脊液ESAT-6和干扰素-γ检测对结核性脑膜炎的诊断价值 被引量：11
8
作者 何玲 常明 +6 位作者 吕晓民 王玉芝 初凤娜 李伟 林会香 王丹 崔俐 《中国现代神经疾病杂志》 CAS 2011年第5期543-547,共5页
目的探讨脑脊液早期分泌抗原靶-6(ESAT-6)和干扰素-γ表达水平变化对结核性脑膜炎的临床诊断价值。方法采用酶联免疫吸附试验分别检测结核性脑膜炎(21例)、非结核性脑膜炎颅内感染(28例)和正常对照者(32例)脑脊液ESAT-6和干扰素-γ表达... 目的探讨脑脊液早期分泌抗原靶-6(ESAT-6)和干扰素-γ表达水平变化对结核性脑膜炎的临床诊断价值。方法采用酶联免疫吸附试验分别检测结核性脑膜炎(21例)、非结核性脑膜炎颅内感染(28例)和正常对照者(32例)脑脊液ESAT-6和干扰素-γ表达水平。结果结核性脑膜炎组患者脑脊液ESAT-6和干扰素-γ平均表达水平分别为4.46 pg/ml[(2.20～10.55)pg/ml]和34.86 ng/L[(25.62～241.71)ng/L],均明显高于非结核性脑膜炎颅内感染组[(1.18±0.49)pg/ml、(12.00±3.37)ng/L]和正常对照组[(1.05±0.47)pg/ml、(14.58±3.46)ng/L],差异具有统计学意义(H=35.695,P=0.000;H=31.560,P=0.000)。非结核性脑膜炎颅内感染组与正常对照组之间差异无统计学意义(t=1.226,P=0.226;t=0.060,P=0.952)。Spearman秩相关分析显示,结核性脑膜炎组患者ESAT-6水平与干扰素-γ水平呈正相关(r_(?)=1.000,P=0.000)。结论结核性脑膜炎患者脑脊液ESAT-6和干扰素-γ表达水平明显高于非结核性脑膜炎颅内感染和正常对照者,检测这两项实验室指标的变化可协助结核脑膜炎的诊断,月.两项指标之间具有一定相关性。 展开更多
关键词 结核 脑膜 脑脊髓液 干扰素ⅱ型 酶联免疫吸附测定
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两种结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测试剂盒检测结核分枝杆菌感染结果比较研究 被引量：27
9
作者 李晓非 赵勤 +1 位作者 汪亚玲 余文林 《中国防痨杂志》 CAS 2011年第5期267-270,共4页
目的评价新的国产结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测试剂盒(TB-IGRA)——体外释放酶联免疫法诊断结核病的敏感性和特异性。方法采用TB-IGRA试剂盒对319例肺结核、23例肺外结核、39例排除结核的肺部疾病和104例健康人群的血清标本进行检... 目的评价新的国产结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测试剂盒(TB-IGRA)——体外释放酶联免疫法诊断结核病的敏感性和特异性。方法采用TB-IGRA试剂盒对319例肺结核、23例肺外结核、39例排除结核的肺部疾病和104例健康人群的血清标本进行检测,同时与澳大利亚Cellestis公司的QuantiFERON-TB GOLDin tube(QFT-GIT)试剂进行平行比较分析。结果采用TB-IGRA试剂,检测肺结核病人的敏感性为90.9%,肺外结核的敏感性为78.3%,特异性为76.9%;采用QFT-GIT试剂,检测肺结核病人的敏感性为88.4%,肺外结核的敏感性为78.3%,特异性为80.4%,2种试剂进行平行比较,敏感性和特异性方面差异无统计学意义。结论 TB-IGRA试剂盒对诊断结核病有较高的敏感性和特异性,可用于结核病尤其是涂阴肺结核和肺外结核的辅助诊断。 展开更多
关键词 结核/诊断 分枝杆菌 结核 干扰素ⅱ型 试剂盒 诊断 敏感性与特异性
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γ-干扰素释放试验(IGRA)的诊断价值探讨(高感染率背景下的研究结果) 被引量：24
10
作者 刘旭晖 乐军 +1 位作者 张忠顺 肖和平 《中国防痨杂志》 CAS 2010年第12期801-805,共5页
目的评估在中国结核分枝杆菌高感染率背景下,γ-干扰素释放试验(interferon gammarelease assay,IGRA)对于诊断结核病的价值。方法以上海市肺科医院2005—2010年完成的201例γ-干扰素释放试验(T-SPOT.TB)及后续随访结果为研究资料,其中... 目的评估在中国结核分枝杆菌高感染率背景下,γ-干扰素释放试验(interferon gammarelease assay,IGRA)对于诊断结核病的价值。方法以上海市肺科医院2005—2010年完成的201例γ-干扰素释放试验(T-SPOT.TB)及后续随访结果为研究资料,其中结核组(A组)69例、结核科医务人员组(B组)56例、肺癌组(C组)22例、普通肺炎组(D组)20例、健康对照组(E组)30例。应用T-SPOT.TB(Oxford Immunotec,Abingdon,UK)试剂盒检测外周静脉血淋巴细胞对于2种结核分枝杆菌菌种特异性分泌蛋白:早期分泌靶抗原6(ESAT-6)和培养分泌蛋白10(CFP-10)的免疫反应。结果 A组阳性率91.3%(63/69),B组阳性率17.9%(10/56),C组阳性率27.3%(6/22),D组阳性率10%(2/20),E组阳性率6.7%(2/30)。A和C组阳性率较E组高,差异有统计学意义(P<0.05);B和D组较E组差异无统计学意义,但有升高的趋势。B组IGRA阳性率较E组显著升高,取中位工作年限3年为分界线,工作年限大于3年者IGRA阳性率27.6%(8/29),较健康对照组差异有统计学意义(P<0.05),RR=4.14,OR=5.33。结论在中国普通人群的高感染率的背景下,γ-干扰素释放试验用于诊断活动性结核病依然有一定价值,但对于肿瘤病人的鉴别诊断特异性不强;随着暴露级别的增加,IGRA的阳性率亦增加,IGRA用于更高的暴露级别人群(如结核相关医务人员)的诊断价值可能不高。 展开更多
关键词 结核/诊断 干扰素ⅱ型 免疫酶技术
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干扰素体外释放酶联免疫法在结核病诊断中的价值 被引量：15
11
作者 刘佳文 康丽军 +1 位作者 翁绳凤 朱新颖 《中国防痨杂志》 CAS 2011年第9期600-603,共4页
目的分析干扰素体外释放酶联免疫法(quantitative diagnostic kit for Mycobacterium tuberculosisIFN-γrelease assay,TB-IGRA)在结核病诊断中的应用价值。方法用北京万泰生物药业股份有限公司生产的结核分枝杆菌相关γ-干扰素检测试... 目的分析干扰素体外释放酶联免疫法(quantitative diagnostic kit for Mycobacterium tuberculosisIFN-γrelease assay,TB-IGRA)在结核病诊断中的应用价值。方法用北京万泰生物药业股份有限公司生产的结核分枝杆菌相关γ-干扰素检测试剂盒(体外释放酶联免疫法)(Wantai quantitative diagnostic kit for Mycobacteriumtuberculosis IFN-γrelease assay,WT-IGRA)(简称WT试剂)和澳大利亚Cellestis有限公司生产的QuantiFER-ON-TB(QuantiFERON-TB GOLD in tube,QFT-GIT)(简称QFT试剂)检测病区与门诊结核患者(249例)及健康者(140例)的全血标本,结果与其结核菌素试验(PPD)、痰结核分枝杆菌培养及痰涂片结果相比较,分析TB-IGRA阳性率、特异度及试剂间的相关性。结果 249例结核病患者,WT试剂和QFT试剂阳性率分别为76.3%(190/249)和67.1%(167/249),特异度都是83.3%(100/120);痰菌阳性和痰菌阴性结核病组,WT试剂阳性率分别为74.1%(43/58)和76.1%(83/109),差异无统计学意义(χ2=0.082,P>0.05);QFT试剂阳性率分别为67.2%(39/58)和65.1%(71/109),差异无统计学意义(χ2=0.075,P>0.05);WT试剂与QFT试剂总符合率为84.3%。结论 TB-IGRA对结核病有一定的诊断价值。 展开更多
关键词 结核/诊断 干扰素ⅱ型 酶联免疫吸附测定
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外周血单核细胞γ干扰素分泌反应在免疫抑制患者肺结核诊断中的应用 被引量：4
12
作者 刘一 张波 +2 位作者 王安生 刘颖 李建 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2009年第2期207-209,共3页
目的:探讨体外单核细胞γ干扰素(IFN-γ)分泌反应对免疫抑制患者肺结核诊断的临床意义。方法:应用ELISPOT的方法检测了12名健康体检者(健康对照组)、12名结核病患者(结核病对照组)和12名免疫抑制合并结核病患者(免疫抑制合并结核病组)... 目的:探讨体外单核细胞γ干扰素(IFN-γ)分泌反应对免疫抑制患者肺结核诊断的临床意义。方法:应用ELISPOT的方法检测了12名健康体检者(健康对照组)、12名结核病患者(结核病对照组)和12名免疫抑制合并结核病患者(免疫抑制合并结核病组)体外单核细胞IFN-γ分泌反应。结果:健康对照组中除1人有结核病接触史者,IFN-γ分泌反应呈阳性外,其余均为阴性;结核病对照组中除1名患者痰培养证实为非结核分枝杆菌,其IFN-γ分泌反应呈阴性外,其余均为阳性;免疫抑制合并结核病患者均为阳性。结论:体外单核细胞IFN-γ分泌反应有助于临床对免疫抑制患者合并肺结核的诊断。 展开更多
关键词 结核 肺 干扰素ⅱ型 诊断 免疫抑制
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肿瘤坏死因子-α联合干扰素-γ治疗肝癌的实验研究 被引量：4
13
作者 彭宝岗 何强 +2 位作者 梁力建 周凡 吕明德 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期1892-1895,共4页
目的:探讨干扰素-γ体内外增强TNF-α治疗原发性肝癌(HCC)的作用。方法:采用结晶紫染色法 测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)和两者联合用药体外杀灭肝癌细胞的能力。以已建立的人肝癌 裸小鼠肝内移植模型为对象,采用瘤... 目的:探讨干扰素-γ体内外增强TNF-α治疗原发性肝癌(HCC)的作用。方法:采用结晶紫染色法 测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γ(IFN-γ)和两者联合用药体外杀灭肝癌细胞的能力。以已建立的人肝癌 裸小鼠肝内移植模型为对象,采用瘤体内注射的直接给药途径,观察TNF-α、IFN-γ和联合用药体内抗肝癌的效果。 结果:细胞毒性试验:TNF-α对肝癌细胞有较强的细胞毒性作用,呈剂量依赖性。当浓度超过107 U／L时,有明显杀 伤作用(P<0．05);联合应用IFN-γ具有协同抗瘤效果,单独应用107U／L TNF-α和106 U／L IFN-γ时,肝癌细胞杀 伤率分别为27．1％和7．9％,两者联合用药可达83．7％。单独使用IFN-γ未见移植瘤生长受抑制及荷瘤鼠生存期 延长(P>0．05),移植瘤仅见小灶性坏死;单独应用TNF-α,表现为抑制移植瘤生长(抑制率17．2％),移植瘤呈不完 全性小片状坏死,但不能延长荷瘤鼠的生存时间(P>0．05)。两者联合用药能明显抑制肿瘤生长(抑癌率35．9％), 移植瘤呈大片状坏死,荷瘤鼠生存期延长(P<0．05),血甲胎蛋白(AFP)浓度降低。结论:TNF-α联合IFN-γ直接瘤 体内注射有可能成为临床治疗原发性肝癌一个新的有效方法。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 干扰素ⅱ型 肝肿瘤 免疫疗法
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干扰素-γ在放射性肺损伤发生过程中的作用研究 被引量：8
14
作者 李启生 刘来昱 +2 位作者 官键 丁轶 陈龙华 《实用医学杂志》 CAS 2008年第21期3654-3656,共3页
目的:通过研究大鼠放射性肺损伤模型,探讨干扰素-γ(IFN-γ)在放射性肺损伤的作用及机制,为临床预防和治疗放射性肺损伤提供新的思路。方法:建立Wistar大鼠半胸照射的放射性肺损伤实验动物模型,35只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(N... 目的:通过研究大鼠放射性肺损伤模型,探讨干扰素-γ(IFN-γ)在放射性肺损伤的作用及机制,为临床预防和治疗放射性肺损伤提供新的思路。方法:建立Wistar大鼠半胸照射的放射性肺损伤实验动物模型,35只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(N组),照射组(R1～R3组),照射+药物组(D1～D3组)。其中D1～D3组大鼠在照射后第1天开始腹腔皮下注射IFN-γ5万U/d,至照射后60d停止。每周记录1次Wistar大鼠的临床表现,分别在照射后2、4和12周取材,行常规病理检查,胶原纤维染色,观察IFN-γ对放射性肺损伤的作用。结果:照射后R组与D组体重差异有显著性(P=0.002),D组肺泡炎较R组轻微、发生时间推迟,且进展缓慢(P=0.002),放射性肺纤维程度较R组减弱,但差异无显著性(P=0.137)。D组的Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达显著低于R组(PⅠ型=0.035,PⅢ型=0.040)。结论:IFN-γ在放射性肺损伤的发生过程中抑制了Ⅰ型和Ⅲ型胶原的合成,有效减少了照射后的放疗反应,提高了实验动物在照射后的存活质量,延迟放射性肺泡炎的发生时间并降低其发生的程度。放射性肺纤维化有轻度减弱,可能与随访时间有关。 展开更多
关键词 辐射性肺炎 干扰素ⅱ型 大鼠
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轮状病毒血症血清中干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α与心肌损害的关系 被引量：18
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作者 周玲 潘家华 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第5期470-472,共3页
目的探讨轮状病毒(RV)血症血清中干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与心肌损害的关系。方法收集131例RV感染且其血清RV抗原阳性的患儿血清,其中心肌损害者89例,设为观察组;无心肌损害者42例,设为对照组。采用双抗体夹心酶联... 目的探讨轮状病毒(RV)血症血清中干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与心肌损害的关系。方法收集131例RV感染且其血清RV抗原阳性的患儿血清,其中心肌损害者89例,设为观察组;无心肌损害者42例,设为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法,检测两组血清中IFN-γ、TNF-α浓度,比较两者差异。结果观察组血清中IFN-γ、TNF-α含量显著高于对照组(P<0.01)。结论 IFN-γ、TNF-α在RV感染心肌损害的发生、发展中发挥重要作用,其确切机制尚需进一步探讨。 展开更多
关键词 轮状病毒感染 干扰素ⅱ型 肿瘤坏死因子Α 心肌疾病
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肿瘤坏死因子和干扰素对大肠癌Fas配体表达的调控作用 被引量：2
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作者 丁尔迅 王强 +1 位作者 付志仁 陈学云 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期806-808,共3页
目的 :探讨不同细胞因子对大肠癌细胞 Fas配体 (Fas L )表达水平的调控作用。方法 :采用 Western印迹法测定了两种细胞因子 (1× 10 6 U / L TNF-α或 IFN-γ)处理后大肠癌细胞 Fas L表达水平的变化。结果 :所检测的 6株大肠癌细胞... 目的 :探讨不同细胞因子对大肠癌细胞 Fas配体 (Fas L )表达水平的调控作用。方法 :采用 Western印迹法测定了两种细胞因子 (1× 10 6 U / L TNF-α或 IFN-γ)处理后大肠癌细胞 Fas L表达水平的变化。结果 :所检测的 6株大肠癌细胞全部表达 Fas L蛋白 ;TNF-α和 IFN-γ处理 DL D- 1细胞 10 h,显著上调其 Fas L蛋白的表达水平 ;TNF-α和 IFN-γ以及 PMA +离子霉素 (ionomycin)处理 SW6 2 0细胞 10 h,也显著上调 SW6 2 0细胞的 Fas L蛋白表达水平。 TNF-α和 PMA +离子霉素处理SW6 2 0细胞 48h进一步增加 SW6 2 0的 Fas L 蛋白表达 ,IFN- γ处理 SM6 2 0则表达增加不明显。结论 :TNF- α和 IFN- γ等细胞因子具有上调某些大肠癌细胞 Fas L 展开更多
关键词 FAS配体 肿瘤坏死因子 干扰素ⅱ型 基因表达 大肠癌 基因调控
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MTT法检测干扰素-γ对人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制效应 被引量：3
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作者 蓝育青 葛坚 +3 位作者 林明楷 郑健梁 陈慧怡 刘海泉 《实用医学杂志》 CAS 2002年第2期123-125,共3页
目的 :探讨重组人IFN γ对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制作用。方法 :用组织块培养法和混合消化液培养法体外培养人眼Tenon囊成纤维细胞。采用MTT法检测不同浓度的重组人IFN γ对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作... 目的 :探讨重组人IFN γ对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞增殖的抑制作用。方法 :用组织块培养法和混合消化液培养法体外培养人眼Tenon囊成纤维细胞。采用MTT法检测不同浓度的重组人IFN γ对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作用。结果 :用上述两种方法成功培养出正常人眼Tenon囊成纤维细胞。重组人IFN γ对人眼Tenon囊成纤维细胞具有抑制作用 ,1× 10～ 1× 10 6IU/mlIFN γ浓度范围的抑制率为 2 0 2 %～43 5 % ,1× 10 6UI/mlIFN γ作用 48h后 ,与对照组相比 ,细胞数量明显减少 ,细胞皱缩 ,但未见细胞死亡或漂浮。结论 :IFN γ对人眼Tenon囊成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 干扰素ⅱ型 MTT法 人眼Tenon囊 成纤维细胞 细胞增殖 抑制效应 比色法 氮蓝四唑
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肝癌干扰素-γ基因修饰瘤苗的实验研究 被引量：2
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作者 王征旭 何振平 +5 位作者 李春海 孔繁华 冯东晓 王鑫 陈兴国 金荔 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期254-256,共3页
构建携带人干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体ｐＺＩＰ－ＩＦＮ－γ，上清感染法导入人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２，分泌ＩＦＮ－γ活性为每４８ｈ０～２７３Ｕ／１０６。ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ和ＳｌｏｔＢｌｏｔ验证目... 构建携带人干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体ｐＺＩＰ－ＩＦＮ－γ，上清感染法导入人肝癌细胞系ＨｅｐＧ２，分泌ＩＦＮ－γ活性为每４８ｈ０～２７３Ｕ／１０６。ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ和ＳｌｏｔＢｌｏｔ验证目的基因的整合及表达。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ证明ＭＨＣＩ类分子的表达水平增加。体外混合淋巴细胞、肿瘤细胞培养，证实该瘤苗能刺激肝癌病人外周血淋巴细胞的增殖。该瘤苗还能增强ＨＬＡＡ２位点相匹配的肝癌病人外周血淋巴细胞的杀伤活性。结果表明，ＩＦＮ－γ基因修饰的肝癌细胞疫苗，能增强其免疫原性。 展开更多
关键词 肝肿瘤 基因疗法 干扰素ⅱ型
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干扰素γ基因多态性与动脉粥样硬化斑块稳定性相关性研究 被引量：3
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作者 杨天睿 撒亚莲 +3 位作者 杨丹 王艳飞 梅芬 王金岿 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 2016年第6期615-619,共5页
目的初步探讨干扰素γ(interferon gamma,IFNγ)+2109A/G和+874A/T位点基因多态性是否影响动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的发生及其斑块稳定性。方法选择204例住院患者,将AS斑块不稳定患者109例为观察组和无斑块或动脉粥样硬化斑块... 目的初步探讨干扰素γ(interferon gamma,IFNγ)+2109A/G和+874A/T位点基因多态性是否影响动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的发生及其斑块稳定性。方法选择204例住院患者,将AS斑块不稳定患者109例为观察组和无斑块或动脉粥样硬化斑块稳定患者95例为对照组,流式细胞仪检测血浆IFNγ水平,并通过PCR产物直接测序法检测IFNγ+2109基因表达,通过序列特异性引物引导的PCR反应技术检测IFNγ+874基因表达,采用DNAStar、GeneTool软件分析测序结果。结果观察组IFNγ+2109位点AA、AG、GG型基因为46.79%、44.04%、9.17%,对照组分别为43.16%、43.16%、13.68%(P=0.585),观察组等位基因频率A、G为68.81%、31.19%,对照组为64.74%、35.26%(P=0.383);观察组IFNγ+874A/T位点AA、AT、TT型基因为48.62%、41.28%、10.10%,对照组分别为46.32%、50.53%、3.15%(P=0.102),观察组等位基因频率A、T分别为69.27%、30.73%,对照组为71.58%、28.42%(P=0.610)。观察组血浆IFNγ为(4.60±1.91)μg/L,对照组为(4.88±2.10)μg/L(P=0.318)。结论 IFNγ的基因多态性不能作为AS斑块稳定性的预警指标。 展开更多
关键词 干扰素ⅱ型 动脉粥样硬化 聚合酶链反应 等位基因 基因型
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干扰素-γ、肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β在体外对人气管平滑肌细胞凋亡的作用 被引量：2
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作者 罗雅玲 赖文岩 +2 位作者 徐健 袁勇 张荣华 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期165-168,共4页
目的 :研究是否干扰素 -γ(IFN -γ)、肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)、白细胞介素 - 1β(IL - 1β)在体外能够诱导人气管平滑肌细胞 (ASMCs)凋亡。方法 :分离人ASMCs并在含有 10 %胎牛血清的DMEM培养基中培养。用 4- 6代的细胞作实验。IFN ... 目的 :研究是否干扰素 -γ(IFN -γ)、肿瘤坏死因子 -α(TNF -α)、白细胞介素 - 1β(IL - 1β)在体外能够诱导人气管平滑肌细胞 (ASMCs)凋亡。方法 :分离人ASMCs并在含有 10 %胎牛血清的DMEM培养基中培养。用 4- 6代的细胞作实验。IFN -γ、TNF -α和IL - 1β ,每种细胞因子单独或一起用于处理人ASMCs。用MTT法在 0、2 4、4 8、72h检测IFN -γ、TNFα和IL - 1β对细胞生长的作用。用光镜和电镜观察形态学的改变。用琼脂糖电泳分析DNA片断。用SP -免疫组化染色方法检测p5 3、bcl- 2、bax基因表达的改变。通过碎片DNA原位末端标记技术(TUNEL)检测凋亡细胞的百分率。结果①IFN -γ以时间依赖的方式单独或 /和TNF -α和IL - 1β一起减低存活的细胞数 ;②光镜和电镜检查显示人ASMCs细胞皱缩、膜出泡 ,核缩小 ,染色质浓聚和核破碎 ;③琼脂糖电泳显示在用上述细胞因子联合处理的人ASMCs ,有代表寡核苷酸片断整倍数的特征性的DNA梯状条带 (大约 180 - 2 0 0bp) ;④在细胞因子联合处理组p5 3和bax基因表达显著高于对照组 ,但bcl- 2基因表达低于对照组 (P <0 0 1) ;⑤用IFN -γ( 4× 10 5U/L)、TNF -α( 4× 10 5U/L)和 /或IL - 1β( 10× 10 4U/L)同时刺激诱导人ASMCs凋亡。在用细胞因子联合处理组的人ASMCs的? 展开更多
关键词 干扰素ⅱ型 肿瘤坏死因子 白细胞介素-1 细胞凋亡 哮喘 慢性阻塞性肺疾病 气道重塑
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