巴氏毕赤酵母SMD1168表达人溶菌酶的发酵条件 被引量：8

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作者 夏杰 徐殿胜 +2 位作者 陆兵 安米 张华 《华东理工大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期367-371,共5页

研究用毕赤酵母SMD1168菌株(MutS,HIS4+)表达人溶菌酶(HLZ)的发酵条件。此菌株具有对胞外分泌的外源蛋白不降解、对反应器氧传递效率的限制不敏感的特性,有利于在常规反应器条件下的过程放大。在培养基中添加复合维生素,在流加甲醇溶液... 研究用毕赤酵母SMD1168菌株(MutS,HIS4+)表达人溶菌酶(HLZ)的发酵条件。此菌株具有对胞外分泌的外源蛋白不降解、对反应器氧传递效率的限制不敏感的特性,有利于在常规反应器条件下的过程放大。在培养基中添加复合维生素,在流加甲醇溶液中添加山梨醇或甘露醇可维持细胞正常的生长和代谢,并表达高活性的HLZ。采用恒溶解氧的方式流加甘油溶液以提高细胞密度,在一段时间内使细胞处于碳源半饥饿状态后,使用恒速流加甲醇溶液诱导HLZ表达。HLZ的体积生成速率达到9.6mg/(L·h)左右,上清液中HLZ的含量约为1.6g/L,发酵周期为110h。 展开更多

关键词 巴氏毕赤酵母 SMD1168 人溶菌酶 流加 发酵

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巴氏毕赤酵母表达系统的研究进展 被引量：9

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作者 姚晶 吴正钧 任婧 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第3期35-38,共4页

巴氏毕赤酵母表达系统具有优良的特性,是目前广泛应用的微生物表达系统之一,它在理论研究和实践应用上尤其是在大规模发酵中具有重要的意义。本研究综述了巴氏毕赤酵母的生物学和遗传学特性,详细阐述了巴氏毕赤酵母表达系统的组成以及... 巴氏毕赤酵母表达系统具有优良的特性,是目前广泛应用的微生物表达系统之一,它在理论研究和实践应用上尤其是在大规模发酵中具有重要的意义。本研究综述了巴氏毕赤酵母的生物学和遗传学特性,详细阐述了巴氏毕赤酵母表达系统的组成以及影响外源基因表达的因素,并提出了一些提高表达量的方法。 展开更多

关键词 巴氏毕赤酵母 表达系统 表达 影响因素

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巴氏毕赤酵母表达系统的特点及其研究进展 被引量：22

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作者 隋少飞 陈松林 《生物技术通报》 CAS CSCD 2004年第3期1-4,共4页

巴氏毕赤酵母表达系统具有真核生物表达的特点。本文综述了巴氏毕赤酵母菌及其表达载体的特点以及外源基因在该系统中表达存在的一些问题。

关键词 巴氏毕赤酵母 外源蛋白 载体 表达

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日本血吸虫组织蛋白酶L2(SjCL2)基因巴氏毕赤酵母表达载体的构建 被引量：2

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作者 易冰 何蔼 +6 位作者 雷智刚 郑小英 张瑞林 孟锦绣 申川军 李卓雅 詹希美 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第5期390-393,共4页

目的　扩增SjCL2基因 ,构建巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB -SjCL2 ,为进一步研究其蛋白酶的功能奠定基础。方法　运用RT -PCR技术 ,从日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫总RNA中扩增获得SjCL2基因 ;将其定向克隆至巴氏毕赤酵母表达载体pPICZ... 目的　扩增SjCL2基因 ,构建巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB -SjCL2 ,为进一步研究其蛋白酶的功能奠定基础。方法　运用RT -PCR技术 ,从日本血吸虫 (中国大陆株 )成虫总RNA中扩增获得SjCL2基因 ;将其定向克隆至巴氏毕赤酵母表达载体pPICZαB质粒 ;经KpnⅠ、XbaⅠ双酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆 ,测序分析SjCL2基因并确定其读码框的正确插入。结果　利用RT -PCR技术从日本血吸虫成虫总RNA中扩增到约 1Kb大小的SjCL2基因 ,通过双酶切分析、PCR鉴定以及DNA序列分析确定SjCL2基因被克隆到巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB中。 结论　成功构建了含有SjCL2基因编码区序列的巴氏毕赤酵母表达载体 pPICZαB 展开更多

关键词 日本血吸虫 组织蛋白酶L2 基因克隆 巴氏毕赤酵母表达载体

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重组毕赤酵母表达期菌体浓度的软测量模型 被引量：5

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作者 许哲军 何云 +2 位作者 郭美锦 储炬 张嗣良 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期28-34,共7页

建立了用于在线估计高密度重组毕赤酵母培养过程中处于表达阶段的菌体密度软测量模型。分别对比了基于遗传算法(GA)的动力学软测量模型以及基于人工神经网络(ANN)的软测量模型,并对神经网络软测量模型的拓扑结构以及训练参数进行了初步... 建立了用于在线估计高密度重组毕赤酵母培养过程中处于表达阶段的菌体密度软测量模型。分别对比了基于遗传算法(GA)的动力学软测量模型以及基于人工神经网络(ANN)的软测量模型,并对神经网络软测量模型的拓扑结构以及训练参数进行了初步探讨。当采用基于遗传算法(GA)的动力学模型,模型拟合值的最大误差为7.63%;在采用神经网络软测量技术时,选取合适的模型结构和输入参数,最大误差为3.12%,而且软测量模型可以很好地反映菌体浓度实时变化趋势。该研究结果表明,在酵母细胞的高密度培养过程中采用基于神经网络的软测量模型具有较高的准确度,可以较好地实时反映发酵过程中菌体浓度的变化。 展开更多

关键词 巴氏毕赤酵母 高密度培养 在线估计 遗传算法 神经网络 软测量

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HBscFv毕赤酵母工程菌的中试发酵及产物纯化 被引量：1

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作者 熊盛 谢秋玲 +2 位作者 王一飞 邓宁 粟宽源 《华南理工大学学报（自然科学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第1期79-83,共5页

中试规模生产可溶性重组人抗HBsAg单链抗体 (HBscFv) ,分泌表达HBscFv的巴氏毕赤酵母 (P .pastoris)工程菌在 30L发酵罐中进行补料分批培养 .上清中的HBscFv以离子交换及免疫亲和层析两步法进行纯化 .发现酵母工程菌经 7d补料分批培养后... 中试规模生产可溶性重组人抗HBsAg单链抗体 (HBscFv) ,分泌表达HBscFv的巴氏毕赤酵母 (P .pastoris)工程菌在 30L发酵罐中进行补料分批培养 .上清中的HBscFv以离子交换及免疫亲和层析两步法进行纯化 .发现酵母工程菌经 7d补料分批培养后 ,6 0 0nm波长下的光密度值 (OD6 0 0 )达到 334,目的蛋白表达量为 2 6 0mg/L .纯化后 ,可获得纯度为95 %的HBscFv ,产量为 171mg/L .活性测定结果表明 ,HBscFv制品的比活性为 (2 5 2±0 17) μg- 1,与大肠杆菌来源的HBscFv无明显差异 . 展开更多

关键词 乙肝表面抗原 单链抗体 巴氏毕赤酵母 发酵 纯化

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毕赤酵母组成型高效表达启动子的筛选鉴定 被引量：3

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作者 石义超 王凤忠 +1 位作者 江均平 朱利泉 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2018年第13期110-116,共7页

为获得高产量、高活性的葡萄糖氧化酶(GOD)酵母表达菌株,优化了GOD的T132S/T56V双突变编码序列,将之克隆到表达载体p GAP_k上得到表达载体p GAP_k-h_2-GOD,以p GAP启动GOD基因的表达。将p GAP_k-h_2-GOD上的p GAP启动子替换为p GCW14和p... 为获得高产量、高活性的葡萄糖氧化酶(GOD)酵母表达菌株,优化了GOD的T132S/T56V双突变编码序列,将之克隆到表达载体p GAP_k上得到表达载体p GAP_k-h_2-GOD,以p GAP启动GOD基因的表达。将p GAP_k-h_2-GOD上的p GAP启动子替换为p GCW14和p AOX1,并对p GCW14启动子进行改造,得到3种p GCW14的改造体,最终得到包括p GAP_k-h_2-GOD在内的6种不同启动子的重组表达载体。将这6种载体转化毕赤酵母GS115,建立了一种简便高效的筛选方法初步筛选出GOD重组菌株,再对筛选到的转化子进行发酵培养,测定发酵上清液的GOD酶活力,以此来比较各种启动子启动效率的强弱。结果显示:p GCW14的启动效率是p GAP的3~5倍,改造后的启动子p GCW14+G20A/C-467T(0.767)和p GCW14-UA(0.689)的启动效率较原始的p GCW14(0.574)都有明显的提高,尤其p GCW14+G20A/C-467T启动效率最高,比原始p GCW14提高了32.5%左右。与诱导型启动子p AOX1(1.187)相比,p GCW14+G20A/C-467T(1.109)的启动效率仅比其低6.6%左右。结论:改造后的启动子可望在毕赤酵母组成型高效表达的研究应用中具有一定的前景。 展开更多

关键词 葡萄糖氧化酶 巴氏毕赤酵母 启动子pGCW14 组成型表达

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重组质粒pPIC9K-oLHαhCGβCTP的构建及在毕赤酵母中的表达 被引量：4

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作者 王桂玉 刘润梅 +1 位作者 潘善培 李伟雄 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第2期175-178,共4页

将人绒毛膜促性腺激素β－亚基的羧基肽（ＣＴＰ）与羊黄体生成素（ｏＬＨ）的α－亚基融合，通过设计两对引物，用部分重叠聚合酶链式反应（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇＰＣＲ）的方法构建了羊的α亚基ＣＴＰ嵌合体．这个嵌合体被克隆到ｐ... 将人绒毛膜促性腺激素β－亚基的羧基肽（ＣＴＰ）与羊黄体生成素（ｏＬＨ）的α－亚基融合，通过设计两对引物，用部分重叠聚合酶链式反应（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇＰＣＲ）的方法构建了羊的α亚基ＣＴＰ嵌合体．这个嵌合体被克隆到ｐＰＩＣ９Ｋ质粒中，用电打孔方法转入巴氏毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ），并获高效表达．表达蛋白经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证明分子量约为２８ｋＤ．２．５Ｌ发酵罐大量培养，产量可达２．０ｇ／Ｌ． 展开更多

关键词 HCG PCR 部分重叠 巴氏毕赤酵母 基因表达

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重组人血管内皮生长因子165在Pichia酵母中的表达 被引量：2

9

作者 刘煜 吴国祥 +4 位作者 赵建阳 颜天华 奚涛 沈子龙 成国祥 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期577-581,共5页

目的 :采用基因工程方法构建基因工程菌制备人VEGF1 65蛋白。方法 :自人肿瘤组织中获取人VEGF1 65cDNA ,构建pPIC9K酵母表达载体 ,采用Pichia酵母真核表达系统表达目的蛋白。结果 :SDS PAGE及Western blot结果显示目的蛋白已成功表达。... 目的 :采用基因工程方法构建基因工程菌制备人VEGF1 65蛋白。方法 :自人肿瘤组织中获取人VEGF1 65cDNA ,构建pPIC9K酵母表达载体 ,采用Pichia酵母真核表达系统表达目的蛋白。结果 :SDS PAGE及Western blot结果显示目的蛋白已成功表达。结论 :在Pichia酵母中成功表达人VEGF1 65。 展开更多

关键词 血管内皮生长因子165 巴氏毕赤酵母 pPIC9K酵母表达载体 SDS-PAGE WESTERN-BLOT

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基因重组酵母工程菌优化表达人源胶原蛋白 被引量：1

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作者 刘斌 郭红丽 +2 位作者 钮小松 张小霞 杨树林 《南京理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第4期558-562,共5页

通过响应曲面法(RSM)优化巴氏毕赤酵母基因工程菌GS115/pPIC9KG6表达高亲水性重组人源胶原蛋白的摇瓶培养条件。采用Box-Behnken设计(BBD)考察初始诱导pH值、温度和甲醇添加量三个主要影响因子对重组人源胶原蛋白表达量的影响,利用DX7Tr... 通过响应曲面法(RSM)优化巴氏毕赤酵母基因工程菌GS115/pPIC9KG6表达高亲水性重组人源胶原蛋白的摇瓶培养条件。采用Box-Behnken设计(BBD)考察初始诱导pH值、温度和甲醇添加量三个主要影响因子对重组人源胶原蛋白表达量的影响,利用DX7Trial软件设计实验方案,根据该方案设置不同培养条件进行实验并测定相关参数。响应面分析确定的最优因素水平组合为:初始诱导pH值为5.0,诱导温度为28℃,甲醇添加量为2.2%/24 h。通过响应面法优化发酵的内在因素水平,找出最佳条件,为利用其指导在发酵罐中进行高密度发酵生产人源胶原蛋白奠定基础。 展开更多

关键词 巴氏毕赤酵母 重组人源胶原蛋白 响应曲面法 BOX-BEHNKEN设计

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重组人VEGF_(165)工程菌的发酵及表达产物的纯化与活性测定 被引量：4

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作者 刘煜 吴国祥 +4 位作者 赵建阳 颜天华 奚涛 沈子龙 成国祥 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期82-85,共4页

目的 :优化重组人VEGF1 65(rhVEGF1 65)工程菌的发酵条件 ,分离纯化目的蛋白并检查活性。方法 :考察了甲醇诱导浓度和诱导时间对目的蛋白表达量的影响 ;发酵液经离心、透析后 ,经肝素亲和柱层析、超滤制得纯品 ;采用CAM实验和血管内皮细... 目的 :优化重组人VEGF1 65(rhVEGF1 65)工程菌的发酵条件 ,分离纯化目的蛋白并检查活性。方法 :考察了甲醇诱导浓度和诱导时间对目的蛋白表达量的影响 ;发酵液经离心、透析后 ,经肝素亲和柱层析、超滤制得纯品 ;采用CAM实验和血管内皮细胞MTT法测定生物活性 ,比较了与人VEGF1 65标准品的免疫原性。结果 :最佳表达条件为 :甲醇诱导浓度为 1% ,诱导时间为 5～ 6d ;采用Heparin SepharoseCL6B亲和层析后 ,产物纯度可达 90 %以上 ;活性测定结果显示 ,目的蛋白具有促血管生成作用 ;与人VEGF1 65具有相似的免疫原性。结论 :经发酵纯化后获得了有活性的重组人VEGF1 展开更多

关键词 rhVEGF165 血管内皮生长因子 巴氏毕赤酵母 纯化 生物活性 免疫原性 肝素亲和层析

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一种用于血清学鉴别的NDV重组嵌合疫苗

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作者 李秉鸿 《畜牧兽医科技信息》 2001年第11期14-15,共2页

荷兰学者Peeters.B等应用反向遗传系统,开发一种重组NDV病毒疫苗,该疫苗用一种杂交的HN基因(血凝神经氨酸苷酶)取代编码的HN基因。

关键词 血清学 反向遗传系统 HN基因 巴氏毕赤酵母 嵌合疫苗 神经氨酸苷酶 融合蛋白 保护性免疫 病毒疫苗 非必需基因

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