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差速超速离心法与试剂盒法提取娟姗牛乳源性外泌体的分析比较
被引量：
3
1
作者
范士杰
马露
卜登攀
《动物营养学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第11期5441-5447,共7页
本试验旨在探究不同方法提取娟姗牛乳源性外泌体的优缺点。采用差速超速离心法和试剂盒法2种提取方法对娟姗牛乳源性外泌体进行提取,通过透射电镜(TEM)、Bradford蛋白定量、免疫印迹(WB)和粒径分析(NTA)方法对2种提取方法得到的外泌体...
本试验旨在探究不同方法提取娟姗牛乳源性外泌体的优缺点。采用差速超速离心法和试剂盒法2种提取方法对娟姗牛乳源性外泌体进行提取,通过透射电镜(TEM)、Bradford蛋白定量、免疫印迹(WB)和粒径分析(NTA)方法对2种提取方法得到的外泌体进行比较鉴定,并采用细胞毒性试验对试剂盒法提取的外泌体进行细胞毒性评估。结果显示:2种提取方法均获得了茶托样结构的囊泡,但TEM视野下试剂盒法提取的外泌体较差速超速离心法多。试剂盒法提取的外泌体蛋白浓度显著高于差速超速离心法(P<0.05)。2种提取方法均能够检测到外泌体的标志性蛋白凋亡连接基因2相互作用蛋白X(ALIX)和四次跨膜蛋白(CD81);差速超速离心法提取的外泌体CD81蛋白丰度极低,且并未鉴定出标志性蛋白肿瘤敏感基因101蛋白(TSG101),但试剂盒法检测到了TSG101。2种提取方法得到的外泌体粒径分布均符合外泌体的正常粒径大小(30~150 nm)。进一步通过细胞毒性试验发现,试剂盒法提取的外泌体对细胞的增殖分化几乎没有影响。因此,基于本试验条件下,试剂盒法更适用于提取娟姗牛乳源性外泌体。
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关键词
外泌体
娟姗牛乳
差速超速离心法
试剂盒
法
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职称材料
奶牛乳源外泌体提取方法的优化及效果评价
被引量：
4
2
作者
赵莹
王靖雷
+6 位作者
王萌
王立斌
张倩
李志杰
马鑫
余四九
潘阳阳
《动物营养学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期1265-1276,共12页
乳源外泌体在疾病治疗及载体效应等领域应用颇为广泛,但目前乳源外泌体的提取方法仍步骤繁琐,耗时长,难以推广应用。为建立省时、高效和稳定的乳源外泌体提取方法,本试验在前期已建立的差速超速离心法、凝乳酶法、乙酸法及蔗糖密度梯度...
乳源外泌体在疾病治疗及载体效应等领域应用颇为广泛,但目前乳源外泌体的提取方法仍步骤繁琐,耗时长,难以推广应用。为建立省时、高效和稳定的乳源外泌体提取方法,本试验在前期已建立的差速超速离心法、凝乳酶法、乙酸法及蔗糖密度梯度离心法的基础上,通过增加离心速度、改变乙酸或凝乳酶用量、调整蔗糖密度梯度、减少离心步骤进行逐一优化。通过透射电子显微镜、纳米粒子跟踪分析、蛋白浓度检测、免疫印迹鉴定比较乳源外泌体形态结构、粒径大小、蛋白浓度、粒子浓度、特异性标记蛋白的差异,筛选出最优提取方法。结果显示:4种优化后提取方法均可分离获得具有典型“茶托”形状,介于30~200 nm的细胞外囊泡,但优化后的乙酸法提取乳源外泌体最多,视野密度高达80%以上,粒径大小为(151.0±47.2)nm,粒子浓度为6.2×10^(12)个/mL,均高于其他优化方法;优化后的乙酸法提取乳源外泌体的特异性标记蛋白[肿瘤易感基因101(TSG101)、热休克蛋白70(HSP70)、CD81和CD9]均表达量较高,其他3种优化方法提取到的乳源外泌体特异性标记蛋白发生不同程度降解,且提取乳源外泌体所得样品蛋白浓度均显著高于优化的乙酸法(P<0.05)。结果表明,优化后奶牛乳源外泌体乙酸提取法具有方法简单、耗时短、纯度高、特异性标记蛋白稳定等优点,该方法为外泌体需求量大的试验、医疗、工业生产等奠定一定基础。
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关键词
乳源外泌体
差速超速离心法
乙酸
凝乳酶
提取鉴定
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职称材料
题名
差速超速离心法与试剂盒法提取娟姗牛乳源性外泌体的分析比较
被引量：
3
1
作者
范士杰
马露
卜登攀
机构
中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
中国农业科学院与世界农用林业中心农用林业与可持续畜牧业联合实验室
出处
《动物营养学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第11期5441-5447,共7页
基金
国家重点研发计划(2018YFD0501600)
中国农业科学院科技创新工程(ASTIP-IAS07)
+1 种基金
北京市奶牛产业创新团队(BAIC06-2018)
畜产品安全工程安徽省重点实验室开放基金(No.xm2001)。
文摘
本试验旨在探究不同方法提取娟姗牛乳源性外泌体的优缺点。采用差速超速离心法和试剂盒法2种提取方法对娟姗牛乳源性外泌体进行提取,通过透射电镜(TEM)、Bradford蛋白定量、免疫印迹(WB)和粒径分析(NTA)方法对2种提取方法得到的外泌体进行比较鉴定,并采用细胞毒性试验对试剂盒法提取的外泌体进行细胞毒性评估。结果显示:2种提取方法均获得了茶托样结构的囊泡,但TEM视野下试剂盒法提取的外泌体较差速超速离心法多。试剂盒法提取的外泌体蛋白浓度显著高于差速超速离心法(P<0.05)。2种提取方法均能够检测到外泌体的标志性蛋白凋亡连接基因2相互作用蛋白X(ALIX)和四次跨膜蛋白(CD81);差速超速离心法提取的外泌体CD81蛋白丰度极低,且并未鉴定出标志性蛋白肿瘤敏感基因101蛋白(TSG101),但试剂盒法检测到了TSG101。2种提取方法得到的外泌体粒径分布均符合外泌体的正常粒径大小(30~150 nm)。进一步通过细胞毒性试验发现,试剂盒法提取的外泌体对细胞的增殖分化几乎没有影响。因此,基于本试验条件下,试剂盒法更适用于提取娟姗牛乳源性外泌体。
关键词
外泌体
娟姗牛乳
差速超速离心法
试剂盒
法
Keywords
exosomes
Jersey milk
differential ultracentrifugation method
kit extraction method
分类号
S823 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
奶牛乳源外泌体提取方法的优化及效果评价
被引量：
4
2
作者
赵莹
王靖雷
王萌
王立斌
张倩
李志杰
马鑫
余四九
潘阳阳
机构
甘肃农业大学动物医学院
甘肃省牛羊胚胎工程技术研究中心
出处
《动物营养学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第2期1265-1276,共12页
基金
甘肃农业大学青年导师基金(GAU-QDFC-2022-02)
甘肃省重点人才项目(2022RCXM016)
+1 种基金
国家自然科学基金地区项目(32160859)
甘肃省杰出青年基金(20JR10RA561)。
文摘
乳源外泌体在疾病治疗及载体效应等领域应用颇为广泛,但目前乳源外泌体的提取方法仍步骤繁琐,耗时长,难以推广应用。为建立省时、高效和稳定的乳源外泌体提取方法,本试验在前期已建立的差速超速离心法、凝乳酶法、乙酸法及蔗糖密度梯度离心法的基础上,通过增加离心速度、改变乙酸或凝乳酶用量、调整蔗糖密度梯度、减少离心步骤进行逐一优化。通过透射电子显微镜、纳米粒子跟踪分析、蛋白浓度检测、免疫印迹鉴定比较乳源外泌体形态结构、粒径大小、蛋白浓度、粒子浓度、特异性标记蛋白的差异,筛选出最优提取方法。结果显示:4种优化后提取方法均可分离获得具有典型“茶托”形状,介于30~200 nm的细胞外囊泡,但优化后的乙酸法提取乳源外泌体最多,视野密度高达80%以上,粒径大小为(151.0±47.2)nm,粒子浓度为6.2×10^(12)个/mL,均高于其他优化方法;优化后的乙酸法提取乳源外泌体的特异性标记蛋白[肿瘤易感基因101(TSG101)、热休克蛋白70(HSP70)、CD81和CD9]均表达量较高,其他3种优化方法提取到的乳源外泌体特异性标记蛋白发生不同程度降解,且提取乳源外泌体所得样品蛋白浓度均显著高于优化的乙酸法(P<0.05)。结果表明,优化后奶牛乳源外泌体乙酸提取法具有方法简单、耗时短、纯度高、特异性标记蛋白稳定等优点,该方法为外泌体需求量大的试验、医疗、工业生产等奠定一定基础。
关键词
乳源外泌体
差速超速离心法
乙酸
凝乳酶
提取鉴定
Keywords
milk exosomes
differential overspeed centrifugal method
acetic acid
rennet
extraction and identification
分类号
S811.3 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
差速超速离心法与试剂盒法提取娟姗牛乳源性外泌体的分析比较
范士杰
马露
卜登攀
《动物营养学报》
CAS
CSCD
北大核心
2020
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
奶牛乳源外泌体提取方法的优化及效果评价
赵莹
王靖雷
王萌
王立斌
张倩
李志杰
马鑫
余四九
潘阳阳
《动物营养学报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
4
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