目的探讨CD137-CD137配体(CD137L)信号是否通过调控巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达影响血管平滑肌细胞(VSMC)钙化形成。方法采用巯基乙酸盐腹腔灌洗法获取C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞(PM),采用组织块贴壁法取3~6代胸主动脉VSMC分...目的探讨CD137-CD137配体(CD137L)信号是否通过调控巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达影响血管平滑肌细胞(VSMC)钙化形成。方法采用巯基乙酸盐腹腔灌洗法获取C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞(PM),采用组织块贴壁法取3~6代胸主动脉VSMC分为对照组、共培养组、CD137激动组和MMP-9抑制组(n=3)。对照组用重组CD137L蛋白干预VSMC,共培养组用PM和VSMC共培养,CD137激动组和MMP-9抑制组分别用重组CD137L蛋白和MMP-9抑制剂干预PM后,与VSMC共培养,再加入重组CD137蛋白(10μg/ml)干预。采用Western blot检测各组钙化相关的骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx-2)表达,微板法检测钙离子浓度和碱性磷酸酶(ALP)活性,Von Kossa和茜素红染色检测各组细胞钙化程度。结果CD137激动组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性明显高于共培养组(P<0.01),而MMP-9抑制组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性明显低于CD137激动组,差异有统计学意义[0.25±0.27 vs 2.12±0.34,0.30±0.32 vs 2.63±0.41,(1.92±0.09)mmol/g vs(4.99±0.37)mmol/g,(1.11±0.50)KU/g vs(2.63±0.04)KU/g,P<0.01]。共培养组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性与对照组比较,无统计学意义(P>0.05)。CD137激动组茜素红染色红色颗粒物质沉积和Von Kossa染色黑色颗粒物质沉积明显多于对照组和共培养组;MMP-9抑制组钙化程度显著降低;对照组和共培养组钙化程度则无明显差异。结论CD137-CD137L信号可能通过调控巨噬细胞MMP-9表达影响VSMC钙化形成。展开更多
目的探讨Toll样受体4(TLR4)信号通路在细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)所介导的单核细胞白血病细胞株(THP-1)巨噬细胞调节基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-14中的作用机制。方法实验分为对照组:THP-1巨噬细胞;刺激组:THP-1巨噬细胞+E...目的探讨Toll样受体4(TLR4)信号通路在细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)所介导的单核细胞白血病细胞株(THP-1)巨噬细胞调节基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-14中的作用机制。方法实验分为对照组:THP-1巨噬细胞;刺激组:THP-1巨噬细胞+EMMPRIN(1ng/ml)刺激6h;抑制组:THP-1巨噬细胞+TAK-242(5μmol/L)抑制4h,PBS清洗3次,再加EMMPRIN刺激6h。运用qRT-PCR和Western blot检测MMP-9、MMP-14基因;MMP-9、MMP-14和TLR4蛋白表达。结果光学显微镜下观察显示,THP-1单核细胞悬浮生长,呈圆形或类圆形,经100ng/ml佛波酯诱导分化48h,细胞体积增大,可伴有伪足伸出,呈椭圆形、长条梭形或短棒状,95%以上细胞贴壁生长。与对照组比较,刺激组MMP-9、MMP-14基因以及MMP-9、MMP-14和TLR4蛋白表达明显升高,抑制组TLR4蛋白表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与刺激组比较,抑制组MMP-9、MMP-14基因以及MMP-9、MMP-14和TLR4蛋白表达明显下降(4.384±0.732 vs 6.473±0.739,3.178±0.492 vs 4.937±0.538,0.635±0.115 vs 0.832±0.114,0.454±0.067 vs 0.733±0.128,0.206±0.058 vs 0.481±0.086,P<0.05)。结论TLR4信号通路在EMMPRIN所介导的THP-1巨噬细胞上调MMP-9、MMP-14表达中起积极作用。展开更多
文摘目的探讨CD137-CD137配体(CD137L)信号是否通过调控巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达影响血管平滑肌细胞(VSMC)钙化形成。方法采用巯基乙酸盐腹腔灌洗法获取C57BL/6J小鼠腹腔巨噬细胞(PM),采用组织块贴壁法取3~6代胸主动脉VSMC分为对照组、共培养组、CD137激动组和MMP-9抑制组(n=3)。对照组用重组CD137L蛋白干预VSMC,共培养组用PM和VSMC共培养,CD137激动组和MMP-9抑制组分别用重组CD137L蛋白和MMP-9抑制剂干预PM后,与VSMC共培养,再加入重组CD137蛋白(10μg/ml)干预。采用Western blot检测各组钙化相关的骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx-2)表达,微板法检测钙离子浓度和碱性磷酸酶(ALP)活性,Von Kossa和茜素红染色检测各组细胞钙化程度。结果CD137激动组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性明显高于共培养组(P<0.01),而MMP-9抑制组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性明显低于CD137激动组,差异有统计学意义[0.25±0.27 vs 2.12±0.34,0.30±0.32 vs 2.63±0.41,(1.92±0.09)mmol/g vs(4.99±0.37)mmol/g,(1.11±0.50)KU/g vs(2.63±0.04)KU/g,P<0.01]。共培养组VSMC中OPN和Runx-2蛋白表达、钙离子浓度及ALP活性与对照组比较,无统计学意义(P>0.05)。CD137激动组茜素红染色红色颗粒物质沉积和Von Kossa染色黑色颗粒物质沉积明显多于对照组和共培养组;MMP-9抑制组钙化程度显著降低;对照组和共培养组钙化程度则无明显差异。结论CD137-CD137L信号可能通过调控巨噬细胞MMP-9表达影响VSMC钙化形成。
文摘目的探讨Toll样受体4(TLR4)信号通路在细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(EMMPRIN)所介导的单核细胞白血病细胞株(THP-1)巨噬细胞调节基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-14中的作用机制。方法实验分为对照组:THP-1巨噬细胞;刺激组:THP-1巨噬细胞+EMMPRIN(1ng/ml)刺激6h;抑制组:THP-1巨噬细胞+TAK-242(5μmol/L)抑制4h,PBS清洗3次,再加EMMPRIN刺激6h。运用qRT-PCR和Western blot检测MMP-9、MMP-14基因;MMP-9、MMP-14和TLR4蛋白表达。结果光学显微镜下观察显示,THP-1单核细胞悬浮生长,呈圆形或类圆形,经100ng/ml佛波酯诱导分化48h,细胞体积增大,可伴有伪足伸出,呈椭圆形、长条梭形或短棒状,95%以上细胞贴壁生长。与对照组比较,刺激组MMP-9、MMP-14基因以及MMP-9、MMP-14和TLR4蛋白表达明显升高,抑制组TLR4蛋白表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与刺激组比较,抑制组MMP-9、MMP-14基因以及MMP-9、MMP-14和TLR4蛋白表达明显下降(4.384±0.732 vs 6.473±0.739,3.178±0.492 vs 4.937±0.538,0.635±0.115 vs 0.832±0.114,0.454±0.067 vs 0.733±0.128,0.206±0.058 vs 0.481±0.086,P<0.05)。结论TLR4信号通路在EMMPRIN所介导的THP-1巨噬细胞上调MMP-9、MMP-14表达中起积极作用。
