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干细胞和巨噬细胞来源的外泌体对结肠炎的调控作用及其机制
1
作者 刘苡佳 刘斌 +2 位作者 胡奎 陈颜芳 蔡德 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第3期447-453,共7页
结肠炎是一种常见的炎症性肠道疾病,其发病机制与免疫调节、肠道微生物稳态等有关。外泌体是由细胞分泌的一种膜囊泡,包含蛋白质、脂质等物质。干细胞和巨噬细胞可通过分泌外泌体参与调控相关疾病。研究发现,干细胞和巨噬细胞来源的外... 结肠炎是一种常见的炎症性肠道疾病,其发病机制与免疫调节、肠道微生物稳态等有关。外泌体是由细胞分泌的一种膜囊泡,包含蛋白质、脂质等物质。干细胞和巨噬细胞可通过分泌外泌体参与调控相关疾病。研究发现,干细胞和巨噬细胞来源的外泌体密切参与结肠炎的调节,而干细胞中尤其是间充质干细胞衍生的外泌体在抗结肠炎中发挥重要作用。本文综述了以间充质干细胞为主的干细胞以及巨噬细胞来源的外泌体调节结肠炎的作用及可能机制,旨在为深入研究结肠炎及为其治疗新策略提供思路。 展开更多
关键词 外泌体 结肠炎 间充质干细胞 巨噬细胞
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M2型巨噬细胞来源的外泌体lncRNA NR_028113.1通过激活JAK2/STAT3通路促进巨噬细胞的极化 被引量：4
2
作者 张梦莹 李志 +4 位作者 裴纬亚 李雪琴 杨辉 朱小龙 吕坤 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期393-399,共7页
目的探究M2型巨噬细胞来源的外泌体lncRNA NR_028113.1对巨噬细胞极化的影响及机制。方法体外分离并培养BALB/c小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs),IL-4诱导其向M2型巨噬细胞极化后,提取并鉴定M2细胞上清液所分泌的外泌体exosome(M2-exo),qR... 目的探究M2型巨噬细胞来源的外泌体lncRNA NR_028113.1对巨噬细胞极化的影响及机制。方法体外分离并培养BALB/c小鼠骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs),IL-4诱导其向M2型巨噬细胞极化后,提取并鉴定M2细胞上清液所分泌的外泌体exosome(M2-exo),qRT-PCR检测M2外泌体中lncRNA的表达。将100μg/mL的M2-exo,对照组用等体积的PBS分别与M0巨噬细胞共孵育48 h后,qRT-PCR及Western blot检测各组细胞中Arg1、YM-1、FIZZ1、iNOS和TNF-α的表达,流式细胞术检测CD206^(+)细胞比例,Western blot检测各组细胞JAK2/STAT3蛋白磷酸化水平。设计、合成lncRNA smart silencer特异性抑制lncRNA NR_028113.1的表达,转染M2细胞48 h后提取各组细胞(exo+NC和exo+smart silencer)上清液分泌的外泌体再与M0型巨噬细胞共孵育,检测孵育后各组细胞中Arg1、YM-1、FIZZ1、iNOS和TNF-α的表达以及CD206^(+)细胞比例和JAK2/STAT3信号通路蛋白磷酸化水平。结果lncRNA NR_028113.1在M2型巨噬细胞外泌体中高表达(P<0.05)。相比于PBS对照组,与M2-exo共培养的M0巨噬细胞中Arg1、YM-1和FIZZ1表达均显著上调(P<0.05),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.05),CD206^(+)细胞所占比例显著增加(P<0.01),JAK2/STAT3蛋白磷酸化水平显著增加(P<0.05)。抑制M2-exo中lncRNA NR_028113.1的表达后,共培养的M0巨噬细胞中Arg1、YM-1和FIZZ1表达显著下调(P<0.05),iNOS和TNF-α表达显著上调(P<0.05),CD206^(+)细胞所占比例显著减少(P<0.05),JAK2/STAT3蛋白磷酸化水平显著减少(P<0.05)。结论M2型巨噬细胞来源的外泌体lncRNA NR_028113.1可显著促进巨噬细胞向M2型极化,其机制可能与激活JAK2/STAT3信号通路相关。 展开更多
关键词 外泌体 lncRNA 巨噬细胞极化 JAK2 STAT3
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巨噬细胞来源的外泌体不同提取方法的比较 被引量：11
3
作者 王飘飘 王会会 +2 位作者 彭代银 张善堂 陈卫东 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期589-592,共4页
目的根据聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)沉淀原理,结合超高速离心改进一种简便、快速的细胞外泌体分离方法。方法采用超高速离心法、PEG6000沉淀结合超高速离心和EXO Quick试剂盒,分别提取巨噬细胞外泌体。通过透射电镜、NanoSight... 目的根据聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)沉淀原理,结合超高速离心改进一种简便、快速的细胞外泌体分离方法。方法采用超高速离心法、PEG6000沉淀结合超高速离心和EXO Quick试剂盒,分别提取巨噬细胞外泌体。通过透射电镜、NanoSight ZS及Nanoparticle tracker(NTA)分析外泌体的形态和粒径;蛋白印迹法鉴定细胞外泌体标志物Alix、TSG101的表达情况。结果 PEG6000沉淀结合超高速离心法获得的外泌体,其粒径分布和差速离心法相当,小于商品化的EXO Quick试剂盒。而外泌体表面蛋白Alix、TSG101在3种方法提取的沉淀物中都有表达。透射电镜结果显示,3种方法均获得典型的盘状囊泡。结论实验改进的细胞外泌体提取方法操作简洁、效率高,并且成本较低。 展开更多
关键词 巨噬细胞 外泌体 蛋白印迹法 透射电镜 纳米粒子示踪技术 聚乙二醇
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CP-25调控巨噬细胞来源的外泌体分泌对子宫内膜癌Ishikawa细胞系自噬性细胞死亡的影响 被引量：2
4
作者 郑小妹 林叶飞 +2 位作者 张韶琼 杨洁 陈曼玲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期323-329,共7页
目的:探讨芍药苷-6'-O-苯磺酸酯(CP-25)通过调控巨噬细胞来源的外泌体对子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬性细胞死亡的影响。方法:使用佛波酯(PMA)将人单核细胞THP-1诱导为巨噬细胞,并提取其外泌体,透射电子显微镜观察外泌体形态,Western... 目的:探讨芍药苷-6'-O-苯磺酸酯(CP-25)通过调控巨噬细胞来源的外泌体对子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬性细胞死亡的影响。方法:使用佛波酯(PMA)将人单核细胞THP-1诱导为巨噬细胞,并提取其外泌体,透射电子显微镜观察外泌体形态,Western blot鉴定外泌体标志蛋白表达;使用不同浓度CP-25(0.1、0.5、1.0μmol/L)干预巨噬细胞外泌体,并与Ishikawa细胞共培养24 h,CCK-8法检测各处理组Ishikawa细胞活性,Transwell小室检测各处理组Ishikawa细胞的迁移与侵袭;以自噬抑制剂3-MA干预细胞,实验分为对照组、3-MA组、Exo-CP-25组、3-MA+Exo-CP-25组,进行对应处理后,Hoechst 33342染色观察各处理组Ishikawa细胞凋亡形态,流式细胞术检测各处理组Ishikawa细胞凋亡率,透射电子显微镜观察各处理组Ishikawa细胞自噬体,免疫荧光染色检测各处理组Ishikawa细胞自噬相关标志物LC3表达,Western blot检测各处理组Ishikawa细胞自噬相关蛋白表达。结果:经鉴定成功分离了诱导后巨噬细胞的外泌体;巨噬细胞来源外泌体与Ishikawa细胞共培养后,细胞活性升高(P<0.05),细胞迁移数与侵袭数均增加(P<0.01);CP-25干预巨噬细胞来源的外泌体与Ishikawa细胞共培养后,细胞活性下降(P<0.05),细胞迁移数与侵袭数均减少(P<0.01);经CP-25干预巨噬细胞来源的外泌体与Ishikawa细胞共培养后,细胞内出现浓缩、碎裂凋亡体,细胞凋亡率增加(P<0.01),LC3绿色荧光表达强度增加(P<0.01),细胞内可见多个由单层膜或双层膜组成的自噬体,同时,LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达增加,P62蛋白表达减少,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著上调(P<0.01);而3-MA处理Ishikawa细胞后再用CP-25干预巨噬细胞来源的外泌体与Ishikawa细胞共培养后,细胞核浓缩与碎裂的现象减少,细胞凋亡率下降(P<0.01),LC3绿色荧光表达强度减弱(P<0.01),细胞内自噬体减少,LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达减少,P62蛋白表达增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ显著下调(P<0.01)。结论:CP-25能够调控巨噬细胞来源的外泌体从而影响子宫内膜癌Ishikawa细胞的自噬性死亡。 展开更多
关键词 巨噬细胞 外泌体 子宫内膜癌 CP-25 细胞自噬性死亡
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M2巨噬细胞来源的外泌体转运miR-1260b促进胶质母细胞瘤迁移的机制研究 被引量：4
5
作者 张衡 陈倩倩 +3 位作者 桂艳萍 黄敏 郭雅冰 赵丽 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期95-106,共12页
肿瘤相关巨噬细胞浸润肿瘤组织并促进胶质母细胞瘤进展,但作用机制还有待进一步研究。本文以探究M2巨噬细胞通过分泌外泌体影响胶质母细胞瘤迁移能力的机制为目的。采用超高速离心法提取外泌体;采用RNA测序筛选差异表达的miRNA;采用数... 肿瘤相关巨噬细胞浸润肿瘤组织并促进胶质母细胞瘤进展,但作用机制还有待进一步研究。本文以探究M2巨噬细胞通过分泌外泌体影响胶质母细胞瘤迁移能力的机制为目的。采用超高速离心法提取外泌体;采用RNA测序筛选差异表达的miRNA;采用数据库靶点预测miRNA可能的靶蛋白;采用双萤光素酶报告基因实验验证miRNA与靶基因的相互作用;采用裸鼠皮下移植瘤模型检测肿瘤细胞增殖能力。实验结果表明,肿瘤相关巨噬细胞主要是M2巨噬细胞,M2巨噬细胞分泌的外泌体能够促进脑胶质瘤细胞的迁移,其机制与转运miR-1260b且靶向调控AJAP1影响脑胶质瘤细胞的迁移有关,提示巨噬细胞分泌的外泌体通过转运miR-1260b,从而影响胶质母细胞瘤的迁移能力。 展开更多
关键词 胶质母细胞瘤 M2巨噬细胞 外泌体 miR-1260b AJAP1
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M2型巨噬细胞外泌体通过AKT-WEE1通路促进SCs增殖增强神经再生
6
作者 吴礼毛 贺靖澜 +1 位作者 申娜 陈松 《中国比较医学杂志》 北大核心 2025年第5期37-50,共14页
目的探索巨噬细胞源外泌体在周围神经损伤中的作用机制。方法巨噬细胞极化为M1与M2表型后提取外泌体干预雪旺细胞,随后进行细胞增殖、实时荧光定量聚合酶链反应、流式细胞术、RNA测序以及蛋白免疫印迹法实验等。体内建立坐骨神经挤压模... 目的探索巨噬细胞源外泌体在周围神经损伤中的作用机制。方法巨噬细胞极化为M1与M2表型后提取外泌体干预雪旺细胞,随后进行细胞增殖、实时荧光定量聚合酶链反应、流式细胞术、RNA测序以及蛋白免疫印迹法实验等。体内建立坐骨神经挤压模型并分为磷酸缓冲盐水治疗组、M1-exo治疗组及M2-exo治疗组,分别注射磷酸缓冲盐水、M1型外泌体及M2型外泌体,同时另设正常组。术后每周对各组坐骨神经功能指数、湿重率以及肌肉神经组织染色等进行评估。结果M1型外泌体促进雪旺细胞迁徙并上调胶质源性神经生长因子;M2型外泌体促进雪旺细胞增殖迁徙并上调脑源性神经生长因子、神经生长因子、髓鞘蛋白零、胶质纤维酸性蛋白、神经生长因子受体及S100钙结合蛋白B等。体内第4周M2型外泌体组坐骨神经功能指数、湿重率、肌肉神经组织Masson染色及神经轴突与雪旺细胞荧光面积均优于PBS治疗组,均具有显著差异,而M1-exo治疗组与PBS治疗组则无显著差异。同时,体内外实验均表明M2-exo可通过磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶后下调细胞周期蛋白WEE1促进雪旺细胞增殖。结论M2型外泌体促进雪旺细胞上调神经再生相关基因;并可通过AKT-WEE1通路促进雪旺细胞增殖、迁徙以提高神经再生。 展开更多
关键词 巨噬细胞 外泌体 雪旺细胞 周围神经损伤 WEE1
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丹寿汤对复发性流产小鼠蜕膜巨噬细胞外泌体miRNA表达谱的影响
7
作者 徐广立 田超 +4 位作者 郭晶晶 郭婧 景竹青 李思梦 陈萍 《郑州大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期33-37,共5页
目的:探讨丹寿汤对复发性流产小鼠蜕膜巨噬细胞外泌体miRNA表达谱的影响。方法:将12只CBA/J雌鼠随机分为2组,每组6只,丹寿汤组灌胃丹寿汤1 mL/次,2次/d,模型组则灌胃等体积蒸馏水,连续7 d。停药3 d后,将雌鼠与DBA/2雄鼠合笼交配,诱导复... 目的:探讨丹寿汤对复发性流产小鼠蜕膜巨噬细胞外泌体miRNA表达谱的影响。方法:将12只CBA/J雌鼠随机分为2组,每组6只,丹寿汤组灌胃丹寿汤1 mL/次,2次/d,模型组则灌胃等体积蒸馏水,连续7 d。停药3 d后,将雌鼠与DBA/2雄鼠合笼交配,诱导复发性流产,雌鼠继续灌胃蒸馏水或丹寿汤。于受孕第15天安乐处死孕鼠,称重胚胎并计算胚胎吸收率。收集蜕膜组织,免疫磁珠法分选蜕膜巨噬细胞,超速离心法提取外泌体,透射电镜下观察外泌体形态,Western blot法检测CD63表达。采用高通量测序技术检测外泌体miRNA表达情况,筛选差异miRNA,并与miRanda、miRWalk和miRDB数据库进行比对,筛选差异miRNA靶基因,对靶基因进行GO和KEGG富集分析。结果:丹寿汤组小鼠胚胎质量大于模型组,胚胎吸收率小于模型组(P<0.05)。共筛选出14个蜕膜巨噬细胞外泌体差异miRNA,其中5个(miR-466m-3p、miR-497a-3p、miR-7015-3p、miR-744-3p和miR-7679-5p)在丹寿汤组表达上调,9个(miR-222-5p、miR-541-5p、miR-3963、miR-669o-5p、miR-3062-5p、miR-34c-3p、miR-6976-5p、miR-3473g和miR-434-5p)表达下调。预测的靶基因有1 490个,GO和KEGG富集分析结果显示,靶基因功能主要为参与蜕膜巨噬细胞的细胞过程及组成等,主要涉及PI3K-Akt和MAPK等信号通路。结论:丹寿汤可能通过调控蜕膜巨噬细胞外泌体miRNA的表达,发挥治疗复发性流产的作用。 展开更多
关键词 复发性流产 丹寿汤 蜕膜巨噬细胞 外泌体 MIRNA 小鼠
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人参外泌体通过促进巨噬细胞M1极化抑制肺癌细胞生长
8
作者 范亮亮 任李梅 +5 位作者 杨松 李文婧 赵悦名 赵荣华 赵大庆 王佳雯 《食品工业科技》 北大核心 2025年第4期358-366,共9页
目的:旨在探讨人参外泌体(Ginseng-derived nanoparticles,GDNPs)通过改变巨噬细胞极化状态,抑制人非小细胞肺癌细胞(A549)生长的分子机制,为人参鲜药的深入研究提供一定的理论基础。方法:采用CCK-8法检测人参外泌体对巨噬细胞(RAW264.7... 目的:旨在探讨人参外泌体(Ginseng-derived nanoparticles,GDNPs)通过改变巨噬细胞极化状态,抑制人非小细胞肺癌细胞(A549)生长的分子机制,为人参鲜药的深入研究提供一定的理论基础。方法:采用CCK-8法检测人参外泌体对巨噬细胞(RAW264.7)活力的影响;实时定量PCR检测人参外泌体刺激巨噬细胞M1极化相关指标IL-6、iNOS、TNF-α、MCP-1转录水平;流式细胞术检测M1型巨噬细胞分子标志CD80的表达。收集LPS和人参外泌体处理的RAW264.7细胞衍生的上清液,制成条件培养基(CM),并与A549共培养。CCK8和流式细胞术检测A549细胞活力、细胞周期和细胞凋亡;采用Western blot检测GDNPs-CM对A549细胞中TLR4/MyD88通路相关蛋白表达的影响。结果:人参外泌体能够增强巨噬细胞的细胞活力(P<0.05,P<0.01),并提高巨噬细胞M1极化相关指标IL-6、iNOS、TNF-α、MCP-1转录水平的表达(P<0.05,P<0.01,P<0.0001);人参外泌体增强了M1型巨噬细胞分子标志CD80的表达(P<0.01)。在条件培养基作用下,A549细胞的细胞活力受到抑制,并发生G1期阻滞,A549细胞的凋亡率提高(P<0.05,P<0.01);同时,GDNPs-CM促进了A549细胞中TLR4、MyD88、NF-κB、iNOS、COX-2等炎症相关蛋白表达量(P<0.05,P<0.01)。结论:人参外泌体通过刺激巨噬细胞M1极化,抑制A549细胞增殖,调节A549细胞周期,激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路提高炎症因子的表达水平,从而诱导肺癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 人参外泌体 肿瘤相关巨噬细胞 人非小细胞肺癌细胞 细胞周期 细胞凋亡
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补阳还五汤通过调控外泌体miR-590-5p介导的巨噬细胞极化延缓大鼠血管衰老
9
作者 涂舒谕 陈祥宇 +2 位作者 李程辉 黄丹萍 张莉 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第6期1251-1259,共9页
目的 探讨补阳还五汤对血管衰老的延缓作用机制是否与外泌体miR-590-5p介导的巨噬细胞极化有关。方法 将18只雄性SD大鼠随机分为年轻组、衰老组和补阳还五汤组,6只/组。通过腹腔注射D-半乳糖300 mg·kg^(-1)·d^(-1)建立衰老模... 目的 探讨补阳还五汤对血管衰老的延缓作用机制是否与外泌体miR-590-5p介导的巨噬细胞极化有关。方法 将18只雄性SD大鼠随机分为年轻组、衰老组和补阳还五汤组,6只/组。通过腹腔注射D-半乳糖300 mg·kg^(-1)·d^(-1)建立衰老模型,补阳还五汤组灌胃补阳还五汤4.4 g/kg,年轻组、衰老组给予等量生理盐水。Vevo 3100高分辨率超声成像系统检测大鼠腹主动脉脉搏波传导速度(PWV)。分离胸主动脉,ELISA法测定血管组织衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性;免疫组织化学法检测p16、p21和SA-β-gal表达。提取各组大鼠血清外泌体并通过纳米颗粒跟踪分析及透射电镜观察外泌体的大小及形态;Western blotting检测血清外泌体表面标记物(CD63和CD81)、血管内皮细胞和血管平滑肌细胞标记蛋白(CD31和SM-22);qRT-PCR检测血清外泌体中miR-590-5p表达;免疫荧光染色和qRT-PCR检测巨噬细胞M1/M2比例及炎性细胞因子表达;生物信息学分析预测miR-590-5p靶基因;双荧光素酶报告基因实验验证miR-590-5p与SLC8A3的靶向关系;Western blotting检测血管组织中SLC8A3表达。结果 与年轻组相比,衰老组大鼠腹主动脉PWV升高(P<0.001),血管中p16、p21和SA-β-gal表达增加(P<0.05);与衰老组相比,补阳还五汤组能够逆转衰老引起的上述变化(P<0.05)。提取的血清外泌体大小为50~150 nm,呈现经典的双凹状囊性小泡结构。分离的血清外泌体不仅表达外泌体表面标记CD63和CD81,还可表达血管内皮细胞及血管平滑肌细胞标记蛋白CD31和SM-22。与年轻组相比,衰老组大鼠血清外泌体中miR-590-5p表达下调(P<0.001),血管中M1和M2巨噬细胞比例(P<0.01)以及M1巨噬细胞特异性细胞因子白细胞介素6和白细胞介素1β升高(P<0.01),M2巨噬细胞特异性细胞因子白细胞介素4和白细胞介素10降低(P<0.01)。与衰老组相比,补阳还五汤组上调衰老大鼠血清外泌体中miR-590-5p表达(P<0.001),抑制衰老血管巨噬细胞M1极化(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,血清外泌体miR-590-5p表达升高与M1/M2巨噬细胞比例呈负相关(P<0.05)。生物信息学分析显示,miR-590-5p与SLC8A3基因序列存在特异性互补结合位点,双荧光素酶报告实验证实miR-590-5p靶向SLC8A3基因并负调控SLC8A3表达(P<0.05)。Western blotting表明,与年轻组相比,衰老组血管组织中SLC8A3表达升高(P<0.05);与衰老组相比,补阳还五汤组中SLC8A3表达下调(P<0.05)。结论 补阳还五汤通过增加外泌体转运miR-590-5p靶向抑制SLC8A3基因表达,改善血管巨噬细胞M1极化及炎性细胞激活,进而延缓血管衰老。 展开更多
关键词 补阳还五汤 miR-590-5p 外泌体 巨噬细胞极化 血管衰老
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低氧条件下食管癌来源外泌体调控巨噬细胞M2型分化与自噬的机制研究 被引量：2
10
作者 尹星 邢艳丽 +3 位作者 常欢 周阳 付民 尹先哲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期299-304,311,共7页
目的:探究低氧条件下食管癌外泌体对巨噬细胞分化和自噬的影响及机制。方法:50 ng/ml PMA诱导THP-1分化为M0型巨噬细胞,超速离心法提取并鉴定HEEC、Eca-109、缺氧诱导的Eca-109细胞分泌的外泌体(记为HEEC-exo、NomEca-109-exo、Hypo-Eca... 目的:探究低氧条件下食管癌外泌体对巨噬细胞分化和自噬的影响及机制。方法:50 ng/ml PMA诱导THP-1分化为M0型巨噬细胞,超速离心法提取并鉴定HEEC、Eca-109、缺氧诱导的Eca-109细胞分泌的外泌体(记为HEEC-exo、NomEca-109-exo、Hypo-Eca-109-exo),激光共聚焦显微镜观察巨噬细胞对外泌体的摄取,将PBS、HEEC exo、Nom-Eca-109-exo、HypoEca-109-exo分别与M0型巨噬细胞共孵育,流式细胞术检测各组细胞CD14和CD206表达,ELISA检测细胞因子IL-1β、IL-12、TNF-α、Arg1、IL-10和TGF-β,qRT-PCR检测各组细胞CCR7、TLR2、CD206和CD14表达,Transwell检测各组细胞迁移和侵袭,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、Beclin-1和p62表达及PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平。结果:提取的外泌体符合结构和生物学特征。相比于PBS组,与Nom-Eca-109-exo、Hypo-Eca-109-exo孵育后,各组M0型巨噬细胞CCR7、TLR2表达显著降低、CD206和CD14表达显著增加,IL-1β、IL-12、TNF-α分泌显著减少,Arg1、IL-10和TGF-β分泌显著增加,LC3-Ⅱ、Beclin-1表达显著增加,p62表达显著降低,细胞迁移和侵袭数显著增加,PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平显著升高。相比于NomEca-109-exo组,Hypo-Eca-109-exo组细胞CD206和CD14表达显著增加,Arg1、IL-10和TGF-β分泌显著增加,LC3-Ⅱ、Beclin-1表达显著增加,p62表达显著降低,细胞迁移和侵袭数显著增加,PI3K、Akt、mTOR的磷酸化水平显著升高。结论:低氧诱导的食管癌细胞外泌体可显著促进M2型巨噬细胞分化和自噬,进而促进肿瘤迁移和侵袭,其机制为激活PI3K/Akt/mTOR信号通路。 展开更多
关键词 低氧 食管癌 外泌体 巨噬细胞分化 自噬 机制
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肺癌细胞外泌体诱导M2型巨噬细胞的极化促进肺癌细胞迁移和侵袭作用及其机制研究
11
作者 周薇 李金权 +2 位作者 马文卓 王有德 童红梅 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第2期362-366,373,共6页
目的:探究肺癌细胞外泌体对M2型巨噬细胞诱导的肺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:提取并鉴定16HBE、A549、H522细胞所分泌的外泌体(16HBE exo、A549 exo、H522 exo),将10μg/ml 16HBE exo、A549 exo、H522 exo、等体积PBS与M0型巨噬细胞... 目的:探究肺癌细胞外泌体对M2型巨噬细胞诱导的肺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:提取并鉴定16HBE、A549、H522细胞所分泌的外泌体(16HBE exo、A549 exo、H522 exo),将10μg/ml 16HBE exo、A549 exo、H522 exo、等体积PBS与M0型巨噬细胞共孵育(16HBE exo组、A549 exo组、H522 exo组、PBS组),qRT-PCR检测各组巨噬细胞Arginase-1、CD206、CD163、TGF-β、iNOS、IL-1β表达,流式细胞术检测各组巨噬细胞中CD206+CD163+的表达,Western blot检测ERK1/2和STAT3磷酸化水平。将A549和H522细胞与上述各组巨噬细胞共孵育(16HBE exo+M0组、A549 exo+M0组、H522 exo+M0组、PBS+M0组),使用Transwell检测A549和H522细胞迁移和侵袭能力。结果:相比于PBS组,A549 exo组和H522 exo组巨噬细胞Arginase-1、CD206、CD163、TGF-β表达显著上调(P<0.001),iNOS和IL-1β表达显著下调(P<0.001),CD206+CD163+巨噬细胞比例显著增加(P<0.001),ERK1/2和STAT3磷酸化水平显著增加(P<0.001)。16HBE exo组上述指标与PBS组相比差异无统计学意义(P>0.05)。A549 exo+M0组和H522 exo+M0组A549和H522细胞迁移和侵袭能力均显著增加(P<0.001)。结论:肺癌细胞外泌体可通过激活ERK1/2/STAT3信号通路诱导M2型巨噬细胞极化而促进肿瘤的迁移和侵袭。 展开更多
关键词 肺癌 外泌体 M2型巨噬细胞 迁移 侵袭
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结直肠癌外泌体诱导肿瘤相关巨噬细胞极化抑制CD8^(+)T细胞抗肿瘤活性
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作者 周江浩 谢书海 陈勇 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第1期61-68,共8页
目的探讨结直肠癌外泌体诱导巨噬细胞极化对CD8^(+)T细胞抗肿瘤活性的影响。方法M0型巨噬细胞与PBS及HT-29和LoVo细胞外泌体(HT-29 exo和LoVo exo)共孵育48 h(PBS组、HT-29 exo组、LoVo exo组),实时定量PCR检测细胞中M2型巨噬细胞标志物... 目的探讨结直肠癌外泌体诱导巨噬细胞极化对CD8^(+)T细胞抗肿瘤活性的影响。方法M0型巨噬细胞与PBS及HT-29和LoVo细胞外泌体(HT-29 exo和LoVo exo)共孵育48 h(PBS组、HT-29 exo组、LoVo exo组),实时定量PCR检测细胞中M2型巨噬细胞标志物CD206、Arginase-1、IL-10、CD163以及M1型巨噬细胞标志物iNOS和IL-1βmRNA表达量。CD8^(+)T细胞与PBS组、HT-29 exo组和LoVo exo组M0巨噬细胞共孵育48 h(PBS+M0组、HT-29 exo+M0组和LoVo exo+M0组),流式细胞术检测CD8^(+)T细胞中PD-1的表达。将PBS+M0组、HT-29 exo+M0组和LoVo exo+M0组CD8^(+)T细胞分别与HT-29及LoVo细胞共孵育24 h(PBS+M0/CD8^(+)T组,HT-29 exo+M0/CD8^(+)T组和LoVo exo+M0/CD8^(+)T组),ELISA检测细胞上清γ干扰素(IFN-γ)、穿孔素(perforin)和颗粒酶B(granzyme B)浓度,细胞毒性实验检测HT-29和LoVo细胞裂解率。结果与PBS组相比,HT-29 exo组、LoVo exo组细胞中CD206、Arginase-1、IL-10、CD163 mRNA表达显著上调(P<0.05),iNOS和IL-1βmRNA表达显著下调(P<0.05)。与PBS+M0组相比,HT-29 exo+M0组和LoVo exo+M0组CD8^(+)T细胞PD-1表达上调(P<0.001)。与PBS+M0/CD8^(+)T组相比,HT-29 exo+M0/CD8^(+)T组和LoVo exo+M0/CD8^(+)T组细胞培养上清中IFN-γ、perforin、granzyme B浓度以及HT-29和LoVo细胞裂解率均显著降低(P<0.001)。结论HT-29 exo和LoVo exo诱导的M2型巨噬细胞可抑制CD8^(+)T细胞抗肿瘤活性。 展开更多
关键词 结直肠癌 外泌体 肿瘤相关巨噬细胞 CD8^(+)T细胞
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食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p通过靶向抑制PTEN促进肿瘤相关巨噬细胞极化
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作者 樊慧 赵乃阔 +4 位作者 陈林林 李治国 柳淼 张远英 周超锋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1441-1446,共6页
目的:探究食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p对M2型巨噬细胞极化的影响及机制。方法:提取并鉴定食管鳞状细胞癌外泌体,qRT-PCR检测miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞及其外泌体中的表达。M0型巨噬细胞分为PBS组、HEEC exo组、Eca-109 exo组、m... 目的:探究食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p对M2型巨噬细胞极化的影响及机制。方法:提取并鉴定食管鳞状细胞癌外泌体,qRT-PCR检测miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞及其外泌体中的表达。M0型巨噬细胞分为PBS组、HEEC exo组、Eca-109 exo组、miR-NC exo组、miR-181b-5p exo组、miR-NC组、miR-181b-5p mimic组、si-NC组、si-PTEN组、miR-181b-5p exo+PTEN组,qRT-PCR检测各组细胞中CD163、CD206、iNOS、TNF-α表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p和PTEN的靶向关系。结果:miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞TE-13、TE-12、TE-10、Eca-109、KYSE30及其外泌体中显著高表达(P<0.001)。相比于miR-NC组,miR-181b-5p mimic组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。双荧光素酶报告基因结果显示PTEN为miR-181b-5p的靶基因。相比于si-NC组,si-PTEN组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于PBS组,Eca-109 exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-NC exo组,miR-181b-5p exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-181b-5p exo组,miR-181b-5p exo+PTEN组CD163和CD206表达显著下调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著上调(P<0.001)。结论:外泌体miR-181b-5p抑制PTEN表达而促进M2型巨噬细胞极化。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 外泌体 miR-181b-5p 巨噬细胞 极化
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感染LM小鼠巨噬细胞外泌体的转录组测序及差异表达miRNA特征分析 被引量：2
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作者 李能秀 焦健 +5 位作者 左雨霏 马忠梅 常意行 孟庆玲 才学鹏 乔军 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第7期1611-1621,共11页
[目的]分离和鉴定感染单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)小鼠巨噬细胞外泌体(Exosomes,Exos)并分析其miRNA表达谱,为揭示巨噬细胞Exos miRNA在LM感染中的调控机制奠定研究基础。[方法]以未感染LM的巨噬细胞为对照组,感... [目的]分离和鉴定感染单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)小鼠巨噬细胞外泌体(Exosomes,Exos)并分析其miRNA表达谱,为揭示巨噬细胞Exos miRNA在LM感染中的调控机制奠定研究基础。[方法]以未感染LM的巨噬细胞为对照组,感染LM的巨噬细胞为试验组,采用超速离心法分离提取巨噬细胞上清中的Exos,通过透射电镜、纳米颗粒追踪技术和Western blot对Exos形态、大小及表面标志分子特征进行鉴定。利用Illumina SE50测序平台对2组巨噬细胞Exos miRNA进行Small RNA-seq测序,筛选出显著差异表达的miRNA。使用Targetscan、miRDB和miRWalk数据库对差异表达miRNA靶基因进行预测,并对差异miRNA靶基因进行GO和KEGG-Pathway功能富集分析。利用Cytoscape软件绘制前20位Hub基因的miRNA-mRNA调控网络图。[结果]Exos直径为30~150 nm,具有典型的双层膜结构,Exos表面标志分子CD9、CD63和TSG101呈阳性表达。高通量测序结果显示,与对照组相比,试验组Exos中共筛选出9个显著差异表达的miRNA,其中显著下调基因8个(mmu-miR-7a-5p、mmu-miR-365-2-5p、mmu-miR-122-5p、mmu-miR-122b-3p、mmu-let-7i-5p、mmu-miR-151-3p、mmu-miR-182-5p和mmu-miR-1198-5p),显著上调基因1个(mmu-miR-192-5p),共预测miRNA调控靶基因1064个。GO富集分析结果显示,差异miRNA靶基因主要富集在轴突形成、细胞连接组装、肌动蛋白结合和金属离子跨膜转运等过程;KEGG分析显示,靶基因显著富集在cGMP-PKG信号通路和FcγR介导的吞噬作用通路。[结论]感染LM的小鼠巨噬细胞Exos miRNA表达谱发生了显著改变,其调控的潜在靶基因主要参与感染和免疫反应等信号通路。 展开更多
关键词 单核细胞增生性李斯特菌 巨噬细胞 外泌体 MIRNA 靶基因
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巨噬细胞及其外泌体在骨科疾病中的作用 被引量：6
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作者 原日明 李建军 《中国医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第5期464-467,472,共5页
外泌体是一种由细胞释放的具有脂质双分子层结构的膜性囊泡,大多数细胞均可分泌,通过携带各种蛋白质、DNA、非编码RNA、核酸等活性物质参与体内免疫反应、组织生成、细胞间信息交流。巨噬细胞作为体内吞噬细胞,可吞噬各种细胞碎片和组... 外泌体是一种由细胞释放的具有脂质双分子层结构的膜性囊泡,大多数细胞均可分泌,通过携带各种蛋白质、DNA、非编码RNA、核酸等活性物质参与体内免疫反应、组织生成、细胞间信息交流。巨噬细胞作为体内吞噬细胞,可吞噬各种细胞碎片和组织碎片,并根据体内微环境的改变表现出不同的表型,即M1和M2型巨噬细胞,分别起促炎和抗炎作用。巨噬细胞及其外泌体与骨折愈合、骨肉瘤、类风湿性关节炎等骨科疾病密切相关。本综述重点探讨巨噬细胞及其外泌体与骨科疾病之间的密切联系。 展开更多
关键词 巨噬细胞 外泌体 骨折 骨肉瘤 类风湿性关节炎
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胰腺癌与巨噬细胞通过外泌体相互作用的研究进展 被引量：1
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作者 于欣卉 玄延花(综述) 朴龙镇(审校) 《医学研究与战创伤救治》 CAS 北大核心 2024年第4期418-421,共4页
外泌体是一类由各种细胞分泌的小囊泡,可通过细胞外液体传递并影响受体细胞的生理和病理过程。巨噬细胞是免疫系统的重要组成部分,其在肿瘤微环境中也具有重要的作用。在胰腺癌的生长、转移和免疫逃逸发生中,外泌体与肿瘤相关巨噬细胞... 外泌体是一类由各种细胞分泌的小囊泡,可通过细胞外液体传递并影响受体细胞的生理和病理过程。巨噬细胞是免疫系统的重要组成部分,其在肿瘤微环境中也具有重要的作用。在胰腺癌的生长、转移和免疫逃逸发生中,外泌体与肿瘤相关巨噬细胞都是其中不可或缺的环节。文章将从胰腺癌细胞与巨噬细胞通过其分泌的外泌体相互作用的角度出发,就外泌体在胰腺癌发生过程中的作用及其机制,包括肿瘤来源的外泌体对巨噬细胞的调节作用、肿瘤巨噬细胞分泌的外泌体对胰腺癌细胞的调节作用等进行综述。 展开更多
关键词 胰腺癌 肿瘤相关巨噬细胞 外泌体
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健脾养正方调控肿瘤相关巨噬细胞外泌体诱导胃癌细胞失巢凋亡的机制研究
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作者 郑姗姗 吴坚 +5 位作者 张瑞娟 张翔 郑晓霞 卢雨佳 黄磊 孙庆敏 《南京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期906-916,共11页
目的 探讨健脾养正方调控肿瘤相关巨噬细胞(TAM)外泌体对胃癌失巢凋亡的影响及其机制。方法 体外诱导人单核细胞THP-1建立TAM模型;超速离心法提取M0、TAM及TAM+健脾养正方外泌体,与胃癌细胞共孵育。流式细胞术检测各组外泌体对胃癌细胞... 目的 探讨健脾养正方调控肿瘤相关巨噬细胞(TAM)外泌体对胃癌失巢凋亡的影响及其机制。方法 体外诱导人单核细胞THP-1建立TAM模型;超速离心法提取M0、TAM及TAM+健脾养正方外泌体,与胃癌细胞共孵育。流式细胞术检测各组外泌体对胃癌细胞失巢凋亡的影响。构建BALB/c移植瘤小鼠模型,Western blot检测移植瘤中凋亡蛋白的表达水平。Label-free质谱蛋白组学及生物信息学分析干预前后胃癌细胞中的差异蛋白;Western blot及qPCR实验检测差异蛋白异柠檬酸脱氢酶1(IDH1)表达水平,泛素化实验检测IDH1的泛素化水平;试剂盒检测α-酮戊二酸(α-KG)、NADPH/NADP^(+)、谷胱甘肽(GSH/GSSG)水平及活性氧(ROS)含量。结果 TAM外泌体干预胃癌细胞后其失巢凋亡率降低(P<0.05,P<0.01);而TAM+健脾养正外泌体干预后则显著升高(P<0.05,P<0.01)。小鼠体内实验中,TAM外泌体组瘤体内Cleaved Caspase-3/Caspase-3的比值降低(P<0.05),而TAM+健脾养正方外泌体干预后比值明显增高(P<0.05)。蛋白组学分析显示IDH1在干预前后差异明显,且与三羧酸循环代谢相关。相较于M0组,TAM组外泌体干预的胃癌细胞IDH1泛素化水平升高,α-KG、NADPH/NADP^(+)及GSH/GSSG水平明显增加,ROS含量降低(P<0.05),而TAM+健脾养正外泌体则可逆转上述现象。结论 健脾养正方通过调控TAM外泌体使胃癌细胞IDH1发生泛素降解,降低胃癌细胞三羧酸循环代谢水平,促进ROS积累,诱发胃癌失巢凋亡,进而抑制胃癌发展。 展开更多
关键词 胃癌 外泌体 肿瘤相关巨噬细胞 IDH1 失巢凋亡 Caspase-3 三羧酸循环代谢
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肺泡上皮细胞分泌的外泌体调控巨噬细胞极化在急性肺损伤中的作用
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作者 王鑫鑫 林树梅 +1 位作者 赵冬冬 王学生 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期71-78,共8页
外泌体作为细胞间微环境中的信使,能够将信号在细胞之间进行传递。肺泡上皮细胞通过分泌外泌体来调节机体固有免疫反应。在特定的刺激条件下,肺泡上皮细胞分泌的外泌体通过传递不同效应活性物质,靶向调节巨噬细胞极化通路中的基因表达,... 外泌体作为细胞间微环境中的信使,能够将信号在细胞之间进行传递。肺泡上皮细胞通过分泌外泌体来调节机体固有免疫反应。在特定的刺激条件下,肺泡上皮细胞分泌的外泌体通过传递不同效应活性物质,靶向调节巨噬细胞极化通路中的基因表达,参与控制肺部炎症反应的巨噬细胞极化调节。本篇综述主要阐述肺泡上皮细胞源性外泌体,通过靶向调节巨噬细胞极化,调控急性肺损伤(acute lung injury,ALI)作用的最新研究进展,为相关研究提供参考。 展开更多
关键词 脓毒症 急性肺损伤 肺泡上皮细胞 巨噬细胞 外泌体
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幽门螺杆菌诱导的胃癌细胞源性外泌体miR-382-5p通过靶向PTEN抑制巨噬细胞自噬并促进其M2极化 被引量：1
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作者 李文婧 郭开云 +7 位作者 罗俊姿 何运兴 段洁 王娜 王昆宁 曾怿歆 罗心怡 张艳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1153-1159,共7页
目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)诱导的人胃癌细胞源性外泌体miR-382-5p对巨噬细胞自噬和极化的影响及机制,为进一步阐明H.pylori的致癌机制提供新线索。方法:超高速离心法和试剂盒提取H.pylori刺激组和对照组AGS细胞释放的外泌体,采用... 目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)诱导的人胃癌细胞源性外泌体miR-382-5p对巨噬细胞自噬和极化的影响及机制,为进一步阐明H.pylori的致癌机制提供新线索。方法:超高速离心法和试剂盒提取H.pylori刺激组和对照组AGS细胞释放的外泌体,采用透射电镜(TEM)、纳米粒子跟踪分析(NTA)和Western blot对外泌体进行鉴定;qRT-PCR检测H.pylori诱导的胃癌细胞AGS源性外泌体中miR-382-5p表达;将miR-382-5p mimic转染至THP-1巨噬细胞,Western blot检测巨噬细胞自噬标志物LC3Ⅱ、P62、Beclin-1的表达,免疫荧光检测自噬小体数量;Western blot检测PTEN蛋白、其下游蛋白PI3K、AKT、mTOR及其磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达水平;流式细胞术检测巨噬细胞表型分子CD206和HLA-DR表达水平;ELISA检测巨噬细胞上清中细胞因子TNF-α、IL-6、IL-10和精氨酸酶1表达水平。结果:提取的外泌体符合外泌体形态,且高表达其表面标志蛋白CD9、CD63、TSG101;与空白对照组相比,H.pylori感染组AGS源性外泌体中miR-382-5p表达显著升高;miR-382-5p mimic转染导致巨噬细胞LC3、Beclin-1表达降低,P62表达升高,自噬小体数量降低;PTEN蛋白表达降低,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达明显增加。转染同时导致巨噬细胞M2型标志蛋白CD206表达增加,M1型标志蛋白HLA-DR表达降低;IL-10和精氨酸酶1表达增加,IL-6和TNF-α表达降低。抑制剂BEZ235预处理可部分逆转miR-382-5p对巨噬细胞自噬和极化的影响。结论:H.pylori诱导的胃癌细胞源性外泌体miR-382-5p通过靶向PTEN基因,激活PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制巨噬细胞自噬并促进其M2极化。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 外泌体miR-382-5p 自噬 巨噬细胞极化 PI3K/AKT/mTOR信号通路
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非酒精性脂肪性肝病中脂毒性肝细胞来源的外泌体miR-192-5p通过Rictor/Akt/FoxO1信号通路激活巨噬细胞 被引量：45
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作者 刘晓琳 范建高 +2 位作者 LIU XL PAN Q CAO HX 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2020年第10期2218-2218,共1页
【据Hepatology 2020年5月报道】题:非酒精性脂肪性肝病中脂毒性肝细胞来源的外泌体miR-192-5p通过Rictor/Akt/FoxO1信号通路激活巨噬细胞(作者Liu XL等)肝脏巨噬细胞可被多种因素如肠道菌群代谢物以及受损的肝细胞释放物等激活。在非... 【据Hepatology 2020年5月报道】题:非酒精性脂肪性肝病中脂毒性肝细胞来源的外泌体miR-192-5p通过Rictor/Akt/FoxO1信号通路激活巨噬细胞(作者Liu XL等)肝脏巨噬细胞可被多种因素如肠道菌群代谢物以及受损的肝细胞释放物等激活。在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生发展中,巨噬细胞向促炎表型(M1)的极化是一个重要的病理生理过程。外泌体可传递多种生物学成分如microRNA、蛋白质以及脂质等,因此被作为细胞间通讯的重要媒介。在NAFLD的发生发展过程中,外泌体在肝细胞与巨噬细胞对话中的作用尚未明确。 展开更多
关键词 非酒精性脂肪性肝病 外泌体 脂毒性 FOXO1 巨噬细胞 细胞间通讯 NAFLD 释放物
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