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应用巢式PCR-RFLP方法鉴别微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫和火鸡隐孢子虫的研究 被引量:4
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作者 姚龙泉 张西臣 +2 位作者 Lihua Xiao 李建华 尹继刚 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期446-449,共4页
应用巢式聚合酶链反应(NestedPCR)-限制片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymor-phism,RFLP)方法对微小隐孢子虫(C.parvum)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)和火鸡隐孢子虫(C.melea-grides)的鉴别进行了研究。结果显示C.parvumBO... 应用巢式聚合酶链反应(NestedPCR)-限制片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymor-phism,RFLP)方法对微小隐孢子虫(C.parvum)、安氏隐孢子虫(C.andersoni)和火鸡隐孢子虫(C.melea-grides)的鉴别进行了研究。结果显示C.parvumBOCC2、C.andesoniBOCC2和C.meleagridesCHCC1扩增产物片段大小分别为830bp、828bp和828bp,扩增产物分别经VspⅠ酶切后形成3种不同的RFLP图谱,根据RFLP图谱可鉴别C.parvum、C.andersoni和C.meleagrides。本研究为我国隐孢子虫的分类和隐孢子虫病的分子流行病学研究打下了良好基础。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 安氏隐孢子虫 火鸡隐孢子虫 巢式pcr-rflp
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18Sr RNA基因巢式PCR-RFLP分析两株牛源隐孢子虫分离株 被引量:5
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作者 刘晖 袁忠英 +2 位作者 沈玉娟 冯耀宇 曹建平 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期115-118,共4页
目的18S rRNA巢式聚合酶链反应(Nested PCR)-限制片段长度多态性(restriction fragment length polymor-phism,RFLP)鉴定上海(简称SH-BOV)和徐州(简称XZ-BOV)两株牛源隐孢子虫。方法改良-抗酸染色确定感染隐孢子虫的上海株和徐州株牛粪... 目的18S rRNA巢式聚合酶链反应(Nested PCR)-限制片段长度多态性(restriction fragment length polymor-phism,RFLP)鉴定上海(简称SH-BOV)和徐州(简称XZ-BOV)两株牛源隐孢子虫。方法改良-抗酸染色确定感染隐孢子虫的上海株和徐州株牛粪,提取DNA后经18S rRNA基因巢式PCR扩增,扩增产物测序后用Blast和MEGA软件进行同源性和系统发育分析。同时扩增产物分别用SspⅠ和VspⅠ单酶切,且XZ-BOV扩增产物用DdeⅠ酶切后进行RFLP分析。结果通过18S rRNA基因分析,SH-BOV与1株巴西牛隐孢子虫Cryptospridiumbovis同源性为100%,种系发育树上两者在同一分支;XZ-BOV与安氏隐孢子虫C.andersoni同源性为99%,种系发育树上两者在同一分支。扩增产物分别用SspⅠ和VspⅠ单酶切后,可鉴别出SH-BOV为C.bovis,XZ-BOV为C.andersoni或C.muris。XZ-BOV扩增产物用DdeⅠ酶切后可鉴别出XZ-BOV为C.andersoni。结论上海株牛源隐孢子虫(SH-BOV)鉴定为牛隐孢子虫(C.bovis),徐州株牛源隐孢子虫(XZ-BOV)鉴定为安氏隐孢子虫(C.andersoni)。 展开更多
关键词 牛隐孢子虫 安氏隐孢子虫 18S RRNA基因 巢式PCR—RFLP
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啮齿类实验动物4种常见病原菌多重巢式PCR检测方法的建立与初步应用
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作者 席晓霞 孙婧 +3 位作者 郭家熙 张丽娟 刘晓玲 段天林 《中兽医医药杂志》 2025年第4期18-25,共8页
建立一种检测啮齿类实验动物鼠伤寒沙门菌、鼠棒状杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等4种常见致病菌的多重巢式PCR检测方法,在此基础上,采用咽拭子和肛拭子等采样方法优化检测流程。试验针对病原菌16S rDNA序列保守区和可变区,通过... 建立一种检测啮齿类实验动物鼠伤寒沙门菌、鼠棒状杆菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等4种常见致病菌的多重巢式PCR检测方法,在此基础上,采用咽拭子和肛拭子等采样方法优化检测流程。试验针对病原菌16S rDNA序列保守区和可变区,通过引物长短差异分别设计通用引物和特异性引物,通过巢式PCR检测各种样本中的病原菌。结果显示,优化后的四重巢式PCR方法可对同一样品中的4种致病菌模板进行特异性扩增,无交叉反应;多重巢式PCR方法可从标准菌株DNA模板中扩增出待检病原菌DNA片段,而阴性对照组均未能检出;多重巢式PCR方法的检测灵敏度明显高于普通多重PCR方法(≤10-2pg/μL vs≤1 pg/μL);多重巢式PCR方法可从混合感染的样本中特异性地检测出4种致病菌;在实际应用中,多重巢式PCR可检测出病原菌感染的阳性样本,且检出率高于普通多重PCR方法。本试验建立的4种病原菌多重巢式PCR检测方法可同时检测动物咽拭子或肛拭子等临床样本中的多种病原菌,与普通多重PCR方法相比,该方法具有省时省力、灵敏性高、特异性强等优点。 展开更多
关键词 多重巢式PCR 鼠伤寒沙门菌 鼠棒状杆菌 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌
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中小学生高度近视发生风险预测模型:基于巢式病例对照研究 被引量:1
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作者 陈胜蓝 郑永韬 +5 位作者 胡旺成 倪作为 夏冰 叶春梅 杜持新 陈晓丹 《中国全科医学》 北大核心 2025年第9期1115-1121,共7页
背景中小学生由于学习压力、电子产品普及以及不良用眼习惯,视力健康问题日益严重,成为近视的高发群体,高度近视作为近视的严重阶段,已成为全球范围内的公共卫生问题。尽管现有诸多研究对近视的危险因素进行了探讨,但鲜有研究针对性阐... 背景中小学生由于学习压力、电子产品普及以及不良用眼习惯,视力健康问题日益严重,成为近视的高发群体,高度近视作为近视的严重阶段,已成为全球范围内的公共卫生问题。尽管现有诸多研究对近视的危险因素进行了探讨,但鲜有研究针对性阐明风险因素与高度近视发生的复杂非线性关系,本研究结合巢式病例对照研究和限制性立方样条,开发一个中小学生高度近视风险预测模型,通过早期识别高风险个体,延缓或阻止高度近视的发展,实现近视的三级预防,对中小学生的学业和生活质量有积极意义。目的探究中小学生高度近视的流行现状及危险因素,构建风险预测模型,为中小学生高度近视防控提供科学依据。方法采用巢式病例对照研究,于2023年选取杭州市12所学校中度近视的学生作为研究对象建立队列,按照全国学生常见病和健康影响因素监测与干预工作方案,对纳入研究的中小学生开展近视状况监测,研究期间进展为高度近视的中小学生作为高度近视发生组,其余未进展为高度近视的中小学生作为对照组,对两组研究对象开展视力保健行为进行调查。采用Lasso回归筛选特征变量后进行多因素Logistic回归分析探究中小学生高度近视发生的影响因素,并采用列线图对风险预测模型可视化,同时采用Hosmer-Lemeshow检验、受试者工作特征(ROC)曲线、Calibration曲线、决策曲线分析(DCA)对模型性能进行评估,最后采用限制性立方样条进一步明确年龄与高度近视发生风险的关系。结果12所中小学校共纳入2468名学生,未进展为高度近视的学生1293名,中度近视进展为高度近视的学生1175名,高度近视发生率为47.61%(1175/2468)。两组学生年龄、年级、BMI、每日入睡时间、地区、户外活动时间、电子产品使用时间、课后作业时间、家用台灯比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Lasso回归筛选出8个特征变量:年级、BMI、每日入睡时间、地区、户外活动时间、电子产品使用时间、课后作业时间、家用台灯。多因素Logistic回归分析结果显示,初中年级(OR=2.612,95%CI=2.185~3.127),超重或肥胖(OR=2.140,95%CI=1.458~3.169)、偏瘦(OR=1.807,95%CI=1.430~2.290),每日入睡时间在22:00之后(OR=1.408,95%CI=1.188~1.670),户外活动时间1~2 h/d(OR=1.371,95%CI=1.122~1.675)、<1 h/d(OR=1.648,95%CI=1.342~2.027),电子产品使用时间>2 h/d(OR=1.440,95%CI=1.119~1.856),课后作业时间1~2 h/d(OR=1.461,95%CI=1.126~1.899)、>2 h/d(OR=1.534,95%CI=1.218~1.935)为中小学生高度近视发生的危险因素(P<0.05);而高中年级(OR=0.560,95%CI=0.419~0.743)为中小学生高度近视发生的保护因素(P<0.05)。基于年级、BMI、每日入睡时间、户外活动时间、电子产品使用时间、课后作业时间等6个变量构建的预测模型ROC曲线下面积为0.840(95%CI=0.825~0.855),具有良好的拟合优度、一致性、应用性,限制性立方样条分析显示13~15岁为高度近视的高发年龄段。结论中小学生高度近视发生率较高,风险预测模型为高度近视的预防和控制提供了科学依据,应在初中年级加强近视防控措施,改善学生的视力保健行为,降低高度近视的发生。 展开更多
关键词 近视 学生 高度近视 巢式病例对照研究 限制性立方样条 预测模型
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应用巢式PCR对猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法
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作者 刘龑 徐蕴博 +4 位作者 张琦 徐倩倩 尹智 刘忠华 翁晓刚 《东北农业大学学报》 北大核心 2025年第4期47-55,共9页
为建立1种准确可靠的猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法,将不同数量细胞样本进行DNA提取纯化后进行PCR扩增,结果表明:当使用纯化的DNA模板进行1轮PCR扩增时,SRY/ZFX引物可在10个细胞中有效扩增,而AMEL和SUSY/SUS12S引物仅在50个细胞以上有... 为建立1种准确可靠的猪胚胎微量细胞性别的鉴定方法,将不同数量细胞样本进行DNA提取纯化后进行PCR扩增,结果表明:当使用纯化的DNA模板进行1轮PCR扩增时,SRY/ZFX引物可在10个细胞中有效扩增,而AMEL和SUSY/SUS12S引物仅在50个细胞以上有效。与纯化DNA模板相比,使用细胞裂解液进行PCR扩增的效果更优,但单次PCR中SUSY/SUS12S和AMEL引物在1或10个细胞样本中未检测到特异性条带。通过设计巢式PCR引物,成功在单细胞中扩增目标基因,特别是AMEL引物效果最佳,并通过Y染色体DNA-FISH检测验证PCR结果准确性。此外,通过在体外受精囊胚中测试建立的巢式PCR方法,表现出良好特异性。 展开更多
关键词 胚胎 单细胞 巢式PCR 性别鉴定
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绵羊支原体肺炎病原巢式PCR检测方法的建立与应用 被引量:1
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作者 杨华 周华倩 +5 位作者 黄新 齐宇 余乾 张文喆 杨永林 侯扶琴 《安徽农业科学》 CAS 2024年第4期74-77,共4页
[目的]建立一种诊断绵羊支原体肺炎病原的巢式PCR方法,确定肺炎支原体感染的靶器官。[方法]根据GenBank网站上登录的绵羊支原体16S rRNA基因序列,设计并合成2对引物,以肺炎支原体菌株基因组DNA为模板,经过PCR反应条件的优化,通过测序验... [目的]建立一种诊断绵羊支原体肺炎病原的巢式PCR方法,确定肺炎支原体感染的靶器官。[方法]根据GenBank网站上登录的绵羊支原体16S rRNA基因序列,设计并合成2对引物,以肺炎支原体菌株基因组DNA为模板,经过PCR反应条件的优化,通过测序验证扩增产物的正确性,建立了绵羊支原体肺炎病原的巢式PCR检测方法,进而应用建立的方法完成临床阳性病料肺脏、肺淋巴、心脏、肾脏、肝脏、脾脏、皮肤、小肠和外周血检测以及疑似样本肺脏组织的检测。[结果]建立的巢式PCR方法可扩增出864 bp的特异性目的片段,肺脏和肺淋巴为绵羊肺炎支原体感染的靶器官,临床样本巢式PCR检出率与支原体培养鉴定结果的符合率为100%。[结论]建立的绵羊支原体肺炎病原巢式PCR检测方法可用于临床样本的实验室诊断。 展开更多
关键词 绵羊肺炎支原体 巢式PCR 检测方法
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油茶巢式交配子代油脂相关性状的遗传分析 被引量:2
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作者 王安妮 王开良 +5 位作者 柴静瑜 钟慧奇 滕建华 张磊 俞文仙 林萍 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期379-388,共10页
【目的】探究油茶种内杂交和种间杂交的亲本选配机制,为油茶高含油率杂交育种选育提供指导。【方法】以油茶巢式交配设计的种内、种间杂交子代为材料,分别测定种仁含油率、木质素、纤维素和半纤维素含量,分析母本的一般配合力(GCA)、杂... 【目的】探究油茶种内杂交和种间杂交的亲本选配机制,为油茶高含油率杂交育种选育提供指导。【方法】以油茶巢式交配设计的种内、种间杂交子代为材料,分别测定种仁含油率、木质素、纤维素和半纤维素含量,分析母本的一般配合力(GCA)、杂交组合的特殊配合力(SCA),解析重要性状的遗传效应。【结果】12个家系的种仁含油率为17.83%~53.55%,木质素含量为4.68%~18.12%,纤维素含量为3.66%~13.04%,半纤维素含量0.54%~12.20%。种仁含油率、木质素、纤维素和半纤维素含量的差异在组合间和母本内父本间达到了显著水平。含油率和木质素、半纤维素含量呈显著负相关关系,其相关系数为-0.489和-0.297。长林4号种仁含油率的GCA最高,达到1.57。各组合的SCA分析表明,含油率SCA为-6.38~4.28,其中含油率SCA高且其余3个性状SCA低的种内杂交组合有40×95和4×18。种间杂交组合含油率的SCA普遍较低,仅53×小2较高,为2.77。除木质素外,含油率、纤维素、半纤维素含量主要受显性效应控制,非加性方差大于加性方差,说明以这3个性状为目标的杂交育种中评估亲本的SCA比GCA更重要。4个性状的单株遗传力范围为10.84%~58.35%,家系遗传力为4.23%~.21.35%,均受到较强的环境效应影响。【结论】以配合力为参考指标,结合各组合的表型数据,选出可用于油茶高含油杂交种质创制的优良种内杂交组合40×95和4×18,种间杂交组合53×小2。 展开更多
关键词 普通油茶 小果油茶 巢式交配设计 油脂性状 配合力 遗传力
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猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方法的建立 被引量:1
8
作者 于浩洋 王彩霞 +5 位作者 仇松寅 刘晓飞 景宏丽 吴绍强 冯春燕 林祥梅 《中国动物检疫》 CAS 2024年第1期95-101,共7页
猪Linda病毒能引起仔猪先天性震颤,严重危害养猪业的发展,目前在我国暂未发现感染病例。本研究根据猪Linda病毒Core-E~(ms)基因序列,设计并合成巢式RT-PCR引物,通过对退火温度、引物浓度等进行优化,建立了猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方... 猪Linda病毒能引起仔猪先天性震颤,严重危害养猪业的发展,目前在我国暂未发现感染病例。本研究根据猪Linda病毒Core-E~(ms)基因序列,设计并合成巢式RT-PCR引物,通过对退火温度、引物浓度等进行优化,建立了猪Linda病毒巢式RT-PCR检测方法。结果显示,该方法具有良好的特异性,与非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型均无交叉反应;敏感性好,对慢病毒阳性对照品的最低检出限为10~1 copies/μL,比普通RT-PCR灵敏10倍。使用该方法检测模拟病毒样品,发现最低检出限为10~1 TU/mL,与荧光定量RT-PCR方法一致。本研究首次建立了可检测猪Linda病毒的巢式RT-PCR方法,其特异性强、灵敏度高,为在口岸以及条件有限的场地对猪Linda病毒进行精准且快速的检测提供了有效技术手段,也为防范Linda病毒传入提供了有力技术支撑。 展开更多
关键词 猪Linda病毒 巢式RT-PCR 检测方法 非典型瘟病毒
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犬弓形虫巢式PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:1
9
作者 柳方远 李双星 +3 位作者 印春生 吉婧 朱明哲 刘业兵 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第1期129-134,共6页
弓形虫病是一种重要的人兽共患病,犬是弓形虫重要的中间宿主,有必要建立一种快速、灵敏的犬弓形虫病检测方法。根据GenBank中弓形虫529 bp基因重复序列设计巢式PCR引物,通过优化反应条件建立巢式PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方... 弓形虫病是一种重要的人兽共患病,犬是弓形虫重要的中间宿主,有必要建立一种快速、灵敏的犬弓形虫病检测方法。根据GenBank中弓形虫529 bp基因重复序列设计巢式PCR引物,通过优化反应条件建立巢式PCR检测方法。特异性试验结果显示,该方法对牛巴贝斯虫、环形泰勒虫、犬新孢子虫的基因扩增无条带;灵敏度试验结果显示,该方法最低可以检出0.134 pg的弓形虫基因,比目前国标PCR方法高100倍。对感染弓形虫犬的组织样品检测发现,巢式PCR能在感染犬的不同组织中检测出弓形虫基因。建立的犬弓形虫巢式PCR检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为该病的检测奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 巢式PCR
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结肠小袋纤毛虫PCR-RFLP分型方法的建立 被引量:1
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作者 徐啊慧 冯彩彩 +6 位作者 丰山旺 赵立卓 齐闻新 张雯 胡苏辉 王天奇 闫文朝 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期829-833,840,共6页
目的建立高效、特异的结肠小袋纤毛虫遗传亚型分析方法。方法选择限制性内切酶ApoI和PflMI对结肠小袋纤毛虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的PCR扩增产物进行酶切分析,建立PCR-RFLP分型方法,利用建立的PCR-RFLP方法对猪源、羊源和豚鼠源临床粪便... 目的建立高效、特异的结肠小袋纤毛虫遗传亚型分析方法。方法选择限制性内切酶ApoI和PflMI对结肠小袋纤毛虫ITS1-5.8S rDNA-ITS2的PCR扩增产物进行酶切分析,建立PCR-RFLP分型方法,利用建立的PCR-RFLP方法对猪源、羊源和豚鼠源临床粪便样品进行遗传亚型分析。结果基于ApoI和PflMI的PCR-RFLP方法可以准确区分结肠小袋纤毛虫遗传变异型A和B,用PflMI可以进一步将遗传变异型B细分为B-c和B-t两个亚型。与镜检和测序结果比较,建立的PCR-RFLP方法具有良好的特异性和更高的灵敏性,不仅可以鉴定临床样品中结肠小袋纤毛虫单个亚型,而且可以鉴别单个样品中结肠小袋纤毛虫多个亚型的混合感染。结论本研究成功建立了结肠小袋纤毛虫PCR-RFLP方法,可用于结肠小袋纤毛虫遗传多态性鉴定和分子流行病学研究。 展开更多
关键词 结肠小袋纤毛虫 pcr-rflp分析 豚鼠
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超灵敏高特异性巢式PCR检测方法的建立及其在大黄鱼(Larimichthys crocea)弧菌病早期预警中的应用 被引量:1
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作者 魏雪莲 包红玉 +5 位作者 李继姬 施慧 陶震 段鑫冰 叶莹莹 郭宝英 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1008-1018,共11页
由哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)及溶藻弧菌(V.alginolyticus)等病菌感染导致的弧菌病是大黄鱼养殖中最常见、最具危害性的疾病之一,然而目前针对发病后的遏制手段有限,因此亟待建立高灵敏度、高特异性... 由哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)及溶藻弧菌(V.alginolyticus)等病菌感染导致的弧菌病是大黄鱼养殖中最常见、最具危害性的疾病之一,然而目前针对发病后的遏制手段有限,因此亟待建立高灵敏度、高特异性的病原检测技术以实现病害早期预警。在普通两轮巢式PCR引物的基础上,对这3种弧菌分别设计一套三轮巢式PCR引物,通过扩增条件优化、特异性检验及灵敏度测定,确定了能精准检测3种弧菌的方法,达到了扩增产物单一、参考菌假阳性检出率为0、靶序列最低检出灵敏度分别为2.50 copies/μL(哈维氏弧菌)、3.12 copies/μL(副溶血弧菌)、2.53 copies/μL(溶藻弧菌)等效果。利用开发的检测方法,检测了2021~2023年度浙江、福建一带大黄鱼养殖样本,所有样本均检测出哈维氏弧菌和溶藻弧菌,副溶血弧菌未检出。结果显示浙江、福建一带大黄鱼弧菌病主要是由哈维氏弧菌和溶藻弧菌引起。开发的检测方法有望应用于大黄鱼等养殖物种弧菌病的早期预警和常规检测。 展开更多
关键词 巢式PCR 大黄鱼 弧菌病 病原检测
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利用PCR-RFLP方法快速鉴别中国牛蒡属药用植物
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作者 黄彦昌 宋跃岳 +6 位作者 许亮 郑汉 董玉玮 张娜 胡传银 窦德强 康廷国 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2024年第12期80-83,I0021,共5页
目的随着近十几年来国内学者对牛蒡属药用植物研究的深入,中国牛蒡属植物鉴定需要一种快速、准确的分子鉴别手段。因此研究拟通过利用聚合酶链式反应-限制性酶切长度多态性(polymerase chain reaction restriction frag-ment length pol... 目的随着近十几年来国内学者对牛蒡属药用植物研究的深入,中国牛蒡属植物鉴定需要一种快速、准确的分子鉴别手段。因此研究拟通过利用聚合酶链式反应-限制性酶切长度多态性(polymerase chain reaction restriction frag-ment length polymorphism,PCR-RFLP)建立一种快速鉴定中国牛蒡属药用植物的方法。方法通过对两种中国牛蒡属药用植物牛蒡与毛头牛蒡常用鉴定DNA条形码进行限制性核酸内切酶图谱分析,找到牛蒡在内源转录间隔区1(internal transcribed spacer-1,ITS1)片段中有一个单核苷酸多态性(Single-nucleotide polymorphism,SNP)位点,正好为BsaAⅠ酶(YAC/GTR)的酶切位点,根据该酶切位点,设计引物对目标片段进行扩增。另外建立PCR体系:95℃预变性5min,循环反应40次(90℃20s,60℃20s,72℃20s),72℃延伸5min,4℃保温。建立限制性内切酶BsaAⅠ酶切体系,制作琼脂糖凝胶电泳观察结果。结果电泳结果表明在经过BsaAⅠ酶切后牛蒡将会产生长度分别为101bp与125bp的短条带,而毛头牛蒡未被切开仍为226bp的长条带,成功将两种药用植物区分开。该方法简单、快速、准确,满足日常对中国牛蒡属植物的鉴定。结论该实验通过从牛蒡与毛头牛蒡的ITS1序列入手,利用PCR-RFLP技术首次完成了对两种植物的鉴别研究,建立了中国牛蒡属植物的PCR-RFLP鉴别方法。 展开更多
关键词 牛蒡 毛头牛蒡 鉴别 pcr-rflp
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PCR-RFLP法鉴别浙贝母及其混淆品湖北贝母 被引量:5
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作者 李莉 陈军 +2 位作者 朱洁 陈志禹 孙胡琳 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2465-2469,共5页
目的建立PCR-RFLP法鉴别浙贝母及其混淆品湖北贝母。方法对比两者叶绿体ycfl基因,选择湖北贝母的特异性酶切位点EcoRI设计引物,优化反应条件,并进行方法学考察。结果退火温度58℃、循环数35时,湖北贝母或掺有湖北贝母的浙贝母经特异性... 目的建立PCR-RFLP法鉴别浙贝母及其混淆品湖北贝母。方法对比两者叶绿体ycfl基因,选择湖北贝母的特异性酶切位点EcoRI设计引物,优化反应条件,并进行方法学考察。结果退火温度58℃、循环数35时,湖北贝母或掺有湖北贝母的浙贝母经特异性引物扩增后能被EcoRI酶酶切,200~400bp处检出2条单一DNA条带,而浙贝母无此条带,检出限达3%。结论该方法方便快捷、灵敏度高,可用于浙贝母、湖北贝母及前者掺混后者的快速检测,为浙贝母质量控制提供参考。 展开更多
关键词 浙贝母 湖北贝母 掺混鉴别 pcr-rflp ycf1基因
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奶牛隐孢子虫Nested PCR-RFLP方法的建立及初步应用 被引量:2
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作者 王权 陈永军 +4 位作者 袁耀明 李安平 蒋蔚 朱志宏 安立刚 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第3期65-72,共8页
为快速检测并准确鉴别奶牛隐孢子虫种,以隐孢子虫18S rRNA基因的特殊区域为基础,设计内、外引物,并根据软件分析确定相应的内切酶EcoT14I,采用Nested PCR-RFLP方法进行虫种种型鉴别分析。在Nested PCR两次PCR反应中,以微小隐孢子虫(Cryp... 为快速检测并准确鉴别奶牛隐孢子虫种,以隐孢子虫18S rRNA基因的特殊区域为基础,设计内、外引物,并根据软件分析确定相应的内切酶EcoT14I,采用Nested PCR-RFLP方法进行虫种种型鉴别分析。在Nested PCR两次PCR反应中,以微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,C.p)和安氏隐孢子虫(Cryptosporidium andersoni,C.an)卵囊提取的DNA为模板,均能扩增出长约800bp和500bp的明亮条带,且特异性强,其他虫种不能扩增出条带,该方法最低可检测到5个卵囊/g粪便;对于由内引物扩增出的500bp的条带,C.an的PCR产物能被内切酶EcoT14I酶切,酶切后的片段分别为416bp和92bp,C.p的PCR产物不能被此酶酶切。用所建立的Nested PCR-RFLP法对上海奶牛389头和进口奶牛200头的共计589份粪样进行检测,Nested PCR的结果表明上海奶牛和进口奶牛的隐孢子虫阳性率分别为19.02%和3.5%,RFLP的结果表明上海奶牛感染的主要是C.p和C.an,进口奶牛感染的主要是C.p。研究结果表明,本研究建立的检测奶牛粪便中的隐孢子虫的Nested PCR-RFLP法,可用于奶牛隐孢子虫流行病学调查并有效鉴别奶牛隐孢子虫种。 展开更多
关键词 奶牛 隐孢子虫 巢式pcr-rflp
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水产养殖巢式设计遗传力计算及其在SPSS上的实现 被引量:2
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作者 高振锟 顾汉东 +1 位作者 和飞 刘超 《黑龙江水产》 2024年第2期205-209,共5页
巢式设计是水产育种中重要的遗传设计之一,其遗传力计算涉及平方和类型的选择、固定模型或随机模型的选择及模型修改等,如果处理因素纳入顺序不对,则通过SPSS图形对话框操作不能完成巢式设计方差分析。文章以教材数据为例,介绍巢式设计... 巢式设计是水产育种中重要的遗传设计之一,其遗传力计算涉及平方和类型的选择、固定模型或随机模型的选择及模型修改等,如果处理因素纳入顺序不对,则通过SPSS图形对话框操作不能完成巢式设计方差分析。文章以教材数据为例,介绍巢式设计方差分析的基本原理,利用SPSS软件中对话框粘贴程序进行编程,并通过一般线性模型过程进行方差组分估计及遗传力计算操作演示,并对模型选择、平方和类型选择及巢式设计方差分析SPSS编程的必要性等进行讨论说明,可为教学和科研提供实践参考。 展开更多
关键词 巢式设计 遗传力 平方和类型 模型修改 SPSS软件
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一种基于线粒体COI PCR-RFLP单酶切快速鉴定4种巨蛎属牡蛎的方法
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作者 崔中望 于诗奇 +1 位作者 缪雄平 阙华勇 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期68-73,共6页
本文报道了一种基于线粒体细胞色素氧化酶亚基I(mt COI)基因序列PCR-RFLP单酶切的牡蛎物种鉴定方法。本方法可快速鉴定福建牡蛎(Crassostrea angulata)、熊本牡蛎(Crassostrea sikamea)、香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)和近江牡蛎... 本文报道了一种基于线粒体细胞色素氧化酶亚基I(mt COI)基因序列PCR-RFLP单酶切的牡蛎物种鉴定方法。本方法可快速鉴定福建牡蛎(Crassostrea angulata)、熊本牡蛎(Crassostrea sikamea)、香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)和近江牡蛎(Crassostrea ariakensis)等中国沿海常见的4种巨蛎属(Crassostrea)牡蛎。该方法以甲基转移酶(Msp I)作为限制性内切酶,对4种巨蛎属牡蛎的线粒体DNA COI扩增序列进行酶切,以得到的特异性条带为依据进行物种鉴定。本方法的鉴定结果与COI测序方法的鉴定结果一致,并且筛选出的单一的限制性内切酶Msp I在4种牡蛎的COI序列中不存在酶切位点的突变,准确率达到100%,能够为巨蛎属牡蛎的物种鉴别提供简便可靠的技术支撑。 展开更多
关键词 巨蛎属(Crassostrea)牡蛎 线粒体COI pcr-rflp
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基于巢式病例对照研究构建椎体压缩骨折患者术前深静脉血栓形成的风险预测模型
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作者 刘录 司海朋 +3 位作者 李春林 任丽 朱玉娇 贺茜 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 北大核心 2024年第6期580-586,共7页
目的分析椎体压缩骨折患者术前深静脉血栓形成(deep vein thrombosis,DVT)的危险因素,构建DVT诊断模型。方法选择2020年1月至2023年10月山东大学齐鲁医院(青岛)脊柱外科收治的骨质疏松性椎体压缩骨折患者作为研究对象,以入院确诊骨质疏... 目的分析椎体压缩骨折患者术前深静脉血栓形成(deep vein thrombosis,DVT)的危险因素,构建DVT诊断模型。方法选择2020年1月至2023年10月山东大学齐鲁医院(青岛)脊柱外科收治的骨质疏松性椎体压缩骨折患者作为研究对象,以入院确诊骨质疏松性椎体压缩骨折为起点、出院为终点,进行巢式病例对照研究。采用极端梯度提升算法XGBoost对DVT诊断模型进行训练,采用准确率和受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线下面积(area under the curve,AUC)评价模型性能。结果基于XGBoost训练DVT诊断模型,可视化前20个重要的特征,可以看出凝血酶原时间、甲状旁腺素这两个指标对于DVT的诊断较为重要。在测试集上评估模型,能够取得90.48%的诊断准确率,采用ROC曲线计算DVT诊断模型的AUC为0.9558,差异有统计学意义(P<0.05)。结论基于XGBoost训练的DVT诊断模型用于筛查术前高风险DVT患者有较好的性能及较好的泛化能力,通过对可引起椎体压缩骨折患者术前DVT的前20个危险因素的可视化,方便临床对DVT高危患者及时识别并给予相应的干预措施,避免延误手术。 展开更多
关键词 椎体压缩性骨折 深静脉血栓形成 机器学习算法 巢式病例对照研究
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乌鳢水泡病毒(SHVV)巢式PCR检测方法的建立与应用
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作者 娄剑锋 公翠萍 +3 位作者 肖自东 刘晓丹 胡大雁 劳顺健 《科学养鱼》 2024年第1期57-59,共3页
巢式PCR是建立在普通PCR方法基础之上的一种改进型方案,广泛用于病毒基因的检测。但是,目前还没有建立巢式PCR检测乌鳢水泡病毒的报道。本研究通过获取感染乌鳢水泡病毒的杂交鳢组织,获得病毒的相关基因,利用巢式PCR相关技术,通过体系... 巢式PCR是建立在普通PCR方法基础之上的一种改进型方案,广泛用于病毒基因的检测。但是,目前还没有建立巢式PCR检测乌鳢水泡病毒的报道。本研究通过获取感染乌鳢水泡病毒的杂交鳢组织,获得病毒的相关基因,利用巢式PCR相关技术,通过体系的建立和反应程序的优化,建立一种检测乌鳢水泡病毒的方法,为及时发现并快速诊断乌鳢水泡病毒提供一项重要的技术手段。 展开更多
关键词 巢式PCR 病毒基因 反应程序 乌鳢 快速诊断 普通PCR 杂交鳢 检测方法
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基于Cytb基因的牦牛肉种来源鉴定与应用
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作者 何建文 党鹏举 +1 位作者 金丽娜 韩建林 《现代畜牧科技》 2025年第3期71-74,共4页
为建立牦牛、黄牛和水牛肉在基因水平快速、准确的鉴定方法,用于牦牛肉及制品的肉种来源鉴别研究。以牦牛、黄牛、水牛肉为研究对象,选用Cytb基因的一段保守区域对牦牛、黄牛和水牛序列进行限制性内切酶位点检测分析,发现3个特异性酶切... 为建立牦牛、黄牛和水牛肉在基因水平快速、准确的鉴定方法,用于牦牛肉及制品的肉种来源鉴别研究。以牦牛、黄牛、水牛肉为研究对象,选用Cytb基因的一段保守区域对牦牛、黄牛和水牛序列进行限制性内切酶位点检测分析,发现3个特异性酶切位点可用于牦牛肉及制品的肉种来源的鉴别。运用该方法对不同品牌的牦牛肉产品进行检测,再通过测序验证酶切结果的正确性及其黄牛肉、水牛肉假冒牦牛肉制品的参杂程度。结果显示,3个特异性酶切位点可用于混合牛肉产品的鉴别,牦牛肉制品的掺假现象较为严重。 展开更多
关键词 牦牛 pcr-rflp CYTB基因 物种鉴定
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西藏日喀则地区羊梨形虫病原调查和分析 被引量:1
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作者 朱浩瀚 赵帅阳 +6 位作者 张少华 张楚晗 苏书晓 关贵全 殷宏 罗建勋 刘军龙 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第3期39-43,共5页
为了解我国西藏自治区日喀则市藏羊梨形虫病的流行情况,本试验采集了366份藏羊血液样品并提取基因组DNA,采用巢式PCR方法对藏羊梨形虫病病原进行检测和鉴定,并基于梨形虫18S rRNA基因序列构建系统进化树。结果显示,梨形虫阳性率为35.79%... 为了解我国西藏自治区日喀则市藏羊梨形虫病的流行情况,本试验采集了366份藏羊血液样品并提取基因组DNA,采用巢式PCR方法对藏羊梨形虫病病原进行检测和鉴定,并基于梨形虫18S rRNA基因序列构建系统进化树。结果显示,梨形虫阳性率为35.79%(131/366),其中绵羊泰勒虫阳性率为35.25%(129/366),环形泰勒虫阳性率为0.55%(2/366);系统进化树结果显示,该地区绵羊泰勒虫与中国新疆株(GenBank:FJ603460)、土耳其株(GenBank:AY260172)和苏丹株(GenBank:AY260171)处于同一分支;环形泰勒虫与意大利株(GenBank:MT341858)、土耳其株(GenBank:524666)和中国内蒙古株(GenBank:EU083801)处于同一分支。本试验首次报道了西藏地区存在绵羊泰勒虫,为西藏地区羊梨形虫病的流行病学调查和综合防控提供了数据参考。 展开更多
关键词 藏羊 梨形虫 巢式PCR 系统进化树 流行病学调查
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