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甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法的建立
被引量：
1
1
作者
汪涵
吴伟怀
+7 位作者
杨旭光
杨先锋
李锐
郑金龙
黄兴
梁艳琼
贺春萍
易克贤
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2017年第12期2334-2339,共6页
为建立甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法,本研究利用真菌DNA内源转录间隔区通用引物ITS1/ITS4扩增甘蔗黑顶柄锈菌DNA,并对其扩增产物进行克隆测序,获得序列于NCBI网站进行比对分析,并于该序列多态性丰富区域设计了2对引物PM2F/R、PM3F/...
为建立甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法,本研究利用真菌DNA内源转录间隔区通用引物ITS1/ITS4扩增甘蔗黑顶柄锈菌DNA,并对其扩增产物进行克隆测序,获得序列于NCBI网站进行比对分析,并于该序列多态性丰富区域设计了2对引物PM2F/R、PM3F/R。通过对同寄主不同病原菌、以及不同属的锈菌DNA进行PCR检测以验证引物的特异性。结果表明,在优化的单一PCR反应体系与程序条件下,2对引物均仅能从甘蔗黑顶柄锈菌中扩增出约474 bp和363 bp的特异条带,而从其它真菌DNA中均扩增不出任何条带。进一步将引物PM2F/R作为第一轮扩增引物、PM3F/R作为第二轮扩增引物进行巢式PCR扩增后,其检测灵敏度在DNA水平上可达0.001 ng/μL,较常规PCR提高100倍。由此表明,依据本研究所设计的2对引物而建立的快速、灵敏、准确的甘蔗黑顶柄锈菌的检测技术,对病原菌的早期诊断、快速检测及病害流行学研究具有重要意义。
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关键词
甘蔗褐锈病
黑顶柄锈菌
巢式pcr分子检测
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职称材料
题名
甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法的建立
被引量：
1
1
作者
汪涵
吴伟怀
杨旭光
杨先锋
李锐
郑金龙
黄兴
梁艳琼
贺春萍
易克贤
机构
中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
海南大学热带农林学院
农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室
宁夏出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心
出处
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2017年第12期2334-2339,共6页
基金
中国热带农业科学院橡胶研究所省部重点实验室/科学观测实验站开放课题(No.RRI-KLOF201506)
文摘
为建立甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法,本研究利用真菌DNA内源转录间隔区通用引物ITS1/ITS4扩增甘蔗黑顶柄锈菌DNA,并对其扩增产物进行克隆测序,获得序列于NCBI网站进行比对分析,并于该序列多态性丰富区域设计了2对引物PM2F/R、PM3F/R。通过对同寄主不同病原菌、以及不同属的锈菌DNA进行PCR检测以验证引物的特异性。结果表明,在优化的单一PCR反应体系与程序条件下,2对引物均仅能从甘蔗黑顶柄锈菌中扩增出约474 bp和363 bp的特异条带,而从其它真菌DNA中均扩增不出任何条带。进一步将引物PM2F/R作为第一轮扩增引物、PM3F/R作为第二轮扩增引物进行巢式PCR扩增后,其检测灵敏度在DNA水平上可达0.001 ng/μL,较常规PCR提高100倍。由此表明,依据本研究所设计的2对引物而建立的快速、灵敏、准确的甘蔗黑顶柄锈菌的检测技术,对病原菌的早期诊断、快速检测及病害流行学研究具有重要意义。
关键词
甘蔗褐锈病
黑顶柄锈菌
巢式pcr分子检测
Keywords
Sugarcane brown rust disease
Puccinia melanocephala Sydow
nested
pcr
detection system
分类号
S435.661 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法的建立
汪涵
吴伟怀
杨旭光
杨先锋
李锐
郑金龙
黄兴
梁艳琼
贺春萍
易克贤
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2017
1
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