嵌套式PCR扩增SRY基因序列鉴定牛胚胎性别体系的建立 被引量：4

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作者 白文林 尹荣焕 +3 位作者 孙明亮 周晨阳 纪英卓 罗光彬 《湖北农业科学》 北大核心 2006年第4期406-409,共4页

应用源自牛X和Y染色体同源区的1对外引物P1、P2及其各自特异区的2对内引物P3、P4和P5、P6,进行嵌套式PCR反应,对中国荷斯坦公、母牛静脉血样DNA及牛胚胎样DNA进行特异性条带的嵌套式PCR扩增,并对外、内嵌套式引物的PCR反应体系进行了优... 应用源自牛X和Y染色体同源区的1对外引物P1、P2及其各自特异区的2对内引物P3、P4和P5、P6,进行嵌套式PCR反应,对中国荷斯坦公、母牛静脉血样DNA及牛胚胎样DNA进行特异性条带的嵌套式PCR扩增,并对外、内嵌套式引物的PCR反应体系进行了优化,以准确鉴定牛早期胚胎性别。结果表明,在优化了的PCR反应体系下,中国荷斯坦公牛DNA样品得到178bp和262bp的两个条带,而母牛仅得到262bp的1个条带;静脉血样DNA性别鉴定结果与实际性别相符率为100%,表明本试验建立的体系完全可以用于牛早期的胚胎性别鉴定。 展开更多

关键词 牛 早期胚胎 嵌套式聚合酶链式反应分子标记 SRY基因 性别鉴定

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猪圆环病毒的分子生物学研究进展

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作者 乔宏兴 张华 +3 位作者 王川庆 杜根成 杨智洪 张甲正 《畜牧兽医科技信息》 2003年第11期9-11,共3页

圆环病毒(circovirus)是近几年引起广泛重视的新的病毒,它可以感染植物、动物和人.猪圆环病毒(porcine circovirus)主要引起猪的一种多系统功能障碍性疾病,临床上以新生仔猪先天性震颤(congenital tremors CT)和断奶仔猪多系统衰竭综合... 圆环病毒(circovirus)是近几年引起广泛重视的新的病毒,它可以感染植物、动物和人.猪圆环病毒(porcine circovirus)主要引起猪的一种多系统功能障碍性疾病,临床上以新生仔猪先天性震颤(congenital tremors CT)和断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndrome PMWS)为表现形式,由于圆环病毒的感染,破坏了机体的免疫系统,临床上常呈并发或继发感染猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome PRRS)、细小病毒(porcine parvovirus PP)、猪流感(swine influenza virus SIV)、猪瘟(hog cholera HC)、伪狂犬(pseudorabies PR)、皮炎肾病综合征(porcine dermatitis and nephropathy syndrome PDNS)等,从而对世界养猪业造成了巨大的损失. 展开更多

关键词 猪圆环病毒 分子生物学 研究进展 理化特性 诊断 酶联免疫吸附试验 聚合酶链式反应 原位核酸杂交试验 双重标记原位杂交技术

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进口锦鲤暴发病病原的nested-PCR鉴定 被引量：62

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作者 刘荭 史秀杰 +1 位作者 高隆英 江育林 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期414-418,共5页

为了查明锦鲤暴发性疾病的病因 ,将患病锦鲤的脑、肝、脾和肾等组织悬液接种到CO、CK和EPC等鱼类细胞系中培养 ,均未发现细胞病变 ;从病灶中取样进行病原菌的分离和培养 ,证明锦鲤有副溶血弧菌和嗜水气单胞菌的感染。制备锦鲤疱疹病毒 (... 为了查明锦鲤暴发性疾病的病因 ,将患病锦鲤的脑、肝、脾和肾等组织悬液接种到CO、CK和EPC等鱼类细胞系中培养 ,均未发现细胞病变 ;从病灶中取样进行病原菌的分离和培养 ,证明锦鲤有副溶血弧菌和嗜水气单胞菌的感染。制备锦鲤疱疹病毒 (KHV)的 2对引物KHV9/ 5F和KHV9/ 5R ,KHV1和KHV2 ,用嵌套式聚合酶链式反应 (nested -PCR)在脑和脾脏组织的抽提物中扩增出长度为 4 12bp的特异性的DNA片段。将该片段的nested -PCR扩增产物纯化后 ,克隆、测序。用NCBI -Blast软件将测序结果在Genebank中进行搜寻、比较 ,结果发现与注册号为AF4 1180 3的KHV基因序列的一部分片段有 99%的同源性。因此初步判断这次锦鲤暴发性疾病是由KHV引起的 。 展开更多

关键词 锦鲤 暴发病 病原 nested-PCR鉴定 嵌套式聚合酶链式反应

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一种可用于PCR分析的水稻DNA简易提取法 被引量：33

4

作者 陈文岳 包劲松 +1 位作者 周祥胜 舒庆尧 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期561-563,共3页

以水稻黄化苗为材料,用NaOH溶液抽提DNA,对其用于基于PCR技术的DNA标记中的效果进行了分析。结果发现,用0.5mol/LNaOH对黄化苗进行直接处理,并用等量1mol/LTrisHCl进行稀释、中和,离心所得的上清液即可直接用于各种PCR扩增和随后的DNA... 以水稻黄化苗为材料,用NaOH溶液抽提DNA,对其用于基于PCR技术的DNA标记中的效果进行了分析。结果发现,用0.5mol/LNaOH对黄化苗进行直接处理,并用等量1mol/LTrisHCl进行稀释、中和,离心所得的上清液即可直接用于各种PCR扩增和随后的DNA标记鉴别,包括转基因PCR片段检测、微卫星标记多态性分析(琼脂糖电泳法或毛细管电泳法),用这种方法提取的DNA可以在短期内保存,在PCR分析中其效果与用常规CTAB法提取的DNA相当。 展开更多

关键词 DNA提取 水稻 聚合酶链式反应 分子标记 微卫星标记 转基因

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一种叶片直接用作PCR扩增的新方法及其应用 被引量：37

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作者 汪秀峰 杨剑波 +2 位作者 向太和 李莉 倪大虎 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期67-70,共4页

以水稻为模式植物研究了利用碱处理叶片直接用作 PCR扩增的模板 ,并应用于水稻品种种性和纯度鉴定以及分子标记辅助田间育种材料的选择中。该方法具有快速、简便、结果可信度高 ,重复性好 ,对待测植株的损伤小等特点 ,它无需高速冷冻离... 以水稻为模式植物研究了利用碱处理叶片直接用作 PCR扩增的模板 ,并应用于水稻品种种性和纯度鉴定以及分子标记辅助田间育种材料的选择中。该方法具有快速、简便、结果可信度高 ,重复性好 ,对待测植株的损伤小等特点 ,它无需高速冷冻离心机及相应的提取 DNA的试剂 ,故试验成本低 ,检测所需的时间短。尤其是群体较大时 ,此种方法更是显得经济有效 ,利用此种方法在 1 d内可检测 30 0份样品。 展开更多

关键词 水稻 基因组DNA 分子标记 聚合酶链式反应 鉴定 研究方法 叶片

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不同对虾种间共用微卫星DNA引物的研究 被引量：20

6

作者 张天时 刘萍 +3 位作者 孟宪红 王伟继 孔杰 王清印 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第11期80-85,共6页

采用已发表的斑节对虾的30对微卫星引物,对部分微卫星引物在中国对虾、凡纳对虾、日本对虾中的通用性进行了研究。通过所建立的降温PCR(Touchdown PCR)方法对3种对虾的DNA进行PCR扩增,筛选出3对引物在3种对虾中均能产生清晰谱带。根据... 采用已发表的斑节对虾的30对微卫星引物,对部分微卫星引物在中国对虾、凡纳对虾、日本对虾中的通用性进行了研究。通过所建立的降温PCR(Touchdown PCR)方法对3种对虾的DNA进行PCR扩增,筛选出3对引物在3种对虾中均能产生清晰谱带。根据上述结果适当调整PCR反应体系中各试剂的量及反应条件,达到了理想的结果。利用这3对引物对3种对虾进行遗传标记分析,结果显示,PCR扩增产物条带清晰,特异性强,每对引物在3种对虾间扩增出的特异性片段大小几乎一致。研究表明,3种对虾基因组间存在一定程度的相似性,引物W15-16、W21-22和W45-46可直接应用于中国对虾、凡纳对虾、日本对虾、斑节对虾分子标记的基因组比较作图,也为图谱克隆法提供了新的思路。 展开更多

关键词 对虾养殖 图谱克隆法 聚合酶链式反应 PCR 分子标记技术

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应用ISSR-PCR对10个菊花品种进行遗传多样性分析 被引量：6

7

作者 程华 李琳玲 +4 位作者 张心玲 方佳 郑永生 姜德志 程水源 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第20期4292-4297,共6页

中国的菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)品种数量众多,形态变异丰富,适应性强,分布广泛,遗传背景非常复杂,这为菊花品种的资源调查、分类鉴定、遗传多样性分析等带来了困难。试验采用分子标记技术,对福白菊(C.morifolium cv.Fubai... 中国的菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)品种数量众多,形态变异丰富,适应性强,分布广泛,遗传背景非常复杂,这为菊花品种的资源调查、分类鉴定、遗传多样性分析等带来了困难。试验采用分子标记技术,对福白菊(C.morifolium cv.Fubaiju)、杭白菊(C.morifolium cv.Hangbaiju)等10个菊花品种进行了分类鉴定及亲缘关系研究,结果显示,在简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应(Inter-simple sequence repeat-Polymerase chain reaction,ISSR-PCR)分子标记反应体系及引物的筛选方面,选择了条带数量多和清晰度高的菊花反应体系,应用野生福白菊对39条ISSR引物进行了筛选,淘汰了扩增效果差、带型不易辨认的引物,最终确定12条引物用于菊花品种的鉴定。ISSR-PCR聚类分析结果表明,12条ISSR引物扩增出了185条清晰的、重复性好的ISSR条带,其中多态性条带有176条,多态性比率高达95.1%。应用NTSYS 2.10e软件进行UPGMA法聚类分析,在相似系数0.55处可将10个菊花品种大致分为3类,结果福白菊与其他杭菊品种在遗传上有较大的差异。 展开更多

关键词 菊花 简单序列重复区间扩增-聚合酶链式反应 分子标记 遗传多样性

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利用多重PCR分析丝羽乌骨鸡遗传多样性 被引量：4

8

作者 周艳 朱庆 李亮 《湖北农业科学》 北大核心 2006年第5期546-548,共3页

以丝羽乌骨鸡为材料,在家鸡1号染色体和Z染色体上分别选取15对和5对微卫星标记,应用多重PCR技术对140只试验个体的基因组DNA进行了扩增,结果表明,所选用的20对微卫星引物中,除MCW0101和MCW0181因扩增效果不理想而剔除外,其余18对标记均... 以丝羽乌骨鸡为材料,在家鸡1号染色体和Z染色体上分别选取15对和5对微卫星标记,应用多重PCR技术对140只试验个体的基因组DNA进行了扩增,结果表明,所选用的20对微卫星引物中,除MCW0101和MCW0181因扩增效果不理想而剔除外,其余18对标记均表现出丰富的多态性,所有结果都能重复。18对微卫星引物平均检测到6.83个等位基因(5～8个),平均杂合度和多态信息含量分别为0.833和0.805。其结果可作为进一步QTL定位和标记辅助选择研究的参考。 展开更多

关键词 丝羽乌骨鸡 多重聚合酶链式反应分子标记 遗传多样性

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旱稻65及其杂交后代的RAPD分析

9

作者 郭晓丽 白丽荣 《湖北农业科学》 北大核心 2013年第18期4519-4521,共3页

利用随机扩增多态性DNA标记(RAPD)从分子水平检测旱稻65(Oryza.sativa L.cv.upland rice 65)及杂交后代间的遗传差异。采用20对随机引物对两者基因组DNA进行RAPD-PCR扩增。结果表明,RAPD共扩增出159个位点,其中多态性位点有33个,占总位... 利用随机扩增多态性DNA标记(RAPD)从分子水平检测旱稻65(Oryza.sativa L.cv.upland rice 65)及杂交后代间的遗传差异。采用20对随机引物对两者基因组DNA进行RAPD-PCR扩增。结果表明,RAPD共扩增出159个位点,其中多态性位点有33个,占总位点的20.75%。旱稻65和杂交后代之间存在RAPD多态性,表明旱稻65和杂交后代之间DNA水平存在差异。 展开更多

关键词 旱稻65(Oryza SATIVA L cv UPLAND rice 65) 杂交后代 随机扩增多态性DNA标记(RAPD) 聚合酶链式反应式(PCR)

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一种植物基因组DNA快速提取方法的建立与评估 被引量：10

10

作者 李琳 罗淋淋 +2 位作者 罗光宇 莫蓓莘 刘琳 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第1期1-8,共8页

植物基因组脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)的提取是植物分子实验的基础,但随着样本数量的增加,基因组DNA的提取成为植株基因型鉴定以及单核苷酸多态性检测等分子实验的限速环节.为解决现有技术中提取植物基因组DNA过程繁琐、... 植物基因组脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)的提取是植物分子实验的基础,但随着样本数量的增加,基因组DNA的提取成为植株基因型鉴定以及单核苷酸多态性检测等分子实验的限速环节.为解决现有技术中提取植物基因组DNA过程繁琐、耗时耗力的问题,从提取液配方和提取条件等方面改良常规快速植物基因组DNA提取法,缩短了样本制备时间并简化了提取步骤,改良后每个样本DNA制备需时不到90 s,同时采用96孔板和配套设施显著提高了实验通量.该方法对植物样本的状态要求低、扩增效率高、成本低,适用于拟南芥、水稻和玉米等多种植物基因组DNA的提取与聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增实验,尤其适用于大样本量的规模化基因型鉴定. 展开更多

关键词 分子生物学 基因组脱氧核糖核酸 快速提取 聚合酶链式反应 水稻 拟南芥 基因型鉴定 单核苷酸多态性分析 简单重复序列标记分析

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随机扩增多态性DNA(RAPD)技术不适合烟草品种的鉴定

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作者 LucaRossi 赵百东 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 1999年第4期28-28,共1页

关键词 烟草品种 多态性DNA 随机扩增 RAPD 分子标记 烤烟品种 聚合酶链式反应 遗传多样性 基因组 反应条件的影响

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