共培养法获得MC15-昆明嵌合鼠 被引量：2

1

作者 何维 吴鹤龄 《北京大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期181-184,共4页

嵌合鼠的获得是通过ＥＳ细胞途径得到转基因小鼠的关键环节。以ＭＣ１５为供体ＥＳ细胞，用昆明白品系小鼠８细胞期的胚胎为受体胚胎，采用共培养方法我们获得了２只毛色嵌合鼠。通过与囊胚显微注射法比较，表明这种方法是方便可行的。

关键词 ES细胞 嵌合鼠 共培养法 胚胎 囊胚显微注射法

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人源化肝嵌合小鼠模型的研究进展与展望

2

作者 张娅红 张琪 +1 位作者 张彩 魏渊 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期550-558,共9页

在人体药物代谢研究和肝病造模及药物筛选研究中,主要依赖于细胞培养做体外验证,实验动物模型做体内分析。然而离体环境下细胞状态不稳定;实验动物与人类之间存在种属差异,使得2种模型在预测体内药物代谢情况以及模拟人体肝病特征方面... 在人体药物代谢研究和肝病造模及药物筛选研究中,主要依赖于细胞培养做体外验证,实验动物模型做体内分析。然而离体环境下细胞状态不稳定;实验动物与人类之间存在种属差异,使得2种模型在预测体内药物代谢情况以及模拟人体肝病特征方面存在一定局限性。而人源化肝嵌合小鼠模型通过移植人肝细胞入活体小鼠的肝脏中并扩增,使其能发挥与人类肝脏相似的特异性功能。这一功能满足了多种研究需求,包括小鼠体内肝炎病毒的复制、肝脏代谢疾病的模拟、肝细胞靶点治疗药物的筛选,以及药物肝毒性评价等。因此,人源化肝嵌合小鼠是候选药物临床前药效验证和安全性评估的理想模型之一。本文针对三类代表性人源化肝嵌合小鼠模型,对其分类、构建原理、受限因素以及应用现状进行总结与展望,以期为人源化肝嵌合小鼠模型的选用提供一定参考。 展开更多

关键词 人源化肝嵌合小鼠 免疫缺陷 药物代谢 肝病 药物筛选

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抗CD71人-鼠嵌合抗体(D2C)的构建和表达 被引量：5

3

作者 王硕 蒋琳 +4 位作者 叶庆 朱慧芬 杨敬 邵静芳 沈关心 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期665-668,共4页

目的 :构建抗CD71人 鼠嵌合抗体的真核细胞表达载体并在真核细胞中表达嵌合抗体。方法 :将鼠源性抗CD71单抗 (75 79)重、轻链可变区基因 (VH 和VL)分别克隆至含有人IgG轻、重链恒定区的表达载体pγ Expr和pκ Expr中 ;将嵌合表达载体 (... 目的 :构建抗CD71人 鼠嵌合抗体的真核细胞表达载体并在真核细胞中表达嵌合抗体。方法 :将鼠源性抗CD71单抗 (75 79)重、轻链可变区基因 (VH 和VL)分别克隆至含有人IgG轻、重链恒定区的表达载体pγ Expr和pκ Expr中 ;将嵌合表达载体 (Chi75 79 pγ Expr和Chi75 79 pκ Expr)经电转染技术共转染至真核细胞 (SP2 0 )中。结果 :经ELISA法检验阳性转染瘤细胞培养上清 ,证明其表达蛋白产物中同时具有人IgG重链恒定区 (Cγ)和轻链恒定区 (Cκ)蛋白 ;通过间接免疫荧光流式细胞术 (FCM)和间接免疫荧光显微技术 ,证明该表达产物能够特异性识别和结合表达于靶细胞表面的CD71分子。结论 :抗CD71人 鼠嵌合抗体 (D2C)在体外真核细胞表达成功。 展开更多

关键词 CD7l 人-鼠嵌合抗体 构建 表达

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抗人胃癌3H11人-鼠嵌合抗体的构建及表达 被引量：5

4

作者 李竞 王卓智 +5 位作者 王琰 刘群英 化冰 陈宇萍 朱迎春 董志伟 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1998年第2期116-120,共5页

为了降低抗人胃癌鼠单抗3H11的免疫原性,以利于该单抗在临床中的应用。我们构建并表达了3H11的人-鼠嵌合抗体,将3H11的轻、重链可变区基因分别插入到含有人k链及IgGl重链恒定区基因的真核细胞表达载体中,构建了3H11人-鼠嵌合抗体轻、重... 为了降低抗人胃癌鼠单抗3H11的免疫原性,以利于该单抗在临床中的应用。我们构建并表达了3H11的人-鼠嵌合抗体,将3H11的轻、重链可变区基因分别插入到含有人k链及IgGl重链恒定区基因的真核细胞表达载体中,构建了3H11人-鼠嵌合抗体轻、重链表达载体。应用Lipofectin方法先将嵌合轻链表达载体转染到Sp2/0细胞中,经用含霉酚酸的选择培养基筛选及克隆化培养,获得稳定分泌3H11人-鼠嵌合轻链的转染细胞株。再将嵌合重链表达载体转染该细胞系,用含有组氨醇的选择培养基筛选,获得组氨醇抗性细胞株,经亚克隆后得到可稳定分泌人k链和人IgGl的转染细胞系,经ELISA检测该细胞系所分泌的上清含有可与人胃癌细胞系803结合的人IgG抗体活性,RT-PCR结果显示该细胞株有人-鼠嵌合抗体mRNA的转录,证明已获得分泌3H11人-鼠嵌合抗体的细胞系。 展开更多

关键词 3H11 人-鼠嵌合抗体 胃肿瘤 真核基因 表达

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抗人膀胱癌人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建和表达 被引量：9

5

作者 白银 王琰 +3 位作者 周丽君 黄啸 丁义 俞莉章 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期402-406,共5页

目的 :构建嵌合型抗人膀胱癌抗体的真核表达载体 ,并实现其真核表达。方法 :从杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因 ,插入嵌合抗体IgG1真核表达载体pDHL中 ,转染CHO细胞 ,实现其真核表达 ,并对抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体的功能进行... 目的 :构建嵌合型抗人膀胱癌抗体的真核表达载体 ,并实现其真核表达。方法 :从杂交瘤细胞中克隆得到鼠源单抗的可变区基因 ,插入嵌合抗体IgG1真核表达载体pDHL中 ,转染CHO细胞 ,实现其真核表达 ,并对抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体的功能进行初步鉴定。结果 :成功构建抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体真核表达载体 ,并实现其真核表达。初步的功能鉴定表明抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体具有较好的特异性和亲合力。结论 :构建的抗人膀胱癌人 鼠嵌合抗体真核表达载体在真核细胞内得到表达 ,且其功能较为理想。 展开更多

关键词 人-鼠嵌合抗体 真核表达 单克隆抗体 药物载体 膀胱肿瘤 治疗 膀胱癌

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抗TNF-α人-鼠嵌合抗体的构建及表达 被引量：2

6

作者 周丽君 陈晓穗 +4 位作者 王欲晓 朱迎春 张海荣 谢帮铁 王琰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第9期491-494,共4页

目的 :构建和表达抗TNF α人 鼠嵌合抗体。方法 :将抗TNF α鼠单抗Z8的轻、重链可变区基因插入到含有人κ链和IgG1重链恒定区基因的真核细胞表达载体中 ,分别构建轻、重链分开表达和共同表达的人 鼠嵌合抗体真核表达载体 ,转染真核细... 目的 :构建和表达抗TNF α人 鼠嵌合抗体。方法 :将抗TNF α鼠单抗Z8的轻、重链可变区基因插入到含有人κ链和IgG1重链恒定区基因的真核细胞表达载体中 ,分别构建轻、重链分开表达和共同表达的人 鼠嵌合抗体真核表达载体 ,转染真核细胞 ,通过ELISA、RT PCR、免疫印迹检测TNF α的活性。用L92 9细胞检测嵌合抗体体外中和TNF α的活性。结果 :ELISA鉴定结果表明该嵌合抗体与TNF α特异性结合 ;PT PCR结果显示转染后细胞系有人 鼠嵌合抗体mRNA的转录 ;免疫印迹结果证实有人IgG蛋白的表达 ;体外中和实验证明此嵌合抗体能中和TNF α对L92 9细胞的毒性。结论 展开更多

关键词 TNF-Α 人-鼠嵌合抗体 构建 基因表达

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^(131)碘肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗肺癌内直接注射后体内的生物学分布 被引量：6

7

作者 李蓓蕾 陈绍亮 +3 位作者 徐兆强 于力克 李田 石洪成 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期475-478,489,共5页

目的研究肺癌瘤内直接注射131I-chTNT后患者体内分布状况。方法经病理组织学确诊的原发性肺癌患者11例,根据CT定位,单次瘤内直接注射131I-chTNT18.5～37MBq/cm3后,多时点测量血、尿放射性。应用HPLC法检测131I-chTNT在体内的稳定性和代... 目的研究肺癌瘤内直接注射131I-chTNT后患者体内分布状况。方法经病理组织学确诊的原发性肺癌患者11例,根据CT定位,单次瘤内直接注射131I-chTNT18.5～37MBq/cm3后,多时点测量血、尿放射性。应用HPLC法检测131I-chTNT在体内的稳定性和代谢情况。采用连续显像法估算全身、各主要脏器和肿瘤的放射性,并转换为注射剂量百分率(%ID),以观察131I-chTNT在体内的分布。结果所有11例患者HPLC检测结果显示,注射后24、48、72、96h内血清中131I-chTNT均以原形存在,原形含量达100%。经计算机拟合,血清药-时曲线符合静脉外给药二室模型,T1/2kα(0.89±0.17)h,T1/2β(86.88±25.97)h。游离131I是尿内131I-chTNT的唯一代谢产物,264h累计尿排泄量为注射量的(58.37±17.45)%。瘤内给药后30min,瘤内131I-chTNT量为(51.05±8.41)%ID,瘤/肺比值(T/N)高达(63.87±25.71)。264h时瘤内131I-chTNT残留(3.47±3.27)%ID,T/N为(9.61±11.00)。全身主要器官中,放射性主要集中在肺、肝、心、肾、脾和甲状腺中。结论131I-chTNT瘤内直接注射后在瘤内停留时间较长,有利于肿瘤治疗。 展开更多

关键词 131碘肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗 肿瘤 放射性核素显像 生物分布 放射免疫治疗

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组织因子人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建及鉴定 被引量：3

8

作者 张全爱 齐延红 +4 位作者 潘薇薇 何永吉 赵峰梅 杨素萍 赵邑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1149-1151,共3页

目的:构建组织因子人-鼠嵌合抗体的真核共表达载体pCN40-VL-VH,并转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中进行稳定表达,以克服鼠源单克隆抗体(mAb)用于临床的局限性。方法:从分泌鼠抗人的组织因子mAb的杂交瘤细胞株(克隆号:mTA)中抽提总RNA,经RT-... 目的:构建组织因子人-鼠嵌合抗体的真核共表达载体pCN40-VL-VH,并转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中进行稳定表达,以克服鼠源单克隆抗体(mAb)用于临床的局限性。方法:从分泌鼠抗人的组织因子mAb的杂交瘤细胞株(克隆号:mTA)中抽提总RNA,经RT-PCR扩增mAb VL和VH的基因序列,构建重组真核表达载体pCN40-VL-VH,并进行酶切鉴定和测序。通过磷酸钙沉淀法转染CHO细胞,以终浓度800μg/LG418筛选阳性细胞,通过间接ELISA、Western blot检测细胞培养上清中嵌合抗体的表达量、活性及特异性。结果:成功构建了抗人组织因子嵌合抗体真核共表达载体pCN40-VL-VH并在CHO细胞中表达。ELISA、Western blot证实,表达的抗组织因子嵌合抗体为人鼠嵌合抗体,该抗体能与重组人TF抗原特异性的结合且表达量为51.25mg/L。结论:成功地构建并在真核细胞中表达了抗人组织因子嵌合抗体,为进一步的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 组织因子 人-鼠嵌合抗体 真核表达载体 CHO细胞

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B7-1人-鼠嵌合抗体对小鼠狼疮样肾炎模型的免疫干预效应 被引量：4

9

作者 沈辉 朱玉强 +7 位作者 孔永 王婧 朱华亭 於葛华 蔡磊 朱莹 王志瑶 邱玉华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1200-1205,共6页

目的:在运用化学法建立小鼠狼疮样肾炎模型并对其进行生物学鉴定的基础上,探讨B7-1人-鼠嵌合抗体阻断B7/D28信号通路对小鼠狼疮样肾炎模型病理损伤的逆转效应。方法:取6周龄雌性C57BL/6J小鼠,予一次性腹腔注射Pristane 0.5ml/只,每月定... 目的:在运用化学法建立小鼠狼疮样肾炎模型并对其进行生物学鉴定的基础上,探讨B7-1人-鼠嵌合抗体阻断B7/D28信号通路对小鼠狼疮样肾炎模型病理损伤的逆转效应。方法:取6周龄雌性C57BL/6J小鼠,予一次性腹腔注射Pristane 0.5ml/只,每月定期检测小鼠的尿蛋白、ANA及肾脏病理学改变。取尿蛋白含量达到++,ANA荧光强度达到++的小鼠随机分为3组,每组5只。抗体干预组用B7-1人-鼠嵌合抗体经眼眶静脉序贯给药,阳性对照组注射免疫抑制剂CTX,阴性对照组注射人同型Ig G。每月定期检测尿蛋白及ANA,干预至3个月时,处死小鼠,取肾脏进行H&E染色分析,免疫复合物(IC)检测及透射电镜观察。结果:Pristane诱导至4个月时,80%的小鼠尿蛋白含量达到+^+++,血清ANA荧光强度为++^+++,出现尿蛋白及ANA的小鼠,其肾小球炎性细胞侵润,肾小管上皮样细胞可见水肿样变性、血管充血明显,纤维组织增生。抗体干预后,尿蛋白逐渐由++^+++降为±^++,ANA由++^+++降为+^++。与阴性对照组比较具有统计学差异(P<0.01)。肾脏HE染色分析的结果显示,抗体干预组肾小球炎性细胞侵润及肾小管充血等表现均得到明显改善。免疫荧光染色可见抗体干预组抗原抗体复合物(IC)的荧光强度明显减弱。经透射电镜观察,抗体干预组与阴性对照组相比,肾小球的电子致密物沉积减少,基底膜厚度趋于均匀。结论:B7-1抗体通过抑制B7-1/CD28信号通路下调机体的免疫应答,减少自身抗体的产生,对自身免疫造成的病理损伤具有逆转作用。 展开更多

关键词 B7-1 人-鼠嵌合抗体 降植烷 狼疮样肾炎 尿蛋白 抗核抗体

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^(131)碘肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗药代动力学研究 被引量：3

10

作者 陈仰纯 陈绍亮 +3 位作者 鞠佃文 石洪成 许开平 许长德 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期164-167,共4页

目的 :研究13 1碘肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗 ( 13 1I chTNT)的药代动力学。方法 :9例肿瘤患者 ,体重5 0± 6kg,单次静脉推注13 1I chTNT 2 9 6± 3 7MBq/kg后测量各时间点血、尿样本中药物的放射性。应用高效液相色谱法检测13 1I ... 目的 :研究13 1碘肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗 ( 13 1I chTNT)的药代动力学。方法 :9例肿瘤患者 ,体重5 0± 6kg,单次静脉推注13 1I chTNT 2 9 6± 3 7MBq/kg后测量各时间点血、尿样本中药物的放射性。应用高效液相色谱法检测13 1I chTNT在体内的稳定性和代谢情况。采用连续显像法估算各时间点全身及各器官的放射性 ,并将原始数据转换为注入剂量的百分率 (ID ,% )。结果 :72h内血清原形13 1I chTNT超过 95 %、16 8h为 ( 86±6 ) %。血清药 时曲线符合静脉给药二室模型 ,t1/2α4 93± 9 36h ,t1/2 β6 1 7± 2 1 2h ,AUC 2 9 1± 11 6MBq·h·ml-1,CL 5 3 9± 2 4 6ml/h。13 1碘是13 1I chTNT的代谢产物 ,1周累积经尿液排出注射剂量的 ( 33± 9) %。注射13 1I chTNT后放射性主要集中在肺、肝、肿瘤组织 ,脑组织最少 ,甲状腺放射性多逐渐浓聚。肿瘤组织放射性 2 4h达到最大值 ,T/L(瘤 /非瘤 )值呈逐渐增大的趋势多在 3～ 7d达到最大值 ( 1 2 5～ 3 73)。肿瘤组织 2 4 ,72 ,16 8h的ID值分别为 ( 2 8± 2 0 ) %、( 1 9± 1 3) %和 ( 0 9± 0 6 ) %。结论 :13 1I 展开更多

关键词 肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗 药代动力学 放射免疫治疗

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抗CD71人-鼠嵌合抗体的体外抗肿瘤效应研究 被引量：1

11

作者 王硕 叶庆 +4 位作者 沈关心 蒋琳 张悦 邵静芳 杨敬 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期13-15,共3页

目的　对抗 CD71人 -鼠嵌合抗体体外抗肿瘤效应进行研究。方法　以表达 CD71分子的 3种人类肿瘤细胞( K5 62 ,CEM和 SMMC- 772 1)为靶细胞 ,以正常人外周血单个核细胞 ( PBMC)为效应细胞 ,在效 /靶细胞比为 5 0∶1的条件下 ,测定嵌合抗... 目的　对抗 CD71人 -鼠嵌合抗体体外抗肿瘤效应进行研究。方法　以表达 CD71分子的 3种人类肿瘤细胞( K5 62 ,CEM和 SMMC- 772 1)为靶细胞 ,以正常人外周血单个核细胞 ( PBMC)为效应细胞 ,在效 /靶细胞比为 5 0∶1的条件下 ,测定嵌合抗体依赖性细胞介导的细胞毒效应 ( ADCC) ;以 CEM和 SMMC- 772 1为靶细胞 ,在有新鲜补体存在下 ,测定嵌合抗体的补体依赖性细胞毒效应 ( CDC)。结果　抗 CD71人 -鼠嵌合抗体 ( D2 C)能够通过识别 CD71分子 ,并通过人抗体 Fc段介导 ADCC。在有新鲜补体存在下 ,介导 CDC。结论　抗 CD71人 -鼠嵌合抗体对 CD71+肿瘤细胞可介导 ADCC和 CDC。 展开更多

关键词 CD71 人-鼠嵌合抗体 抗肿瘤效应

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免疫球蛋白变区基因的体外扩增及人－鼠嵌合抗体的表达 被引量：2

12

作者 刘健 潘志美 +2 位作者 郭虹汾 王斌 田培坤 《生物化学杂志》 CSCD 1994年第3期264-269,共6页

应用聚合酶链反应法体外扩增抗人小细胞肺癌单克隆抗体的变区基因，经核苷酸序列分析，轻链变区基因为３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸；重链变区基因为３５１ｂｐ，编码１１７个氨基酸。将重链变区基因克隆至ｐＳＶ_２△ＨｇｐｔＨｕγ... 应用聚合酶链反应法体外扩增抗人小细胞肺癌单克隆抗体的变区基因，经核苷酸序列分析，轻链变区基因为３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸；重链变区基因为３５１ｂｐ，编码１１７个氨基酸。将重链变区基因克隆至ｐＳＶ_２△ＨｇｐｔＨｕγ_３质粒，经一系列克隆、筛选，得一插入方向正确的表达人－鼠嵌合重链抗体的载体－ｐＳＶ_２△Ｈｇｐｔ２Ｆ７ＶＨＨｕγ_３。用电穿孔方法将该质粒导入鼠源骨髓瘤细胞Ｊ５５８Ｌ，用霉酚酸进行初步筛选，最终用兔抗人免疫球蛋白ＩｇＧＦｃ片段的抗体筛选得七株阳性克隆，免疫印迹法结果表明在与人ＩｇＧ相同位置上有一阳性条带。 展开更多

关键词 免疫球蛋白 变区基因 人鼠嵌合抗体

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抗人p185^(erbB2)人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建表达及活性测定 被引量：2

13

作者 姜北海 刘文斌 +2 位作者 孟麟 吴健 寿成超 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期491-495,共5页

目的 :HER2 /neu过度表达见于多种恶性肿瘤。作为肿瘤抗原 ,p185 erbB2 是一个理想的肿瘤治疗靶点。本实验在既往工作基础上 ,构建嵌合型抗p185 erbB2 单克隆抗体 (单抗 )的真核表达载体 ,并在CHO dhfr-细胞中表达 ,从而降低鼠源性抗体... 目的 :HER2 /neu过度表达见于多种恶性肿瘤。作为肿瘤抗原 ,p185 erbB2 是一个理想的肿瘤治疗靶点。本实验在既往工作基础上 ,构建嵌合型抗p185 erbB2 单克隆抗体 (单抗 )的真核表达载体 ,并在CHO dhfr-细胞中表达 ,从而降低鼠源性抗体的免疫原性 ,为进一步的应用研究奠定基础。方法 :RT -PCR扩增p185 erbB2 单抗 1 2的轻、重链可变区基因 ,插入嵌合抗体真核表达载体pWSD2中 ,脂质体转染CHO dhfr-细胞。经RT -PCR、间接ELISA、Westernblot检测人 -鼠嵌合抗体的表达水平 ,用ELISA、免疫沉淀方法对嵌合抗体的亲和力和特异性进行初步鉴定。此外 ,采用MTT比色法检测嵌合抗体对高表达p185 erbB2 的乳腺癌细胞系SKBR3的生长抑制作用。结果 :用RT -PCR、间接ELISA、Westernblot方法证明人 -鼠嵌合抗体在CHO dhfr-细胞中表达 ;ELISA检测提示嵌合抗体与高表达p185 erbB2的细胞反应阳性 ,与低表达p185 erbB2 的细胞反应阴性 ;免疫沉淀结果表明嵌合抗体可与p185 erbB2 分子特异性结合 ;MTT比色法检测表明嵌合抗体对过表达p185 erbB2 的乳腺癌细胞SKBR3的生长有抑制作用。结论 :CHO dhfr-细胞表达的人 -鼠嵌合抗体可与p185 erbB2 特异性结合 ,并可抑制高表达p185 erbB2 的肿瘤细胞生长 ,表明抗人p185 erbB2 人 展开更多

关键词 p185^erbB2 人-鼠嵌合抗体 真核表达载体 CHO 高表达 RT-PCR 乳腺癌细胞 特异性结合 HER2/NEU 重链可变区

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抗人整合素ανβ_3 单抗E10鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体的构建和表达 被引量：3

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作者 王臣 侯利华 +5 位作者 张彦明 李建民 廖振林 杜桂鑫 陈薇 童贻刚 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2004年第5期9-13,共5页

　为构建抗人整合素ανβ3单抗E10鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,并在噬菌体表面表达,采用PCR方法从整合素ανβ3单抗E10ScFv载体中,扩增重链可变区VH和轻链可变区VL基因。将VH基因与人重链恒定区CH1基因连接,VL基因与人CK基因连接... 　为构建抗人整合素ανβ3单抗E10鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,并在噬菌体表面表达,采用PCR方法从整合素ανβ3单抗E10ScFv载体中,扩增重链可变区VH和轻链可变区VL基因。将VH基因与人重链恒定区CH1基因连接,VL基因与人CK基因连接,分别构建了鼠/人嵌合重链FD基因和轻链基因,将其克隆入pComb3,构建了鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,用辅助噬菌体VCSM13超感染,间接ELISA及竞争抑制ELISA检测鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体活性。结果成功构建了鼠/人嵌合Fab噬菌体抗体表达载体,并在噬菌体表面展示了可结合人整合素ανβ3抗原的鼠/人嵌合Fab抗体。 展开更多

关键词 整合素ΑΝΒ3 噬菌体展示 PCR 肿瘤血管形成 细胞粘附分子 鼠/人嵌合Fab抗体

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基因重组制备鼠/人嵌合McAb研究进展 被引量：1

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作者 程云 汪美先 杨守纯 《单克隆抗体通讯》 CSCD 1990年第3期18-24,共7页

利用淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌特异性McAb杂交瘤细胞系,从中提取已重排的编码功能性Ig DNA 基因组(组建DNA文库)或成熟的IgH,L链mRNA片段(组建cDNA文库及制备探针),从而获得编码特异性McAb的V区基因。利用基因重组技术,将此来源于小... 利用淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌特异性McAb杂交瘤细胞系,从中提取已重排的编码功能性Ig DNA 基因组(组建DNA文库)或成熟的IgH,L链mRNA片段(组建cDNA文库及制备探针),从而获得编码特异性McAb的V区基因。利用基因重组技术,将此来源于小鼠特异性IgH、L链的V区基因分别与编码人IgH、L链的C区基因相重组,构成鼠/人嵌合的Ig重组基因。然后将此重组嵌合Ig基因导入真核表达质粒(多为pSV2-ypt和pSV2-neo)_4经磷酸钙沉淀技术,原生质体融合技术或电穿孔导入技术(以后2种方法较为实用且转化频率较高),将此质粒转染哺乳动物非分泌型骨髓瘤细胞如Sp2/0等,经选择性培养基培养,从中筛选分必完整功能性的鼠/人嵌合McAb。将此cMcAb临床应用于人体内进行诊断和治疗时,具有原鼠亲本McAb特异性结合抗原的能力,同时还具备优于亲本鼠McAb的介导补体,细胞对靶抗原的杀伤和吞噬作用。而且不引起过敏反应或干扰治疗效果。从而给临床诊断,治疗恶性肿瘤。病毒,细菌等感染提供了一种新颖的免疫治疗试剂、本文对近年来鼠/人嵌合McAb的研究进展,基本技术及原理,优越性及不足之处作了简要阐述,并认为制备嵌合McAb是今后制备并取代人McAb研制及应用的一种发展趋向。 展开更多

关键词 基因重组 鼠人嵌合抗体 单克隆抗体

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6C6鼠-人嵌合抗体的纯化及鉴定 被引量：1

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作者 胡晓倩 李二秋 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期629-632,共4页

采用基因工程技术 ,将小鼠 6C6单克隆抗体可变区基因与人抗体恒定区基因连接 ,构建了鼠 人 6C6嵌合抗体基因 ,并在CHO细胞中高效表达 .利用ProteinA亲和层析柱从细胞培养上清中分离纯化 6C6嵌合抗体 ,得到电泳纯度大于 98%的 6C6嵌合抗... 采用基因工程技术 ,将小鼠 6C6单克隆抗体可变区基因与人抗体恒定区基因连接 ,构建了鼠 人 6C6嵌合抗体基因 ,并在CHO细胞中高效表达 .利用ProteinA亲和层析柱从细胞培养上清中分离纯化 6C6嵌合抗体 ,得到电泳纯度大于 98%的 6C6嵌合抗体 ,其重链 (5 5kD)和轻链 (2 4kD)符合IgG相对分子质量的理论值 .Western印迹、细胞免疫荧光和免疫组织化学实验结果均呈阳性 .表明6C6嵌合抗体可识别人乳腺癌细胞表面上的肿瘤相关抗原 ,保持了 6C6单克隆抗体的特性 。 展开更多

关键词 6C6鼠-人嵌合抗体 纯化 鉴定 单克隆抗体 乳腺癌细胞 肿瘤相关抗原

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人鼠嵌合抗体重链基因转染小鼠骨髓瘤细胞的初步研究

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作者 杨志兴 杨学成 +3 位作者 王革伏 陈虹 刘伟民 张云湖 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1990年第3期31-33,共3页

本文介绍了通过人鼠嵌合抗体重链基因转染小鼠骨髓瘤J558L的研究,较详尽地阐述了用原生质体融合法将重组的人鼠嵌合抗体重链基因转染到S558L骨髓瘤细胞中,并用ELISA法检测转染子的过程和方法。同时简要地说明了影响转染率的一些因素。

关键词 人鼠嵌合抗体 重链基因 骨髓瘤

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抗人小细胞肺癌单抗2F7人-鼠嵌合Fab片段基因的构建和表达

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作者 林琳 鲁驰 +2 位作者 朱明洁 胡晶莹 赵新泰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期173-176,共4页

目的 :通过基因工程抗体改造获得具有与人小细胞肺癌有特异性反应的人 鼠嵌合抗体 2F7Fab片段。方法 :采用RT PCR技术从抗人小细胞肺癌单克隆抗体 2F7杂交瘤中克隆该抗体的重、轻链可变区基因 ,将 2F7单抗的重、轻链可变区基因装入带... 目的 :通过基因工程抗体改造获得具有与人小细胞肺癌有特异性反应的人 鼠嵌合抗体 2F7Fab片段。方法 :采用RT PCR技术从抗人小细胞肺癌单克隆抗体 2F7杂交瘤中克隆该抗体的重、轻链可变区基因 ,将 2F7单抗的重、轻链可变区基因装入带有人恒定区基因的表达载体pSW1 Fab中 ,构建得到pSW1 2F7Fab ,转化受体菌E .coilXL1 Blue ,IPTG诱导表达 ,经Westernblot和ELISA鉴定表达蛋白的活性。结果 :从抗人小细胞肺癌单克隆抗体 2F7杂交瘤中克隆获得了抗体重、轻链可变区基因。测序证实 2F7单抗的重链 (VH)可变区基因全长 36 2bp ,编码 12 0个氨基酸 ;轻链 (VL)可变区基因全长 319bp ,编码10 5个氨基酸。构建的 2F7人 鼠嵌合Fab表达载体诱导后获得了目的蛋白的表达 ,主要分泌在菌液的上清中 ,表达量较高且稳定 ,具有与NCI H1 2 8细胞特异性结合的活性。结论 :构建和表达了抗人小细胞肺癌单抗 2F7人 鼠嵌合Fab片段 ,表达产物具有与抗原结合的特异性 ,为进一步研究和应用打下了基础。 展开更多

关键词 抗人小细胞肺癌单抗 人-鼠嵌合抗体 FAB片段 基因工程

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抗人L-PGDS人-鼠嵌合轻链的真核表达

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作者 黄连春 包国强 曹永安 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1016-1017,共2页

目的:在Sp2/0细胞中表达抗人L-PGDS人-鼠嵌合轻链。方法:采用RT-PCR技术从稳定分泌抗人L-PGDS单克隆抗体(mAb)的小鼠杂交瘤细胞中扩增抗体轻链可变区基因VL,并构建到人-鼠嵌合轻链表达载体pAG4622。重组质粒pAG4622/VL经DOTAP试剂转染入... 目的:在Sp2/0细胞中表达抗人L-PGDS人-鼠嵌合轻链。方法:采用RT-PCR技术从稳定分泌抗人L-PGDS单克隆抗体(mAb)的小鼠杂交瘤细胞中扩增抗体轻链可变区基因VL,并构建到人-鼠嵌合轻链表达载体pAG4622。重组质粒pAG4622/VL经DOTAP试剂转染入Sp2/0细胞,酶酚酸筛选后用ELISA和RT-PCR检测表达产物。结果:在筛选后的转染细胞上清中检测到抗人L-PGDS人-鼠嵌合轻链蛋白,且其细胞中存在相应嵌合轻链mRNA。结论:嵌合轻链的稳定表达,为后续抗人L-PGDS人-鼠嵌合抗体的获得奠定基础。 展开更多

关键词 L-PGDS 人-鼠嵌合轻链 表达

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人源化鼠嵌合肝动物模型研究进展

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作者 李瑞生 李晓娟 +1 位作者 沈宏辉 郭立新 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第7期72-75,共4页

动物模型是人类疾病研究、发病机制、药物研发的重要工具,对于困扰人类健康的肝脏疾病还没有理想的动物模型能有效地反映出人类疾病发病的机制。建立人源化鼠嵌合肝动物模型,对于研究人类肝脏疾病的发病机制、疫苗和药物的研发及疾病的... 动物模型是人类疾病研究、发病机制、药物研发的重要工具,对于困扰人类健康的肝脏疾病还没有理想的动物模型能有效地反映出人类疾病发病的机制。建立人源化鼠嵌合肝动物模型,对于研究人类肝脏疾病的发病机制、疫苗和药物的研发及疾病的诊治等方面都具有十分广阔的应用前景。 展开更多

关键词 鼠嵌合肝 肝细胞移植 干细胞移植 模型 动物

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