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利用SRY基因鉴定山羊胎儿成纤维细胞的性别被引量：3: 1; 作者王怡管鹏飞 +1 位作者薛整风成勇《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第16期7359-7360,共2页; 根据GenBank中已发表的山羊SRY基因和β-乳球蛋白基因序列设计2对PCR引物,对来自3个1月龄山羊胎儿成纤维细胞的基因组DNA进行PCR扩增,分别以公羊、母羊的基因组DNA为阳性和阴性对照,同时对PCR产物进行序列测定和同源性分析。结果表明,... 展开更多; 关键词 SRY基因山羊胎儿成纤维细胞性别鉴定; 在线阅读下载PDF 职称材料

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向敲除奶山羊胎儿成纤维细胞SCD1基因被引量：4: 2; 作者刘雷雷贾启鹏 +4 位作者李宗帅杨洋李海江赵兴绪张勇《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期30-38,共9页; 【目的】利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除奶山羊胎儿成纤维细胞(GFFs)中硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)基因,旨在为奶山羊敲入外源性基因奠定理论基础以及构建动物模型提供生物材料.【方法】根据“20N+NGG”原则在SCD1第4外显子和第6外显... 展开更多; 关键词 CRISPR/Cas9系统奶山羊胎儿成纤维细胞敲除硬脂酰辅酶A去饱和酶1; 在线阅读下载PDF 职称材料

体细胞核移植法获得转人乳铁蛋白基因克隆山羊妊娠的研究被引量：8: 3; 作者刘凤军张玉玲 +4 位作者杨自军陈兴启孙达权王国华张涌《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第29期12720-12723,共4页; [目的]探讨供体细胞类型、移植胚胎发育阶段、数量及部位对山羊转基因克隆效率的影响。[方法]利用体细胞核移植技术将转染人乳铁蛋白基因hLF的山羊胎儿成纤维细胞（GFF）和乳腺上皮细胞（GMGE）移植到MII期去核卵母细胞内，经电融合、... 展开更多; 关键词体细胞核移植转基因人乳铁蛋白基因山羊胎儿成纤维细胞乳腺上皮细胞; 在线阅读下载PDF 职称材料

山羊myostatin基因慢病毒RNA干扰载体的构建及效果验证被引量：1: 4; 作者陆健张世芳 +6 位作者张小宁刘佳森李碧春赵福平张莉魏彩虹杜立新《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第9期1-6,共6页; myostatin基因是肌肉生长和发育的关键负调控因子之一,该基因突变或失活的物种都呈现肌肉增大的双肌表型,暗示在家畜中使该基因失活可以增加其产肉量。为了进一步揭示myostatin在山羊胎儿成纤维细胞中的生物学功能以及制备可有效失活myo... 展开更多; 关键词 MYOSTATIN基因山羊胎儿成纤维细胞慢病毒载体 RNA干扰; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名利用SRY基因鉴定山羊胎儿成纤维细胞的性别被引量：3: 1; 作者王怡管鹏飞薛整风成勇; 机构扬州大学比较医学中心扬州大学兽医学院; 出处《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第16期7359-7360,共2页; 基金扬州大学生命科学学科群资助项目; 文摘根据GenBank中已发表的山羊SRY基因和β-乳球蛋白基因序列设计2对PCR引物,对来自3个1月龄山羊胎儿成纤维细胞的基因组DNA进行PCR扩增,分别以公羊、母羊的基因组DNA为阳性和阴性对照,同时对PCR产物进行序列测定和同源性分析。结果表明,阳性对照和GFF1细胞系有2条扩增带,阴性对照、GFF2和GFF3细胞系只有1条扩增带;序列测定结果表明,PCR扩增产物为SRY基因,利用该方法准确鉴定出1个雄性细胞系和2个雌性细胞系。; 关键词 SRY基因山羊胎儿成纤维细胞性别鉴定; Keywords SRY gene Goat fibroblast cell Sex determination; 分类号 S827 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名利用CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向敲除奶山羊胎儿成纤维细胞SCD1基因被引量：4: 2; 作者刘雷雷贾启鹏李宗帅杨洋李海江赵兴绪张勇; 机构甘肃农业大学动物医学院; 出处《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期30-38,共9页; 基金兰州市科技局人才创新创业项目(2015-RC-7) 甘肃省重点研发计划-农业类项目(18YF1NA074) +1 种基金 2018度甘肃省委组织部重点人才项目(041045); 文摘【目的】利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除奶山羊胎儿成纤维细胞(GFFs)中硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)基因,旨在为奶山羊敲入外源性基因奠定理论基础以及构建动物模型提供生物材料.【方法】根据“20N+NGG”原则在SCD1第4外显子和第6外显子分别设计6个靶向SCD1基因sgRNA(F1、F2、F3、S1、S2、S3),构建PX330-eGFP-sgRNA敲除载体,通过脂质体转染到GFFs中,PCR扩增阳性细胞SCD1外显子4和外显子6的核苷酸序列,连接到pEASY-Blunt载体上,测序评估不同sgRNA的敲除效率;分别在第4外显子和第6外显子选择敲除效率高的sgRNA共同转染GFFs,经流式分选获得敲除SCD1基因的GFFs.【结果】设计的6个sgRNA均能够连入PX330-eGFP载体中,单克隆菌测序试验表明sgRNA F2、sgRNA F3、sgRNA S1和sgRNA S2具有敲除作用,其敲除效率分别为41.67%、30.77%、6.67%和28.57%;实时荧光定量PCR检测结果表明sgRNA-F2-S2与sgRNA-F3-S2转染组均能显著降低阳性细胞中SCD1的mRNA水平(P<0.05);Western Blot检测结果表明在阳性细胞中均未表达SCD1蛋白.【结论】获得两株敲除SCD1基因的GFFs,为制备敲除SCD1基因奶山羊核供体提供了生物材料.; 关键词 CRISPR/Cas9系统奶山羊胎儿成纤维细胞敲除硬脂酰辅酶A去饱和酶1; Keywords CRISPR/Cas9 system dairy goat fetal fibroblast knockout SCD1; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学] S827 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名体细胞核移植法获得转人乳铁蛋白基因克隆山羊妊娠的研究被引量：8: 3; 作者刘凤军张玉玲杨自军陈兴启孙达权王国华张涌; 机构河南科技大学动物科技学院西北农林科技大学生物工程研究所; 出处《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第29期12720-12723,共4页; 基金国家高技术研究与发展计划(863)项目(2004AA213072) 河南科技大学博士基金项目资助; 文摘 [目的]探讨供体细胞类型、移植胚胎发育阶段、数量及部位对山羊转基因克隆效率的影响。[方法]利用体细胞核移植技术将转染人乳铁蛋白基因hLF的山羊胎儿成纤维细胞（GFF）和乳腺上皮细胞（GMGE）移植到MII期去核卵母细胞内，经电融合、激活、体外培养后，2-8细胞期克隆胚被移植到同期发情山羊的输卵管内，囊胚被移植到子宫角内。[结果]GFF与GMGE的妊娠率相近（输卵管移植妊娠率分别为26.47%及20.00%）；在GFF，输卵管移植的妊娠率与子宫角内移植妊娠率接近（分别为26.47%及25.00%），输卵管移植胚胎平均数为21.2组的妊娠率显著高于5.93组和9.64组（40.00%及26.67%，21.43%）。[结论]供体细胞类型、移植胚胎的发育阶段及移植部位对山羊转基因克隆效率的影响不大，但对于输卵管移植，受体羊移植胚胎数量对妊娠率有明显的影响。此外，该研究还提示了利用成年羊乳腺上皮细胞制作转基因动物的可行性。; 关键词体细胞核移植转基因人乳铁蛋白基因山羊胎儿成纤维细胞乳腺上皮细胞; Keywords Somatic cell nuclear transfer Transgene Human lactoferrin Goat fetal fibroblasts Mammary gland epithelial cells; 分类号 S827 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名山羊myostatin基因慢病毒RNA干扰载体的构建及效果验证被引量：1: 4; 作者陆健张世芳张小宁刘佳森李碧春赵福平张莉魏彩虹杜立新; 机构扬州大学动物科学与技术学院中国农业科学院北京畜牧兽医研究所国家畜禽分子遗传育种中心内蒙古农牧科学院畜牧研究所; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第9期1-6,共6页; 基金转基因生物新品种培育重大专项--转基因肉羊育种新材料创制课题(2009ZX08008-003B); 文摘 myostatin基因是肌肉生长和发育的关键负调控因子之一,该基因突变或失活的物种都呈现肌肉增大的双肌表型,暗示在家畜中使该基因失活可以增加其产肉量。为了进一步揭示myostatin在山羊胎儿成纤维细胞中的生物学功能以及制备可有效失活myostatin基因的工具,将筛选的myostatin基因潜在RNA干扰靶位点连接到慢病毒干扰载体的转移质粒中,构建慢病毒介导的RNA干扰载体,验证其干扰效果。结果表明,干扰序列与转移质粒连接正确,成功构建myostatin基因慢病毒干扰载体,慢病毒三质粒共转293T细胞,获得的慢病毒颗粒可高效转染山羊胎儿成纤维细胞,Real-time PCR检测发现慢病毒干扰载体Lv322有效减少山羊胎儿成纤维细胞中myostatin基因mRNA 75%的表达(P<0.01),Western blotting检测显示myostatin蛋白则有效降低了94%(P<0.01)。本试验为研究myostatin基因的功能及制备失活转基因动物提供有效工具以及理论基础。; 关键词 MYOSTATIN基因山羊胎儿成纤维细胞慢病毒载体 RNA干扰; Keywords myostatin gene goat fetal fibroblasts lentiviral vector RNA interference; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	利用SRY基因鉴定山羊胎儿成纤维细胞的性别	王怡管鹏飞薛整风成勇	《安徽农业科学》 CAS 北大核心	2009	3	在线阅读下载PDF 职称材料
2	利用CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向敲除奶山羊胎儿成纤维细胞SCD1基因	刘雷雷贾启鹏李宗帅杨洋李海江赵兴绪张勇	《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心	2019	4	在线阅读下载PDF 职称材料
3	体细胞核移植法获得转人乳铁蛋白基因克隆山羊妊娠的研究	刘凤军张玉玲杨自军陈兴启孙达权王国华张涌	《安徽农业科学》 CAS 北大核心	2008	8	在线阅读下载PDF 职称材料
4	山羊myostatin基因慢病毒RNA干扰载体的构建及效果验证	陆健张世芳张小宁刘佳森李碧春赵福平张莉魏彩虹杜立新	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2012	1	在线阅读下载PDF 职称材料