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丹参水提物对山羊子宫内膜上皮细胞炎症模型中基质金属蛋白酶-2表达的影响 被引量:6
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作者 邝晓娇 张世栋 +4 位作者 董书伟 王东升 魏立琴 靳亚平 严作廷 《动物医学进展》 北大核心 2015年第3期54-59,共6页
为研究丹参水提物(SME)对子宫内膜上皮细胞炎症模型中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响,体外培养山羊子宫内膜上皮细胞(EEC),利用内毒素(脂多糖,LPS)诱导细胞增殖和产生TNF-α,建立EEC炎症模型。然后给予高、中、低不同剂量SME干预。... 为研究丹参水提物(SME)对子宫内膜上皮细胞炎症模型中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达的影响,体外培养山羊子宫内膜上皮细胞(EEC),利用内毒素(脂多糖,LPS)诱导细胞增殖和产生TNF-α,建立EEC炎症模型。然后给予高、中、低不同剂量SME干预。应用MTT比色法检测细胞活力,ELISA试剂盒检测TNF-α含量,实时荧光定量PCR检测细胞MMP-2mRNA表达变化。结果表明,5μg/mL LPS作用EEC 12h时促增殖作用显著(P<0.01);SME可显著促进EEC炎症模型中MMP-2的表达,以中、高浓度组的作用较为明显。说明SME对LPS引起的子宫内膜炎症反应有一定的保护作用。 展开更多
关键词 子宫内膜上皮细胞 丹参水提物 内毒素 基质金属蛋白酶-2
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性腺激素对山羊子宫内膜上皮细胞激素受体表达的影响 被引量:2
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作者 屈延延 齐雪峰 +5 位作者 南志春 苏运芳 李义 赵献军 王爱华 靳亚平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期135-139,共5页
为探讨性腺激素对山羊子宫内膜上皮细胞激素受体表达的影响。本研究构建永生化山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)与基质细胞(ESC)体外培养研究模型,通过细胞免疫荧光技术检测性腺激素E2或/和P4对单独培养EEC中PR与ER表达水平的调节作用以及ESC... 为探讨性腺激素对山羊子宫内膜上皮细胞激素受体表达的影响。本研究构建永生化山羊子宫内膜上皮细胞(EEC)与基质细胞(ESC)体外培养研究模型,通过细胞免疫荧光技术检测性腺激素E2或/和P4对单独培养EEC中PR与ER表达水平的调节作用以及ESC对该作用的影响。结果显示:与未加激素对照组相比,单独添加P4或与E2同时加入均可显著抑制单独培养EEC中PR与ER的表达(P<0.05);而单独添加E2可轻微促进2种激素受体表达水平。在添加有ESC条件培养液的EEC培养模式中,E2单独作用对EEC中PR与ER表达水平无显著影响;P4单独或与E2共同作用下,EEC中PR与ER表达水平均较未加激素对照组显著降低(P<0.05)。性腺激素对单独培养及与ESC共培养模式下的EEC中PR与ER表达水平的调节作用相似,P4对山羊EEC中PR与ER表达水平具有显著抑制作用。 展开更多
关键词 性腺激素 子宫内膜上皮细胞 免疫荧光技术 激素受体
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嗜酸乳杆菌体外黏附山羊子宫内膜上皮细胞条件的优化 被引量:2
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作者 白东宁 齐雪峰 +5 位作者 赵献军 段连茂 靳亚平 李义 王大会 王芳 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2011年第3期40-44,共5页
【目的】优化嗜酸乳杆菌对永生化山羊子宫内膜上皮细胞体外黏附的条件。【方法】通过革兰氏染色法,研究山羊子宫内膜上皮细胞的生长状态,嗜酸乳杆菌菌液浓度、菌体生长状态和pH值以及孵育时间对菌体黏附性能的影响。【结果】当山羊子宫... 【目的】优化嗜酸乳杆菌对永生化山羊子宫内膜上皮细胞体外黏附的条件。【方法】通过革兰氏染色法,研究山羊子宫内膜上皮细胞的生长状态,嗜酸乳杆菌菌液浓度、菌体生长状态和pH值以及孵育时间对菌体黏附性能的影响。【结果】当山羊子宫内膜上皮细胞培养48 h,嗜酸乳杆菌菌液浓度为1.0×109mL-1,pH值为4.0,孵育时间120 min,嗜酸乳杆菌培养24 h时,嗜酸乳杆菌对山羊子宫内膜上皮细胞的黏附性最好。【结论】永生化山羊子宫内膜上皮细胞作为细菌黏附性能研究的体外模型是有效可行的。 展开更多
关键词 嗜酸乳杆菌 子宫内膜上皮细胞 体外培养 黏附
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百里香酚对山羊子宫内膜上皮细胞的体外毒活性研究 被引量:2
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作者 闫宝琪 张世栋 +5 位作者 董书伟 王东升 那立冬 桑梦琪 杨洪早 严作廷 《中国兽药杂志》 北大核心 2017年第4期35-41,共7页
为了探究百里香酚对山羊子宫内膜上皮细胞(goat endometrial epithelial cells,g EECs)的毒性作用,采用不同浓度的百里香酚作用于g EECs后,观测其对细胞生长曲线,细胞形态学变化,以及细胞膜结构完整性的影响。结果表明,百里香酚对EECs... 为了探究百里香酚对山羊子宫内膜上皮细胞(goat endometrial epithelial cells,g EECs)的毒性作用,采用不同浓度的百里香酚作用于g EECs后,观测其对细胞生长曲线,细胞形态学变化,以及细胞膜结构完整性的影响。结果表明,百里香酚对EECs的毒性作用与其浓度呈剂量依赖效应(y=-0.008x+1.2202,R^2=0.9767),即随着药物浓度的增加细胞的增殖抑制率增大,药物对细胞的半数增殖抑制率(IC50)为100μg/m L。当50、100μg/m L的百里香酚作用于EECs时,g EECs的细胞核、细胞浆的形态均未产生明显变化,但当150μg/m L的百里香酚作用于g EECs时,细胞膜破裂,细胞死亡;而且药物浓度≥100μg/m L时细胞LDH的释放量显著高于正常细胞组,g EECs细胞膜的完整性受到破坏。百里香酚作用于山羊子宫内膜上皮细胞后呈现一定的毒性作用,且毒性作用和药物的浓度有关。百里香酚作用于g EECs的安全范围在0~100μg/m L,研究结果为百里香酚治疗奶牛等经济动物的炎症性疾病的临床用药浓度提供理论依据。 展开更多
关键词 百里香酚 子宫内膜上皮细胞 细胞毒性 膜通透性
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黄藤素对山羊子宫内膜上皮细胞的体外毒性研究
5
作者 闫宝琪 董书伟 +5 位作者 王东升 那立冬 桑梦琪 杨洪早 张世栋 严作廷 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第12期3239-3244,共6页
为了探究黄藤素的体外细胞毒性,采用不同浓度的黄藤素作用山羊子宫内膜上皮细胞(EECs)后,采用MTT 法绘制细胞生长曲线;倒置显微镜下观察细胞生长状态;瑞氏—姬姆萨染色法观察细胞形态学变化并通过测定乳酸脱氢酶(LDH)含量检测细... 为了探究黄藤素的体外细胞毒性,采用不同浓度的黄藤素作用山羊子宫内膜上皮细胞(EECs)后,采用MTT 法绘制细胞生长曲线;倒置显微镜下观察细胞生长状态;瑞氏—姬姆萨染色法观察细胞形态学变化并通过测定乳酸脱氢酶(LDH)含量检测细胞膜的完整性。结果显示,当黄藤素的浓度为10-227μg/mL 时,黄藤素对EECs有促增殖的作用;当浓度大于227μg/mL 时出现细胞增殖抑制现象,药物对细胞的半数增殖抑制率(IC50)为360μg/mL;瑞氏—姬姆萨染色结果显示,100、200μg/mL 的黄藤素作用于 EECs 时均未对其细胞核、细胞浆的形态产生影响;LDH 结果显示,药物浓度≥250μg/mL 时细胞 LDH 的释放量极显著高于正常细胞组(P 〈0.01)。综上所述,黄藤素作用于山羊 EECs 后呈现一定的毒性作用,且呈现显著的剂量依赖效应,作用于 EECs 的安全剂量范围为≤250μg/mL。 展开更多
关键词 黄藤素 子宫内膜上皮细胞 细胞毒性 膜通透性
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FoxO1对高NEFA诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子表达的影响
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作者 刘佳金 温小庆 +4 位作者 罗春海 贾红豆 王薇 李丹阳 付世新 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第9期4708-4717,共10页
旨在探究叉头盒蛋白O1(fork head box O 1,FoxO1)对高浓度非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acids,NEFA)状态下的奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子表达变化的影响。通过实时荧光定量PCR法及Western blot法评价添加激活剂白藜芦醇(resvera... 旨在探究叉头盒蛋白O1(fork head box O 1,FoxO1)对高浓度非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acids,NEFA)状态下的奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子表达变化的影响。通过实时荧光定量PCR法及Western blot法评价添加激活剂白藜芦醇(resveratrol)后沉默信息调节因子(silent information regulator 1,SIRT1)的表达效果,明确奶牛子宫内膜上皮细胞中FoxO1的表达情况。加入Resveratrol和高浓度的NEFA后,检测FoxO1通路关键因子及细胞凋亡相关因子蛋白的表达变化情况。与对照组相比,添加Resveratrol上调SIRT1的蛋白和mRNA表达水平(P<0.01),下调Ac-FoxO1蛋白表达水平(P<0.01);下调Caspase-3蛋白表达水平无显著影响(P>0.05),上调Bcl-2、Bcl-xl的蛋白表达水平(P<0.01),下调Bax和Bax/Bcl-2的蛋白表达水平(P<0.05)。与NEFA组相比,NEFA+Resveratrol组上调IGF-1、SIRT1和p-AKT蛋白表达水平(P<0.01),下调FoxO1、p-FoxO1、Ac-FoxO1、FoxO1/p-FoxO1、AKT和AKT/p-AKT蛋白表达水平(P<0.01),上调Bcl-xl和Bcl-2蛋白表达水平(P<0.01),下调Caspase-3、Bax和Bax/Bcl-2蛋白表达水平(P<0.01)。激光共聚焦检测结果显示,NEFA+Resveratrol组与NEFA组相比,抑制FoxO1的表达水平(P<0.01)。Resveratrol可有效激活SIRT1的表达,进而抑制FoxO1的表达,降低高浓度NEFA状态下奶牛子宫内膜上皮细胞中凋亡因子的表达水平。 展开更多
关键词 奶牛子宫内膜上皮细胞 非酯化脂肪酸 沉默信息调节因子1 叉头盒蛋白O1 凋亡因子
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脂多糖诱导奶牛子宫内膜上皮细胞焦亡的分析
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作者 王峥钰 付春宇 +3 位作者 黄子轩 高滢 于泳 鲁文赓 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第10期5232-5238,共7页
旨在分析脂多糖(LPS)诱导奶牛子宫内膜上皮细胞的焦亡现象。用0.1μmol·L^(-1)的LPS处理奶牛子宫内膜上皮细胞,通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测相关炎性因子(IL-1β、Nod-1、TNF-α、IL-18和IL-6)的mRNA转录水平,采用酶联免疫吸附试... 旨在分析脂多糖(LPS)诱导奶牛子宫内膜上皮细胞的焦亡现象。用0.1μmol·L^(-1)的LPS处理奶牛子宫内膜上皮细胞,通过实时荧光定量PCR(qPCR)检测相关炎性因子(IL-1β、Nod-1、TNF-α、IL-18和IL-6)的mRNA转录水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测相关炎性因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)蛋白水平的变化,进一步用扫描电镜观察奶牛子宫内膜上皮细胞的形态变化,以及通过免疫印迹(Western blot)检测细胞焦亡相关蛋白(NLRP3、IL-18、IL-1β、GSDMD、Cleaved caspase-1和Cleaved GSDMD)的表达水平。结果显示,LPS刺激12 h后,奶牛子宫内膜上皮细胞炎性因子(IL-1β、Nod-1、TNF-α、IL-18和IL-6)的mRNA转录水平增加;细胞发生肿胀破裂;炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平升高;焦亡与炎性相关蛋白(NLRP3、IL-18、IL-1β、GSDMD、Cleaved caspase-1和Cleaved GSDMD)的表达显著增强(P<0.05)。LPS刺激可诱导奶牛子宫内膜上皮细胞发生细胞焦亡。 展开更多
关键词 细胞损伤 奶牛子宫内膜上皮细胞 细胞焦亡
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山羊CREBZF蛋白两种亚型过表达载体的构建及其对子宫内膜上皮细胞凋亡的影响 被引量:2
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作者 牛宏宇 张瑞雪 +4 位作者 齐茂振 马玉洁 曲栓 靳亚平 林鹏飞 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期132-140,共9页
旨在构建编码山羊CREBZF蛋白2种亚型(长亚型SMILE和短亚型Zhangfei)基因的过表达载体,并初步探究CREBZF对山羊子宫内膜上皮细胞(gEECs)凋亡的影响。本研究针对编码山羊CREBZF不同亚型的基因CDS区分别设计引物,分段进行PCR扩增;运用无缝... 旨在构建编码山羊CREBZF蛋白2种亚型(长亚型SMILE和短亚型Zhangfei)基因的过表达载体,并初步探究CREBZF对山羊子宫内膜上皮细胞(gEECs)凋亡的影响。本研究针对编码山羊CREBZF不同亚型的基因CDS区分别设计引物,分段进行PCR扩增;运用无缝克隆技术将所获得各目的基因片段与线性化pcDNA3.1(+)载体连接,构建pcDNA3.1(+)-SMILE和pcDNA3.1(+)-Zhangfei重组过表达载体,通过双酶切和测序进行鉴定;转染过表达载体至gEECs,提取总RNA和蛋白,通过qRT-PCR和Western blot验证过表达效率;应用流式细胞术检测过表达SMILE和Zhangfei对gEECs凋亡率的影响。PCR、双酶切显示各目的条带大小正确;测序显示目的片段与NCBI基因库中山羊CREBZF的预测序列一致性为100%;转染过表达载体后,gEECs中SMILE与Zhangfei在转录和翻译水平的表达量均显著增加,并发现SMILE可能在翻译后自身被修饰;空载体组细胞凋亡率为8.45%;转染pcDNA3.1(+)-SMILE组凋亡率显著上升至12.41%(P<0.01);转染pcDNA3.1(+)-Zhangfei组凋亡率上升至9.83%,但相较于空载体组统计学差异不显著;结果提示,CREBZF可能调控gEECs的凋亡进程。本研究将目的基因分段克隆与无缝克隆技术联用,构建了上述2种过表达载体,为进一步探究CREBZF在反刍动物子宫内膜上皮细胞周期性变化中的作用奠定基础。 展开更多
关键词 CREBZF 过表达载体 无缝克隆 山羊子宫内膜上皮细胞 凋亡
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过表达miRNA-424-5p靶向AKT3对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的影响 被引量:1
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作者 姚伟佳 罗春海 +4 位作者 刘佳金 王薇 李丹阳 刘炳琦 付世新 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3635-3642,共8页
[目的]本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理... [目的]本试验通过过表达miRNA-424-5p,明确miRNA-424-5p与其靶基因丝氨酸/苏氨酸激酶3(AKT serine/threonine kinase 3,AKT3)对奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡影响的机制,为阐明miRNA-424-5p在奶牛胎盘分离过程中的作用机制提供试验基础和理论依据。[方法]试验分为3组:空白对照组(Control)、阴性对照组(miRNA-424-5p mimics NC)和过表达组(miRNA-424-5p mimics)。采用茎环法实时荧光定量PCR检测转染miRNA-424-5p mimics后奶牛子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p的表达变化;采用Western blotting及实时荧光定量PCR检测过表达后AKT3和凋亡相关因子的表达变化,采用Annexin V-FITC/PI法检测奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡情况。[结果]与空白对照及阴性对照组相比,转染miRNA-424-5p mimics后子宫内膜上皮细胞miRNA-424-5p mRNA的表达量极显著升高(P<0.01),B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,Caspase3)和Caspase9的mRNA表达量极显著升高(P<0.01),AKT3和Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P<0.01);Bax和Caspase3蛋白表达量极显著升高(P<0.01),Caspase9蛋白表达量显著升高(P<0.05),AKT3和Bcl-2蛋白表达量极显著降低(P<0.01);细胞凋亡率极显著升高(P<0.01)。[结论]过表达miRNA-424-5p可通过靶向调控AKT3使奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡因子Bax、Caspase3和Caspase9的表达量增加,使Bcl-2的表达量降低,进而促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 奶牛 miRNA-424-5p AKT3 子宫内膜上皮细胞 凋亡
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山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离培养和鉴定 被引量:13
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作者 丰艳妮 吴庆侠 +2 位作者 吴瑞 楚元奎 靳亚平 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期12-14,共3页
为了探讨山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离、生长条件以及纯度鉴定,通过2g/L的Ⅰ型胶原酶置于水浴消化4h,200目的滤网过滤后进行低速离心,收集沉淀物,沉降洗涤3~5次,将细胞移至24孔培养板置37℃细胞培养箱中进行培养。12h后开始贴... 为了探讨山羊子宫内膜腺上皮细胞的分离、生长条件以及纯度鉴定,通过2g/L的Ⅰ型胶原酶置于水浴消化4h,200目的滤网过滤后进行低速离心,收集沉淀物,沉降洗涤3~5次,将细胞移至24孔培养板置37℃细胞培养箱中进行培养。12h后开始贴壁生长,腺团开始向外部扩散,生长2~3d,细胞扩散并出现明显的铺路石状,4~5d腺团基本扩散开来并呈一定走向继续生长。经免疫组织化学方法进行细胞染色,细胞表达角蛋白的阳性率达90%以上。 展开更多
关键词 子宫内膜 上皮细胞 免疫组织化学 鉴定 山羊
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孕酮调控奶牛子宫内膜上皮细胞容受性基因表达的研究 被引量:1
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作者 唐颖 李琦 +3 位作者 王红战 李博 陈艳茹 郑鹏 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4711-4721,共11页
【目的】探讨孕酮对奶牛子宫内膜上皮细胞容受性标志基因表达的影响,为研究孕酮与子宫内膜容受性的关系及其调控机制提供理论依据。【方法】用0、10、100μg/L孕酮处理奶牛子宫内膜上皮细胞,通过显微镜观察细胞形态,利用CCK8试验检测细... 【目的】探讨孕酮对奶牛子宫内膜上皮细胞容受性标志基因表达的影响,为研究孕酮与子宫内膜容受性的关系及其调控机制提供理论依据。【方法】用0、10、100μg/L孕酮处理奶牛子宫内膜上皮细胞,通过显微镜观察细胞形态,利用CCK8试验检测细胞增殖水平,使用实时荧光定量PCR检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)和同源盒结构基因10(HOXa10)的mRNA表达水平,筛选孕酮最佳作用浓度。用孕酮、转录激活因子3(STAT3)抑制剂(1.5μmol/L)、孕酮+STAT3抑制剂分别处理奶牛子宫内膜上皮细胞,通过实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测VEGF和HOXa10的mRNA和蛋白表达水平。使用Lipofectamine 3000将VEGF的靶向miRNA(miR-497 mimic、miR-497 inhibitor)、HOXa10的靶向miRNA(miR-27a-3p mimic、miR-27a-3p inhibitor)以及阴性对照(mimic-NC、inhibitor-NC)分别转染奶牛子宫内膜上皮细胞,采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-497、miR-27a-3p以及VEGF和HOXa10的表达情况。【结果】与0μg/L组相比,10和100μg/L孕酮处理组细胞增殖水平、PI 3 K和Akt基因的mRNA表达水平没有显著差异(P>0.05),VEGF和HOXa 10基因mRNA表达水平显著升高(P<0.05),后续选用10μg/L孕酮进行试验。与10μg/L孕酮处理组相比,STAT3抑制剂处理组和孕酮+STAT3抑制剂联合处理组细胞中VEGF和HOXa10的mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05),但与对照组无显著差异(P>0.05)。与mimic-NC组相比,转染miR-497 mimic、miR-27a-3p mimic后细胞中VEGF、HOXa10的mRNA及蛋白表达水平均显著下降(P<0.05);与inhibitor-NC组相比,转染miR-497 inhibitor、miR-27a-3p inhibitor后细胞中VEGF、HOXa10的mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。【结论】孕酮通过激活STAT3信号通路调节奶牛子宫内膜上皮细胞中VEGF和HOXa 10基因的表达,miR-497负调控VEGF基因的表达,miR-27a-3p负调控HOXa 10基因的表达。 展开更多
关键词 孕酮 奶牛子宫内膜上皮细胞 容受性基因
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蛋鸡子宫内膜上皮细胞分离培养和鉴定及其衰老模型的建立
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作者 瞿源 邵丹 +1 位作者 杨海明 童海兵 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期8041-8048,共8页
本研究旨在建立蛋鸡子宫内膜上皮细胞的原代培养方法,并利用D-半乳糖(D-gal)构建蛋鸡子宫内膜上皮细胞体外衰老模型。试验选用产蛋高峰期(35周龄)蛋鸡子宫内膜组织为研究对象,刮取蛋鸡子宫内膜,使用Ⅰ型胶原酶消化,体外分离培养蛋鸡子... 本研究旨在建立蛋鸡子宫内膜上皮细胞的原代培养方法,并利用D-半乳糖(D-gal)构建蛋鸡子宫内膜上皮细胞体外衰老模型。试验选用产蛋高峰期(35周龄)蛋鸡子宫内膜组织为研究对象,刮取蛋鸡子宫内膜,使用Ⅰ型胶原酶消化,体外分离培养蛋鸡子宫内膜上皮细胞,通过形态学观察及细胞免疫荧光(IF)对细胞进行鉴定。添加不同浓度(0、8、16、32、64 mg/mL)的D-gal干预子宫内膜上皮细胞,通过观察细胞形态,测定干预24 h后的细胞活率,采用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测蛋鸡子宫内膜上皮细胞的细胞衰老阳性率,筛选出D-gal的最佳干预浓度。结果显示:1)利用刮取结合酶消化法培养的蛋鸡子宫内膜上皮细胞形态呈铺路石状。2)通过免疫荧光技术,运用兔抗细胞角蛋白18(CK18)作为一抗,对蛋鸡子宫内膜上皮细胞进行鉴定,结果呈阳性,纯度达90%以上。3)与对照组相比,8、16、32、64 mg/mL D-gal组的细胞存活率均显著降低(P<0.05),32 mg/mL组的存活率仅剩47.87%。4)与对照组相比,不同浓度D-gal组细胞衰老阳性率显著增加(P<0.05),16 mg/mL D-gal组的细胞衰老阳性率为41.08%。综上所述,本研究使用的方法能够成功分离、纯化培养并鉴定出原代蛋鸡子宫内膜上皮细胞,采用16 mg/mL D-gal处理24 h子宫内膜上皮细胞可成功构建其衰老模型。 展开更多
关键词 子宫内膜上皮细胞 体外细胞培养 衰老模型 蛋鸡
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NE激活Nrf2/HO-1信号通路调节人子宫内膜上皮细胞的氧化应激
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作者 杨雪 马瑞欣 +3 位作者 李佳鑫 孔雪瑞 李军平 罗彦 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第5期767-773,共7页
目的明确去甲肾上腺素(NE)是否能通过核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)调控培养的人子宫内膜上皮细胞(hEECs)的氧化应激状态。方法培养hEECs,通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测α和β肾上腺素能受体在hEECs的表达;细... 目的明确去甲肾上腺素(NE)是否能通过核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)调控培养的人子宫内膜上皮细胞(hEECs)的氧化应激状态。方法培养hEECs,通过逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测α和β肾上腺素能受体在hEECs的表达;细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验确定NE处理对细胞活性的影响,根据结果将细胞分为处理组和对照组,选择合适浓度进行处理;通过Western blot实验,检测闭锁蛋白(Occludin),闭锁小带蛋白-1(ZO-1),凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),抗氧化应激蛋白Nrf2、HO-1的表达,流式细胞术检测NE处理后细胞凋亡的情况;酶联免疫吸附试验试剂盒(ELISA)检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平。结果在hEECs上检测到α1 a、α1 b、α2 a、α2 b、α2 c、β1、β3肾上腺素能受体的表达。NE处理后,在低浓度(5、10μmol/L)不明显影响细胞活力,而15、20μmol/L NE处理细胞6 h或24 h均明显增加细胞活性。紧密连接蛋白ZO-1和Occludin在15μmol/L 24 h处理组显著升高。ZO-1在6 h处理组下降,15μmol/L处理显著下降,同时Occludin在6 h处理组升高。NE处理后与对照相比,细胞凋亡率升高,15μmol/L NE处理细胞6 h凋亡率显著升高,处理24 h后细胞凋亡率有所下降,凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax>1。NE处理后,上调Nrf2及HO-1,细胞培养基上清液中的MDA水平没有明显升高,同时SOD水平明显上调。结论NE处理细胞后可通过激活Nrf2/HO-1信号,上调SOD,发挥抗氧化应激、抗凋亡的作用。 展开更多
关键词 去甲肾上腺素 NRF2 HO-1 子宫内膜上皮细胞 ZO-1 OCCLUDIN Bax Bcl-2
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LIF调控奶牛子宫内膜上皮细胞容受性基因表达研究 被引量:2
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作者 王红战 陈艳茹 +3 位作者 李琦 唐颖 李博 郑鹏 《黑龙江动物繁殖》 2024年第1期1-6,共6页
接受态的子宫内膜对于奶牛胚胎的成功植入至关重要。为探讨白血病抑制因子(LIF)对奶牛子宫内膜容受性的调控机制,试验将奶牛子宫内膜上皮细胞分为对照组、LIF处理组、LIF+STAT3共处理组,研究了LIF对子宫内膜容受性的作用和STAT3信号通... 接受态的子宫内膜对于奶牛胚胎的成功植入至关重要。为探讨白血病抑制因子(LIF)对奶牛子宫内膜容受性的调控机制,试验将奶牛子宫内膜上皮细胞分为对照组、LIF处理组、LIF+STAT3共处理组,研究了LIF对子宫内膜容受性的作用和STAT3信号通路对奶牛子宫内膜容受性的调控。采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测容受性相关基因HOXa10、VEGF和炎症相关基因TLR4、NF-κB的mRNA和蛋白表达变化。结果表明:与对照组相比,LIF处理组奶牛子宫内膜上皮细胞的容受性相关基因HOXa10、VEGF的表达量显著增加(P<0.05),炎症相关基因TLR4、NF-κB的表达量显著增加(P<0.05)。LIF+STAT3共处理组的HOXa10、VEGF的表达量与LIF处理组比较显著降低(P<0.05),与对照组无显著差异(P>0.05);TLR4、NF-κB的表达量与LIF处理组比较无显著差异(P>0.05),显著高于对照组(P<0.05)。说明LIF通过激活STAT3信号通路调控子宫内膜上皮细胞HOXa10、VEGF的表达,能够增强子宫内膜的容受性。 展开更多
关键词 子宫内膜上皮细胞 容受性 胚胎附植 STAT3抑制剂 白血病抑制因子(LIF)
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肉牛ISG20基因编码区的克隆及其在子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达分析
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作者 姚妮 罗仍卓么 +2 位作者 包斌武 杨易 王兴平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第2期184-191,共8页
为探究干扰素刺激外切酶基因20(ISG20)在肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达及功能分析。采用RT-PCR结合测序技术获得肉牛ISG20基因的CDS区,利用生物信息学在线工具进行了ISG20基因及其所编码的蛋白质的序列分析,并利用qRT-PCR检测... 为探究干扰素刺激外切酶基因20(ISG20)在肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达及功能分析。采用RT-PCR结合测序技术获得肉牛ISG20基因的CDS区,利用生物信息学在线工具进行了ISG20基因及其所编码的蛋白质的序列分析,并利用qRT-PCR检测了ISG20基因及其相关基因在肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达量。结果显示,ISG20基因的CDS区长度为516 bp,可编码一条由176个氨基酸组成的无跨膜结构域且不稳定的碱性亲水性单体蛋白质。该蛋白质含有1个DEDD核酸外切酶超家族结构域,与ISG15和MX2等10种蛋白质相互作用,主要在细胞质中发挥作用。此外,qRT-PCR结果表明,与对照组相比,ISG20基因及其相关的ISG15和MX2在孕酮(P4)联合干扰素-tau(IFN-τ)诱导的肉牛子宫内膜上皮细胞容受态形成中的表达量均显著上调。ISG20可能参与肉牛子宫内膜上皮细胞容受态的形成,并在早期妊娠等生物学过程中发挥作用。 展开更多
关键词 肉牛 ISG20 子宫内膜上皮细胞 细胞容受性 生物信息学分析
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子宫内膜上皮细胞类器官在生殖领域的研究进展
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作者 曹志文 颜桂军 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期576-582,共7页
近年来,子宫内膜上皮细胞类器官研究在生殖领域取得了显著进展。传统的二维细胞培养模型和动物实验难以准确还原子宫内膜的三维结构和生理功能,从而限制了对子宫内膜上皮细胞正常生理机制和相关疾病机制的深入研究。新兴的类器官技术为... 近年来,子宫内膜上皮细胞类器官研究在生殖领域取得了显著进展。传统的二维细胞培养模型和动物实验难以准确还原子宫内膜的三维结构和生理功能,从而限制了对子宫内膜上皮细胞正常生理机制和相关疾病机制的深入研究。新兴的类器官技术为此提供了新途径,子宫内膜上皮细胞类器官通过干细胞或前体细胞在三维培养基中自行组织形成,成功地高度还原了在体子宫内膜腺体的特征。这种类器官模型不仅能够模拟子宫内膜上皮细胞在不同周期阶段的生理变化,还能够模拟囊胚与子宫内膜之间的复杂互动过程。此外,子宫内膜上皮细胞类器官系统为生殖领域的基础研究和临床研究提供了重要工具,包括生殖相关基础研究、疾病机制探索、药物筛选及靶向治疗研究等。这些研究可为深入了解子宫内膜的生物学特性、疾病机制以及相关疾病的治疗策略提供全新的思路和方法。 展开更多
关键词 子宫内膜上皮细胞 类器官 药物筛选
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高NEFA经FoxO1途径诱导奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡机制的研究
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作者 温小庆 罗春海 +2 位作者 曹一鸣 李美娟 付世新 《黑龙江八一农垦大学学报》 2024年第5期56-62,共7页
为揭示高NEFA经FoxO1途径诱导奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的机制,研究通过添加0、0.2、1.2 mM的NEFA刺激奶牛子宫内膜上皮细胞12 h,应用流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期情况,应用WB和qRT-PCR技术检测FoxO1、pFoxO1、Caspase-3、Bcl-2... 为揭示高NEFA经FoxO1途径诱导奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡的机制,研究通过添加0、0.2、1.2 mM的NEFA刺激奶牛子宫内膜上皮细胞12 h,应用流式细胞技术检测细胞凋亡和细胞周期情况,应用WB和qRT-PCR技术检测FoxO1、pFoxO1、Caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白和mRNA表达水平。结果显示:NEFA在低浓度0.2 m M时细胞凋亡无明显变化,在高浓度1.2 mM时细胞凋亡极显著增多(P<0.01);NEFA在高浓度1.2 mM时极显著上调G1期细胞数量,显著下调G2期细胞数量;NEFA在低浓度0.2 mM时对细胞内Caspase-3、Bcl-2、Bax、FoxO1和p-FoxO1蛋白表达无显著影响(P>0.05);NEFA在1.2 mM时极显著上调细胞内Caspase-3、Bax、FoxO1和p-FoxO1的蛋白表达(P<0.01),NEFA在高浓度1.2 mM时极显著下调Bcl-2的蛋白表达(P<0.01)。NEFA在低浓度0.2 mM时对细胞内Caspase-3、Bcl-2、Bax、FoxO1的mRNA表达无显著影响(P>0.05);NEFA在1.2 mM时极显著上调细胞内Caspase-3、Bax和FoxO1的mRNA表达水平(P<0.01),极显著下调Bcl-2的mRNA水平(P<0.01)。研究表明,高浓度NEFA可以通过FoxO1途径诱导奶牛子宫内膜上皮细胞凋亡和细胞周期阻滞。 展开更多
关键词 非酯化脂肪酸 细胞凋亡 奶牛子宫内膜上皮细胞 叉头盒O蛋白1
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miR-3604在牛子宫内膜上皮细胞容受性、增殖和凋亡中的作用
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作者 姬中祥 罗仍卓么 +4 位作者 李宇航 王玉梅 虎喜敏 李彦青 王兴平 《生物技术通报》 CSCD 北大核心 2024年第12期291-298,共8页
【目的】研究miR-3604在牛子宫内膜上皮细胞(bovines endometrial epithelial cells,bEECs)容受性中的作用。【方法】利用孕酮(progesterone,P4)和干扰素-tau(interferon tau,IFN-τ)联合诱导bEECs构建容受性细胞模型。在此基础上,对容... 【目的】研究miR-3604在牛子宫内膜上皮细胞(bovines endometrial epithelial cells,bEECs)容受性中的作用。【方法】利用孕酮(progesterone,P4)和干扰素-tau(interferon tau,IFN-τ)联合诱导bEECs构建容受性细胞模型。在此基础上,对容受态bEECs进行牛miR-3604的过表达和干扰后,分别采用RT-qPCR、流式细胞术、EdU和CCK8技术检测了牛miR-3604在bEECs容受性、细胞增殖和凋亡中的作用。【结果】与对照组相比,容受态bEECs的miR-3604过表达组的细胞容受性标志基因HOXA10、IL-6和VEGF的表达量均显著降低(P<0.05);细胞凋亡标志基因CASP3和BAX的表达量显著上调(P<0.05);容受态bEECs的凋亡率极显著降低(P<0.01),而细胞增殖率显著升高(P<0.05)。同时,miR-3604干扰实验的结果与过表达实验的结果相反。【结论】miR-3604在容受性bEECs中的表达量升高,从而可抑制bEECs的容受性和细胞凋亡,并促进bEECs的增殖。 展开更多
关键词 miR-3604 子宫内膜容受性 子宫内膜上皮细胞 细胞增殖 细胞凋亡
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干扰FABP4基因对绵羊子宫内膜上皮细胞脂质积累及迁移的影响
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作者 陈岩 刘畅 +3 位作者 魏盼盼 喻恒彬 张童 胡广东 《饲料研究》 CAS 北大核心 2024年第15期51-56,共6页
研究旨在探究脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因对绵羊子宫内膜上皮细胞脂质积累及迁移的影响。设计3条FABP4干扰片段,将片段与pGBplv-U6-mcherry-puro连接构建干扰载体,以空载质粒为对照(NC组),3条干扰重组质粒分别为FABP4-shRNA1、FABP4-shR... 研究旨在探究脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因对绵羊子宫内膜上皮细胞脂质积累及迁移的影响。设计3条FABP4干扰片段,将片段与pGBplv-U6-mcherry-puro连接构建干扰载体,以空载质粒为对照(NC组),3条干扰重组质粒分别为FABP4-shRNA1、FABP4-shRNA2、FABP4-shRNA3,对重组质粒进行酶切鉴定。质粒转染后RT-qPCR鉴定干扰效率,Western Blot对载体干扰效果进行进一步验证。将载体转染至体外培养的子宫内膜上皮细胞中,BODIPY法检测脂滴聚集情况,使用试剂盒检测细胞中甘油三酯含量,RT-qPCR检测脂代谢及增殖迁移相关基因,细胞划痕试验检测细胞迁移情况。结果显示:所有载体均可有效干扰FABP4基因的表达,其中FABP4-shRNA2载体干扰效果最好。在干扰子宫内膜上皮细胞FABP4基因表达后,与NC组相比,细胞中脂滴聚集能力下降,甘油三酯含量降低,细胞脂质代谢和增殖迁移相关基因mRNA表达下降,划痕愈合速度降低;降低子宫内膜上皮细胞FABP4基因表达后,细胞脂质积累水平及细胞迁移能力下降。研究表明,FABP4基因可能对绵羊妊娠和胚胎正常发育具有重要作用,值得在育种实践中进行更深入研究。 展开更多
关键词 绵羊 子宫内膜上皮细胞 FABP4 RNAI
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应用大蒜素缓解牛子宫内膜炎损伤的研究
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作者 楚秋霞 陈付英 +6 位作者 冯亚杰 张子敬 师志海 施巧婷 王二耀 吕世杰 付晓鹤 《安徽农业科学》 2025年第6期85-88,共4页
[目的]研究大蒜素对牛子宫内膜炎损伤的治疗作用。[方法]采用脂多糖诱导牛子宫内膜上皮细胞建立炎性细胞模型,探讨大蒜素的抗炎机制。筛选最佳LPS浓度;通过ELISA方法、荧光定量PCR技术和Western blot方法分别检测细胞炎症因子的含量、m... [目的]研究大蒜素对牛子宫内膜炎损伤的治疗作用。[方法]采用脂多糖诱导牛子宫内膜上皮细胞建立炎性细胞模型,探讨大蒜素的抗炎机制。筛选最佳LPS浓度;通过ELISA方法、荧光定量PCR技术和Western blot方法分别检测细胞炎症因子的含量、mRNA相对表达量和蛋白相对表达量。[结果]不同浓度的LPS均能够提高细胞的增殖量,当LPS浓度为30μg/mL时细胞活力最高。与炎性细胞相比,大蒜素可抑制LPS诱导的子宫内膜上皮细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-8炎性因子的分泌,也能降低IL-1β、TLR4和NF-κβp65的基因转录水平。Western blot分析结果表明,大蒜素能够抑制TLR4和NF-κβp65蛋白的表达。[结论]大蒜素能够抑制TLR4/NF-κβ信号通路,通过调节细胞炎症因子的分泌发挥抗炎活性。 展开更多
关键词 子宫内膜上皮细胞 大蒜素 炎性反应 细胞因子
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