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山羊副流感病毒3型的研究进展
1
作者 杨胜波 莫玉兵 +3 位作者 徐景峨 李婷 潘永 杨莉 《现代畜牧科技》 2024年第6期97-99,共3页
山羊群中普遍存在山羊副流感病毒3型(CPIV3)病毒的感染,严重危害养羊业的健康发展。该文简要介绍了CPIV3的临床表现、流行病学、病原学、致病性、诊断技术、疫苗研发及防控技术等内容。研究表明,研制出安全有效的疫苗是控制山羊副流感病... 山羊群中普遍存在山羊副流感病毒3型(CPIV3)病毒的感染,严重危害养羊业的健康发展。该文简要介绍了CPIV3的临床表现、流行病学、病原学、致病性、诊断技术、疫苗研发及防控技术等内容。研究表明,研制出安全有效的疫苗是控制山羊副流感病毒3型的方法,对预防由CPIV3引起的呼吸道疾病具有重要意义。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 呼吸道疾病 诊断技术 研究进展
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山羊副流感病毒3型感染MDBK细胞的miRNA表达谱变化分析 被引量：4
2
作者 李基棕 李文良 +4 位作者 毛立 郝飞 杨蕾蕾 张纹纹 江杰元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期896-906,共11页
本研究旨在分析山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞和正常MDBK细胞差异表达的miRNA,以探索miRNA在CPIV3感染过程中的作用及其调控机制。将CPIV3感染MDBK细胞,利用高通量测序技术检测分析MDBK细胞中miRNA表达谱,并筛选差异表达的miRN... 本研究旨在分析山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞和正常MDBK细胞差异表达的miRNA,以探索miRNA在CPIV3感染过程中的作用及其调控机制。将CPIV3感染MDBK细胞,利用高通量测序技术检测分析MDBK细胞中miRNA表达谱,并筛选差异表达的miRNA。对靶基因进行GO注释和KEGG富集。结果显示,有37个miRNA显著差异表达(P<0.001),其中18个miRNA在病毒感染中上调,19个miRNA在病毒感染中下调。经RT-qPCR方法验证5个差异表达的候选miRNA,结果与高通量测序分析有很好的一致性。进一步GO功能注释表明:差异表达的miRNA靶基因生物学功能相对集中在免疫调节、细胞生物调控及细胞新陈代谢等生物过程。这些靶基因参与多种细胞的信号通路,包括细胞黏附分子、B细胞受体信号通路、MAPK信号通路、代谢通路、黏合斑、钙离子信号通路和趋化因子信号通路等。本研究为进一步探讨CPIV3致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 MIRNA MDBK细胞 高通量测序
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IFN-α对山羊副流感病毒3型的抗病毒活性 被引量：4
3
作者 孙敏 郝飞 +5 位作者 张纹纹 李文良 杨蕾蕾 毛立 程子龙 刘茂军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期736-743,共8页
旨在探讨原核表达纯化的山羊α干扰素(IFN-α)对山羊副流感病毒3型(CPIV3)的抗病毒活性。通过分析山羊IFN-α的序列特点,比对不同种属IFN-α的同源性,进而构建山羊IFN-α成熟蛋白编码基因(去除信号肽基因序列)的原核表达载体pET-30a-gI... 旨在探讨原核表达纯化的山羊α干扰素(IFN-α)对山羊副流感病毒3型(CPIV3)的抗病毒活性。通过分析山羊IFN-α的序列特点,比对不同种属IFN-α的同源性,进而构建山羊IFN-α成熟蛋白编码基因(去除信号肽基因序列)的原核表达载体pET-30a-gIFN-α,将其转化至感受态细胞Rosetta(DE3),IPTG诱导后镍柱及亲和纯化获得山羊IFN-α。利用RT-qPCR测定山羊IFN-α作用于牛肾细胞(Madin-Darby bovine kidney cell,MDBK cell)后6种干扰素刺激基因(interferon-stimulated genes,ISGs)的相对表达水平;同时,利用TCID50及Western blot测定其对CPIV3的抗病毒活性。结果表明,原核表达的山羊IFN-α蛋白含量为0.20 mg·mL^(-1),Western blot结果表明表达产物相对分子质量约为20 ku,与预期结果相符。RT-qPCR结果显示,山羊IFN-α孵育MDBK细胞后,可显著刺激RSAD2、STAT1及ISG15等6种ISGs基因的转录上调。与对照组细胞相比,山羊IFN-α显著下调MDBK细胞中CPIV3的病毒滴度,Western blot结果显示,山羊IFN-α孵育显著下调CPIV3非结构蛋白C的表达水平。山羊IFN-α对CPIV3在MDBK细胞中的增殖具有显著抑制作用。本研究扩展了I型干扰素的研究范围,为CPIV3等反刍动物疫病的防控提供新的思路。 展开更多
关键词 山羊IFN-α 原核表达 ISGs 山羊副流感病毒3型 抗病毒活性
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MiR-222对山羊副流感病毒3型复制的影响 被引量：4
4
作者 钟纯燕 李基棕 +9 位作者 毛立 李文良 郝飞 孙敏 刘茂军 主性 嵇辛勤 肖芳 杨蕾蕾 张纹纹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2664-2671,共8页
为探讨miR-222对山羊副流感病毒3型(CPIV3)复制的影响及其机制。本研究将miR-222模拟体转染MDBK细胞,接种CPIV3病毒液,收集上清和细胞,测定病毒效价和干扰素(IFN)含量;通过Target Scan和miRanda等生物信息学软件预测miR-222调控的靶基因... 为探讨miR-222对山羊副流感病毒3型(CPIV3)复制的影响及其机制。本研究将miR-222模拟体转染MDBK细胞,接种CPIV3病毒液,收集上清和细胞,测定病毒效价和干扰素(IFN)含量;通过Target Scan和miRanda等生物信息学软件预测miR-222调控的靶基因,用双荧光素酶报告系统验证其靶基因,RNA干扰技术研究靶基因对CPIV3复制的影响。结果显示,miR-222模拟体能抑制CPIV3复制,转染miR-222组IFN的表达水平较高,且病毒复制效价(10^(2. 5)TCID_(50)·0. 1 mL^(-1))显著低于miRNA阴性对照组(10^(3. 3)TCID_(50)·0. 1 mL^(-1));双荧光素酶报告系统验证和qPCR检测得出,miR-222可靶向结合IRF2的3'-UTR,并降解IRF2的mRNA和抑制IRF2蛋白表达;敲除IRF2的MDBK细胞感染CPIV3后,病毒复制效价(10^(2. 0)TCID_(50)·0. 1 mL^(-1))低于正常MDBK细胞组(10^(3. 2)TCID_(50)·0. 1 mL^(-1))。本研究表明,miR-222通过靶向降解IRF2 mRNA提高IFN表达水平来抑制CPIV3复制,为基于miR-222研制潜在抗病毒药物提供基础资料。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 MIR-222 MDBK细胞 IRF2
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山羊副流感病毒3型和巴氏杆菌混合感染的诊断与病原分离鉴定 被引量：6
5
作者 恽佳蕾 毛立 +5 位作者 杨蕾蕾 何苗峰 李文良 张纹纹 孙敏 刘茂军 《江苏农业科学》 北大核心 2021年第11期124-127,共4页
随着规模化养羊业的发展,肉羊呼吸道疾病流行普遍、发病严重、防治困难,给养殖业及养殖户造成较大的经济损失。为明确安徽某肉羊养殖场呼吸道疾病的病因,结合流行病学、临床症状、剖检病变观察、细菌学及病毒学检测与分离鉴定以及血清... 随着规模化养羊业的发展,肉羊呼吸道疾病流行普遍、发病严重、防治困难,给养殖业及养殖户造成较大的经济损失。为明确安徽某肉羊养殖场呼吸道疾病的病因,结合流行病学、临床症状、剖检病变观察、细菌学及病毒学检测与分离鉴定以及血清学检测对病因进行分析,结果表明该病是由山羊副流感病毒3型与巴氏杆菌混合感染所致。分离菌株对丁胺卡那霉素、氟苯尼考、阿奇霉素、恩诺沙星和头孢曲松敏感,对青霉素、克林霉素和强力霉素不敏感。通过MDBK细胞成功分离获得山羊副流感病毒3型毒株,其M基因片段与已有毒株同源性达99%。血清学检测也进一步证实病毒的感染。这为临床上科学防控山羊呼吸道疾病提供了指导和借鉴。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 巴氏杆菌 呼吸道疾病 混合感染 分离鉴定
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山羊副流感病毒3型N蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：2
6
作者 王咪 李文良 +4 位作者 郝飞 毛立 杨蕾蕾 张纹纹 江杰元 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期150-156,共7页
山羊副流感病毒3型可引起山羊呼吸道疾病,与支原体、细菌等混合感染引起广泛的发病与死亡,笔者拟通过建立基于N蛋白的间接ELISA抗体检测方法用于该病的监测。设计引物扩增目的基因N,克隆到质粒pET32a(+)上,构建重组质粒pET32a-N,并转化... 山羊副流感病毒3型可引起山羊呼吸道疾病,与支原体、细菌等混合感染引起广泛的发病与死亡,笔者拟通过建立基于N蛋白的间接ELISA抗体检测方法用于该病的监测。设计引物扩增目的基因N,克隆到质粒pET32a(+)上,构建重组质粒pET32a-N,并转化至大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达重组N蛋白并鉴定。通过条件优化建立ELISA抗体检测方法,并检测临床样品与HI试验进行比较。本试验成功构建重组质粒,诱导表达的蛋白质(47ku)经SDS-PAGE与Western blot鉴定,证明其正确表达且具有良好的抗原性与特异性。利用纯化的蛋白质作为包被抗原优化间接ELISA反应条件,确定其最佳抗原包被浓度为1μg·mL-1、血清稀释度为1∶200、血清作用时间60min、酶标二抗工作浓度为1∶6 000、二抗反应时间30min、底物显色时间10min。通过对138份临床血清样品检测发现其与HI试验结果符合率达88.41%。本研究建立的间接ELISA检测方法敏感、特异、准确,适用于临床样品的检测与血清流行病学调查。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 N蛋白 原核表达 间接ELISA
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山羊副流感病毒3型通过Caspase途径诱导气管上皮细胞凋亡 被引量：2
7
作者 廖政 李基棕 +9 位作者 肖芳 钟纯燕 杨蕾蕾 毛立 李文良 孙敏 主性 嵇辛勤 张纹纹 刘茂军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期2061-2069,共9页
旨在揭示山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染气管上皮细胞后是否可诱导细胞发生凋亡,并对细胞凋亡的信号通路进行初步探究。本研究将CPIV3病毒液接种气管上皮细胞,在12、24、36、48、72和96 h收集培养物上清检测病毒增殖滴度;通过形态学观察C... 旨在揭示山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染气管上皮细胞后是否可诱导细胞发生凋亡,并对细胞凋亡的信号通路进行初步探究。本研究将CPIV3病毒液接种气管上皮细胞,在12、24、36、48、72和96 h收集培养物上清检测病毒增殖滴度;通过形态学观察CPIV3诱导气管上皮细胞病变(CPE)情况;采用Annexin V-FITC/PI双染细胞凋亡检测试剂盒和Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活性检测试剂盒检测凋亡水平及相关指标;荧光定量PCR检测细胞凋亡分子mRNA表达水平;Western blot分析激活型Caspase-3蛋白表达变化情况。结果显示,CPIV3在气管上皮细胞中的增殖呈上升趋势,96 h能达到10 4.50 TCID 50·mL^-1;形态学观察发现,病毒接种后48 h出现细胞收缩变圆、脱落等CPE现象;流式细胞术检测及Caspase活性检测表明,感染组细胞出现细胞凋亡,48 h后细胞凋亡率达19.66%,且Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活性随着时间延长逐渐升高;死亡受体凋亡途径和线粒体凋亡途径细胞凋亡因子mRNA表达上调。Western blot分析揭示,激活型Caspase-3蛋白在病毒感染过程中被活化。本研究证实CPIV3感染可诱导气管上皮细胞凋亡,且Caspase途径在病毒诱导细胞凋亡的过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 细胞凋亡 气管上皮细胞 CASPASE
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山羊副流感病毒3型感染MDBK细胞和BECs后7种ISGs mRNA变化分析 被引量：2
8
作者 肖芳 嵇辛勤 +5 位作者 李基棕 廖政 毛立 李文良 孙敏 刘茂军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1147-1153,共7页
为探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞和气管上皮细胞(BECs)后的抗病毒免疫应答,本研究针对7种干扰素刺激基因(ISGs):IFI6、ISG15、OAS1Y、OAS1Z、Mx1、Mx2及RSAD2的基因序列设计特异性引物,经优化建立了检测7种ISGs的SYBR Gree... 为探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞和气管上皮细胞(BECs)后的抗病毒免疫应答,本研究针对7种干扰素刺激基因(ISGs):IFI6、ISG15、OAS1Y、OAS1Z、Mx1、Mx2及RSAD2的基因序列设计特异性引物,经优化建立了检测7种ISGs的SYBR Green I荧光定量PCR方法。利用所建立的方法检测CPIV3JS2013株感染MDBK细胞和BECs 24 h、48 h和72 h后7种ISGs的m RNA转录水平。结果显示,在MDBK细胞中,CPIV3感染时间越长,7种ISGs的转录水平上调倍数越高,其中ISG15、Mx1、Mx2和RSAD2的m RNA转录水平上调量持续高于IFI6、OAS1Y和OAS1Z;而在BECs中,CPIV3感染后虽然IFI6、ISG15、OAS1Y、OAS1Z、Mx1、Mx2和RSAD2 m RNA转录水平均出现上调,但ISG15、Mx2和RSAD2的m RNA转录水平上调量高于IFI6、OAS1Y、OAS1Z和Mx1。结果表明,CPIV3 JS2013株可以刺激MDBK细胞和BECs中这7种ISGs的大量转录,本研究为进一步探究其抗病毒功能提供了实验依据。 展开更多
关键词 干扰素刺激基因 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR 山羊副流感病毒3型 建立及应用
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山羊副流感病毒3型感染MDBK细胞的转录组分析 被引量：1
9
作者 钟纯燕 李基棕 +9 位作者 毛立 李文良 郝飞 孙敏 刘茂军 主性 嵇辛勤 肖芳 杨蕾蕾 张纹纹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期364-372,共9页
本研究旨在探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞后的转录组基因变化情况,丰富CPIV3转录组信息。取1MOI CPIV3JSHA2014-1病毒液感染MDBK细胞,设非感染正常细胞为对照,于24h后收获细胞,提取总RNA,利用Illumina HiSeqTM2500对感染组... 本研究旨在探究山羊副流感病毒3型(CPIV3)感染MDBK细胞后的转录组基因变化情况,丰富CPIV3转录组信息。取1MOI CPIV3JSHA2014-1病毒液感染MDBK细胞,设非感染正常细胞为对照,于24h后收获细胞,提取总RNA,利用Illumina HiSeqTM2500对感染组与对照组进行高通量测序,并用测序评估、基因注释等生物信息学方法进行分析。结果显示,差异表达基因共261个,其中表达上调140个,表达下调121个,经RT-qPCR方法验证8个差异表达的干扰素信号通路相关基因,结果与高通量测序一致。进一步GO分类结果显示,差异表达基因主要涉及细胞生物学进程、构成细胞的组分以及实现的分子功能三个方面,KEGG分析显示这些基因参与代谢、生物系统、细胞进程、基因信息进程和环境信息进程。本研究为深入探究CPIV3的致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 山羊副流感病毒3型 MDBK细胞 高通量测序 转录组
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