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重组人尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶2B7三个功能性突变体的构建、表达及活性比较
被引量：
5
1
作者
袁玲敏
陈静
曾苏
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期274-283,共10页
目的构建人尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶(UGT)2B7重组酶的3个功能性突变体UGT2B7*71S(A71S,211G>T),UGT2B7*2(H268Y,802C>T)和UGT2B7*5(D398N,1192G>A),以进一步研究该酶野生型和其突变体在对底物作用过程中的功能差异。方法应用...
目的构建人尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶(UGT)2B7重组酶的3个功能性突变体UGT2B7*71S(A71S,211G>T),UGT2B7*2(H268Y,802C>T)和UGT2B7*5(D398N,1192G>A),以进一步研究该酶野生型和其突变体在对底物作用过程中的功能差异。方法应用细菌/杆状病毒系统,将构建的pFastBac-UGT2B7*71S,pFastBac-UGT2B7*2和pFastBac-UGT2B7*5重组质粒转化E.coli DH10Bac大肠杆菌,通过转座作用获得各自的重组粘粒(bac-mid),然后将其转染草地夜蛾(Sf)9细胞后,产生重组杆状病毒。这些病毒再感染Sf9细胞,即可获得野生型UGT2B7*1及其突变体的重组酶。野生型及突变体酶的活性以7-羟基-4-三氟甲基香豆素(7-HFC)为底物,用荧光法测定并分析比较。结果利用杆状病毒/昆虫细胞系统,成功地构建人UGT2B7重组酶的3个功能性突变体。UGT2B7*1对7-HFC的Km值为(0.331±0.018)mmol·L-1,Vmax值为(2.14±0.04)μmol·min-1·g-1蛋白;UGT2B7*71S对7-HFC的Km值为(0.260±0.026)mmol·L-1,Vmax值为(1.36±0.05)μmol·min-1·g-1蛋白;UGT2B7*2对7-HFC的Km值为(0.53±0.06)mmol·L-1,Vmax值为(9.5±0.5)μmol·min-1·g-1蛋白;UGT2B7*5对7-HFC的Km值为(0.59±0.05)mmol·L-1,Vmax值为(7.52±0.28)μmol·min-1·g-1蛋白。结论应用细菌/杆状病毒系统,成功构建了UGT2B7的3个功能性突变体,这些突变体可进一步用于对其他底物的代谢活性比较。
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关键词
尿苷二磷酸葡糖醛酸
转移酶
突变蛋白质类
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职称材料
胆红素-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶A1基因多态性在Gilbert综合征发病机制中的作用
被引量：
6
2
作者
宋金云
孙梅
+2 位作者
李嘉妍
王建芳
吴旭平
《临床肝胆病杂志》
CAS
2016年第3期609-612,共4页
Gilbert综合征属于先天性非溶血性黄疸,是一种胆红素代谢障碍性疾病。胆红素-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)缺乏或活性降低是Gilbert综合征发病的重要原因。UGT1A1是UGT的同工酶,也是肝脏结合胆红素的关键酶。UGT1A1基因突变,导致UG...
Gilbert综合征属于先天性非溶血性黄疸,是一种胆红素代谢障碍性疾病。胆红素-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)缺乏或活性降低是Gilbert综合征发病的重要原因。UGT1A1是UGT的同工酶,也是肝脏结合胆红素的关键酶。UGT1A1基因突变,导致UGT结构异常,从而导致胆红素结合功能减弱或丧失。介绍了UGT1A1及其基因多态性在Gilbert综合征发病机制及诊断价值等方面的进展。
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关键词
吉尔伯特病
尿苷二磷酸葡糖醛酸
葡糖
醛
酸
基转移酶
多态现象
遗传
综述
在线阅读
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职称材料
P364L突变降低UGT1A1酶对非结合胆红素的催化活性
被引量：
1
3
作者
唐怡
邓国宏
+3 位作者
李露锋
郭艳
吴全新
毛青
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期1017-1021,共5页
目的研究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶1A1的P364L突变型(c.1091 C>T)对催化非结合胆红素葡糖醛酸化的影响。方法构建含有UGT1A1编码序列的野生型和P364L突变型质粒,转染HEK293细胞,表达野生型与突变型蛋白;Western blot验证野生型和...
目的研究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶1A1的P364L突变型(c.1091 C>T)对催化非结合胆红素葡糖醛酸化的影响。方法构建含有UGT1A1编码序列的野生型和P364L突变型质粒,转染HEK293细胞,表达野生型与突变型蛋白;Western blot验证野生型和P364L突变型蛋白表达情况;超声裂解细胞提取表达蛋白;设计两组反应,野生型为对照组,P364L突变型为实验组,分别催化非结合胆红素反应,HPLC定量检测两组中非结合胆红素浓度变化情况。结果对照组中非结合胆红素的浓度随着时间的延长呈逐渐下降的趋势,而结合胆红素的浓度随时间延长逐渐升高;实验组中非结合胆红素浓度下降程度远小于对照组,未见明显的结合胆红素峰值;反应30 min时计算酶的活性P364L突变型为野生型的14.2%。结论突变酶UGT1A1-P364L催化非结合胆红素能力较野生型明显降低。
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关键词
尿苷二磷酸葡糖醛酸
基转移酶1A1
胆红素
葡糖
醛
酸
化
突变体
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职称材料
题名
重组人尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶2B7三个功能性突变体的构建、表达及活性比较
被引量：
5
1
作者
袁玲敏
陈静
曾苏
机构
浙江大学药学院药物分析与药物代谢研究室
出处
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期274-283,共10页
基金
国家自然科学基金项目(30701038)
罗氏研发(中国)基础科研基金项目(RDC2006006)~~
文摘
目的构建人尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶(UGT)2B7重组酶的3个功能性突变体UGT2B7*71S(A71S,211G>T),UGT2B7*2(H268Y,802C>T)和UGT2B7*5(D398N,1192G>A),以进一步研究该酶野生型和其突变体在对底物作用过程中的功能差异。方法应用细菌/杆状病毒系统,将构建的pFastBac-UGT2B7*71S,pFastBac-UGT2B7*2和pFastBac-UGT2B7*5重组质粒转化E.coli DH10Bac大肠杆菌,通过转座作用获得各自的重组粘粒(bac-mid),然后将其转染草地夜蛾(Sf)9细胞后,产生重组杆状病毒。这些病毒再感染Sf9细胞,即可获得野生型UGT2B7*1及其突变体的重组酶。野生型及突变体酶的活性以7-羟基-4-三氟甲基香豆素(7-HFC)为底物,用荧光法测定并分析比较。结果利用杆状病毒/昆虫细胞系统,成功地构建人UGT2B7重组酶的3个功能性突变体。UGT2B7*1对7-HFC的Km值为(0.331±0.018)mmol·L-1,Vmax值为(2.14±0.04)μmol·min-1·g-1蛋白;UGT2B7*71S对7-HFC的Km值为(0.260±0.026)mmol·L-1,Vmax值为(1.36±0.05)μmol·min-1·g-1蛋白;UGT2B7*2对7-HFC的Km值为(0.53±0.06)mmol·L-1,Vmax值为(9.5±0.5)μmol·min-1·g-1蛋白;UGT2B7*5对7-HFC的Km值为(0.59±0.05)mmol·L-1,Vmax值为(7.52±0.28)μmol·min-1·g-1蛋白。结论应用细菌/杆状病毒系统,成功构建了UGT2B7的3个功能性突变体,这些突变体可进一步用于对其他底物的代谢活性比较。
关键词
尿苷二磷酸葡糖醛酸
转移酶
突变蛋白质类
Keywords
uridine diphosphate glucuronicacid transferase
mutant proteins
分类号
R963 [医药卫生—微生物与生化药学]
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职称材料
题名
胆红素-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶A1基因多态性在Gilbert综合征发病机制中的作用
被引量：
6
2
作者
宋金云
孙梅
李嘉妍
王建芳
吴旭平
机构
东南大学附属第二医院临床科研中心
出处
《临床肝胆病杂志》
CAS
2016年第3期609-612,共4页
文摘
Gilbert综合征属于先天性非溶血性黄疸,是一种胆红素代谢障碍性疾病。胆红素-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)缺乏或活性降低是Gilbert综合征发病的重要原因。UGT1A1是UGT的同工酶,也是肝脏结合胆红素的关键酶。UGT1A1基因突变,导致UGT结构异常,从而导致胆红素结合功能减弱或丧失。介绍了UGT1A1及其基因多态性在Gilbert综合征发病机制及诊断价值等方面的进展。
关键词
吉尔伯特病
尿苷二磷酸葡糖醛酸
葡糖
醛
酸
基转移酶
多态现象
遗传
综述
Keywords
Gilbert disease
uridine diphosphate glucuronic acid
glucuronosyltransferase
polymorphism,genetic
review
分类号
R575 [医药卫生—消化系统]
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职称材料
题名
P364L突变降低UGT1A1酶对非结合胆红素的催化活性
被引量：
1
3
作者
唐怡
邓国宏
李露锋
郭艳
吴全新
毛青
机构
第三军医大学西南医院全军感染病研究所、感染病研究重庆市重点实验室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期1017-1021,共5页
文摘
目的研究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶1A1的P364L突变型(c.1091 C>T)对催化非结合胆红素葡糖醛酸化的影响。方法构建含有UGT1A1编码序列的野生型和P364L突变型质粒,转染HEK293细胞,表达野生型与突变型蛋白;Western blot验证野生型和P364L突变型蛋白表达情况;超声裂解细胞提取表达蛋白;设计两组反应,野生型为对照组,P364L突变型为实验组,分别催化非结合胆红素反应,HPLC定量检测两组中非结合胆红素浓度变化情况。结果对照组中非结合胆红素的浓度随着时间的延长呈逐渐下降的趋势,而结合胆红素的浓度随时间延长逐渐升高;实验组中非结合胆红素浓度下降程度远小于对照组,未见明显的结合胆红素峰值;反应30 min时计算酶的活性P364L突变型为野生型的14.2%。结论突变酶UGT1A1-P364L催化非结合胆红素能力较野生型明显降低。
关键词
尿苷二磷酸葡糖醛酸
基转移酶1A1
胆红素
葡糖
醛
酸
化
突变体
Keywords
UDP-glucuronosyltransferasel A1
bilirubin
glucuronidation
mutation
分类号
R322.48 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R345 [医药卫生—基础医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶2B7三个功能性突变体的构建、表达及活性比较
袁玲敏
陈静
曾苏
《中国药理学与毒理学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
胆红素-尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶A1基因多态性在Gilbert综合征发病机制中的作用
宋金云
孙梅
李嘉妍
王建芳
吴旭平
《临床肝胆病杂志》
CAS
2016
6
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职称材料
3
P364L突变降低UGT1A1酶对非结合胆红素的催化活性
唐怡
邓国宏
李露锋
郭艳
吴全新
毛青
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
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