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含尼帕病毒N基因和L基因的假病毒构建及其应用
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作者
崔超杰
张慧
+7 位作者
刘春菊
魏荣
张永强
崔进
戈胜强
李金明
蔡玉梅
王志亮
《中国兽医杂志》
北大核心
2025年第7期56-62,共7页
尼帕病毒(NiV)作为高致死率的人兽共患病病原,受到世界各国广泛关注。为了获得快速灵敏的检测方法和安全稳定的阳性标准品,本试验将NiV N和L基因同时插入假病毒转移质粒PLJM-GFP中,与包装质粒共转染人胚胎肾(HEK293T)细胞,收集并浓缩病...
尼帕病毒(NiV)作为高致死率的人兽共患病病原,受到世界各国广泛关注。为了获得快速灵敏的检测方法和安全稳定的阳性标准品,本试验将NiV N和L基因同时插入假病毒转移质粒PLJM-GFP中,与包装质粒共转染人胚胎肾(HEK293T)细胞,收集并浓缩病毒液,测定转染后48和72 h收集的假病毒滴度,于透射电子显微镜下观察假病毒形态,并进行PCR扩增和测序鉴定。以世界动物卫生组织推荐的NiV检测引物对包装的假病毒进行验证,应用实时荧光定量PCR(q PCR)技术对不同标准和文献中的4对NiV检测引物进行特异性和敏感性分析,并对构建的NiV假病毒进行均一性试验、短期稳定性试验和抗RNase A降解试验。结果显示,转染后48和72 h收集的假病毒滴度分别可达2.72×10^(5)和3.47×10^(4)IU/m L,电子显微镜下假病毒呈圆形、有囊膜的颗粒。测序结果显示,NiV假病毒核酸中成功插入N和L基因片段;4对NiV检测引物特异性良好,均可用于NiV检测,其中,在研国家标准检测方法中引物的灵敏性更高,病毒的检测下限为10^(0)IU/m L;NiV假病毒均一性良好,可在4℃条件下稳定保存至少7 d,且能够抵抗一定量的RNase A降解。本试验成功包装含有NiV N基因和L基因的假病毒,并对其进行初步应用和稳定性研究,为尼帕病毒性脑炎的防控提供物质储备。
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关键词
尼帕
病毒
(
niv
)
假
病毒
构建
实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)
敏感性试验
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职称材料
题名
含尼帕病毒N基因和L基因的假病毒构建及其应用
1
作者
崔超杰
张慧
刘春菊
魏荣
张永强
崔进
戈胜强
李金明
蔡玉梅
王志亮
机构
中国动物卫生与流行病学中心
山东农业大学动物医学院山东省人兽共患病重点实验室
青岛市现代生物工程及动物疫病研究重点实验室
农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(南方)
出处
《中国兽医杂志》
北大核心
2025年第7期56-62,共7页
基金
2025年动物疫情监测与防治
“十四五”国家重点研发计划项目(2022YFD1800500)
世界银行“预防、准备与应对新发传染病项目”农业农村部子项目(2205-000000-04-01-465744)。
文摘
尼帕病毒(NiV)作为高致死率的人兽共患病病原,受到世界各国广泛关注。为了获得快速灵敏的检测方法和安全稳定的阳性标准品,本试验将NiV N和L基因同时插入假病毒转移质粒PLJM-GFP中,与包装质粒共转染人胚胎肾(HEK293T)细胞,收集并浓缩病毒液,测定转染后48和72 h收集的假病毒滴度,于透射电子显微镜下观察假病毒形态,并进行PCR扩增和测序鉴定。以世界动物卫生组织推荐的NiV检测引物对包装的假病毒进行验证,应用实时荧光定量PCR(q PCR)技术对不同标准和文献中的4对NiV检测引物进行特异性和敏感性分析,并对构建的NiV假病毒进行均一性试验、短期稳定性试验和抗RNase A降解试验。结果显示,转染后48和72 h收集的假病毒滴度分别可达2.72×10^(5)和3.47×10^(4)IU/m L,电子显微镜下假病毒呈圆形、有囊膜的颗粒。测序结果显示,NiV假病毒核酸中成功插入N和L基因片段;4对NiV检测引物特异性良好,均可用于NiV检测,其中,在研国家标准检测方法中引物的灵敏性更高,病毒的检测下限为10^(0)IU/m L;NiV假病毒均一性良好,可在4℃条件下稳定保存至少7 d,且能够抵抗一定量的RNase A降解。本试验成功包装含有NiV N基因和L基因的假病毒,并对其进行初步应用和稳定性研究,为尼帕病毒性脑炎的防控提供物质储备。
关键词
尼帕
病毒
(
niv
)
假
病毒
构建
实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)
敏感性试验
Keywords
Nipah virus(
niv
)
pseudovirus construction
real-time fluorescence quantitative reverse transcription PCR(qRT-PCR)
sensitivity test
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
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1
含尼帕病毒N基因和L基因的假病毒构建及其应用
崔超杰
张慧
刘春菊
魏荣
张永强
崔进
戈胜强
李金明
蔡玉梅
王志亮
《中国兽医杂志》
北大核心
2025
0
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已选择
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条
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引证文献
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