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尖吻蝮蛇毒PCA对HUVEC活性的影响 被引量:2
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作者 桑金凤 张根葆 +1 位作者 周淑艳 季娜 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期572-576,共5页
目的:观察皖南尖吻蝮蛇毒蛋白C激活剂(PCA)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的超微结构及其合成组织因子(TF)、血管性血友病因子(vWF)和内皮素-1(ET-1)水平的影响,并探讨PCA的抗血栓机制。方法:实验分为对照组(DMEM液)、脂多糖(LPS)组(LPS... 目的:观察皖南尖吻蝮蛇毒蛋白C激活剂(PCA)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的超微结构及其合成组织因子(TF)、血管性血友病因子(vWF)和内皮素-1(ET-1)水平的影响,并探讨PCA的抗血栓机制。方法:实验分为对照组(DMEM液)、脂多糖(LPS)组(LPS 0.1μg/ml)、PCA组(PCA 1μg/ml)、PCA+LPS组(1μg/ml PCA+0.1μg/ml LPS),加药作用12 h后在透射电镜下观察各组细胞的内质网、线粒体形态及自噬体数量变化;ELISA检测各组培养上清中TF、vWF、ET-1含量;RT-PCR检测细胞内vWF、ET-1基因表达水平;Western blot检测细胞内TF蛋白表达水平。结果:LPS组的HUVEC与对照组相比,细胞膜不光滑、出现凸起样改变,并发生线粒体、内质网肿胀,自噬体数量增多等超微结构的改变,PCA组HUVEC的超微结构与对照组比无明显变化;与LPS组相比,PCA+LPS组的HUVEC线粒体、内质网肿胀消失,自噬体数量明显减少。与对照组相比,LPS组细胞培养上清中TF、vWF、ET-1的含量及细胞内vWF、ET-1基因、TF蛋白的表达水平显著增高(P<0.05);PCA组细胞培养上清及细胞内3种物质的表达量较对照组无显著变化(P>0.05);与LPS组相比,LPS+PCA组HUVEC培养上清及细胞内TF、vWF、ET-1的表达水平显著降低(P<0.05)。结论:1μg/ml的PCA可减轻LPS引起的HUVEC超微结构的改变,也可抑制LPS对HUVEC的TF、vWF、ET-1分泌量的增加作用。 展开更多
关键词 尖吻蝮蛇毒蛋白c激活剂 脐静脉血管内皮细胞 组织因子 血管性血友病因子 内皮素-1
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皖南尖吻蝮蛇中11个C型凝集素类似蛋白亚单位的cDNA克隆和序列分析 被引量:3
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作者 余红秀 向开军 +1 位作者 汪玉洁 刘兢 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第1期64-70,共7页
通过放射性标记DNA探针筛选和PCR克隆筛选 ,从皖南尖吻蝮蛇毒腺的λgt11cDNA文库中 ,克隆得到了 11个编码C型凝集素类似蛋白亚单位的cDNA .其中 2个克隆分别含有编码an tithrombinA的A链和B链的序列 .另外 6个则含有编码如下肽链的序列 ... 通过放射性标记DNA探针筛选和PCR克隆筛选 ,从皖南尖吻蝮蛇毒腺的λgt11cDNA文库中 ,克隆得到了 11个编码C型凝集素类似蛋白亚单位的cDNA .其中 2个克隆分别含有编码an tithrombinA的A链和B链的序列 .另外 6个则含有编码如下肽链的序列 :antithrombinC的A链和B链、agkisacutacin的A链和B链、抗凝血因素的A链和B链 ,其它 3个克隆含有编码未知蛋白质的序列 .有趣的是 ,在编码AntithrombinC的序列中 ,每条链中除了含有 7个与所有C型凝集素类似蛋白位置一致的Cys外 ,在B链上还含有一个额外的Cys3;2条B链上的Cys3可能形成一对新的链间二硫键 .氨基酸序列的比较及进化分析显示 ,C型凝集素类似蛋白B链起源于一个单系类群 ,A链至少有 展开更多
关键词 蝮蛇 c型凝集素类似蛋白 克隆 序列分析
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尖吻蝮蛇毒中一种具有抗补体活性金属蛋白酶的分离纯化及部分性质鉴定 被引量:2
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作者 汪晗 孙黔云 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1036-1043,共8页
通过离子交换和凝胶过滤层析从湖南产尖吻蝮蛇毒中分离纯化出1个抗补体活性蛋白AACI-I.还原与非还原SDS-PAGE测得其表观分子质量分别为26 kD和22 kD,等电聚焦电泳显示其等电点为pH 8.9.它能抑制补体经典途径和替代途径的溶血,且该作用... 通过离子交换和凝胶过滤层析从湖南产尖吻蝮蛇毒中分离纯化出1个抗补体活性蛋白AACI-I.还原与非还原SDS-PAGE测得其表观分子质量分别为26 kD和22 kD,等电聚焦电泳显示其等电点为pH 8.9.它能抑制补体经典途径和替代途径的溶血,且该作用具有量效和时效性.AACI-I可依次水解纤维蛋白原的Aα、Bβ、γ链,此活性能被EDTA、EGTA和1,10-phenanthroline完全抑制,不受PMSF、SBTI作用影响.同时,该蛋白无精氨酸酯酶活性,提示AACI-I是金属蛋白酶.另外,AACI-I具有azocasein水解活性和水肿活性,当0.01μg/g AACI-I注射小鼠足趾,其诱导肿胀率约为(14.06±6.78)%,而小鼠皮下注射2.6μg/g AACI-Ⅰ后没有发现其有出血毒活性. 展开更多
关键词 蝮蛇 抗补体活性 金属蛋白 纤维蛋白原水解活性
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尖吻蝮蛇蛇毒出血毒素DaHT-3的纯化与性质 被引量:4
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作者 叶文娟 冉永禄 +3 位作者 赖仞 龚光林 俞帆 曾昭权 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第5期762-767,共6页
被尖吻蝮蛇咬伤会引起严重的出血,对蛇毒出血毒素的研究有利于治疗蛇伤出血药物的筛选.通过SephadexG-75,DEAE-SephadexA-50,SephadexG-200和两次PBE聚焦层析,从尖吻蝮蛇(Dienagkistrodonacutus)蛇毒中纯化到一个分子量为56000的出血毒... 被尖吻蝮蛇咬伤会引起严重的出血,对蛇毒出血毒素的研究有利于治疗蛇伤出血药物的筛选.通过SephadexG-75,DEAE-SephadexA-50,SephadexG-200和两次PBE聚焦层析,从尖吻蝮蛇(Dienagkistrodonacutus)蛇毒中纯化到一个分子量为56000的出血毒素(DaHT-3),经氨基酸组成测定计算,由487个氨基酸残基组成.此成分在SDS-PAGE上显示出一条均一的蛋白染色带,用等电聚焦电泳测定,其pI为5.50.该出血成分的最小出血剂量是2.6μg,具有蛋白水解酶活力,其活力为3.68,但没有精氨酸酯酶和磷脂酶A2活力.用红外光谱仪研究DaHT-3在溶液中酰胺I带的吸收谱,该毒素含有31.8%的α螺旋、56.1%的β折叠和12.1%的转角;当加入EDTA螯合剂去除金属离子后,它们的α螺旋、β折叠、转角和无规卷曲分别变为11%、26.4%、46.2%和16.5%,而出血活力和蛋白水解酶活力均丧失。 展开更多
关键词 蝮蛇 出血 理化性质 纯化 金属蛋白
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抗蛇毒IgY对尖吻蝮(Deinagkistrodon acutus)蛇毒主要活性的中和作用研究 被引量:1
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作者 刘锦花 李恒 +4 位作者 和七一 张迎锋 陈典成 罗聪 余晓东 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期58-62,共5页
目的评价抗尖吻蝮蛇(D.acutus)毒Ig Y对该蛇毒主要活性的中和能力。方法通过不同浓度Ig Y与该蛇毒混合孵育后,再用生化方法检测该蛇毒的多种活性。结果体外实验表明,Ig Y能明显地中和该蛇毒的PLA_2、5'-核苷酸酶、透明质酸酶、金属... 目的评价抗尖吻蝮蛇(D.acutus)毒Ig Y对该蛇毒主要活性的中和能力。方法通过不同浓度Ig Y与该蛇毒混合孵育后,再用生化方法检测该蛇毒的多种活性。结果体外实验表明,Ig Y能明显地中和该蛇毒的PLA_2、5'-核苷酸酶、透明质酸酶、金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶(纤维蛋白酶)等酶活性;小鼠实验表明,Ig Y对小鼠的半有效保护剂量(ED_(50))为1 131.09μg。结论该抗尖吻蝮蛇毒Ig Y具有很好的中和活性,且Ig Y无明显的毒性。 展开更多
关键词 蝮蛇IgY PLA2 5'-核苷酸酶 透明质酸酶 丝氨酸蛋白酶(纤维蛋白酶) 金属蛋白 ED50 中和作用
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PCA通过NF-κB和AP-1信号通路影响HUVECs表达TF
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作者 靳文 张根葆 +1 位作者 高恬媛 桑金凤 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期904-908,共5页
目的:探讨核因子κB(NF-κB)和活化蛋白1(AP-1)信号通路在尖吻蝮蛇毒蛋白C激活剂(PCA)抑制脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)组织因子(TF)表达中的作用。方法:MTT法检测HUVECs活力,免疫组化法检测肿瘤坏死因子受体相关因子6(TR... 目的:探讨核因子κB(NF-κB)和活化蛋白1(AP-1)信号通路在尖吻蝮蛇毒蛋白C激活剂(PCA)抑制脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)组织因子(TF)表达中的作用。方法:MTT法检测HUVECs活力,免疫组化法检测肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)蛋白在细胞中的分布,Western blot法检测细胞内NF-κB p65、TF、c-Fos和c-Jun蛋白的表达,qPCR法测定TF mRNA在HUVECs的表达,ELISA法检测细胞培养上清中TF的含量。结果:与对照组比较,LPS组的细胞活力明显下降(P<0.01),胞质内出现明显的黄染颗粒,胞质染色加深,TRAF6平均吸光度值升高(P<0.01),NF-κB p65、c-Jun和c-Fos的蛋白表达均明显增加(P<0.01),TF mRNA和蛋白表达亦明显增加(P<0.01);PCA+LPS组的细胞活力较LPS组升高(P<0.05),细胞形态正常,胞质黄染颗粒不明显,TRAF6平均吸光度明显小于LPS组(P<0.01),NF-κB p65、c-Fos和c-Jun 3种蛋白表达则明显降低(P<0.01),TF mRNA及蛋白亦表达减少(P<0.01)。结论:PCA可明显减轻LPS引起的HUVECs损伤,其机制可能是通过降低TRAF6、NF-κB及AP-1核因子的活化进而减少组织因子的释放来实现的。 展开更多
关键词 腹蛇蛋白c激活剂 人脐静脉血管内皮细胞 组织因子 核因子ΚB 活化蛋白1
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