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小鼠IgGFc受体(moFcγRⅡ)稳定表达细胞系的建立及鉴定
1
作者 苗现伟 席俊 +6 位作者 刘玺 张改平 邓瑞广 李清州 张利娜 游雷鸣 刘运超 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第2期133-135,共3页
为建立小鼠IgGFc受体(moFcγRⅡ)稳定表达的哺乳动物细胞系,PCR克隆小鼠moFcγRⅡ片段,构建真核表达载体pcDNAmoFcγRⅡ。转染COS-7细胞后通过G418抗性筛选和连续克隆,获得了在COS-7细胞表面稳定表达FcγRⅡ的真核细胞系。玫瑰花环试验... 为建立小鼠IgGFc受体(moFcγRⅡ)稳定表达的哺乳动物细胞系,PCR克隆小鼠moFcγRⅡ片段,构建真核表达载体pcDNAmoFcγRⅡ。转染COS-7细胞后通过G418抗性筛选和连续克隆,获得了在COS-7细胞表面稳定表达FcγRⅡ的真核细胞系。玫瑰花环试验结果显示其阳性率在90%以上。 展开更多
关键词 小鼠igg受体(fcγrⅱ) 细胞系 玫瑰花环 稳定转染
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猪IgGⅡB类Fc受体基因剪接异构体的克隆及序列分析 被引量：2
2
作者 刘玉松 夏平安 +6 位作者 刘肖萍 张志远 刘明莉 王中明 段二珍 卢晓艳 崔保安 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期542-548,552,共8页
根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体(swFcγRⅡB)cDNA基因序列,利用Prim er软件设计合成了1对特异性引物,应用RT-PCR技术,从猪外周血白细胞cDNA中扩增swFcγRⅡB基因,将扩增的基因片段插入pTG19-T载体进行测序,利用DNAStar Protean软件对基... 根据GenBank中猪IgGⅡB类Fc受体(swFcγRⅡB)cDNA基因序列,利用Prim er软件设计合成了1对特异性引物,应用RT-PCR技术,从猪外周血白细胞cDNA中扩增swFcγRⅡB基因,将扩增的基因片段插入pTG19-T载体进行测序,利用DNAStar Protean软件对基因的氨基酸序列潜在抗原表位进行预测.结果表明,克隆的swFcγRⅡB基因序列长度为951 bp,编码316个氨基酸,与已发表序列的核苷酸与氨基酸序列同源性分别为99.3%和98.3%,其胞内区多出19个氨基酸的插入,其氨基酸序列至少存在3个潜在优势抗原表位的区域.swFcγRⅡB基因存在亚类,所克隆基因是swFcγRⅡB基因的1种RNA剪接异构体,预示了swFcγRⅡB基因至少存在2种RNA剪接异构体. 展开更多
关键词 猪 fcγrⅱB 抑制性受体 序列分析 抗原表位
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牛IgG Fc受体Ⅱ胞外区在大肠杆菌中的表达及特性鉴定 被引量：1
3
作者 张改平 王丽 +6 位作者 李青梅 张华 乔松林 乔宏星 席俊 王选年 郭军庆 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2005年第7期86-89,共4页
从牛肺巨噬细胞cDNA文库中扩增编码牛IgGFc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)胞外区基因,PCR产物经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,插入原核表达载体pET28a的T7启动子下游,构建重组表达质粒pETboRⅡ。以pETboRⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS-PAGE... 从牛肺巨噬细胞cDNA文库中扩增编码牛IgGFc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)胞外区基因,PCR产物经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切后,插入原核表达载体pET28a的T7启动子下游,构建重组表达质粒pETboRⅡ。以pETboRⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。SDS-PAGE分析诱导表达菌体可见分子量约为27kDa的蛋白条带,该表达蛋白在细胞质中主要以不溶性包涵体形式存在。Westernblotting和Dotblot检测表明,boFcγRⅡ重组蛋白在变性条件下可与牛IgG特异结合,提示牛FcγRⅡ胞外区可能存在IgG线性结合表位。 展开更多
关键词 牛igg fc受体ⅱ 胞外区基因 原核表达
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猪IgG Ⅱ类Fc受体基因真核表达重组质粒的构建及表达 被引量：1
4
作者 张玉杨 张改平 +1 位作者 乔松林 郭成留 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期52-55,共4页
利用本研究小组克隆的猪IgG Ⅱ类Fc受体cDNA(swFcγRⅡ)基因序列(DQ026064)设计引物,应用RT-PCR技术,从猪外周血白细胞cDNA中扩增了完整的960 bpswFcγRIIORF序列,利用基因重组技术将swFcγRIIORF基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3,经PCR... 利用本研究小组克隆的猪IgG Ⅱ类Fc受体cDNA(swFcγRⅡ)基因序列(DQ026064)设计引物,应用RT-PCR技术,从猪外周血白细胞cDNA中扩增了完整的960 bpswFcγRIIORF序列,利用基因重组技术将swFcγRIIORF基因亚克隆到真核表达载体pcDNA3,经PCR及双酶切鉴定:扩增出901 bp的PCR产物;KpnI/EcoR I双酶切,切出5 376和901bp DNA片段,表明重组质粒pcDNA/swFcγRⅡ构建成功。然后脂质体法转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验鉴定了swFcγRII配体亲和特性。 展开更多
关键词 猪 igg ⅱ类fc受体 表达载体 玫瑰花环试验
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猪Fc_γRⅡb亚型(Fc_γRⅡb1)基因的分子克隆及鉴定
5
作者 Xia P A 晋大鹏 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第11期124-124,共1页
IgG Fc受体(FcγRs)的一个主要效应机制是可结合IgG免疫复合物发生反应。目前已鉴定出的FcγRs有4类:高亲和力的FcγRⅠ(CD64),中等亲和力的FcγRⅠ、FcγRⅡ(CD32),以及低亲和力的FcγRⅢ(CD16)。人FcγRⅡ主要有FcγRⅡa、FcγRⅡb、F... IgG Fc受体(FcγRs)的一个主要效应机制是可结合IgG免疫复合物发生反应。目前已鉴定出的FcγRs有4类:高亲和力的FcγRⅠ(CD64),中等亲和力的FcγRⅠ、FcγRⅡ(CD32),以及低亲和力的FcγRⅢ(CD16)。人FcγRⅡ主要有FcγRⅡa、FcγRⅡb、FcγRⅡc 3个亚型;小鼠有1个亚型FcγRⅡb;牛有2个亚型FcγRⅡb、FcγRⅡc。人、小鼠、牛中FcγRⅡb又包括2个亚型:FcγRⅡb1(b1)和FcγRⅡb2(b2),但有关猪FcγRⅡb亚型的研究鲜有报道。本研究对猪FcγRⅡb亚型(FcγRⅡb1)进行了分子克隆、测序及鉴定,并运用RT-PCR从猪外周血白细胞RNA中扩增出猪FcγRⅡb1cDNA序列。结果发现,猪FcγRⅡb1cDNA序列包含一个951bp的开放阅读框(ORF),可编码316个氨基酸跨膜糖蛋白,包括两个免疫球蛋白(Ig)样胞外结构域,一个跨膜区域,一个带有免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)的胞质尾区。猪FcγRⅡb1cDNA序列与DQ026064同源性为98.3%,其在胞质尾区有一19个氨基酸的插入框。荧光免疫试验结果发现,猪FcγRⅡb1cDNA序列编码的糖蛋白可稳定转染COS-7细胞,结合并激活IgG免疫复合物。猪FcγRⅡb1序列的鉴定为进一步了解猪免疫反应中IgG-FcγR相互作用的分子基础提供参考。 展开更多
关键词 fcγ受体 fcγrⅱb 亚型 猪
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上调巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能 被引量：4
6
作者 郑修军 王琦 +1 位作者 曹秀琴 杨志伟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1022-1026,共5页
目的构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用。方法以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表... 目的构建大鼠FcγRⅡB慢病毒诱导表达载体,观察其对巨噬细胞的作用。方法以大鼠肝脏mRNA为模板逆转录获得FcγRⅡB基因片段,并将其克隆入慢病毒表达质粒四环素(Tet)顺式应答元件(TRE),构建TRE-FcγRⅡB慢病毒表达重组质粒。将慢病毒表达重组质粒TRE-FcγRⅡB、慢病毒调节质粒Tet分别与慢病毒包装质粒共转染HEK293T细胞,分别包装表达病毒和调节病毒,测定表达病毒和可诱导病毒感染滴度。表达病毒和调节病毒共感染巨噬细胞,经梯度浓度强力霉素(DOX)诱导,免疫荧光技术检测巨噬细胞FcγRⅡB表达,实时定量PCR检测FcγRⅡB mRNA表达,Western blot法检测FcγRⅡB蛋白表达。经不同浓度DOX诱导后的腹腔巨噬细胞分别检测吞噬和趋化功能。结果重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确。表达和调节病毒滴度均达到106转导单位/m L。巨噬细胞被病毒感染后经DOX诱导表达FcγRⅡB,免疫荧光染色结果显示,FcγRⅡB能够在巨噬细胞表达;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示FcγRⅡB表达水平与DOX浓度呈正相关。巨噬细胞的吞噬和趋化功能与FcγRⅡB表达呈负相关。结论调节巨噬细胞FcγRⅡB的表达可抑制其吞噬和趋化功能。 展开更多
关键词 fcγrⅱB 慢病毒诱导表达载体 抑制性受体 巨噬细胞 吞噬和趋化
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FcγRⅡB在重症肌无力中的表达及其与抗AChR抗体的关系 被引量：1
7
作者 翦爱 田晓琳 +5 位作者 胡波 黄慧芬 欧阳松 尹炜凡 李静 杨欢 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期492-494,共3页
目的探讨免疫球蛋白IgG的Fc段受体ⅡB(FcγRⅡB)在重症肌无力(myasthenia gravis,MG)发病中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链技术和流式细胞术,检测26名血清乙酰胆碱受体(AChR)抗体阳性MG患者和26名正常对照组外周血B淋巴细胞中FcγRⅡB... 目的探讨免疫球蛋白IgG的Fc段受体ⅡB(FcγRⅡB)在重症肌无力(myasthenia gravis,MG)发病中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链技术和流式细胞术,检测26名血清乙酰胆碱受体(AChR)抗体阳性MG患者和26名正常对照组外周血B淋巴细胞中FcγRⅡBmRNA和FcγRⅡB蛋白的表达水平,ELISA检测血清AChR抗体水平,分析三者之间的关系。结果 MG组外周血B细胞中FcγRⅡBmRNA的表达明显低于正常对照组(P<0.01),但在眼肌型患者和全身型患者的表达无统计学差异(P>0.05)。MG患者外周血B细胞上FcγRⅡB的表达低于对照组(P<0.05)。IgG型AChR抗体水平与B细胞中FcγRⅡB1mRNA和FcγRⅡB2mRNA表达水平呈负相关(P<0.01),与FcγRⅡB的表达亦为负相关(P<0.05)。结论 MG中B细胞上FcγRⅡB在转录和蛋白水平表达均降低,负调控作用减弱,造成B细胞过度活化,产生大量抗AChR自身抗体,可能是MG发病的一个重要环节。 展开更多
关键词 fcγrⅱB 重症肌无力 B淋巴细胞 乙酰胆碱受体抗体
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中和抗体阻断FcγR Ⅰ降低脂多糖诱导的大鼠PC12细胞凋亡 被引量：2
8
作者 陈艳杰 梁映霞 张岩 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期746-750,共5页
目的探讨IgG Fc受体Ⅰ(FcγRⅠ)在脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡中的作用。方法将PC12细胞接种于培养板中,用(50、125、250、500、1000)μg/mL LPS处理24 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,选取合适的LPS剂量。... 目的探讨IgG Fc受体Ⅰ(FcγRⅠ)在脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡中的作用。方法将PC12细胞接种于培养板中,用(50、125、250、500、1000)μg/mL LPS处理24 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,选取合适的LPS剂量。待细胞处于对数生长期,采用随机数字表法分为空白对照组:不进行任何处理,继续培养24 h;LPS组:培养液中加入500μg/mL LPS,孵育24 h;LPS联合FcγRⅠ中和抗体组:培养液中加入500μg/mL LPS和0.2μg/mL FcγRⅠ中和抗体,孵育24 h。处理结束后,实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组FcγRⅠmRNA和蛋白含量,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)染色结合流式细胞术检测细胞凋亡,采用免疫组织化学染色法检测各组细胞caspase-3、Bcl-2和BAX的蛋白水平。结果随着LPS剂量的增加,PC12细胞的活力逐渐下降;与对照组相比,LPS处理组FcγRⅠmRNA和蛋白水平增加,caspase-3、Bcl-2和BAX蛋白水平增加,细胞凋亡率增加;与LPS组相比,LPS联合FcγRⅠ中和抗体组FcγRⅠmRNA和蛋白水平降低,caspase-3、BAX蛋白水平显著降低,细胞凋亡率降低,Bcl-2蛋白水平增加。结论FcγRⅠ参与LPS诱导的PC12细胞凋亡。 展开更多
关键词 igg fc受体Ⅰ(fcγr Ⅰ) 脂多糖 PC12细胞 细胞凋亡
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鸡Igλ轻链绿色荧光蛋白融合分子在COS7细胞膜的表达
9
作者 张红 宋海涛 +5 位作者 张改平 邢广旭 赵东 杨继飞 柴书军 郝青梅 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2006年第11期102-104,109,共4页
将牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区序列嵌合入鸡Igλ轻链基因中,并将鸡Igλ轻链信号肽与Pegfp-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体Pegfp-C1-SP。鸡Igλ轻链基因嵌合分子定向克隆入载体的多克隆位点,构建了带有信号肽的鸡I... 将牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区序列嵌合入鸡Igλ轻链基因中,并将鸡Igλ轻链信号肽与Pegfp-C1载体的绿色荧光蛋白N端融合产生带有信号肽的中间载体Pegfp-C1-SP。鸡Igλ轻链基因嵌合分子定向克隆入载体的多克隆位点,构建了带有信号肽的鸡Igλ轻链/GFP融合蛋白真核表达载体。转染COS7细胞后,荧光显微镜观察,重组鸡Igλ轻链/GFP蛋白在COS7细胞膜及膜周围有明显表达,而载体pEGFP-C1转染的COS7细胞GFP则分布在细胞及细胞核。结果表明,牛IgG Fc受体γRⅡ的跨膜区能介导融合蛋白在细胞膜上的表达。 展开更多
关键词 鸡Igγ轻链 牛igg fc受体γr ⅱ跨膜区 COS7细胞 GFP融合蛋白
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