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高糖促进小鼠肾小管上皮细胞DNMT3B表达并通过激活β-catenin信号通路促进纤维化相关蛋白分泌
被引量：
2
1
作者
屈玲玲
邹琴
+5 位作者
李清璇
李晓颖
刘忠强
周宇霞
郭兵
石明隽
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第7期608-615,共8页
目的观察高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)对分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)表达的影响及对Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用。方法将体外培养的小鼠RTEC分为正常糖(NG)组和高糖(HG)组。RTEC分别转...
目的观察高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)对分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)表达的影响及对Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用。方法将体外培养的小鼠RTEC分为正常糖(NG)组和高糖(HG)组。RTEC分别转染DNMT3B短发夹RNA(sh-DNMT3B)及DNMT3B过表达(DNMT3B-OE)质粒后,反转录PCR检测RTEC的DNMT3B、 SFRP1、Ⅳ型胶原蛋白(Col4)、纤连蛋白(FN)mRNA表达,Western blot法检测DNMT3B、 SFRP1、糖原合成酶3β(GSK3β)、磷酸化的GSK3β(p-GSK3β)、β-catenin、 Col4、 FN的蛋白表达。免疫荧光细胞化学染色检测DNMT3B和SFRP1在RTEC的表达和定位。结果与NG组相比,HG组RTEC中DNMT3B、β-catenin、 p-GSK3β、 Col4、 FN蛋白表达增加,SFRP1表达降低。与空载体组比较,敲低DNMT3B后,HG条件下RTEC的SFRP1 mRNA及蛋白表达均增加,β-catenin、 p-GSK3β、 Col4蛋白表达降低,FN的mRNA和蛋白表达均降低,而β-catenin mRNA表达无明显改变;过表达DNMT3B后,各指标表达情况与上述结果相反。DNMT3B及SFRP1在RTEC的细胞核及细胞质中均有表达,与NG组相比,HG组的细胞可见DNMT3B在细胞核内聚集,且与SFRP1的共定位增加。结论 HG刺激增加RTEC的DNMT3B表达,下调SFRP1表达,激活Wnt/β-catenin信号通路促进细胞外基质形成。
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关键词
肾
脏纤维化
小鼠肾小管上皮细胞
(RTEC)
DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)
分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)
Wnt
β联蛋白(β-catenin)
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职称材料
泛素化调节因子2真核表达质粒的构建及其在原代肾小管上皮细胞的表达
2
作者
高磊
赵海焦
+3 位作者
吴金栋
田娅慧
张中文
吴国娟
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2013年第6期37-40,共4页
本试验旨在构建带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP及目的基因泛素化调节因子2(Smurf2)的真核表达载体pEGFP-N3-Smurf2,并转染小鼠肾小管上皮细胞检测其表达情况。用RT-PCR法扩增小鼠肾小管上皮细胞Smurf2的CDS区,构建克隆载体pEASY-Ze...
本试验旨在构建带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP及目的基因泛素化调节因子2(Smurf2)的真核表达载体pEGFP-N3-Smurf2,并转染小鼠肾小管上皮细胞检测其表达情况。用RT-PCR法扩增小鼠肾小管上皮细胞Smurf2的CDS区,构建克隆载体pEASY-Zero-Smurf2和真核表达载体pEGFP-N3-Smurf2,酶切并测序鉴定。运用脂质体转染法将pEGFP-N3-Smurf2真核表达载体转染小鼠肾小管上皮细胞,实时荧光定量PCR、免疫印迹检测Smurf2的表达。PCR结果显示扩增出Smurf2基因片段大小约为2247bp;重组质粒pEGFP-N3-Smurf2的酶切鉴定及测序结果均表明Smurf2基因成功克隆到真核表达载体中;脂质体转染后检测结果显示,转染pEGFP-N3-Smurf2表达载体的肾小管上皮细胞中Smurf2基因mR-NA表达量升高且EGFP-Smurf2重组蛋白有表达。本试验成功构建了含有增强型绿色荧光蛋白标记的Smurf2真核表达质粒,转染后能明显提高细胞内Smurf2的表达,为研究Smurf2基因的功能奠定了基础。
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关键词
泛素化调节因子2
pEGFP-N3
小鼠肾小管上皮细胞
质粒
表达
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职称材料
题名
高糖促进小鼠肾小管上皮细胞DNMT3B表达并通过激活β-catenin信号通路促进纤维化相关蛋白分泌
被引量：
2
1
作者
屈玲玲
邹琴
李清璇
李晓颖
刘忠强
周宇霞
郭兵
石明隽
机构
贵州医科大学病理学与病理生理学教研室
贵州省贵阳市第一人民医院肾内科
贵州省常见慢性疾病发病机制及药物研究重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第7期608-615,共8页
基金
贵州省科技计划项目(黔科合LH字[2016]7353号,黔科合基础[2016]1117号)
贵阳市科技局基金项目(筑科合同[2017]30-23号)。
文摘
目的观察高糖条件下小鼠肾小管上皮细胞(RTEC)中DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)对分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)表达的影响及对Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号通路的调控作用。方法将体外培养的小鼠RTEC分为正常糖(NG)组和高糖(HG)组。RTEC分别转染DNMT3B短发夹RNA(sh-DNMT3B)及DNMT3B过表达(DNMT3B-OE)质粒后,反转录PCR检测RTEC的DNMT3B、 SFRP1、Ⅳ型胶原蛋白(Col4)、纤连蛋白(FN)mRNA表达,Western blot法检测DNMT3B、 SFRP1、糖原合成酶3β(GSK3β)、磷酸化的GSK3β(p-GSK3β)、β-catenin、 Col4、 FN的蛋白表达。免疫荧光细胞化学染色检测DNMT3B和SFRP1在RTEC的表达和定位。结果与NG组相比,HG组RTEC中DNMT3B、β-catenin、 p-GSK3β、 Col4、 FN蛋白表达增加,SFRP1表达降低。与空载体组比较,敲低DNMT3B后,HG条件下RTEC的SFRP1 mRNA及蛋白表达均增加,β-catenin、 p-GSK3β、 Col4蛋白表达降低,FN的mRNA和蛋白表达均降低,而β-catenin mRNA表达无明显改变;过表达DNMT3B后,各指标表达情况与上述结果相反。DNMT3B及SFRP1在RTEC的细胞核及细胞质中均有表达,与NG组相比,HG组的细胞可见DNMT3B在细胞核内聚集,且与SFRP1的共定位增加。结论 HG刺激增加RTEC的DNMT3B表达,下调SFRP1表达,激活Wnt/β-catenin信号通路促进细胞外基质形成。
关键词
肾
脏纤维化
小鼠肾小管上皮细胞
(RTEC)
DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)
分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)
Wnt
β联蛋白(β-catenin)
Keywords
renal fibrosis
renal tubular epithelial cells(RTECs)
DNA methyltransferase 3B(DNMT3B)
secreted frizzled-related protein 1(SFRP1)
Wnt
β-catenin
分类号
R692 [医药卫生—泌尿科学]
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
泛素化调节因子2真核表达质粒的构建及其在原代肾小管上皮细胞的表达
2
作者
高磊
赵海焦
吴金栋
田娅慧
张中文
吴国娟
机构
北京农学院动物科学技术学院
出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2013年第6期37-40,共4页
基金
国家自然科学基金(31172362
30972215)
+1 种基金
北京市自然科学基金(5102014)
北京市人才强教深化计划(教学创新人才)
文摘
本试验旨在构建带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP及目的基因泛素化调节因子2(Smurf2)的真核表达载体pEGFP-N3-Smurf2,并转染小鼠肾小管上皮细胞检测其表达情况。用RT-PCR法扩增小鼠肾小管上皮细胞Smurf2的CDS区,构建克隆载体pEASY-Zero-Smurf2和真核表达载体pEGFP-N3-Smurf2,酶切并测序鉴定。运用脂质体转染法将pEGFP-N3-Smurf2真核表达载体转染小鼠肾小管上皮细胞,实时荧光定量PCR、免疫印迹检测Smurf2的表达。PCR结果显示扩增出Smurf2基因片段大小约为2247bp;重组质粒pEGFP-N3-Smurf2的酶切鉴定及测序结果均表明Smurf2基因成功克隆到真核表达载体中;脂质体转染后检测结果显示,转染pEGFP-N3-Smurf2表达载体的肾小管上皮细胞中Smurf2基因mR-NA表达量升高且EGFP-Smurf2重组蛋白有表达。本试验成功构建了含有增强型绿色荧光蛋白标记的Smurf2真核表达质粒,转染后能明显提高细胞内Smurf2的表达,为研究Smurf2基因的功能奠定了基础。
关键词
泛素化调节因子2
pEGFP-N3
小鼠肾小管上皮细胞
质粒
表达
Keywords
Smad ubiquitination regulatory factor 2
pEGFP-N3
renal tubular epithelial cell
plasmid^expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
高糖促进小鼠肾小管上皮细胞DNMT3B表达并通过激活β-catenin信号通路促进纤维化相关蛋白分泌
屈玲玲
邹琴
李清璇
李晓颖
刘忠强
周宇霞
郭兵
石明隽
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
泛素化调节因子2真核表达质粒的构建及其在原代肾小管上皮细胞的表达
高磊
赵海焦
吴金栋
田娅慧
张中文
吴国娟
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2013
0
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职称材料
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