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小鼠细小病毒NS1蛋白的原核表达、多克隆抗体制备及其免疫原性评价
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作者 张旭亮 陈莉 +4 位作者 赵志刚 马畅 尤金炜 董敏 恽时锋 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4923-4931,共9页
【目的】通过原核表达系统表达小鼠细小病毒(Minute virus of mice,MVM)的非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1),并制备其多克隆抗体,为MVM NS1蛋白生物学功能研究及相关检测方法的建立提供研究材料。【方法】通过同源重组将MVM N... 【目的】通过原核表达系统表达小鼠细小病毒(Minute virus of mice,MVM)的非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1),并制备其多克隆抗体,为MVM NS1蛋白生物学功能研究及相关检测方法的建立提供研究材料。【方法】通过同源重组将MVM NS 1基因与质粒pET-N-His-C-His进行连接构建重组质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,通过不同诱导条件筛选并纯化出无需复性的可溶性蛋白。将纯化后的重组蛋白NS1免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,通过间接ELISA法测定抗体效价。采用Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定重组蛋白的表达及免疫原性。【结果】SDS-PAGE分析显示,诱导表达的重组蛋白大小为76 ku,在诱导剂(IPTG)浓度为0.6 mmol/L、诱导温度为28℃条件下表达效果最佳。间接ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价为1∶32000。Western blotting和IFA检测结果显示,制备的NS1多克隆抗体可与NS1蛋白及MVM特异性结合。【结论】本研究成功表达并纯化获得MVM NS1重组蛋白,并制备了免疫原性良好的多克隆抗体,为进一步研究NS1蛋白生物学功能及其在MVM复制感染机制中的作用、MVM临床诊断方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 小鼠细小病毒 非结构蛋白1 多克隆抗体 免疫原性
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小鼠感染细小病毒的临床特征分析 被引量:5
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作者 潘金春 罗银珠 +5 位作者 吴瑞可 王静 袁文 何丽芳 黄碧洪 张钰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期64-69,共6页
目的分析小鼠细小病毒(MVM)在人工感染小鼠体内的分布规律、排毒和抗体变化,以及自然条件下小鼠感染MVM的情况。方法对33只BALB/c小鼠腹腔接种0.2 m L MVM悬浮液,每天观察动物的外观、行为、饮食和精神状态,在接种第0~60天共12个时间点... 目的分析小鼠细小病毒(MVM)在人工感染小鼠体内的分布规律、排毒和抗体变化,以及自然条件下小鼠感染MVM的情况。方法对33只BALB/c小鼠腹腔接种0.2 m L MVM悬浮液,每天观察动物的外观、行为、饮食和精神状态,在接种第0~60天共12个时间点各对2~3只动物进行安乐死,并采取组织、粪便和血清样本进行检测。荧光定量PCR(QPCR)方法检测组织和粪便的病毒核酸,ELISA方法检测血清抗体。同时,采取100只SPF小鼠、76只开放饲养小鼠检测MVM核酸,采取1463只SPF小鼠、82只开放饲养小鼠检测MVM抗体。结果实验小鼠接种MVM后外观、行为、饮食和精神状态未见异常,剖检无明显病变。各组织在接种后都能检出病毒核酸,并在接种后4~7 d达到峰值,且到60 d仍可检出病毒核酸。各组织间比较,病毒峰值最高的组织是肝,其次是肾、脾、胃、心脏、肺、盲肠和脑。粪便排毒在接种后11 d可达到峰值,之后迅速下降,但到60 d还可检到。血清抗体在病毒接种后7 d开始产生,之后抗体效价逐渐升高,21 d就可以达到32倍左右,之后至60 d一直处于64倍左右。临床样本中,核酸检测SPF小鼠未检出,开放饲养小鼠的检测阳性率为14.5%,经过测序比较确认为MVM病毒感染;抗体检测SPF小鼠有较低的检出率(0.3%),开放饲养小鼠检出率为68.3%。结论 MVM感染小鼠后一般呈隐性感染状态,可长期排毒,主要组织脏器、粪便、血清都能用于MVM的检测,实验小鼠感染MVM可以通过病毒核酸和血清抗体检测方法进行病原检测。 展开更多
关键词 小鼠细小病毒 人工感染 自然感染 临床特征
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五种国产与进口小鼠病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究 被引量:1
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作者 王吉 卫礼 +3 位作者 付瑞 李晓波 岳秉飞 贺争鸣 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第12期4-7,共4页
目的评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒。方法选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、可信度试验... 目的评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒。方法选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、可信度试验比较。结果国产与进口试剂盒:同种试剂盒之间灵敏度相差最低为2倍,差异显著(P<0.05),最高为16倍,差异极显著(P<0.01);特异性试验显示每种试剂盒,与其他4种病毒均无交叉反应;精密性试验显示5种试剂盒批内平均变异系数均小于10%;稳定性试验显示5种试剂盒相对偏差均小于25%;分别选择已知36份小鼠血清进行检测,国产和进口LCMV、MHV、SV、MPV符合率均为100%;国产MAV符合率为86.1%,进口MAV符合率均为100%,二者之间差异极显著(P<0.01)。结论除国产MAV试剂盒敏感性、可信度低于进口外,国产LCMV、MHV、SV、MPV试剂盒与进口同种试剂盒相比,在敏感性、特异性、精密性、稳定性和可信度方面均良好。 展开更多
关键词 ELISA检测试剂盒 比较研究 淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒 小鼠肝炎病毒 仙台病毒 病毒 小鼠细小病毒
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