枸杞多糖对顺铂诱导小鼠睾丸支持细胞TM4氧化损伤的影响 被引量：11

1

作者 王海 周游 +1 位作者 黄姗婉 高丽萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第17期198-202,共5页

目的:研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum(Ⅱ),CDDP)诱导的小鼠睾丸支持细胞TM4氧化损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:噻唑蓝法测定CDDP、LBP分别对TM4细胞生长的影响以及LB... 目的:研究枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum(Ⅱ),CDDP)诱导的小鼠睾丸支持细胞TM4氧化损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:噻唑蓝法测定CDDP、LBP分别对TM4细胞生长的影响以及LBP对CDDP诱导的细胞毒性的拮抗作用。硫代巴比妥酸法测定细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,二硫代二硝基苯甲酸法测定谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力。结果:5~100 mg/L LBP可极显著提高TM4细胞存活率(P<0.01),20~100 mg/L LBP能够极显著抑制CDDP造成的细胞毒性(P<0.01),50 mg/L的LBP保护效果最佳。50 mg/L LBP能够极显著抑制CDDP(12 mg/L)引起的MDA含量升高以及GSH含量和SOD活力降低(P<0.01)。结论:LBP能有效拮抗顺铂诱导的TM4细胞氧化损伤,其机制与LBP较强的抗氧化作用有关。 展开更多

关键词 枸杞多糖 顺铂 小鼠睾丸支持细胞tm4 氧化损伤

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葡萄籽原花青素对顺铂诱导小鼠睾丸支持细胞TM4细胞凋亡的影响 被引量：7

2

作者 杜月梅 韩何丹 +1 位作者 郭卓雨 高丽萍 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第9期98-104,共7页

目的:研究葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)对顺铂(cisdichlorodiamineplatinum(Ⅱ),cDDP)诱导小鼠睾丸支持细胞(TM4)细胞凋亡、细胞凋亡形态及凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法:体外培养正常TM4细胞,将实验... 目的:研究葡萄籽原花青素(grape seed proanthocyanidin extract,GSPE)对顺铂(cisdichlorodiamineplatinum(Ⅱ),cDDP)诱导小鼠睾丸支持细胞(TM4)细胞凋亡、细胞凋亡形态及凋亡相关基因蛋白表达的影响。方法:体外培养正常TM4细胞,将实验细胞分为空白对照组、cDDP组(0.014 mg/mL)、GSPE(0.005 mg/mL)+cDDP组(0.014 mg/mL)、GSPE组(0.005 mg/mL)。流式细胞检测法测定GSPE对cDDP诱导TM4细胞凋亡率的影响,Hoechst染液染色法测定TM4细胞凋亡的形态学变化,Western blot蛋白免疫印迹法测定凋亡相关基因蛋白表达情况。结果:cDDP可显著增加TM4细胞凋亡,显著降低TM4细胞Bcl-2表达量以及处于酶原状态Pro-caspase3表达量,而明显增加TM4细胞Bax表达量,同时增加处于激活状态的Caspase-3表达量。GSPE可明显降低cDDP诱导的TM4细胞凋亡,降低Bax以及Caspase-3表达量,增加Bcl-2和Pro-caspase3表达量。结论:细胞凋亡在cDDP诱导TM4细胞毒性过程中起重要作用。Bcl-2、Bax、Caspase-3等蛋白参与cDDP诱导TM4细胞凋亡,GSPE通过抑制Bax及Caspase-3的蛋白表达及增强Bcl-2和Pro-caspase3的表达来阻抑cDDP诱导TM4细胞的凋亡,从而减轻c DDP诱导TM4细胞损伤。 展开更多

关键词 葡萄籽原花青素 顺铂 小鼠睾丸支持细胞 细胞凋亡

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D-半乳糖刺激小鼠睾丸TM4支持细胞分泌功能的衰退及其机制 被引量：5

3

作者 陈茜 赵海霞 +5 位作者 马娜 尤旭 杨思琪 马琼艳 袁丁 张长城 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期327-333,共7页

目的采用D-半乳糖(D-Gal)刺激小鼠TM4睾丸支持细胞,建立衰老所致TM4细胞分泌功能衰退模型。方法将小鼠TM4睾丸支持细胞分为正常对照组、(25、50、100、150、200、250)mmol/L D-Gal刺激组。MTT法检测TM4细胞活力、流式细胞术检测细胞周... 目的采用D-半乳糖(D-Gal)刺激小鼠TM4睾丸支持细胞,建立衰老所致TM4细胞分泌功能衰退模型。方法将小鼠TM4睾丸支持细胞分为正常对照组、(25、50、100、150、200、250)mmol/L D-Gal刺激组。MTT法检测TM4细胞活力、流式细胞术检测细胞周期、光镜观察细胞形态、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色观察衰老细胞百分率;反转录PCR检测P21、P16、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和干细胞因子(SCF)的mRNA水平;Western blot法检测GDNF、SCF、红系2样核因子2(nuclear factor,erythroid 2 like 2,NRF2)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)的蛋白水平。结果与正常对照组比较,D-Gal刺激组细胞活力显著下降;处于G1期的细胞比例增高、S期细胞比例降低,细胞阻滞于G0/G1期;SA-β-Gal染色阳性率明显增多,衰老基因P21 mRNA表达上调,GDNF和SCF mRNA及蛋白水平均显著下调;氧化应激相关蛋白NRF2、HO-1和NQO-1的蛋白水平显著降低。结论成功建立D-Gal刺激的TM4睾丸支持细胞分泌功能衰退模型,衰老机制可能与下调NRF2信号通路有关。 展开更多

关键词 D-半乳糖(D-Gal) tm4睾丸支持细胞 衰老 NRF2信号通路

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维生素C改变小鼠TM4支持细胞的代谢试验

4

作者 王昕昕 吴子薇 +3 位作者 赵晗 王芳 杜志强 杨彩侠 《湖南畜牧兽医》 2024年第3期49-52,57,共5页

试验旨在探究维生素C对小鼠TM4支持细胞的代谢影响。通过液相二级质谱(LC-MS/MS)技术对250μmol/L AA2P(L-抗坏血酸2-磷酸倍半镁水合盐)处理36 h的小鼠TM4支持细胞和未处理的细胞进行检测,在所有样品中共检测到450个二级代谢物,根据统... 试验旨在探究维生素C对小鼠TM4支持细胞的代谢影响。通过液相二级质谱(LC-MS/MS)技术对250μmol/L AA2P(L-抗坏血酸2-磷酸倍半镁水合盐)处理36 h的小鼠TM4支持细胞和未处理的细胞进行检测,在所有样品中共检测到450个二级代谢物,根据统计检验计算P值、OPLS-DA降维方法计算变量投影重要度(VIP),筛选得到70个显著差异的代谢物(P<0.05,VIP>1),其中58个上调,12个下调。70个显著差异代谢物主要富集于类固醇激素生物合成、PPAR信号通路、mTOR信号通路、GnRH信号通路、FoxO信号通路、凋亡、醛固酮合成和分泌等信号通路。ELISA验证醛固酮和花生四烯酸具有与代谢组一致的变化趋势和显著性差异。结论:维生素C改变小鼠TM4支持细胞的代谢,试验结果为解析维生素C调控雄性生殖的机制提供了研究基础。 展开更多

关键词 小鼠 tm4细胞 维生素C 代谢组学

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D-半乳糖(D-gal)通过激活p38MAPK通路引起小鼠睾丸TM4支持细胞屏障功能损伤 被引量：5

5

作者 杨圆 张长城 +5 位作者 张艳 杨思琪 叶勇 吴杰 袁丁 赵海霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1002-1008,共7页

目的研究D-半乳糖(D-gal)对小鼠TM4睾丸支持细胞屏障功能的损伤作用及机制。方法TM4细胞分为正常对照组和(25、50、100、150、200、250)mmol/L D-gal刺激组,噻唑蓝(MTT)法检测TM4细胞增殖活性,Western blot法检测TM4细胞紧密连接相关蛋... 目的研究D-半乳糖(D-gal)对小鼠TM4睾丸支持细胞屏障功能的损伤作用及机制。方法TM4细胞分为正常对照组和(25、50、100、150、200、250)mmol/L D-gal刺激组,噻唑蓝(MTT)法检测TM4细胞增殖活性,Western blot法检测TM4细胞紧密连接相关蛋白闭锁小带蛋白1(ZO-1)和闭合蛋白(occludin),黏附连接相关蛋白神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和β联蛋白(β-catenin),缝隙连接相关蛋白连接子蛋白43(CX43),骨架蛋白波形蛋白(vimentin)和丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路相关蛋白胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、Janus激酶(JNK)和p38MAPK的蛋白表达及磷酸化水平。结果与正常对照组比较,D-gal浓度大于50 mmol/L时,细胞活力显著下降;ZO-1、occludin、N-cadherin、E-cadherin和β-catenin的蛋白表达水平均显著降低,p38MAPK蛋白磷酸化水平显著增加,而CX43、vimentin及ERK1/2、JNK蛋白及磷酸化水平无明显变化。结论D-gal可引起TM4睾丸支持细胞紧密连接损伤和黏附连接损伤,可能与激活p38MAPK通路有关。 展开更多

关键词 D-半乳糖(D-gal) 睾丸支持细胞 tm4细胞 血睾屏障

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雌激素受体α下调导致小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤的作用机制 被引量：2

6

作者 杨焱娜 张长城 +4 位作者 常言语 周本文 陈思敏 邓何 赵海霞 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1718-1724,共7页

目的探究雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)下调导致的小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤是否与自噬相关。方法不同浓度ERα抑制剂ICI182780(ICI)处理TM4细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性;将细胞分为正常对照组、不同浓度ICI处理... 目的探究雌激素受体α(estrogen receptor alpha,ERα)下调导致的小鼠睾丸TM4支持细胞连接功能损伤是否与自噬相关。方法不同浓度ERα抑制剂ICI182780(ICI)处理TM4细胞,CCK-8法检测细胞增殖活性;将细胞分为正常对照组、不同浓度ICI处理组。光镜观察细胞数量及形态变化;Western blot法检测ERα蛋白、连接功能相关蛋白、自噬标志物蛋白表达变化;免疫荧光法检测缝隙连接蛋白43(Cx43)表达与定位;氯喹(chloroquine,CQ)与ICI联合作用细胞24 h,Western blot法检测自噬及连接功能相关蛋白表达水平。结果ICI 50 nmol·L^(-1)及以上浓度时,细胞活力明显下降;光镜观察ICI组细胞空泡增多;与正常对照组相比,ICI用药组ERα、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭锁蛋白(occludin)、紧密连接蛋白11(claudin-11)、β-联蛋白(β-catenin)及Cx43表达水平均下降,而神经钙黏蛋白(N-cadherin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)表达无明显变化;微管相关蛋白轻链3(LC3)上升,p62表达下降;免疫荧光结果显示,ICI用药组Cx43荧光表达量明显下降,位置无明显变化;与ICI组相比,CQ+ICI组LC3Ⅱ、p62、ZO-1、β-catenin、Cx43表达水平均上升。结论ERα下调可导致TM4细胞连接功能损伤,其机制可能与激活自噬有关。 展开更多

关键词 雌激素受体Α 支持细胞 tm4细胞 自噬 连接功能 血睾屏障

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山羊睾丸支持细胞外泌体对精子液态保存效果的影响

7

作者 张梦美 徐英环 +2 位作者 李鑫康 牛劲聪 刘腾飞 《动物医学进展》 北大核心 2025年第9期68-72,共5页

精子液态保存在山羊养殖业中应用广泛,但精子活力下降较快等弊端极大限制了该技术的发展应用。睾丸支持细胞外泌体(sertoli cells-exosomes,SCs-EXOs)含有多种活性物质,对精子的发育和成熟具有重要作用。目前关于SCs-EXOs对山羊精子液... 精子液态保存在山羊养殖业中应用广泛,但精子活力下降较快等弊端极大限制了该技术的发展应用。睾丸支持细胞外泌体(sertoli cells-exosomes,SCs-EXOs)含有多种活性物质,对精子的发育和成熟具有重要作用。目前关于SCs-EXOs对山羊精子液态保存影响的研究较少,论文探究山羊SCs-EXOs对4℃液态保存过程中精子质量的影响,用超高速差速离心法提取山羊SCs-EXOs,从微观结构、粒径大小以及标志蛋白等方面进行鉴定,结果表明提取的外泌体纯度较高。进一步将不同浓度的SCs-EXOs(10、20、40μg/mL)与精子共孵育,用伊红染色法和计算机辅助精子分析系统(computer-aided spermatozoa analysis,CASA)检测4℃液态保存不同时间(6、12、24、48 h)精子质量的变化,显示精子活率及运动性能随着液态保存时间延长逐渐降低,添加SCs-EXOs能够显著提高精子活率及运动性能。这些结果表明,山羊SCs-EXOs能够改善4℃液态保存过程中精子的质量,研究结果可为SCs-EXOs在提升家畜精液品质方面的应用提供理论基础。 展开更多

关键词 山羊 精子 4℃液态保存 睾丸支持细胞 外泌体

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miRNA-138-5p靶向调控胱天蛋白酶3减缓吸烟所致睾丸支持细胞TM4细胞凋亡 被引量：5

8

作者 徐华 买尔哈巴·阿不力孜 +1 位作者 赵婉竹 何丽娟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期285-294,共10页

近年来研究表明,长期大量吸烟可致睾丸出现不可逆性损伤进而出现精子发生受阻,凋亡信号通路在其中发挥着关键作用,其分子调控机制仍有待深入研究。本研究旨在探讨miRNA-138-5p在香烟烟雾所致小鼠睾丸支持细胞TM4细胞(正常小鼠睾丸Sertol... 近年来研究表明,长期大量吸烟可致睾丸出现不可逆性损伤进而出现精子发生受阻,凋亡信号通路在其中发挥着关键作用,其分子调控机制仍有待深入研究。本研究旨在探讨miRNA-138-5p在香烟烟雾所致小鼠睾丸支持细胞TM4细胞(正常小鼠睾丸Sertoli细胞)损伤中的靶向调控机制。MTT法、乳酸脱氢酶法和TUNEL法结果显示,CSE干预后的TM4细胞存活率显著降低(P<0.05),细胞毒性显著增加(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05);RT-PCR和Western印迹结果证明,10%CSE干预TM4细胞后,凋亡前体基因p53、促凋亡基因Bak和胱天蛋白酶3(caspase-3)的mRNA和蛋白质表达水平显著上调(P<0.05);在TM4细胞中转染miRNA-138-5p过表达质粒后同样进行CSE干预,结果显示,支持细胞存活率较转染前显著升高(P<0.05),凋亡阳性细胞数较转染前显著降低(P<0.05),凋亡前体p53基因、促凋亡基因Bak和Caspase-3的mRNA和蛋白质表达较转染前显著下调(P<0.05);沉默miRNA-138-5p后,Bak、胱天蛋白酶3的mRNA和蛋白质表达水平显著增加(P<0.05);在线数据库分析显示,miRNA-138-5p与胱天蛋白酶3具有较高的匹配预测值,双荧光素酶报告基因结果显示,Bak未结合至miRNA-138-5p,而胱天蛋白酶3可以靶向结合至miRNA-138-5p。以上结果提示,miRNA-138-5p可靶向调控胱天蛋白酶3,减缓吸烟所致睾丸支持细胞凋亡,具有支持细胞的保护作用。 展开更多

关键词 香烟烟雾暴露 tm4细胞(正常小鼠睾丸Sertoli细胞) miRNA-138-5p

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姜黄素对小鼠睾丸细胞株TM_4细胞的影响

9

作者 王庆忠 《湖北农业科学》 北大核心 2012年第23期5418-5420,共3页

主要探讨姜黄素(Curcumin,CCM)对支持细胞株TM4体外生长的影响。通过采用形态学观察、MTT法和TUNNEL法检测了5种不同浓度的姜黄素对小鼠支持细胞株TM4细胞生长和增殖的影响。结果表明,姜黄素抑制TM4细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,这种作... 主要探讨姜黄素(Curcumin,CCM)对支持细胞株TM4体外生长的影响。通过采用形态学观察、MTT法和TUNNEL法检测了5种不同浓度的姜黄素对小鼠支持细胞株TM4细胞生长和增殖的影响。结果表明,姜黄素抑制TM4细胞的增殖并诱导其细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖效应,当用40μmol/mL的姜黄素处理培养的TM4细胞时,MTT法测得的细胞生长抑制率和TUNNEL法获得的细胞凋亡指数与对照组相比均有显著差异。说明姜黄素在预防和治疗睾丸癌方面有一定的应用价值。 展开更多

关键词 姜黄素(Curcumin CCM) 小鼠tm4细胞 细胞凋亡

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草甘膦对小鼠睾丸支持细胞凋亡及雄激素结合蛋白、波形蛋白mRNA表达的影响 被引量：8

10

作者 赵文红 俞慧 +1 位作者 张建国 束莉 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1709-1712,F0003,共5页

目的探讨不同剂量草甘膦(GLY)对小鼠睾丸支持细胞(sertoli细胞)凋亡及细胞存活率的影响,同时观察雄激素结合蛋白(ABP)及波形蛋白mRNA表达的变化。方法体外原代培养小鼠sertoli细胞,收集细胞并分为正常对照组和不同剂量草甘膦组,草甘膦... 目的探讨不同剂量草甘膦(GLY)对小鼠睾丸支持细胞(sertoli细胞)凋亡及细胞存活率的影响,同时观察雄激素结合蛋白(ABP)及波形蛋白mRNA表达的变化。方法体外原代培养小鼠sertoli细胞,收集细胞并分为正常对照组和不同剂量草甘膦组,草甘膦的浓度分别为60、90、120、150和180 mg/L;各组细胞培养24 h后,倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态改变;MTT法检测细胞存活率;Hoechst 33342检测细胞凋亡情况;RT-PCR检测草甘膦对ABP及波形蛋白mRNA表达情况。结果在不同浓度草甘膦作用下,sertoli细胞出现不同程度缩小、脱落、甚至破碎;细胞的增值率明显低于对照组(P<0.01);细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.05);细胞ABP mRNA和波形蛋白mRNA表达与对照组相比均减弱(P<0.05)。结论草甘膦对小鼠sertoli细胞有一定的毒性,能诱导细胞凋亡及抑制细胞增殖,且随草甘膦剂量的增加,有害作用有增加的趋势;同时能抑制ABP和波形蛋白mRNA的表达。 展开更多

关键词 草甘膦 小鼠睾丸支持细胞 雄激素结合蛋白 波形蛋白

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茶多酚对草甘膦致小鼠睾丸支持细胞氧化损伤及凋亡的保护作用 被引量：3

11

作者 赵文红 俞慧 +1 位作者 张建国 江城梅 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第19期2037-2040,共4页

目的探讨不同剂量的茶多酚(tea polyphenol,TP)对草甘膦(glyphosate,GLY)诱导小鼠睾丸支持细胞(sertoli细胞)氧化损伤及凋亡的拮抗作用。方法体外原代培养小鼠sertoli细胞,90 mg/L GLY培养液处理细胞形成sertoli细胞损伤模型,加入不同剂... 目的探讨不同剂量的茶多酚(tea polyphenol,TP)对草甘膦(glyphosate,GLY)诱导小鼠睾丸支持细胞(sertoli细胞)氧化损伤及凋亡的拮抗作用。方法体外原代培养小鼠sertoli细胞,90 mg/L GLY培养液处理细胞形成sertoli细胞损伤模型,加入不同剂量TP(浓度分别为10、20、40、80 mg/L),形成4个拮抗组,另设由正常培养基形成的对照组;各组细胞培养24 h后,倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态改变;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)法检测细胞毒性;TUNEL法检测细胞凋亡情况;检测细胞中超氧化物歧化酶(super oxidase dimutase,SOD)活性、谷胱甘肽(glutathione,GSH)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果 GLY处理组细胞出现收缩变小、脱落、甚至破碎,细胞的存活率明显低于对照组(P<0.05),为对照组的47.03%;细胞内LDH活性明显高于对照组;细胞凋亡指数为(37.0±4.0)%,明显高于对照组(P<0.05);细胞内SOD活性、GSH含量与对照组相比明显降低,而MDA含量明显升高(P<0.05)。各拮抗组与GLY处理组相比,细胞形态有不同程度改善,尤其是拮抗组4(TP 80 mg/L)细胞生长状况明显好转,碎片明显减少;细胞的存活率、SOD活性及GSH含量明显升高(P<0.05,P<0.01);细胞凋亡指数、LDH活及MDA含量明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论 GLY对小鼠sertoli细胞具有诱导细胞凋亡及抑制细胞增殖,降低细胞抗氧化能力的影响,TP对GLY造成的这些损伤有一定的保护作用。 展开更多

关键词 茶多酚 草甘膦 小鼠睾丸支持细胞 氧化损伤 凋亡

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白藜芦醇通过沉默调节蛋白1-解偶联蛋白2信号通路降低小鼠睾丸间质细胞TM3的氧化损伤 被引量：6

12

作者 张晓春 陈指龙 +3 位作者 方娟 黎陈 伍小松 杨青 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期2632-2640,共9页

本试验旨在研究白藜芦醇(RES)对氧化损伤小鼠睾丸间质细胞TM3的保护作用,并探索其可能的作用机制。首先,用不同浓度(0、150、200、250、300μmol/L)的过氧化氢(H2O2)处理小鼠睾丸间质细胞TM3 8 h,确定建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓... 本试验旨在研究白藜芦醇(RES)对氧化损伤小鼠睾丸间质细胞TM3的保护作用,并探索其可能的作用机制。首先,用不同浓度(0、150、200、250、300μmol/L)的过氧化氢(H2O2)处理小鼠睾丸间质细胞TM3 8 h,确定建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度;然后,用不同浓度(0、2.5、5.0和10.0μmol/L)的RES分别处理正常细胞24 h,确定RES安全浓度;最后,用安全浓度的RES处理氧化损伤细胞24 h。在整个培养过程中采用i CELLigence实时无标记细胞功能分析仪监测细胞的增殖情况;待安全浓度的RES处理氧化损伤细胞结束后采用2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)探针法检测细胞中活性氧(ROS)的含量,实时荧光定量PCR(RT-q PCR)和蛋白质印迹(Western blotting)法分别检测沉默调节蛋白1(SIRT1)/解偶联蛋白2(UCP2)信号通路中关键因子SIRT1和UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量。结果表明:1)用浓度为150μmol/L及以上的H2O2处理细胞8 h后,极显著降低细胞存活率(P<0.01),因此确定150μmol/L为建立氧化损伤细胞模型的适宜H2O2浓度。2)用10.0μmol/L及以下浓度的RES处理正常细胞24 h后,细胞存活率均无显著变化(P>0.05);用2.5、5.0和10.0μmol/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞存活率均显著提高(P<0.05),且各浓度RES组间无显著差异(P>0.05)。因此,选用5.0μmol/L为RES的安全浓度。3)用5.0μmol/L的RES处理氧化损伤细胞24 h后,细胞中ROS的含量极显著降低(P<0.01);细胞中SIRT1 mRNA和蛋白质的相对表达量极显著增加(P<0.01),而UCP2 mRNA和蛋白质的相对表达量则显著或极显著降低(P<0.01或P<0.05)。由此可见,适宜浓度的RES可激活SIRT1同时抑制UCP2的表达,UCP2通过负反馈调节方式减少细胞内ROS的生成,从而在一定程度上抑制TM 3细胞的氧化损伤。 展开更多

关键词 白藜芦醇 氧化损伤 沉默调节蛋白1 解偶联蛋白2 小鼠睾丸间质细胞tm3

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椒蒿对自身免疫性睾丸炎小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响 被引量：2

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作者 仵燕 斯依提尼沙汗.吾满尔 +2 位作者 吴小川 骆靖华 玛衣拉.阿不拉克 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期244-247,269,共5页

目的研究椒蒿挥发油对自身免疫性睾丸炎小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响。方法雄性BALB/c小鼠80只,随机分为4组(生理盐水组、模型组、橄榄油组、椒蒿组),采用睾丸内注射冰醋酸的方法造模,各组都在手术前3天开始灌胃,手术后继续灌胃,共... 目的研究椒蒿挥发油对自身免疫性睾丸炎小鼠CD4+CD25+调节性T细胞的影响。方法雄性BALB/c小鼠80只,随机分为4组(生理盐水组、模型组、橄榄油组、椒蒿组),采用睾丸内注射冰醋酸的方法造模,各组都在手术前3天开始灌胃,手术后继续灌胃,共连续灌胃24d(盐水组只灌胃,不手术)。分别于术后3周、9周取外周血,通过流式细胞仪对CD4+CD25+调节性T细胞进行检测。结果术后3周,模型组、橄榄油组、椒蒿组小鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分比均低于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05),而此3组之间差异无统计学意义(P>0.05)。术后9周模型组与橄榄油组小鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞百分比低于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05),椒蒿组与生理盐水组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论椒蒿能使自身免疫性睾丸炎小鼠CD4+CD25+调节性T细胞百分比提高,后者可发挥免疫调节作用。 展开更多

关键词 椒蒿 自身免疫性睾丸炎 CD4+CD25+调节性T细胞 BALB/C小鼠

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N-乙酰-半胱氨酸干预壬基酚对小鼠Sertoli TM4细胞的损伤作用 被引量：2

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作者 刘晓珍 聂少平 +2 位作者 余强 黄丹菲 谢明勇 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第13期130-136,共7页

目的:研究N-乙酰-半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)对壬基酚(nonylphenol,NP)诱导的小鼠SertoliTM4细胞氧化损伤及凋亡的干预作用。方法:以Sertoli TM4细胞为对象,实验分为对照组、NP组(20 μmol/L NP处理)、NP+NAC组(5 mmol/L NAC预处... 目的:研究N-乙酰-半胱氨酸(N-acetyl-cysteine,NAC)对壬基酚(nonylphenol,NP)诱导的小鼠SertoliTM4细胞氧化损伤及凋亡的干预作用。方法:以Sertoli TM4细胞为对象,实验分为对照组、NP组(20 μmol/L NP处理)、NP+NAC组(5 mmol/L NAC预处理4 h后20 μmol/L NP处理24 h)、NAC组(5 mmol/L NAC处理4 h后换正常培养基培养),采用噻唑蓝法检测细胞存活率;流式细胞术检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和细胞凋亡情况;试剂盒法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量及Caspase-3相对活力;Western blot法检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化情况。结果:与对照组相比,20 μmol/L NP处理24 h能显著降低细胞存活率(P<0.05),同时诱导细胞内ROS生成,下调SOD和CAT活力,增加MDA含量,诱导Sertoli TM4细胞凋亡,增加Caspase-3相对活力,促进ERK、JNK蛋白磷酸化激活;与NP组相比,NAC预处理能够明显削弱NP引起的细胞内ROS生成,使SOD、CAT活力下调,MDA含量增加,Sertoli TM4细胞凋亡,Caspase-3相对活力增强,激活ERK、JNK信号通路。结论:NAC具有干预NP对小鼠Sertoli TM4细胞损伤的作用,这可能与NAC抑制NP诱导的细胞氧化应激和凋亡以及阻断ERK、JNK信号通路的激活相关。 展开更多

关键词 壬基酚 小鼠Sertoli tm4细胞 N-乙酰-半胱氨酸 细胞凋亡 氧化应激

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枸杞多糖对顺铂诱导小鼠睾丸支持细胞凋亡的影响 被引量：4

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作者 刘云帆 杜月梅 +1 位作者 刘晓艺 高丽萍 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2021年第6期624-630,共7页

目的:研究枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum,CDDP)诱导小鼠睾丸支持细胞(TM4)凋亡的影响并探讨其可能机制。方法:体外培养TM4细胞,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测LBP对CDDP诱导TM4细胞... 目的:研究枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum,CDDP)诱导小鼠睾丸支持细胞(TM4)凋亡的影响并探讨其可能机制。方法:体外培养TM4细胞,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测LBP对CDDP诱导TM4细胞生存率的影响,Western blot检测LBP对CDDP诱导TM4细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。结果:与Control组相比,CDDP组TM4细胞凋亡显著增加,细胞内抑凋亡基因Bcl-2表达量显著降低,促凋亡基因Bax表达量及Caspase-3表达量显著升高;与CDDP组相比,CDDP+LBP组TM4细胞凋亡显著减少,细胞内抑凋亡基因Bcl-2表达量显著升高,促凋亡基因Bax表达量及Caspase-3表达量显著降低。结论:LBP作用于CDDP诱导的TM4细胞,能够通过增强细胞内Bcl-2的表达,抑制Bax及Caspase-3的表达来阻抑因CDDP诱导的TM4细胞凋亡,进而减轻CDDP对TM4细胞造成的损伤。 展开更多

关键词 枸杞多糖 顺铂 小鼠睾丸支持细胞 细胞凋亡

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他克林对脂多糖诱导小鼠睾丸支持细胞炎性损伤的保护作用

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作者 蔡金霞 黄明光 +8 位作者 胡传活 张鑫 梁莹莹 纪伟霞 冯妮 葛晨玲 陈志英 李珣 王晓晔 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2022年第3期700-706,共7页

【目的】分析他克林对脂多糖(LPS)诱导小鼠睾丸支持细胞(TM4)炎性损伤的保护作用,从炎症角度探索他克林的功能,为动物生产过程中雄性动物生殖疾病相关抗炎药物的利用及精子质量提升提供更多药物选择。【方法】采用CCK8法检测0.01、0.10... 【目的】分析他克林对脂多糖(LPS)诱导小鼠睾丸支持细胞(TM4)炎性损伤的保护作用,从炎症角度探索他克林的功能,为动物生产过程中雄性动物生殖疾病相关抗炎药物的利用及精子质量提升提供更多药物选择。【方法】采用CCK8法检测0.01、0.10、1.00、10.00和100.00μg/mL LPS分别诱导3.0、6.0、12.0和24.0 h对TM4的适宜损伤条件;同时分析0.01、0.10、1.00、10.00、100.00、1000.00、10000.00和100000.00μg/mL他克林在加入LPS前预处理0.5、1.0和2.0 h或加入LPS后处理0.5、1.5、3.0、6.0、12.0和24.0 h对TM4炎性损伤的适宜保护条件。以荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测TNF-α和IL-6基因mRNA表达水平,以ELISA法进一步评价细胞上清TNF-α和IL-6蛋白表达量,以免疫蛋白印迹(WB)法分析NF-κB蛋白表达量。【结果】不同浓度不同处理时间下,LPS对TM4增殖的影响情况存在差异,其中1.00μg/mL LPS处理12 h TM4的增殖率极显著低于空白组(P<0.01,下同)。他克林对TM4炎性损伤的保护作用与处理时间和剂量有关,其中,10000.00μg/mL他克林预处理2.0 h的TM4增殖率显著低于空白组(P<0.05,下同),10000.00、100000.00μg/mL他克林预处理0.5和1.0 h或后处理0.5、1.5、3.0、6.0、12.0和24.0 h的TM4增殖率均极显著低于空白组,而0.01μg/mL他克林后处理6.0 h的保护作用最佳,其TM4增殖率显著高于空白组。与空白组相比,LPS可显著上调TM4的IL-6和TNF-α基因mRNA及蛋白表达量,而与LPS组相比,0.01μg/mL他克林显著下调其表达量。与空白组相比,LPS可显著上调TM4的NF-κB蛋白表达量;1.00、100.00和10000.00μg/mL他克林可极显著上调NF-κB蛋白表达量,而与LPS相比,0.01μg/mL他克林降低NF-κB蛋白表达量,但差异不显著(P>0.05)。【结论】0.01μg/mL他克林后处理6.0 h对TM4的保护作用最佳,其机制可能与IL-6和TNF-α基因mRNA及蛋白表达量下调有关。 展开更多

关键词 他克林 脂多糖 小鼠睾丸支持细胞 炎性损伤

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双酚A通过上调Apoa 1基因的表达抑制TM3细胞睾酮合成

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作者 赵彤 杨文哲 +4 位作者 潘飞龙 赵树臣 刘克祥 吕占军 赵立佳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期3516-3525,共10页

旨在从脂质代谢的角度探讨载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,Apoa 1)是否介导了双酚A(bisphenol A,BPA)暴露所致小鼠睾丸间质细胞株(TM3)睾酮合成的降低。将TM3细胞随机分为不同浓度的BPA暴露剂量(0、5、10、20、40、60、80μmol·L^(-... 旨在从脂质代谢的角度探讨载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,Apoa 1)是否介导了双酚A(bisphenol A,BPA)暴露所致小鼠睾丸间质细胞株(TM3)睾酮合成的降低。将TM3细胞随机分为不同浓度的BPA暴露剂量(0、5、10、20、40、60、80μmol·L^(-1))组,0μmol·L^(-1)BPA为对照组(CON)。给予相应剂量处理24 h后,运用CCK-8法检测TM3细胞活力,确定BPA最适染毒剂量;通过ELISA检测TM3细胞培养上清液睾酮(testosterone,T)含量;利用RT-qPCR检测TM3细胞脂质代谢相关基因Apoa1、Apoa 2(apolipoprotein A2)、Apoc 3(apolipoprotein C3)的mRNA表达水平;运用Western blot和免疫荧光方法检测APOA1蛋白表达水平;采用油红O染色观察细胞内脂滴累积情况。结果表明,20μmol·L^(-1)BPA处理24 h对TM3细胞活力无显著影响,40μmol·L^(-1)BPA处理24 h后,TM3细胞活力受到极显著抑制(P<0.01);此外,20μmol·L^(-1)BPA处理TM3细胞24 h后,培养上清液中睾酮含量极显著低于对照组(P<0.01),Apoa 1基因的mRNA表达水平及蛋白表达量极显著升高(P<0.001),但Apoa 2和Apoc 3基因的mRNA表达水平无显著变化;与对照组相比,20μmol·L^(-1)BPA处理24 h,TM3细胞的脂滴累积量极显著降低(P<0.0001)。综上,BPA可通过上调Apoa 1基因的表达水平,增强胆固醇逆向转运(reverse cholesterol transport,RCT),引起TM3细胞内的脂滴含量减少,导致TM3细胞的睾酮合成分泌降低。 展开更多

关键词 双酚A(BPA) 载脂蛋白A1(Apoa 1) 小鼠睾丸间质细胞(tm3) 睾酮(T)

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Sox30基因敲除致小鼠睾丸间质细胞增殖异常的研究 被引量：1

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作者 唐莹 姜晓 +5 位作者 韩飞 周洋西 崔志鸿 刘晋祎 杨惠芳 曹佳 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第11期1063-1073,共11页

目的探讨Sox30基因敲除对小鼠睾丸间质细胞增殖的影响。方法采用HE染色法观察10周龄Sox30基因野生型(Sox30^(+/+))、杂合型(Sox30^(-/+))及纯合缺失型(Sox30^(-/-))小鼠睾丸组织病理形态;采用免疫组化技术检测睾丸组织中间质细胞特异性... 目的探讨Sox30基因敲除对小鼠睾丸间质细胞增殖的影响。方法采用HE染色法观察10周龄Sox30基因野生型(Sox30^(+/+))、杂合型(Sox30^(-/+))及纯合缺失型(Sox30^(-/-))小鼠睾丸组织病理形态;采用免疫组化技术检测睾丸组织中间质细胞特异性表达蛋白3β-HSD的表达水平;采用慢病毒感染及siRNA干扰技术构建Sox30基因过表达及敲低TM3细胞模型,并在此细胞模型基础上分别采用CCK-8法、流式细胞术、RT-qPCR法以及Western blot法检测细胞存活率、细胞周期分布及周期相关基因的mRNA及蛋白表达水平。采用JASPAR数据库预测Sox30与周期相关基因的启动子区结合位点。结果与Sox30^(+/+)和Sox30^(-/+)小鼠比较,HE染色结果显示Sox30^(-/-)小鼠睾丸组织中间质细胞显著增生,同时免疫组化染色发现表达3β-HSD的间质细胞增多。与Vector组相比,Sox30组TM3细胞存活率降低(P<0.05),G1期细胞周期阻滞(P<0.05),同时细胞周期相关基因CyclinD1、Cdk2等mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。与Sox30-NC组比较,siSox30-3组TM3细胞存活率增加(P<0.05),G1期细胞周期阻滞恢复(P<0.05),同时细胞周期相关基因CyclinD1、Cdk2等mRNA和蛋白表达水平显著恢复(P<0.05)。JASPAR预测发现CyclinD1、Cdk2的启动子区域均存在Sox30蛋白质可能的结合位点。结论Sox30基因敲除可导致小鼠间质细胞增殖异常,CyclinD1和Cdk2可能是Sox30调控细胞周期的重要靶基因。 展开更多

关键词 Sox30 小鼠睾丸间质细胞 tm3细胞 细胞周期

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啶虫脒通过氧化应激损害小鼠睾丸的超微结构 被引量：2

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作者 张姣姣 王怡 +2 位作者 向海洋 王鲜忠 张家骅 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1457-1462,共6页

旨在研究啶虫脒对雄性小鼠睾丸支持细胞和生精细胞的损害作用是否与氧化应激有关。将50只成年昆明雄鼠(25～30g)随机分成5组,灌喂方式给药,所有实验动物连续灌喂35d,通过电镜观察睾丸超微结构的变化,并检测一氧化氮合酶(NOS)、羟自由基... 旨在研究啶虫脒对雄性小鼠睾丸支持细胞和生精细胞的损害作用是否与氧化应激有关。将50只成年昆明雄鼠(25～30g)随机分成5组,灌喂方式给药,所有实验动物连续灌喂35d,通过电镜观察睾丸超微结构的变化,并检测一氧化氮合酶(NOS)、羟自由基、谷胱甘肽(GSH)和总抗氧化能力(T-AOC)的变化确定抗氧化能力的变化。观察睾丸的超微结构发现,啶虫脒组小鼠睾丸的支持细胞胞质中内质网扩张,溶酶体数量减少;初级精母细胞的细胞核溶解,染色质异常聚集,线粒体固缩,细胞器较少;精子细胞的核染色质异常聚集,精子细胞内出现明显染色质样小体,线粒体固缩明显。此外,啶虫脒能引起睾丸中总一氧化氮合酶(TNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)的活性及产生羟自由基的能力升高(P<0.05),GSH和T-AOC活性降低(P<0.05)。维生素E能够明显降低啶虫脒对睾丸超微结构的损害作用。研究结果表明啶虫脒通过诱导氧化应激对小鼠睾丸的超微结构产生损害作用。 展开更多

关键词 啶虫脒 小鼠 睾丸支持细胞 生精细胞 超微结构 氧化应激

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鹿尾蛋白与多肽制备工艺优化及其对TM3细胞增殖活性研究 被引量：5

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作者 郭鑫 吴梦阳 +4 位作者 郭子奕 时坤 李建明 宗颖 杜锐 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第22期181-186,共6页

以梅花鹿尾为研究对象,采用正交试验优化超声水提蛋白工艺及水酶法提取多肽工艺,比较两种最佳工艺所得物对小鼠睾丸间质细胞(TM3)增殖活性的影响。结果表明,超声水提蛋白工艺最佳条件为料液比1∶5 g/mL、超声功率200 W、提取时间1 h、... 以梅花鹿尾为研究对象,采用正交试验优化超声水提蛋白工艺及水酶法提取多肽工艺,比较两种最佳工艺所得物对小鼠睾丸间质细胞(TM3)增殖活性的影响。结果表明,超声水提蛋白工艺最佳条件为料液比1∶5 g/mL、超声功率200 W、提取时间1 h、提取温度40℃,在此条件下蛋白含量为60.72%±0.56%;水酶法提取多肽工艺中最佳蛋白酶为胰蛋白酶,酶解最佳条件为pH8、加酶量1500 U/g、酶解时间4 h、提取温度50℃,在此条件下水解度为22.85%±0.35%。水酶法提取鹿尾多肽对小鼠睾丸间质细胞(TM3)增殖活性优于超声水提鹿尾蛋白。 展开更多

关键词 鹿尾 蛋白 多肽 酶解产物 CCK-8法 小鼠睾丸间质细胞(tm3) 增殖活性

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