UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定 被引量：1

1

作者 王春生 李晶 +4 位作者 宁方勇 张秋婷 梁洋 朴善花 安铁洙 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1202-1205,1235,共5页

为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S的阳性小鼠成纤维细胞,本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子(UHS),与带有IRES序列和GFP报告基因的表达载体连接,构建真核表达载体UHS-2S-pIRES2-EGFP;... 为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S的阳性小鼠成纤维细胞,本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子(UHS),与带有IRES序列和GFP报告基因的表达载体连接,构建真核表达载体UHS-2S-pIRES2-EGFP;将UHS-2S-pIRES2-EGFP线性化后,采用脂质体法转染小鼠皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得neo基因抗性阳性细胞。结果表明:(1)成功构建UHS-2S-pIRES2-EGFP;(2)转基因细胞的最佳G418筛选浓度为400μg/mL;(3)筛选获得呈梭形的转基因细胞,对其进行传代培养时,细胞增殖缓慢,细胞未呈现正常细胞的"S"型的生长曲线;(4)PCR检测结果显示,UHS-2S-pIRES2-EGFP载体已经整合到G418抗性细胞的基因组中。 展开更多

关键词 蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体 超高硫角蛋白启动子 真核表达载体 小鼠成纤维细胞 转基因

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蚕蛹羧甲基壳聚糖对小鼠成纤维细胞增殖与生长的影响 被引量：1

2

作者 朱琳 邹德庆 +2 位作者 范作卿 王娜 郭光 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期491-495,共5页

手术后组织粘连与组织损伤部位纤维的增生有密切关系。研究蚕蛹羧甲基壳聚糖对小鼠成纤维细胞L929增殖与生长的影响,探索其用作预防组织粘连生物医用材料的可行性。体外试验结果表明,培养液中添加0.1 mg/m L蚕蛹羧甲基壳聚糖能够极显著... 手术后组织粘连与组织损伤部位纤维的增生有密切关系。研究蚕蛹羧甲基壳聚糖对小鼠成纤维细胞L929增殖与生长的影响,探索其用作预防组织粘连生物医用材料的可行性。体外试验结果表明,培养液中添加0.1 mg/m L蚕蛹羧甲基壳聚糖能够极显著抑制小鼠成纤维细胞的增殖(P<0.01),抑制率达到50.08%±10.12%;荧光定量PCR检测小鼠成纤维细胞中的细胞生长因子TGF-β1和VEGF编码基因的表达极显著下调(P<0.01),并且这种抑制作用呈现明显的剂量效应。据此初步认为,蚕蛹羧甲基壳聚糖可有效控制成纤维细胞中关键的自分泌生长因子编码基因的表达,进而抑制机体的细胞增殖与生长以及炎症反应和血管增生,预防术后组织粘连。 展开更多

关键词 蚕蛹羧甲基壳聚糖 小鼠成纤维细胞L929 增殖生长 细胞生长因子

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利用TALE-TFs在小鼠成纤维细胞中激活β-酪蛋白基因启动子表达载体

3

作者 皮文辉 梁龙 +6 位作者 唐红 张译元 郭延华 王立民 向春和 周平 刘守仁 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2014年第5期13-16,I0003,共5页

目的利用TALE-TFs,在小鼠成纤维细胞中激活β-酪蛋白基因启动子,为检测β-酪蛋白基因启动子—目的基因表达框的表达结果,提供一种检测途径。方法将构建的TALE-TFs和β-酪蛋白基因启动子—Red报告基因质粒电转染进入小鼠成纤维细胞,通过... 目的利用TALE-TFs,在小鼠成纤维细胞中激活β-酪蛋白基因启动子,为检测β-酪蛋白基因启动子—目的基因表达框的表达结果,提供一种检测途径。方法将构建的TALE-TFs和β-酪蛋白基因启动子—Red报告基因质粒电转染进入小鼠成纤维细胞,通过荧光显微镜直接观察报告基因表达情况。结果与结论利用TALE人工转录因子,在小鼠成纤维细胞中能够激活β-酪蛋白基因启动子表达框,为替代乳腺上皮细胞表达验证系统提供了新的途径。 展开更多

关键词 TALE-TFs 小鼠成纤维细胞 β-酪蛋白基因启动子 表达调控

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三种口腔溃疡中药制剂对小鼠成纤维细胞生长增殖和胶原合成的影响 被引量：8

4

作者 金姗姗 郑雅文 +3 位作者 张洁 齐锐 刘斌 李志革 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1176-1181,共6页

目的探讨3种治疗复发性口腔溃疡中药制剂(西瓜霜、云南白药、甘草泻心汤)在细胞水平上促进溃疡愈合的作用机制。方法建立小鼠口腔成纤维细胞体外培养模型,以华素片为对照,采用MTT、Elisa测定3种中药制剂对成纤维细胞增殖、胶原合成的影... 目的探讨3种治疗复发性口腔溃疡中药制剂(西瓜霜、云南白药、甘草泻心汤)在细胞水平上促进溃疡愈合的作用机制。方法建立小鼠口腔成纤维细胞体外培养模型,以华素片为对照,采用MTT、Elisa测定3种中药制剂对成纤维细胞增殖、胶原合成的影响。结果西瓜霜在促进成纤维细胞的增殖及胶原合成,抑制MMP-2,促进TIMP-1方面有较显著的作用。云南白药促进能够HYP的分泌和抑制MMP-2的分泌。甘草泻心汤对成纤维细胞有一定的抑制作用。结论提示临床上治疗复发性口腔溃疡时应联合用药或分期用药。 展开更多

关键词 复发性口腔溃疡 西瓜霜 云南白药 甘草泻心汤 小鼠成纤维细胞L929 胶原合成 羟脯氨酸(HYP) 金属基质蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)

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同步化处理后小鼠成纤维细胞表观遗传水平的相对定量分析 被引量：1

5

作者 纪少珲 王喜宏 +1 位作者 季维智 金立方 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期350-355,共6页

供体细胞的同步化处理可能改变其表观遗传特性,进而影响胚胎的克隆效率。研究同步化处理对小鼠胎儿成纤维细胞(mouse embryonicf ibroblasts,MEFs)组蛋白H3K9甲基化、乙酰化及组蛋白H3K4单甲基化、三甲基化表达的影响。分离培养MEFs,增... 供体细胞的同步化处理可能改变其表观遗传特性,进而影响胚胎的克隆效率。研究同步化处理对小鼠胎儿成纤维细胞(mouse embryonicf ibroblasts,MEFs)组蛋白H3K9甲基化、乙酰化及组蛋白H3K4单甲基化、三甲基化表达的影响。分离培养MEFs,增殖稳定的第3代MEFs分别用5mL/L血清饥饿处理4d或15mL/LDM-SO处理2d使细胞处于增殖抑制期,通过免疫组化染色和Image-J图像处理软件,相对定量比较不同处理情况下组蛋白H3K9甲基化、乙酰化和组蛋白H3K4单甲基化、三甲基化变化情况。Ki-67染色检测结果表明,两种同步化处理可使细胞处于G0期或G1期。DMSO处理使MEFs组蛋白H3K9乙酰化表达水平升高,而5mL/L血清饥饿处理则使其表达水平下降;此外,两种同步化处理均导致组蛋白H3K9甲基化和H3K4单甲基化表达下降,但不影响组蛋白H3K4三甲基化的表达水平。研究结论表明:同步化处理可改变MEFs组蛋白乙酰化和甲基化表达水平,进而有可能影响胚胎克隆效率。 展开更多

关键词 小鼠胎儿成纤维细胞 同步化处理 组蛋白 甲基化 乙酰化

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不同血清浓度对小鼠成纤维细胞L929生长增殖和胶原蛋白分泌的影响 被引量：2

6

作者 刘敏 胡平安 丁克祥 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期736-739,共4页

目的：观察不同血清浓度对小鼠L929成纤维细胞生长增殖和分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和羟脯氨酸的影响,以了解适宜成纤维细胞生长和分泌的最佳血清浓度。方法：L929细胞分成6组：分别以血清浓度为0 mL/L、200 mL/L、400 mL/L、600 mL/L、800... 目的：观察不同血清浓度对小鼠L929成纤维细胞生长增殖和分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和羟脯氨酸的影响,以了解适宜成纤维细胞生长和分泌的最佳血清浓度。方法：L929细胞分成6组：分别以血清浓度为0 mL/L、200 mL/L、400 mL/L、600 mL/L、800 mL/L和1 000 mL/L的培养液培养,培养2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组细胞进行HE和吖啶橙荧光染色,了解细胞形态和生长状况变化。在2 d、4 d、6 d和8 d分别取各组上清,酶联免疫法检测Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原,羟脯氨酸水平。磺基罗丹明B（SRB）法检测培养2 d、4 d、6 d和8 d后各组细胞增殖情况。结果：（1）L929在血清浓度很高和很低（0%和100%）时细胞增殖率都明显下降,20%组血清浓度的增殖率最高;40%~100%组,随着血清浓度增高,细胞增殖率反而下降;（2）HE和AO染色发现0%血清浓度组细胞出现凋亡情况,80%组细胞开始出现空泡化,100%血清浓度时细胞空泡化严重。20%~60%血清浓度细胞形态基本正常。（3）0%、80%和100%血清浓度在培养的8 d内I型胶原浓度一直比较低,40%血清浓度I型胶原浓度最高。培养的第2天,各浓度组的Ⅲ胶原均有增加,后有所下降,6~8 d时又再次上升。各组血清浓度组的L929细胞在不同培养时间羟脯氨酸浓度变化不大。结论：20%~40%血清浓度最适合成纤维细胞的生长,增殖和胶原分泌,血清浓度过高或过低都会引起细胞增殖率下降、细胞凋亡、空泡化和胶原的分泌减少,自体血清注射时采用合适的血清浓度可能会取得更好的效果。 展开更多

关键词 小鼠L929成纤维细胞 细胞增殖 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原 羟脯氨酸

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MTT法检测钛酸钡涂层对小鼠成纤维细胞L929增殖率的影响 被引量：5

7

作者 郭晓瑨 吴文慧 +2 位作者 刘静亚 胡大艳 陈乃玲 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期615-619,共5页

目的:探索纯钛烤瓷冠中钛酸钡涂层对小鼠成纤维细胞L929形态及增殖率的影响,并评价其细胞毒性分级。方法:以含钛酸钡涂层的钛瓷试件、常规钛瓷试件的浸提液体外培养小鼠成纤维细胞1、3、5 d,并以含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基为阴性... 目的:探索纯钛烤瓷冠中钛酸钡涂层对小鼠成纤维细胞L929形态及增殖率的影响,并评价其细胞毒性分级。方法:以含钛酸钡涂层的钛瓷试件、常规钛瓷试件的浸提液体外培养小鼠成纤维细胞1、3、5 d,并以含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基为阴性对照组,1%苯酚溶液为阳性对照组,采用MTT法检测试件浸提液对小鼠成纤维细胞L929增殖率的影响。结果:含钛酸钡涂层的钛瓷结合试件浸提液培养的小鼠成纤维细胞L929形态正常,生长旺盛;钛酸钡涂层组吸光度值大于阴性对照组(P<0.05),含钛酸钡涂层的纯钛试件浸提液的细胞毒性分级为0级。结论:含钛酸钡涂层的钛瓷结合试件有良好的细胞相容性。 展开更多

关键词 钛酸钡涂层 MTT法 小鼠成纤维细胞L929

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利用CRISPR/Cas9技术构建Quaking敲除的小鼠胚胎成纤维细胞株

8

作者 高登科 马白荣 +5 位作者 郭怡莹 刘薇 刘田 靳亚平 江舟 陈华涛 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期65-72,共8页

【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)Quaking基因敲除细胞株,并检测Quaking基因对NIH3T3细胞增殖能力的影响。【方法】首先,利用在线网站设计两条靶向作用于Quaking外显子的sgRNA,成功构建了两个分别靶向Quakin... 【目的】利用CRISPR/Cas9技术构建小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)Quaking基因敲除细胞株,并检测Quaking基因对NIH3T3细胞增殖能力的影响。【方法】首先,利用在线网站设计两条靶向作用于Quaking外显子的sgRNA,成功构建了两个分别靶向Quaking基因第1、第2外显子的CRISPR/Cas9重组慢病毒质粒。将构建的Quaking基因CRISPR/Cas9重组慢病毒载体和pcDNA3.1-Quaking过表达质粒共转染至HEK293T细胞中,通过Western blot实验检测Quaking蛋白的敲除效率。其次,将筛选得到的敲除效率高的重组慢病毒质粒(LentiCRISPRv2-sgRNA1)与辅助包装质粒共转染入HEK293T细胞进行慢病毒包装,慢病毒转导NIH3T3细胞后,利用嘌呤霉素筛选阳性单克隆细胞株。最后,通过Western blot及免疫荧光染色鉴定敲除效果。【结果】发现Quaking蛋白在该细胞株中不表达,并测序证实了发生片段敲除。CCK8检测发现,Quaking基因敲除显著抑制了NIH3T3细胞的增殖能力。【结论】本研究首次通过CRISPR/Cas9技术成功构建了小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)Quaking基因敲除细胞株,为后续研究Quaking基因在小鼠生理功能调节中的作用机制提供了体外模型基础。 展开更多

关键词 Quaking CRISPR/Cas9 小鼠胚胎成纤维细胞 基因敲除

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4种典型纳米材料对小鼠胚胎成纤维细胞毒性的初步研究 被引量：29

9

作者 杨辉 杨丹凤 +4 位作者 张华山 张伟 刘焕亮 刘超 袭著革 《生态毒理学报》 CAS CSCD 2007年第4期427-434,共8页

为探讨不同种类纳米材料对原代培养小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryo fibroblasts,MEF)的毒性效应及作用机制,选择4种典型的纳米材料(纳米碳、单壁碳纳米管、纳米氧化锌、纳米二氧化硅)制备颗粒悬液,设立5个剂量组(5、10、20、50、100μ... 为探讨不同种类纳米材料对原代培养小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryo fibroblasts,MEF)的毒性效应及作用机制,选择4种典型的纳米材料(纳米碳、单壁碳纳米管、纳米氧化锌、纳米二氧化硅)制备颗粒悬液,设立5个剂量组(5、10、20、50、100μg·mL-1)对BALB/c小鼠MEF细胞进行24、48、72h染毒培养,利用细胞形态学观察和噻唑蓝实验(MTT比色法)检测上述4种纳米材料对MEF细胞活性的影响,同时,测定染毒24h后细胞培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性以探讨纳米颗粒对细胞膜完整性的影响.结果显示:1)4种纳米材料均能明显影响MEF细胞的生长形态.染毒24h后,MEF细胞发生不同程度的回缩变形,细胞间隙增大,排列稀疏,胞内颗粒物增多,细胞透明度下降.2)纳米碳、纳米氧化锌、纳米二氧化硅对MEF细胞增殖的抑制作用和对细胞膜完整性的损伤作用均随染毒剂量的升高而增强,具有明显的剂量-效应关系,其半数致死浓度(24h-IC50)分别为21.85、21.94、461.10μg·mL-1;碳纳米管组的剂量-效应之间不呈对数线性关系,未能得出其24h-IC50.3)在不同染毒剂量水平上,4种纳米材料的毒性对比差异显著:低剂量水平上纳米碳与碳纳米管的毒性强于纳米氧化锌和纳米二氧化硅,随着剂量的升高纳米氧化锌的细胞毒性升高最为显著.结果提示,纳米材料能够对MEF细胞造成毒性损伤,破坏细胞膜的完整性可能只是作用途径之一;纳米材料的毒性可能受粒径、形状、化学组成等许多因素的影响. 展开更多

关键词 纳米材料 小鼠胚胎成纤维细胞 细胞毒性 纳米碳 单壁碳纳米管 纳米氧化锌 纳米二氧化硅

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^(137)Cs γ-射线诱导小鼠胚胎成纤维细胞衰老模型的建立 被引量：4

10

作者 路璐 黄颂 +4 位作者 李德冠 张俊伶 邢永华 李程程 孟爱民 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期87-89,共3页

随着老龄人口的增加，各种老年疾病随之而来，如何延缓衰老已经成为世界各国学者研究的热点。研究衰老机制，建立衰老模型尤为必要。有学者根据衰老的自由基理论，利用一定剂量的1射线照射建立衰老模型[1-5]，但检测的衰老相关指标较少... 随着老龄人口的增加，各种老年疾病随之而来，如何延缓衰老已经成为世界各国学者研究的热点。研究衰老机制，建立衰老模型尤为必要。有学者根据衰老的自由基理论，利用一定剂量的1射线照射建立衰老模型[1-5]，但检测的衰老相关指标较少。为此采用^137Csγ射线照射小鼠胚胎成纤维细胞（mouse embryo fibroblast，MEF），探讨衰老模型的建立。 展开更多

关键词 Γ射线 小鼠胚胎成纤维细胞 衰老

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小鼠胚胎成纤维细胞分离培养研究 被引量：5

11

作者 庄淑珍 吕芳 +1 位作者 潘巍 张富春 《新疆农业科学》 CAS CSCD 2007年第6期729-733,共5页

为探索实验室影响小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）分离和培养的因素,取昆明白小鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对不同胎龄、不同血清浓度、不同胰蛋白酶浓度和作用时间对MEF分离及培养的影响进行研究,观察MEF的生长形态及其生物学... 为探索实验室影响小鼠胚胎成纤维细胞（MEF）分离和培养的因素,取昆明白小鼠胚胎分离成纤维细胞,利用体外培养体系,对不同胎龄、不同血清浓度、不同胰蛋白酶浓度和作用时间对MEF分离及培养的影响进行研究,观察MEF的生长形态及其生物学特性。结果表明,在实验室条件下,12.5-14.5 d胎龄的小鼠胎儿MEF分离效果最好;最佳培养基为DMEM添加15%小牛血清;第3代细胞增殖最旺盛;室温条件下,0.125%胰蛋白酶消化MEF时间以8-10 min为宜。在培养ES细胞时,应选择第3-5代的MEF作为饲养层细胞。研究获得了可在实验室分离制备MEF的方法,为实验室进一步分离培养ES细胞奠定基础。 展开更多

关键词 小鼠胚胎成纤维细胞 分离 培养 生物学特性

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钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ对热休克小鼠胚胎成纤维细胞HSP70表达的影响 被引量：3

12

作者 孙琪 丛霞 +5 位作者 索佳佳 曹荣峰 姜忠玲 崔凯 高善颂 田文儒 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2012年第4期213-217,共5页

为证实热休克小鼠胎儿成纤维细胞中钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)对热休克蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)基因表达的影响及其作用机理,将体外培养的小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse Emb... 为证实热休克小鼠胎儿成纤维细胞中钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)对热休克蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)基因表达的影响及其作用机理,将体外培养的小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse Embryonic Fibroblasts,MEF)随机分为39℃和41℃热处理组(分别处理0.5,1,1.5,2 h)和常温对照组(37℃),测定各组细胞CaMKⅡ和HSF1 mRNA的量。此外,将培养的细胞分为37℃和39℃CaMKⅡ特异性抑制剂(myr-AIP)处理组和相应的空白对照组,分别测定各组细胞HSP70、HSF1及其mRNA的量。结果表明,39℃热休克1 h后HSF1和CaMKⅡ的mRNA表达量极显著高于常温对照组,经过myr-AIP处理的39℃组细胞HSP70及其mR-NA含量显著低于39℃空白对照组,而37℃myr-AIP处理组与37℃对照组没有显著差异;myr-AIP对37℃组和39℃组的HSF1 mRNA和蛋白含量影响均不显著,却使p-HSF1的含量显著降低。热休克能增加CaMKⅡ和HSF1 mRNA的转录,且CaMKⅡ通过磷酸化HSF1促进HSP70基因表达。 展开更多

关键词 热休克反应 HSP70 CAMK Ⅱ HSF1 小鼠胎儿成纤维细胞

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小鼠胚胎成纤维细胞对Lewis肺癌细胞增殖及凋亡的影响 被引量：2

13

作者 耿智敏 姬乐 +1 位作者 郑见宝 王林 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期286-289,共4页

目的探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性。方法原代培养MEF并经细胞免疫组化法鉴定α-SMA的表达情况;收集培养48h无血清高糖DMEM培养基上清并制备条件培养基MEF-CM,根据实验中Lewis肺癌细胞(LLC)... 目的探讨小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)是否具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性。方法原代培养MEF并经细胞免疫组化法鉴定α-SMA的表达情况;收集培养48h无血清高糖DMEM培养基上清并制备条件培养基MEF-CM,根据实验中Lewis肺癌细胞(LLC)细胞培养基不同,分为MEF条件培养基组、DMEM组,应用MTT法检测不同培养基对LLC增殖率的影响;再根据5-Fu作用与否,进一步应用流式细胞仪检测不同培养基对LLC凋亡的影响。结果成功获得原代培养的MEF,表达α-SMA;MEF-CM较DMEM能够明显促进LLC细胞增殖(P<0.05);MEF-CM较DMEM能够明显抑制LLC细胞凋亡,并能够明显拮抗5-Fu的肿瘤杀伤作用(P<0.05)。结论 MEF是一种活化的成纤维细胞,具有肿瘤相关成纤维细胞相似的生物学活性,有促进LLC增殖及抑制凋亡的作用,可以作为肿瘤相关成纤维细胞用于肿瘤微环境的研究。 展开更多

关键词 小鼠胚胎成纤维细胞 LEWIS肺癌细胞 肿瘤微环境 肿瘤相关成纤维细胞 细胞增殖 细胞凋亡 细胞培养

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罗格列酮与全反式维甲酸诱导小鼠胚胎成纤维细胞定向骨分化研究 被引量：1

14

作者 王涵 邵英 +6 位作者 朱茄慧 廖云鹏 马妍 任文艳 周林云 吴柯 何百成 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期1384-1391,共8页

目的探讨罗格列酮(RSG)与全反式维甲酸(ATRA)对干细胞定向骨分化的影响,并初步解析这一作用的可能分子机制。方法通过定量PCR、组织化学染色及Western blot等方法,检测相关成骨与成脂分化标志物的变化情况;利用荧光素酶报告质粒,检测Ru... 目的探讨罗格列酮(RSG)与全反式维甲酸(ATRA)对干细胞定向骨分化的影响,并初步解析这一作用的可能分子机制。方法通过定量PCR、组织化学染色及Western blot等方法,检测相关成骨与成脂分化标志物的变化情况;利用荧光素酶报告质粒,检测Runx2的转录水平以及BMP/Smad信号的激活情况。结果在C2C12、C3H10T1/2和MEFs中,PPARγ以及RAR和RXR各亚型受体均有表达。单独使用RSG或ATRA均能增加MEFs细胞中碱性磷酸酶(ALP)的活性,且RSG能明显增加ATRA所诱导的ALP活性。RSG或ATRA单独应用不能诱导钙盐沉积,两者合用不但增加OPN和OCN的表达,而且还诱导钙盐沉积。RSG可诱导脂滴生成,ATRA不能诱导脂滴生成,且抑制RSG促进脂滴生成的作用。RSG在MEFs中促进C/EBPα表达,但ATRA能抑制RSG的这种作用。ATRA与RSG合用可促进MEFs中Runx2的蛋白表达。同时,ATRA与RSG合用增加了MEFs中BMP/Smad的转录和Smad1/5/8的磷酸化水平,同时也增加了Smad6的mRNA表达,但对Samd7的mRNA表达有抑制作用。结论RSG与ATRA合用能诱导MEFs定向骨分化,该作用可能与ATRA抑制RSG诱导的成脂分化,并增加BMP/Smad信号转导活性有关。 展开更多

关键词 罗格列酮 全反式维甲酸 小鼠胚胎成纤维细胞 成脂分化 成骨分化 BMP/Smad信号

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蛋白磷酸酶2A催化亚基α在小鼠胚胎成纤维细胞迁移中的作用研究 被引量：1

15

作者 王庆华 王生存 +4 位作者 李斌 刘春 吴刘成 王旭 邵义祥 《动物医学进展》 北大核心 2016年第6期49-54,共6页

利用体外基因敲除技术检测小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)周期和迁移能力的变化,探究蛋白磷酸酶2A的Cα亚基在MEFs细胞迁移过程中的作用。用Cαfl/fl的纯合子雄鼠与雌鼠1∶2配对,取E12.5d的胚胎制作小鼠胚胎成... 利用体外基因敲除技术检测小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)周期和迁移能力的变化,探究蛋白磷酸酶2A的Cα亚基在MEFs细胞迁移过程中的作用。用Cαfl/fl的纯合子雄鼠与雌鼠1∶2配对,取E12.5d的胚胎制作小鼠胚胎成纤维细胞。利用表达Cre重组酶(Ad-Cre-EGFP)以及GFP荧光蛋白(Ad-EGFP)的腺病毒载体,对P3代MEFs进行感染,分别用PCR,RT-PCR和Western blot方法进行基因型鉴定。同时利用流式分选技术检测感染后MEFs的细胞周期的变化,利用细胞划痕试验检测了其细胞迁移能力的变化。结果显示,胰酶消化的方法成功获得了小鼠胚胎成纤维细胞,DNA,RNA和蛋白水平的鉴定获得了3对3的野生型和基因敲除MEFs。流式分选发现Ad-Cre处理的MEFs与Ad-EGFP处理的MEFs相比,处于G2期的细胞比例为30.8%±2.57%,高于Ad-EGFP MEFs的23.9%±2.46%,并且细胞碎片的比例也远高于后者。划痕试验表明,Cα亚基缺失后细胞迁移能力下降,12h就显著低于对照组。结果表明,腺病毒携带的Cre重组酶能够在体外有效地敲除掉MEFs中的蛋白磷酸酶2A的Cα亚基,PP2ACα亚基的缺失会导致MEFs细胞周期倾向于阻滞在G2期,并会降低细胞迁移的能力。 展开更多

关键词 蛋白磷酸酶2A 小鼠胚胎成纤维细胞 细胞迁移 细胞周期

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HP1α在Zmpste24-缺陷早老小鼠胚胎成纤维细胞中表达和磷酸化水平升高 被引量：1

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作者 刘佳 周光前 +5 位作者 尹献辉 刘宝华 郑慧玲 李雪芹 王优雅 王子梅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期624-629,共6页

本实验旨在研究异染色质蛋白1(heterochromatin protein 1,HP1)在Zmpste24基因敲除早老小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)中的表达量和磷酸化水平,探索异染色质功能异常与早老发病机制的内在联系.首先取雄雌Zmpste2... 本实验旨在研究异染色质蛋白1(heterochromatin protein 1,HP1)在Zmpste24基因敲除早老小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)中的表达量和磷酸化水平,探索异染色质功能异常与早老发病机制的内在联系.首先取雄雌Zmpste24杂合子小鼠胚胎,原代培养MEFs;分别用PCR和Western印迹检测MEFs基因型和A型核纤层蛋白(laminA)表达以区分野生型与Zmpste24-缺陷型早老细胞;用与衰老相关的β-半乳糖苷酶染色法(senescence associated-β-galactosidase assay,SA-β-gal)确定早老细胞出现衰老表型的传代数.用Western印迹和phos-tagWestern印迹分别检测HP1在Zmpste24+/+和Zmpste24-/-MEFs中表达量和磷酸化水平的差异.实验结果显示,Zmpste24-/-MEFs中存在异常的LaminA,且在传代培养第5代出现明显的细胞衰老现象.选用培养至第3代或第4代的MEFs细胞进行下述实验发现,Zmpste24-/-MEFs中HP1α表达量明显高于Zmpste24+/+MEFs,而HP1β未发现明显升高;Zmpste24+/+MEFs中HP1α以非磷酸化状态为主,但在Zmpste24-/-MEFs中磷酸化HP1α比例明显升高;2种细胞中均未检测到磷酸化HP1β.本研究结果证明,HP1α在Zmpste24-缺陷型早老小鼠传代早期MEFs中的表达量和磷酸化水平均有升高,提示HP1α参与A型核纤层蛋白相关的早老小鼠发病机制. 展开更多

关键词 异染色质蛋白1(HP1) A型核纤层蛋白 早老症 小鼠胚胎成纤维细胞 蛋白质磷酸化

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HCMV体外感染小鼠胚胎成纤维细胞的研究 被引量：1

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作者 吉阳 任鹏 +1 位作者 陈敬贤 王明丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2013年第3期215-219,共5页

目的观察人巨细胞病毒(HCMV)AD169株体外感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的生物学特征,为探讨HCMVAD169株能跨种属感染MEF提供依据。方法将100TCID50HCMV AD169株病毒悬液接种至MEF和人胚胎成纤维细胞(HF)上,逐日观察HCMV特征性细胞病变效... 目的观察人巨细胞病毒(HCMV)AD169株体外感染小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的生物学特征,为探讨HCMVAD169株能跨种属感染MEF提供依据。方法将100TCID50HCMV AD169株病毒悬液接种至MEF和人胚胎成纤维细胞(HF)上,逐日观察HCMV特征性细胞病变效应(CPE);分别收集感染后1、3、5 d的MEF和HF培养物,提取细胞DNA,采用实时荧光定量PCR检测HCMV立即早期基因(IE)拷贝数变化;分别采用HCMV立即早期基因(IE-1)、主要衣壳蛋白(MCP)和包膜糖蛋白(gB)单克隆抗体进行间接免疫荧光实验检测感染后的1、3、5 d MEF和HF中相应病毒蛋白的表达。结果观察到HCMV AD169株接种MEF出现病毒所致CPE,与HF出现的CPE相似;实时荧光定量PCR检测HCMV IE基因拷贝数发现,MEF在HCMVAD169感染后的1、3、5 d,病毒基因拷贝数呈增长趋势,但均低于相同时间点的HF中病毒拷贝数;间接免疫荧光检测HCMV感染MEF和HF后1、3、5 d HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达情况时发现,在MEF上HCMV IE-1、MCP和gB蛋白表达随时间延长呈增强趋势。结论 HCMV AD169株可以体外感染MEF,并在其中复制增殖。 展开更多

关键词 人巨细胞病毒 小鼠胚胎成纤维细胞 跨种属感染

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小鼠胎儿成纤维细胞的冷冻保存研究 被引量：1

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作者 王英泽 刘辉哲 王莉 《河北科技大学学报》 CAS 2007年第4期310-313,共4页

为了摸索小鼠胎儿成纤维细胞冷冻保存的简易方法，采用常规冷冻和玻璃化冷冻2种模式，探讨了不同的冷冻方法、不同的冷冻前平衡时间、不同的冷冻保护液的配比等因素对成纤维细胞冷冻效果的影响。实验结果表明：常规冷冻采用含100,4（体... 为了摸索小鼠胎儿成纤维细胞冷冻保存的简易方法，采用常规冷冻和玻璃化冷冻2种模式，探讨了不同的冷冻方法、不同的冷冻前平衡时间、不同的冷冻保护液的配比等因素对成纤维细胞冷冻效果的影响。实验结果表明：常规冷冻采用含100,4（体积分数）甘油的DMEM液作保护剂，可将0～5℃下平衡时间缩短至45～60min，细胞活力可达0．87。玻璃化冷冻采用10％（体积分数）NBS＋1．8mol／L乙二醇＋0．1mol／L蔗糖的PBS冷冻小鼠胎儿成纤维细胞效果好于其他组合，细胞活力可达到0．86。玻璃化冷冻法与常规冷冻法的冷冻效果差异不显著。 展开更多

关键词 小鼠胎儿成纤维细胞 冷冻保存 玻璃化冷冻

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小鼠骨髓间充质干细胞、骨髓单核细胞和胚胎成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞的效率比较

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作者 王尧 王雷 +4 位作者 陆玉华 范向军 朱铭岩 朱沙俊 王志伟 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1304-1311,共8页

目的比较小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)、小鼠骨髓单核细胞(BM-MNCs)和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程为诱导性多能干细胞(iPS细胞)的效率。方法用慢病毒LV-ef1a-mOct4-IRES-EGFP、LV-ef1amSox2-IRES-EGFP、LV-ef1a-mKlf4-IRES-EGFP和LV... 目的比较小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)、小鼠骨髓单核细胞(BM-MNCs)和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程为诱导性多能干细胞(iPS细胞)的效率。方法用慢病毒LV-ef1a-mOct4-IRES-EGFP、LV-ef1amSox2-IRES-EGFP、LV-ef1a-mKlf4-IRES-EGFP和LV-ef1a-mc-Myc-IRES-EGFP感染BMSCs、BMMNCs和MEFs,通过计算碱性磷酸酶染色阳性克隆数比较这3种细胞重编程为iPS细胞的效率。用胚胎干细胞表面标记检测、胚胎干细胞内源基因检测、拟胚体形成实验和畸胎瘤形成实验验证重编程获得的iPS细胞的多能性。结果起源于小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs的3种iPS细胞均能形成边缘光整的致密克隆,可表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在体内外分化为三胚层组织。但是BMSCs来源的碱性磷酸酶阳性克隆数低于BM-MNCs和MEFs来源的克隆数。结论小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs均可重编程为iPS细胞,但BMSCs重编程为iPS细胞的效率低于BM-MNCs和MEFs。 展开更多

关键词 诱导性多潜能干细胞 重编程效率 骨髓间充质干细胞 骨髓单核细胞 小鼠胚胎成纤维细胞

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羊栖菜多糖对小鼠胎儿成纤维细胞生长、增殖及代谢的影响

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作者 安立龙 张土保 +3 位作者 吴凌锋 苑麟勇 胡洋 徐汉进 《饲料工业》 北大核心 2010年第24期39-44,共6页

用含5、10、204、0、80 mg/l羊栖菜多糖(SFPS)的培养液培养小鼠胎儿成纤维细胞(MEF),研究SFPS对MEF生长增殖、营养物质吸收利用和细胞因子分泌的影响。结果表明:5、10、20 mg/lSFPS对MEF形态和生长增殖均无显著影响(P>0.05),40、80 m... 用含5、10、204、0、80 mg/l羊栖菜多糖(SFPS)的培养液培养小鼠胎儿成纤维细胞(MEF),研究SFPS对MEF生长增殖、营养物质吸收利用和细胞因子分泌的影响。结果表明:5、10、20 mg/lSFPS对MEF形态和生长增殖均无显著影响(P>0.05),40、80 mg/l SFPS对MEF表现出明显的抑制作用(P<0.05),使MEF突触分叉,细胞内颗粒增多;SFPS可显著促进MEF对葡萄糖的摄取利用(P<0.05),但对钙和氨基酸的利用无显著影响(P>0.05);低浓度SFPS有促进MEF碱性成纤维细胞因子(bFGF)、干细胞生长因子(SCF)、白血病抑制因子(LIF)分泌的趋势,但高浓度SFPS对bFGF、SCF和LIF的分泌无显著影响。 展开更多

关键词 羊栖菜多糖 小鼠胎儿成纤维细胞 增殖 细胞因子

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