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无乳链球菌与小鼠巨噬细胞互作转录组测序分析
1
作者 杨岚 张永安 周洋 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期307-315,共9页
巨噬细胞是先天性免疫系统的重要组成部分,但无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)却能在巨噬细胞内存活并以巨噬细胞为载体入侵中枢神经系统。为解析无乳链球菌在巨噬细胞内的存活机制,将无乳链球菌HN016与RAW264.7共孵育,提取胞内细... 巨噬细胞是先天性免疫系统的重要组成部分,但无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)却能在巨噬细胞内存活并以巨噬细胞为载体入侵中枢神经系统。为解析无乳链球菌在巨噬细胞内的存活机制,将无乳链球菌HN016与RAW264.7共孵育,提取胞内细菌RNA后进行转录组测序(RNA-seq)、Gene Ontology(GO)及Kyoto encyclopedia of genes and genomes(KEGG)富集分析;于体外将HN016与罗非鱼原代巨噬细胞孵育,提取胞内细菌RNA,并利用quantitative real-time PCR(qPCR)验证目标基因(包括:sip、fbsA、cylB、cylD、cylE、neuA、cpsB和cfb)表达情况。结果显示,与无处理组相比,共筛选到1 215个差异表达基因(DEG),其中896个上调基因,319个下调基因。GO富集结果显示,DEG在分子功能、生物学过程和细胞组分3大类中均显著富集。KEGG富集结果显示,显著富集通路主要为ABC转运体、核糖体和群体感应等代谢途径。在DEG中,筛选到无乳链球菌毒力相关基因27个,包括fbsA(+8.65)、sip(+6.28)、cylD(+4.93)和cfb(-4.65)等,并利用qPCR验证RNA-seq结果,二者数据一致。而检测罗非鱼原代巨噬细胞内存活细菌的转录水平发现其目标基因的表达水平与小鼠巨噬细胞的相似。因此推测,无乳链球菌在被巨噬细胞吞入后,巨噬细胞内的有害环境增强了无乳链球菌的信号传导机制,刺激了无乳链球菌的能量运输和对巨噬细胞所产生的次生代谢物代谢的能力,并且提高了毒力相关基因的表达水平。 展开更多
关键词 无乳链球菌 小鼠巨噬细胞RAW264.7 胞内存活 次生代谢物
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核糖体蛋白RPS2对刚地弓形虫体外侵入小鼠巨噬细胞Ana-1功能的影响
2
作者 杨晨晨 齐玮瑜 +3 位作者 王晓娟 姜宇宸 李相辰 张莉 《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2024年第11期1174-1182,共9页
为研究刚地弓形虫核糖体蛋白RPS2(TgRPS2)对弓形虫侵入小鼠巨噬细胞Ana-1功能的影响,本研究采用系列分子生物学软件分析TgRPS2的生物信息学,通过PCR从弓形虫中扩增TgRPS2基因构建重组表达质粒pET32a-TgRPS2,经双酶切和测序鉴定正确后与p... 为研究刚地弓形虫核糖体蛋白RPS2(TgRPS2)对弓形虫侵入小鼠巨噬细胞Ana-1功能的影响,本研究采用系列分子生物学软件分析TgRPS2的生物信息学,通过PCR从弓形虫中扩增TgRPS2基因构建重组表达质粒pET32a-TgRPS2,经双酶切和测序鉴定正确后与pET-32a分别转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后采用镍柱亲和层析法纯化表达的重组TgRPS2蛋白(r TgRPS2)和空载体蛋白,采用SDS-PAGE检测两种蛋白的表达及纯化效果并经BCA法测定两种纯化蛋白的浓度。将r TgRPS2以300μg的剂量免疫小鼠6次,制备TgRPS2多克隆抗体(PAb),采用western blot鉴定r TgRPS2与弓形虫抗体、弓形虫可溶性蛋白与rTgRPS2 PAb的反应性。结果显示,分别在47.3 ku及18 ku处出现目的蛋白和空载体蛋白条带,且目的蛋白主要以包涵体的形式表达,空载体蛋白以上清形式表达,纯化后二者在相应位置均出现单一目的条带,测得rTgRPS2及空载体蛋白的浓度分别为1 949.54μg/mL和2 827.15μg/mL。Western blot结果显示,rTgRPS2能够与兔源弓形虫PAb反应,rTgRPS2 PAb也可以与弓形虫可溶性蛋白反应。将20μg/mL及不同浓度的rTgRPS2分别与小鼠巨噬细胞Ana-1共培养后,采用间接免疫荧光试验(IFA)检测rTgRPS2与小鼠巨噬细胞Ana-1的结合;利用CCK-8试剂盒及流式细胞术分别检测不同浓度rTgRPS2对巨噬细胞增殖能力、吞噬能力及凋亡的影响,利用ELISA检测各组巨噬细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6、IL-10和转化生长因子β1(TGF-β1)的分泌水平,利用试剂盒检测各组巨噬细胞NO的含量。结果显示,rTgRPS2能够与小鼠巨噬细胞紧密结合,在细胞质中出现红色荧光,而阴性对照及Mock组细胞均无红色荧光。不同浓度的rTgRPS2对巨噬细胞的增殖均无影响。与空载蛋白对照组相比,不同浓度rTgRPS2作用后巨噬细胞Ana-1的吞噬能力均极显著增强(P<0.001);10μg/mL~40μg/mL的rTgRPS2作用后,巨噬细胞Ana-1的凋亡率均极显著升高(P<0.01、P<0.001);不同浓度的r TgRPS2作用后巨噬细胞中促炎细胞因子TNF-α的分泌水平显著和极显著升高(P<0.05、P<0.001),但促炎细胞因子IL-6的分泌水平无显著变化;5μg/mL和10μg/mL的rTgRPS2作用后巨噬细胞中抑炎细胞因子TGF-β1的分泌水平显著和极显著下降(P<0.05、P<0.01);40μg/mL和80μg/mL的rTgRPS2作用后巨噬细胞中抑炎细胞因子IL-10的分泌水平极显著升高(P<0.001);40μg/mL和80μg/mL的rTgRPS2作用后巨噬细胞中总NO的含量显著和极显著升高(P<0.05、P<0.01)。上述研究结果首次证实rTgRPS2有较强的反应原性,能够与巨噬细胞结合,促进巨噬细胞的吞噬能力与凋亡,并通过多种方式双向调节巨噬细胞的炎症反应及免疫应答方式。本研究为探究弓形虫体内感染巨噬细胞的免疫反应机制奠定基础,也为弓形虫疫苗抗原的筛选、亚单位疫苗的研制提供参考依据。 展开更多
关键词 刚地弓形虫 核糖体RPS2蛋白 原核表达 小鼠巨噬细胞 免疫功能
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胸腺基质淋巴细胞生成素对小鼠巨噬细胞抗原提呈功能及炎性分泌功能的影响 被引量：7
3
作者 林静 王磊 +2 位作者 苏又苏 方红成 李大主 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1063-1067,共5页
目的:研究胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对小鼠巨噬细胞抗原提呈能力及炎性分泌功能的影响和可能作用机制。方法:分离野生型C57B小鼠及TSLPR基因敲除(TSLPR-/-)C57B小鼠腹腔巨噬细胞,给予TSLP进行刺激。采用流式细胞术检测巨噬细胞MHCⅡ... 目的:研究胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)对小鼠巨噬细胞抗原提呈能力及炎性分泌功能的影响和可能作用机制。方法:分离野生型C57B小鼠及TSLPR基因敲除(TSLPR-/-)C57B小鼠腹腔巨噬细胞,给予TSLP进行刺激。采用流式细胞术检测巨噬细胞MHCⅡ、CD86的表达;采用实时定量PCR以及ELISA方法检测小鼠巨噬细胞内以及培养上清液炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-10的表达。结果:与野生型对照组比较,野生型实验组小鼠巨噬细胞表面抗原提呈分子(MHCⅡ,CD86)表达明显升高,炎症因子MCP-1和TNF-α表达及分泌均增高,IL-10表达及分泌无明显变化;与TSLPR基因敲除对照组相比较,TSLPR基因敲除小鼠巨噬细胞经TSLP刺激后细胞表面抗原提呈分子(MHCⅡ,CD86)表达及炎症因子MCP-1、TNF-α和IL-10的表达及分泌均无明显变化;与野生型实验组相比较,TSLPR基因敲除可明显抑制TSLP诱导的小鼠巨噬细胞抗原提呈分子增加以及炎症因子表达。结论:TSLP可通过与TSLPR结合促进小鼠巨噬细胞活化,增加巨噬细胞抗原递呈能力,产生炎症因子,促使小鼠巨噬细胞向促炎巨噬细胞表型M1型转化。 展开更多
关键词 TSLP TSLPR基因敲除 小鼠巨噬细胞 抗原提呈能力 炎症因子
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半叶马尾藻多糖对辐射损伤小鼠巨噬细胞功能和胸腺细胞周期进程的影响 被引量：10
4
作者 孟庆勇 刘志辉 郑辉 《辐射防护》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期211-215,222,共6页
通过研究小鼠胸腺细胞周期进程、巨噬细胞吞饮和分泌功能的变化,探讨半叶马尾藻多糖(SHP)对辐射损伤小鼠胸腺细胞和巨噬细胞的影响。利用常规方法和流式细胞术分别检测小鼠巨噬细胞的功能和胸腺细胞周期进程。结果发现给予小鼠5Gy60Co... 通过研究小鼠胸腺细胞周期进程、巨噬细胞吞饮和分泌功能的变化,探讨半叶马尾藻多糖(SHP)对辐射损伤小鼠胸腺细胞和巨噬细胞的影响。利用常规方法和流式细胞术分别检测小鼠巨噬细胞的功能和胸腺细胞周期进程。结果发现给予小鼠5Gy60Coγ射线单次全身照射(剂量率为0.673Gy/min),小鼠巨噬细胞吞饮功能显著低于正常对照组。但是,在照射前给予SHP(10mg/kg～40mg/kg)组的小鼠巨噬细胞吞饮功能明显高于单纯照射组,小鼠巨噬细胞IL1分泌功能SHP(20mg/kg～40mg/kg)加照射组也显著高于单纯照射组。5Gy照射引起小鼠胸腺G0/G1期细胞百分率增高,S期和G2/M期细胞百分率减少,SHP(20mg/kg～40mg/kg)可以有效抑制辐射损伤小鼠胸腺G0/G1期阻滞和G2/M期细胞百分率下降,SHP(10mg/kg～40mg/kg)也能够预防辐射损伤小鼠S期胸腺细胞百分率的下降。说明SHP对辐射损伤小鼠胸腺细胞和巨噬细胞有保护作用。 展开更多
关键词 辐射损伤 细胞周期 马尾藻 进程 细胞功能 多糖 ^60Coγ射线 小鼠巨噬细胞 胸腺细胞 分泌功能 流式细胞术 G1期阻滞 百分率 常规方法 全身照射 IL-1 保护作用 胞吞 剂量率 SHP 单纯 M期 G2 S期 下降
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芹菜素抑制脂多糖诱导小鼠巨噬细胞分泌炎症介质的分子机制 被引量：5
5
作者 吴广 符平 +1 位作者 周玉生 周润梅 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期753-757,共5页
目的:观察芹菜素对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞分泌炎症介质的影响,并探讨其分子机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7,用不同浓度的芹菜素处理后,加入LPS刺激。Western blot检测血红素氧合酶-1(HO-1)、环氧化酶-2(COX-2)、诱导... 目的:观察芹菜素对脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞分泌炎症介质的影响,并探讨其分子机制。方法:体外培养小鼠巨噬细胞RAW 264.7,用不同浓度的芹菜素处理后,加入LPS刺激。Western blot检测血红素氧合酶-1(HO-1)、环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合成酶(i NOS)的表达以及p38和IκB的磷酸化;比色法检测亚硝酸盐和硝酸盐(NOx)的含量;ELISA检测PGE2的产生;报告基因分析芹菜素对NF-κB激活的影响。结果:芹菜素可显著诱导RAW 264.7细胞表达HO-1,采用p38抑制剂SB203580预处理细胞后,可抑制芹菜素诱导的HO-1表达;同时,芹菜素能降低胞浆内核转录因子Nrf2含量,并增高其在细胞核内水平;采用si RNA干扰Nrf2表达后,HO-1表达量降低。此外,芹菜素也能抑制LPS诱导RAW264.7细胞产生NOx和PGE2,下调COX-2和i NOS表达,以及抑制IκB磷酸化和NF-κB激活。而用HO-1 si RNA转染后,能在一定程度上抑制芹菜素的上述效应。结论:芹菜素可能通过诱导HO-1表达、抑制NF-κB的激活而发挥抗炎症作用。 展开更多
关键词 芹菜素 血红素氧合酶-1 小鼠巨噬细胞
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牙周炎患者自身组织核酸刺激小鼠巨噬细胞后对破骨相关因子mRNA表达的影响 被引量：2
6
作者 丁子清 申玉芹 +4 位作者 周岳 刘引 高涵 于海蛟 林崇韬 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期192-196,共5页
目的检测牙周炎患者自身组织核酸刺激巨噬细胞后破骨相关因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-12(IL-12)p35、IL-12p40、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、活化T细胞核因子1(NFATc1)、核激活因子κB受体(RANK)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的... 目的检测牙周炎患者自身组织核酸刺激巨噬细胞后破骨相关因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-12(IL-12)p35、IL-12p40、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、活化T细胞核因子1(NFATc1)、核激活因子κB受体(RANK)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达,观察牙周炎患者自身组织核酸对巨噬细胞向破骨细胞分化的影响作用。方法采集翻瓣术中慢性牙周炎患者炎症牙周组织及正畸患者健康牙拔除术获取的健康牙周组织,提取组织总RNA逆转录cDNA。培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,加入质量浓度1μg·mL-1的特定序列寡核苷酸MT01共孵育3 h后(以1μg·mL-1的PBS作为对照),加入已提取的炎症牙周组织及健康牙周组织cDNA(质量浓度为1μg·mL-1)。实验分4组:健康组织cDNA,炎症组织cDNA,MT01+健康组织cDNA,MT01+炎症组织cDNA。4组细胞分别孵育3、6、12、24 h,采用实时定量聚合酶链反应法检测破骨相关因子IL-6、IL-12p35、IL-12p40、MMP-9、NFATc1、RANK及TNF-αmRNA的表达,进行两两组间比较。结果牙周炎患者自身组织核酸可上调RAW264.7破骨相关因子IL-6、IL-12p35、IL-12p40、MMP-9、NFATc1、RANK及TNF-αmRNA的表达;在免疫抑制剂MT01的作用下,牙周炎患者自身组织核酸上调RAW264.7内破骨相关因子mRNA的表达状况受到抑制。结论牙周炎患者自身组织核酸可以影响小鼠巨噬细胞向破骨细胞的分化。 展开更多
关键词 特定序列寡核苷酸MT01 牙周炎患者自身组织核酸 破骨相关因子 小鼠巨噬细胞
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杏鲍菇提取物对小鼠巨噬细胞免疫活性的研究 被引量：1
7
作者 樊铭聪 李文香 +2 位作者 胡欣蕾 孙亚男 于戈 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1210-1217,共8页
本文中以杏鲍菇子实体为原料,将杏鲍菇不同极性的提取物(PEs)对小鼠巨噬细胞Ana-1进行了免疫活性研究。将PEs作用于小鼠巨噬细胞Ana-1,通过MTT法测定其对Ana-1细胞增殖活性的影响,Elisa法测定Ana-1细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素... 本文中以杏鲍菇子实体为原料,将杏鲍菇不同极性的提取物(PEs)对小鼠巨噬细胞Ana-1进行了免疫活性研究。将PEs作用于小鼠巨噬细胞Ana-1,通过MTT法测定其对Ana-1细胞增殖活性的影响,Elisa法测定Ana-1细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)在不同提取物浓度和不同作用时间的分泌量变化情况,中性红法检测对细胞吞噬活性的影响,Elisa法测定Ana-1细胞表面膜蛋白Toll样受体(TLR2、TLR4)的表达量的变化情况。结果显示:杏鲍菇4种提取物(PEs)对小鼠巨噬细胞Ana-1有不同程度上的免疫刺激作用,甲醇提取物(PEM)表现出了最强的促进细胞增殖和促进细胞因子分泌的活性,在PEM质量浓度为12.5μg/m L的条件下,能够促进Ana-1细胞增殖作用最强,细胞因子TNF-α和IL-6均出现分泌高峰;但PEM对细胞因子分泌的作用时间不同,PEM作用于Ana-1细胞后,在12 h时出现TNF-α分泌高峰,而IL-6在24 h时出现分泌高峰。此外,PEM可以激活Ana-1,提高细胞吞噬活性,促进细胞表面膜蛋白受体TLR2、TLR4的表达。本研究结果表明了PEM能够通过促进巨噬细胞增殖、诱导细胞因子分泌和提高吞噬活性的方式实现免疫增强功能。 展开更多
关键词 杏鲍菇 不同极性提取物 小鼠巨噬细胞 免疫调节作用
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布鲁氏菌M5侵染小鼠巨噬细胞一氧化氮和非对称性二甲基精氨酸含量的测定 被引量：1
8
作者 刘朋涛 胡梦薇 +2 位作者 李建华 王文文 高剑峰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期149-153,共5页
本试验旨在研究布鲁氏菌侵染小鼠巨噬细胞过程中一氧化氮(NO)对布鲁氏菌的抑制作用,以及NO和非对称性二甲基精氨酸(ADMA)的相互作用关系。以布鲁氏菌标准疫苗株M5侵染小鼠巨噬细胞,采用Griess试剂法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞内... 本试验旨在研究布鲁氏菌侵染小鼠巨噬细胞过程中一氧化氮(NO)对布鲁氏菌的抑制作用,以及NO和非对称性二甲基精氨酸(ADMA)的相互作用关系。以布鲁氏菌标准疫苗株M5侵染小鼠巨噬细胞,采用Griess试剂法和酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞内外NO含量和ADMA水平,并对各个侵染时间段进行CFU计数。结果显示,被布鲁氏菌侵染后巨噬细胞的NO含量呈上升趋势,且胞外含量显著高于胞内(P<0.05),与对照组相比均差异显著(P<0.05);而巨噬细胞的ADMA含量随着侵染时间的增加与NO含量呈负相关,与对照组相比均差异极显著(P<0.01)。结合CFU计数结果,表明NO对布鲁氏菌的抑制作用只发生在侵染前期(12h前),在侵染后期(12h后)NO对布鲁氏菌的生长并未起到抑制作用,而ADMA在布鲁氏菌侵染小鼠巨噬细胞过程中对NO的生成有一定的抑制作用。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 小鼠巨噬细胞 一氧化氮 非对称性二甲基精氨酸
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比色法测定小鼠巨噬细胞的吞噬活性 被引量：2
9
作者 张明 蒋培红 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第10期84-85,共2页
关键词 小鼠巨噬细胞 吞噬活性 比色法测定 机体免疫系统 非特异性免疫功能 机体免疫功能 吞噬细胞 细胞成分
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HSF1对内毒素血症小鼠巨噬细胞浸润的影响
10
作者 刘瑛 高敏 +4 位作者 朱珊 张丽丽 区丹敏 陈广文 肖献忠 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第A10期2036-2036,共1页
关键词 小鼠巨噬细胞 HSF1 内毒素血症 基因敲除小鼠 小鼠肺 RAW 组织损伤 基因缺失
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布鲁氏菌LPS对小鼠巨噬细胞中NLRP3炎症小体转录水平的影响 被引量：8
11
作者 袁莎 陈鹏博 陈创夫 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第1期9-16,共8页
为研究布鲁氏菌LPS对巨噬细胞中NLRP3炎症小体的影响,本试验提取布鲁氏菌2308、RB51和△WbkA的LPS,以不同浓度与小鼠巨噬细胞相互作用,荧光定量PCR检测其对NLRP3、ASC、Caspase1、IL1-β、IL18转录水平的影响。结果显示RB51LPS和△WbkA ... 为研究布鲁氏菌LPS对巨噬细胞中NLRP3炎症小体的影响,本试验提取布鲁氏菌2308、RB51和△WbkA的LPS,以不同浓度与小鼠巨噬细胞相互作用,荧光定量PCR检测其对NLRP3、ASC、Caspase1、IL1-β、IL18转录水平的影响。结果显示RB51LPS和△WbkA LPS上调NLRP3炎症小体相关基因的转录水平,且呈浓度依赖性,而浓度对2308LPS调节NLRP3炎症小体相关基因转录的作用不大;且同一浓度下,RB51LPS和2308LPS比△WbkA LPS更好的调节Caspase1、IL1-β、IL18的转录水平。 展开更多
关键词 布鲁氏菌LPS 小鼠巨噬细胞 NLRP3炎症小体
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刚地弓形虫热休克蛋白21体外条件下对小鼠巨噬细胞功能的影响 被引量：4
12
作者 李纯静 周天缘 +5 位作者 于正青 储稳 徐立新 宋小凯 严若峰 李祥瑞 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期136-143,共8页
[目的]本试验旨在探究刚地弓形虫热休克蛋白21(TgHSP21)在体外对小鼠巨噬细胞系(Ana-1)功能的调节作用。[方法]构建重组表达载体pET-32a/TgHSP 21,获得重组蛋白TgHSP21(rTgHSP21)。用免疫荧光抗体试验(IFA)验证rTgHSP21在体外与Ana-1细... [目的]本试验旨在探究刚地弓形虫热休克蛋白21(TgHSP21)在体外对小鼠巨噬细胞系(Ana-1)功能的调节作用。[方法]构建重组表达载体pET-32a/TgHSP 21,获得重组蛋白TgHSP21(rTgHSP21)。用免疫荧光抗体试验(IFA)验证rTgHSP21在体外与Ana-1细胞的结合情况。Ana-1细胞分别用不同质量浓度(5、10、20、40、80μg·mL^-1)的rTgHSP21处理后,采取细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖情况,应用Transwell细胞小室检测细胞趋化情况,应用流式细胞术检测Ana-1细胞凋亡和吞噬能力。分别用总一氧化氮(NO)试剂盒和细胞因子ELISA试剂盒检测Ana-1细胞的NO和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素12(IL-12)、IL-6、IL-1β的分泌量。[结果]成功获得纯化的rTgHSP21,其具有与Ana-1细胞结合的能力。5和10μg·mL^-1的rTgHSP21均显著促进Ana-1细胞的增殖,各个浓度的rTgHSP21均显著促进细胞凋亡和吞噬能力。80μg·mL^-1 rTgHSP21明显促进Ana-1细胞分泌NO。在不同浓度rTgHSP21作用下,细胞因子IL-6和TNF-α的表达量均明显上升,而其质量浓度为10、20、40和80μg·mL^-1时IL-12的分泌被抑制。此外,rTgHSP21显著抑制了Ana-1细胞的迁移能力。[结论]TgHSP21能够与Ana-1细胞结合并在体外条件下调节Ana-1细胞的增殖、吞噬、凋亡、迁移及分泌。 展开更多
关键词 弓形虫 热休克蛋白21 小鼠巨噬细胞系 免疫功能
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冠突散囊菌与木霉混合发酵液醇提物对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节的影响 被引量：3
13
作者 范冬月 李倩 +1 位作者 邹先伟 张君毅 《中国酿造》 CAS 北大核心 2021年第5期37-42,共6页
为进一步开发冠突散囊菌的药理活性,该研究将冠突散囊菌与木霉共同发酵,通过不同体积分数的乙醇对混合发酵液化学活性部位进行追踪,并结合液质联用(LC-MS)技术对活性部位化合物组成进行分析,通过四氮甲基唑蓝(MTT)比色法、中性红吞噬实... 为进一步开发冠突散囊菌的药理活性,该研究将冠突散囊菌与木霉共同发酵,通过不同体积分数的乙醇对混合发酵液化学活性部位进行追踪,并结合液质联用(LC-MS)技术对活性部位化合物组成进行分析,通过四氮甲基唑蓝(MTT)比色法、中性红吞噬实验及酶联免疫吸附测定方法分别研究冠突散囊菌与木霉混合发酵液活性部位对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖、吞噬以及分泌细胞因子的能力的影响。结果表明,冠突散囊菌与木霉混合发酵液体积分数70%乙醇提取部位有较好的免疫活性,该部位含有大黄素、芥子碱等生物活性成分。与阳性对照组脂多糖相比,500μg/mL冠突散囊菌与木霉混合发酵液的体积分数70%乙醇提物能够使小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖率提高12%,增强小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红的能力,并能促进NO及细胞因子IL-6、TNF-α的分泌。 展开更多
关键词 冠突散囊菌 木霉 混合发酵 乙醇提取物 免疫调节 小鼠巨噬细胞RAW264.7
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牛磺鹅去氧胆酸对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞凋亡的影响 被引量：4
14
作者 张文 王建光 +4 位作者 李金莲 赵孝民 陈正涛 周川 石有斐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第7期1674-1680,共7页
为了探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的抗凋亡作用,试验采用二苯胺法及实时荧光定量PCR技术分别检测了针对RAW264.7细胞凋亡百分率及凋亡抑制蛋白CIAP-1、CIAP-2和XIAP的mRNA表达影响。结果显示,剂量为0.05、0.1... 为了探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的抗凋亡作用,试验采用二苯胺法及实时荧光定量PCR技术分别检测了针对RAW264.7细胞凋亡百分率及凋亡抑制蛋白CIAP-1、CIAP-2和XIAP的mRNA表达影响。结果显示,剂量为0.05、0.10和10μg/mL TCDCA可以极显著地对抗地塞米松(DEX)诱导的RAW264.7细胞系凋亡(P<0.01)。1μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1和XIAP表达有显著的促进作用(P<0.05);10μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和XIAP表达均具有显著的促进作用(P<0.05)。TCDCA给药后对DEX诱导的RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和XIAP表达均具有极显著的促进作用(P<0.01),但不同给药剂量的TCDCA作用有所差异。以上研究结果表明,TCDCA具有对抗DEX诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7凋亡作用,且与上调凋亡抑制蛋白mRNA表达有关。 展开更多
关键词 牛磺鹅去氧胆酸 小鼠巨噬细胞系RAW264.7 细胞凋亡 凋亡抑制蛋白
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牛坏死杆菌对小鼠巨噬细胞的增殖和自噬影响的初步探究 被引量：2
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作者 王天硕 于思雯 +4 位作者 毕栏 赵鹏宇 蒋凯 肖佳薇 郭东华 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期936-941,950,共7页
为探究牛坏死杆菌对小鼠巨噬细胞系(RAW264.7细胞)增殖和自噬的影响,本研究将牛坏死杆菌A25株以MOI 10感染RAW264.7细胞作为实验组,以未感染的RAW264.7细胞作为对照组。分别于感染后1 h、2 h、4 h收集细胞,采用Ed U和MDC染色法观察细胞... 为探究牛坏死杆菌对小鼠巨噬细胞系(RAW264.7细胞)增殖和自噬的影响,本研究将牛坏死杆菌A25株以MOI 10感染RAW264.7细胞作为实验组,以未感染的RAW264.7细胞作为对照组。分别于感染后1 h、2 h、4 h收集细胞,采用Ed U和MDC染色法观察细胞荧光,并计算各组细胞增殖率及细胞自噬小体的数量。Ed U染色法观察可见,各实验组随着感染时间的延长,绿色荧光的量逐渐减少,对照细胞绿色荧光的量基本无变化,且与对照组相比,随着感染时间的延长,感染组细胞增殖率均极显著降低(P<0.05);MDC染色法观察结果可见,与对照组相比,随着感染时间的延长,感染组细胞中的绿色荧光逐渐增强,且随着感染时间的延长,细胞中自噬小体的数量与对照组相比均极显著增多(P<0.01)。上述结果表明,牛坏死杆菌感染RAW264.7细胞后抑制细胞的增殖,并且诱导该细胞发生自噬。分别采用荧光定量PCR(RT-qPCR)和western blot检测上述各组细胞中自噬基因Beclin-1和P62 mRNA的相对转录水平及自噬蛋白LC3和P62的相对表达水平。RT-q PCR结果显示,与对照组相比,感染1 h后RAW264.7细胞中Beclin-1基因mRNA的相对转录水平无显著变化;感染2 h和4 h时该基因mRNA的相对转录水平极显著升高(P<0.01),P62基因mRNA的相对转录水平在不同感染时间均极显著降低(P<0.001);western blot结果显示,与对照组相比,各实验组细胞中LC3-Ⅱ蛋白的表达量于不同感染时间均极显著升高(P<0.01),P62蛋白的表达量于不同感染时间均极显著降低(P<0.001)。上述结果从自噬相关基因mRNA转录水平和其蛋白表达水平均证明牛坏死杆菌诱导RAW264.7细胞发生了自噬,首次证实牛坏死杆菌可以诱导RAW264.7细胞发生自噬,并且抑制该细胞的增殖,本研究为进一步探究牛坏死杆菌的感染机制奠定实验基础。 展开更多
关键词 牛坏死杆菌 小鼠巨噬细胞 自噬
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黄芪多糖对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞形态及免疫功能的影响 被引量：23
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作者 陈广勇 韩乾杰 +3 位作者 张玲玲 金庆日 崔艳军 杨彩梅 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期4358-4365,共8页
本试验旨在研究黄芪多糖(APS)对脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞形态及免疫功能的影响。采用LPS刺激小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞),研究不同浓度(0.1、0.5、1.0 mg/mL)的APS对LPS刺激引起的小鼠巨噬细胞免疫应激的调控作用。结果表明:1)1.0 m... 本试验旨在研究黄芪多糖(APS)对脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞形态及免疫功能的影响。采用LPS刺激小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞),研究不同浓度(0.1、0.5、1.0 mg/mL)的APS对LPS刺激引起的小鼠巨噬细胞免疫应激的调控作用。结果表明:1)1.0 mg/mL APS能抑制由LPS刺激引起的巨噬细胞形态和增殖能力的变化。2)1.0 mg/mL APS能够显著提高巨噬细胞酸性磷酸酶的活性(P<0.05)。0.1、0.5、1.0 mg/mL的APS能够显著缓解由LPS刺激引起的碱性磷酸酶活性的降低(P<0.05)。3)不同浓度APS均能显著降低由LPS诱导的促炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的升高(P<0.05)。4)LPS刺激显著提高巨噬细胞Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子-κB(NF-κB)的mRNA表达量(P<0.05),而添加1.0 mg/mL APS后,巨噬细胞TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA表达量均表现出显著降低(P<0.05)。综上可知,APS可以改善小鼠巨噬细胞形态,恢复细胞增殖能力,并可通过调节TLR4信号通路相关基因的表达降低促炎症因子IL-1β和TNF-α分泌,减少机体免疫应激反应。 展开更多
关键词 黄芪多糖 小鼠巨噬细胞 细胞形态 免疫功能
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小鼠巨噬细胞对爆炸冲击损伤的力学生物学响应研究
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作者 张弩 徐大森 +8 位作者 朱细燕 周一丹 王思洁 靳明亮 戴亮亮 王素芳 赵辉 李玉龙 杨慧 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第S01期114-114,共1页
目的建立激波管对小鼠侧卧身位燥炸冲击实验模型,探究冲击对小鼠心、肺、脑组织中巨噬细胞/小胶质细胞的响应变化规律。方法使用激波管对C57BL/6小鼠加载冲击波。在冲击后不同时间点测量其体重变化,并在麻醉后解剖取心脏、肺以及全脑组... 目的建立激波管对小鼠侧卧身位燥炸冲击实验模型,探究冲击对小鼠心、肺、脑组织中巨噬细胞/小胶质细胞的响应变化规律。方法使用激波管对C57BL/6小鼠加载冲击波。在冲击后不同时间点测量其体重变化,并在麻醉后解剖取心脏、肺以及全脑组织样本。对组织样本进行HE染色检测结构损伤;采用TUNEL染色方法标记并统计各组织中死亡细胞比例。 展开更多
关键词 力学生物学 TUNEL染色 C57BL/6小鼠 小胶质细胞 小鼠巨噬细胞 激波管 冲击损伤 冲击实验
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实时定量PCR检测siRNA对小鼠巨噬细胞中FTH1基因表达的抑制作用 被引量：1
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作者 杜军伟 王远志 +2 位作者 陈创夫 葛阳春 唐利燕 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期638-641,共4页
目的通过实时定量PCR(real-ti me PCR)检测基因表达的mRNA,建立一种直接观察小干扰RNA(si RNA)抑制目的基因表达的方法。方法化学设计合成对应于FTH1(ferritin heavy chain1,FTH1)基因表达mRNA的si RNA,经TurboFectTMin vitro Transfect... 目的通过实时定量PCR(real-ti me PCR)检测基因表达的mRNA,建立一种直接观察小干扰RNA(si RNA)抑制目的基因表达的方法。方法化学设计合成对应于FTH1(ferritin heavy chain1,FTH1)基因表达mRNA的si RNA,经TurboFectTMin vitro Transfection Reagent转染小鼠RAW264.7巨噬细胞,48h后,提取总RNA,逆转录为cDNA。以3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)为内参,定量检测FTH1的表达,比较干扰前后FTH1基因mRNA的量。结果 3种si RNA处理的小鼠巨噬细胞中FTH1基因的表达抑制率最高为97.60%。结论实时定量PCR方法的建立为研究布鲁氏菌在侵染巨噬细胞过程中FTH1的功能提供了有效途径。 展开更多
关键词 实时定量PCR SIRNA 小鼠RAW264.7巨噬细胞 FTH1
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黄酒多肽的多级分离纯化及其对小鼠巨噬细胞免疫调节的影响 被引量：6
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作者 冯瑞雪 史瑛 +4 位作者 姬中伟 钱肖华 徐岳正 毛健 许正宏 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2020年第13期289-295,共7页
本研究以黄酒为原料,通过大孔树脂吸附、凝胶色谱等方法多级分离纯化黄酒中活性肽组分,并探究各级分离肽组分对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响。通过脂多糖LPS(1μg/mL)刺激RAW264.7细胞建立体外炎症模型,以不同浓度的各级分... 本研究以黄酒为原料,通过大孔树脂吸附、凝胶色谱等方法多级分离纯化黄酒中活性肽组分,并探究各级分离肽组分对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用的影响。通过脂多糖LPS(1μg/mL)刺激RAW264.7细胞建立体外炎症模型,以不同浓度的各级分离纯化的黄酒多肽样品进行干预,对NO释放抑制率最高的黄酒多肽组分进行结构分析。结果表明,可通过大孔树脂初步分离纯化黄酒活性多肽。对3种不同型号大孔树脂的吸附解析性能进行比较,最终选择DA201-C大孔吸附树脂富集黄酒多肽,收集洗脱液旋蒸冻干后获得黄酒多肽SJ组分。采用MTT法检测细胞活力,黄酒多肽SJ作用RAW264.7细胞的安全范围为≤2.5 mg/mL。采用Griess Reagent法检测细胞培养液中一氧化氮(NO)含量,与LPS模型组相比,黄酒多肽SJ浓度为0.3、0.6、1.2、2.5 mg/mL时能明显抑制NO释放(抑制率分别为20.85%、36.42%、68.58%、95.01%)。黄酒多肽SJ经Sephadex G-15凝胶色谱柱分离得到3个组分即G1、G2、G3,分别收集这三组洗脱峰并测定其对RAW264.7细胞NO分泌量的影响。研究发现G1组分活性高于其他2种组分,G1、G2、G3的NO释放半抑制浓度分别是0.68、0.86、0.75 mg/mL。对G1组分进行氨基酸组成分析得知其疏水氨基酸占比32.63%,必需氨基酸占比28.46%。研究结果证明黄酒多肽能显著抑制LPS诱导的RAW264.7分泌NO,对LPS刺激的RAW264.7细胞炎症具有保护作用,从而促使巨噬细胞发挥免疫作用。 展开更多
关键词 黄酒多肽 结构鉴定 小鼠巨噬细胞RAW264.7 免疫调节活性
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小鼠骨髓源性巨噬细胞诱导及冻存方法的优化
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作者 魏琼 赵梦竹 +2 位作者 程序 刘梦华 张冬梅 《中国病理生理杂志》 北大核心 2025年第3期611-618,共8页
目的:探讨小鼠骨髓源性巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)诱导及冻存的适宜方法。方法:将小鼠成纤维细胞(L929细胞)于不同温度、接种密度、血清浓度培养条件下培养,ELISA法检测细胞上清中巨噬细胞集落刺激因子(macrophag... 目的:探讨小鼠骨髓源性巨噬细胞(bone marrow-derived macrophages,BMDMs)诱导及冻存的适宜方法。方法:将小鼠成纤维细胞(L929细胞)于不同温度、接种密度、血清浓度培养条件下培养,ELISA法检测细胞上清中巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)浓度;提取小鼠骨髓细胞,细胞差速贴壁法将骨髓细胞预培养4 h,流式细胞术检测骨髓原驻留巨噬细胞比例;使用L929细胞上清或重组M-CSF诱导细胞7 d,倒置显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞术检测诱导后细胞F4/80及CD11b双阳性占比;中性红法及ELISA法检测C57BL/6N和C57BL/6J两种亚型来源BMDMs吞噬能力和炎症反应水平;将提取的骨髓细胞即刻冻存后复苏再诱导,或将已成功诱导的BMDMs冻存后复苏,倒置显微镜下观察细胞形态,CCK-8法检测细胞活力,中性红法检测吞噬能力。结果:33℃、10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)培养7 d条件下的L929细胞上清中富集高浓度M-CSF;骨髓细胞经预培养4 h,贴壁细胞中F4/80+占比显著高于悬浮细胞(P<0.01);经L929上清或重组M-CSF诱导7 d后细胞F4/80+CD11b+占比无显著差异(P>0.05);与C57BL/6J亚型来源BMDMs相比,C57BL/6N亚型来源BMDMs具有更强的吞噬能力(P<0.01),释放较低水平TNF-α(P<0.01)和IL-6(P<0.05),以及较高水平IL-1β(P<0.05);相较于将已成功诱导的BMDMs冻存后复苏,骨髓细胞提取后即刻冻存、复苏再诱导的BMDMs具有更好的巨噬细胞形态,更高的细胞活力(P<0.01)和更强的吞噬能力(P<0.01)。结论:通过33℃、10%FBS培养7 d的L929细胞上清富含更高浓度M-CSF,可成功诱导骨髓细胞分化为小鼠骨髓源性巨噬细胞,细胞差速贴壁法预培养可去除原骨髓驻留巨噬细胞,C57BL/6N和C57BL/6J两种亚型来源BMDMs吞噬能力和炎症反应水平不同,将提取的骨髓细胞即刻冻存后复苏再诱导是较好的BMDMs冻存方法。 展开更多
关键词 小鼠骨髓源性巨噬细胞 原代细胞 成纤维细胞 巨噬细胞集落刺激因子
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