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重组HMGB1-A盒蛋白对小鼠单核细胞的抗炎作用 被引量:2
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作者 刘婷 贺永文 陈西柳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期298-303,共6页
目的:观察高迁移率蛋白B1-A盒蛋白(HMGB1-Abox)对小鼠单核细胞系在脂多糖(LPS)刺激下表达HMGB1的影响和动态变化以及对炎性因子分泌的抑制作用。方法:利用克隆载体构建PET28a-HMGB1-Abox原核质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-... 目的:观察高迁移率蛋白B1-A盒蛋白(HMGB1-Abox)对小鼠单核细胞系在脂多糖(LPS)刺激下表达HMGB1的影响和动态变化以及对炎性因子分泌的抑制作用。方法:利用克隆载体构建PET28a-HMGB1-Abox原核质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(ITPG)诱导后经Ni2+-NTA树脂亲和纯化得到目的蛋白;以不同浓度的重组HMGB1-Abox蛋白作用于LPS刺激的小鼠单核细胞系RAW264.7,CCK8试剂盒检测其对小鼠单核细胞活力的影响。以PBS和重组HMGB1-Abox蛋白为对照组和实验组,于2、6、12、24、48小时检测其细胞上清中的TNF-α、IL-1β的含量,Western blot、免疫荧光法观察细胞中HMGB1的表达、RT-PCR检测细胞中HMGB1-mRNA变化趋势。结果:成功构建PET28a-HMGB1-Abox原核质粒并纯化出大约为14 kD的目的蛋白。小鼠单核细胞活力与重组HMGB1-Abox蛋白浓度及作用时间呈正相关;实验组细胞上清TNF-α、IL-1β的含量较对照组显著下降;Western blot及免疫荧光检测提示实验组细胞中HMGB1表达不断减少;细胞中HMGB1-mR-NA含量及峰值均较对照组显著减少且延后。结论:重组HMGB1-Abox蛋白可以显著减少小鼠单核细胞在受到LPS刺激时HMGB1的表达和分泌,从而有效的阻断HMGB1对其他早期炎性因子的促进作用,减少炎性因子的分泌,有较强的抗炎作用。 展开更多
关键词 HMGB1-A盒蛋白 原核构建 蛋白纯化 小鼠单核细胞
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二氧化钛纳米颗粒对小鼠单核巨噬细胞超微结构影响的电镜研究 被引量:1
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作者 汤莹 于洋 +4 位作者 雷长海 范晓燕 羊富光 许珊 杨勇骥 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期539-542,共4页
目的:应用电镜观察二氧化钛纳米颗粒(nano-TiO2)对小鼠单核巨噬细胞超微结构的影响。方法:将不同浓度的nano-TiO2溶液加入小鼠单核巨噬细胞(Rawcell)中,在37℃、5%CO2的细胞培养箱中孵育4h,收集细胞,制样后在透射电镜下观察小鼠单核巨... 目的:应用电镜观察二氧化钛纳米颗粒(nano-TiO2)对小鼠单核巨噬细胞超微结构的影响。方法:将不同浓度的nano-TiO2溶液加入小鼠单核巨噬细胞(Rawcell)中,在37℃、5%CO2的细胞培养箱中孵育4h,收集细胞,制样后在透射电镜下观察小鼠单核巨噬细胞超微结构的改变。结果:电镜下,nano-TiO2的粒径为20~35nm。致密的nano-TiO2通过内吞进入细胞,当浓度超过200μg/mL时,细胞胞质空泡内吞噬有大量成簇的致密颗粒,细胞核固缩,染色质浓缩、边集,出现早期细胞凋亡改变。 展开更多
关键词 二氧化钛纳米颗粒(nano-TiO2) 小鼠单核巨噬细胞 电镜 超微结构 细胞凋亡
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诱导C57BL/6小鼠骨髓单核细胞向破骨细胞分化的条件 被引量:3
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作者 曾立 耿欢 +2 位作者 刘水涛 姜川 邢更彦 《中国医学前沿杂志(电子版)》 2018年第1期32-36,共5页
目的研究诱导C57BL/6小鼠骨髓单核细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs)向破骨细胞分化的条件,提高诱导破骨细胞的效率。方法采用流式细胞仪鉴定BMMs表面标记物,巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colonystimulating factor,M-CSF... 目的研究诱导C57BL/6小鼠骨髓单核细胞(bone marrow-derived macrophages,BMMs)向破骨细胞分化的条件,提高诱导破骨细胞的效率。方法采用流式细胞仪鉴定BMMs表面标记物,巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colonystimulating factor,M-CSF)与核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factorκB ligand,RANKL)共同诱导BMMs,4天后形成破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)与鬼笔环肽染色鉴定诱导出的破骨细胞,通过骨板吸收实验鉴定破骨细胞的骨吸收活性。结果流式细胞仪检测BMMs的CD11b阳性率为98.4%。经过4天诱导,BMMs激活、融合产生了大量的破骨细胞,呈TRAP阳性,鬼笔环肽染色可见纤维肌动蛋白环形成,骨板上形成大量不规则的骨吸收瘢痕。结论 RANKL诱导BMMs 4天可产生骨吸收活性较高的破骨细胞。 展开更多
关键词 C57BL/6小鼠骨髓单核细胞 破骨细胞 巨噬细胞集落刺激因子 核因子ΚB受体活化因子配体
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培养基对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导分化破骨细胞的影响 被引量:1
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作者 刘昕 李圆圆 +4 位作者 刘红 李艳 潘静华 王少君 赵宏艳 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1422-1427,共6页
目的 探讨培养基对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法 实验分为3组:高糖DMEM培养基组(DMEM组);高糖DMEM/α-MEM培养基组(DMEM/α-MEM组);α-MEM培养基组(α-MEM组)。按常规方法采用上述3种培养基进行破骨细胞培养,培... 目的 探讨培养基对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法 实验分为3组:高糖DMEM培养基组(DMEM组);高糖DMEM/α-MEM培养基组(DMEM/α-MEM组);α-MEM培养基组(α-MEM组)。按常规方法采用上述3种培养基进行破骨细胞培养,培养5 d后,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase, TRAP)染色观察各组破骨细胞的形成情况,并采用实时荧光定量PCR方法观察破骨细胞分化相关标志物NFATc-1、c-Fos和TRAF-6 mRNA的表达;培养11 d后采用甲苯胺蓝染色进行骨陷窝面积分析,观察破骨细胞骨吸收功能情况。结果 3组均可以观察到典型的TRAP^(+)破骨细胞。与DMEM组相比,DMEM/α-MEM组、α-MEM组TRAP^(+)破骨细胞数量明显增加(P<0.01),但各组形态略有不同。在骨吸收功能上,与DMEM组和DMEM/α-MEM组相比,α-MEM组骨陷窝面积明显增加(P<0.01)。在破骨细胞分化相关调控因子表达上,与DMEM组相比,α-MEM组NFATc-1、c-Fos和TRAF-6 mRNA表达显著增加(P<0.01,P<0.05);DMEM/α-MEM组NFATc-1 mRNA表达显著增加(P<0.01),c-Fos和TRAF-6 mRNA表达有增加的趋势,但差异无统计学意义;α-MEM组与DMEM/α-MEM组比较差异无统计学意义。结论 高糖DMEM培养基、高糖DMEM/α-MEM培养基、α-MEM培养基均可用于小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导分化破骨细胞的实验;从破骨细胞数量、状态及功能来看,α-MEM培养基更适合做为破骨细胞分化培养基。 展开更多
关键词 破骨细胞 小鼠单核巨噬细胞RAW264.7 高糖DMEM培养基 α-MEM培养基
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宣肺承气汤改善脓毒症小鼠肺部炎症的作用机制
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作者 苗欢欢 李德需 +2 位作者 赵永辰 张金辉 李岚淼 《世界中医药》 北大核心 2025年第9期1479-1485,共7页
目的:探讨宣肺承气汤通过长链非编码RNA癌症易感候选基因19(CASC19)靶向微小核糖核酸-96-5p(miR-96-5p)对脓毒症致小鼠肺损伤(ALI)的炎症调控作用。方法:脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞白血病(RAW264.7)细胞激活,取10只小鼠经宣肺承... 目的:探讨宣肺承气汤通过长链非编码RNA癌症易感候选基因19(CASC19)靶向微小核糖核酸-96-5p(miR-96-5p)对脓毒症致小鼠肺损伤(ALI)的炎症调控作用。方法:脂多糖(LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞白血病(RAW264.7)细胞激活,取10只小鼠经宣肺承气汤灌胃后的含药血清作用于RAW264.7细胞,实时定量逆转录聚合酶链反应检测miR-96-5p、CASC19 mRNA表达;将72只小鼠按随机数表法分为对照组、模型组、宣肺承气汤组、地塞米松组、宣肺承气汤+拮抗剂阴性对照组和宣肺承气汤+miR-96-5p拮抗剂组,每组12只。除对照组外腹腔注射10 mg/kg LPS建立ALI模型,除对照组、地塞米松组外宣肺承气汤灌胃。荧光原位杂交技术检测miR-96-5p、CASC19水平,双荧光素酶报告基因法验证CASC19与miR-96-5p靶向关系,酶联免疫吸附检测炎症介质水平,蛋白质印迹法测定生化指标,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态。结果:LPS诱导的RAW264.7细胞中CASC19 mRNA高表达,miR-96-5p呈低表达,而给予含药血清可逆转miR-96-5p、CASC19 mRNA表达(P<0.05);CASC19与miR-96-5p存在靶向关系;对于LPS诱导的小鼠ALI,地塞米松、宣肺承气汤均可改善肺功能并降低炎症介质水平及核因子κB、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3表达(P<0.05)。结论:宣肺承气汤能够通过抑制炎症介质释放来治疗LPS诱导的ALI,这可能与其下调CASC19而靶向上调miR-96-5p介导炎症相关信号通路有关。 展开更多
关键词 宣肺承气汤 癌症易感候选基因19 微小核糖核酸-96-5p 肺损伤 脓毒症 炎症 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞 调控
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波尔定对破骨细胞分化及骨吸收功能的影响 被引量:1
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作者 徐慧慧 赵宏艳 +3 位作者 王贵 黄晶 郭明慧 肖诚 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期265-270,共6页
目的研究波尔定对NF-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的小鼠单核细胞(RAW264.7)向破骨细胞(OC)分化及骨吸收功能的影响。方法采用RANKL(50 ng/ml)诱导RAW264.7细胞向OC分化,不同浓度波尔定(1、10、20、40、80μmol/L)联合分化培养。培养... 目的研究波尔定对NF-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导的小鼠单核细胞(RAW264.7)向破骨细胞(OC)分化及骨吸收功能的影响。方法采用RANKL(50 ng/ml)诱导RAW264.7细胞向OC分化,不同浓度波尔定(1、10、20、40、80μmol/L)联合分化培养。培养第4d采用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,计算OC样细胞数量;比色法测定TRAP活性;Real-time PCR法检测各组OC标志性基因核因子κB受体活化因子(RANK)、活化T细胞核因子1(NFATc1)和c-fos基因的表达;CCK-8法检测波尔定对OC的毒性。培养至第9d,采用甲苯胺蓝染色并用Leica Qwin图像分析系统计算骨吸收陷窝面积。结果与对照组比较,TRAP阳性OC数量、TRAP活性、OC标志性基因RANK、NFATc1和c-fos的表达量及骨陷窝面积,随着波尔定浓度增加而减少,与对照组比较,20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L波尔定可明显减少OC数量和TRAP活性(P<0.05,P<0.01),下调OC标志性基因RANK、NFATc1和c-fos的表达量及骨陷窝面积(P<0.05),但以上浓度波尔定对OC均未产生毒性。结论波尔定对RANKL诱导的RAW264.7细胞向OC的分化及骨吸收功能具有抑制作用。 展开更多
关键词 波尔定 破骨细胞 骨吸收 小鼠单核细胞 核因子ΚB受体活化因子
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SO_2与CeO_2超细颗粒非均相反应产物的细胞毒性效应 被引量:2
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作者 俞淼 汪冰 +6 位作者 张丹 冯源 梁红丽 郑令娜 王萌 程路峰 丰伟悦 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期63-70,共8页
大气二次细颗粒物(secondary fine particulate matters,SFPMs)是我国城市大气PM_(2.5)的主要组成部分。然而由于PM_(2.5)组成成份复杂,其毒性产生的来源并不明确。在本研究中,我们以二氧化铈(CeO_2)超细颗粒物(UFPs)为大气细矿物质颗... 大气二次细颗粒物(secondary fine particulate matters,SFPMs)是我国城市大气PM_(2.5)的主要组成部分。然而由于PM_(2.5)组成成份复杂,其毒性产生的来源并不明确。在本研究中,我们以二氧化铈(CeO_2)超细颗粒物(UFPs)为大气细矿物质颗粒模型,研究了SO_2气体在模拟大气环境中,如湿度(RH)、紫外光照(UV)和NO_2存在条件下,在CeO_2UFPs界面经多相反应生成的二次无机细颗粒物的性质及与细胞毒性的构效关系。实验通过实时高通量细胞分析系统,实时观察了CeO_2-SFPMs暴露对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)增殖的影响;并进一步检测了CeO_2-SFPMs对细胞膜通透性和细胞凋亡的影响。结果表明,SO_2与CeO_2UFPs作用后可转化为硫酸盐,在有NO_2存在下转化更为明显。CeO_2-SFPMs对细胞毒性效应与其生成的环境条件相关,并具有时间效应性。RAW264.7细胞暴露于CeO_2-SFPMs 8 h,细胞增殖无明显变化;暴露8~25 h后,CeO_2-SFPMs对细胞增殖的抑制率随CeO_2<@CeO_2+SO_2<@CeO_2+SO_2+RH≈@CeO_2+SO_2+RH+UV<@CeO_2+SO_2+RH+NO_2的顺序显著升高。CeO_2-SFPMs对Raw264.7细胞膜通透性和细胞凋亡的影响研究也证明CeO_2-SFPMs@CeO_2+SO_2+RH+NO_2产生的细胞毒性最明显。 展开更多
关键词 二次无机细颗粒物 超细二氧化铈 界面多相反应 小鼠单核巨噬细胞 细胞毒性
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复方肿节风溶液抗炎和平喘作用的研究 被引量:7
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作者 梁正敏 张明昕 +4 位作者 彭健波 杨善忠 唐廷崇 赖胜基 何家康 《动物医学进展》 北大核心 2017年第4期120-125,共6页
为考察复方肿节风溶液的抗炎平喘作用,进行了该药的体外抗炎和体内平喘作用研究。用脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞建立体外炎症模型,MTT法检测复方肿节风对RAW 264.7细胞活力的影响,ELISA检测细胞上清液中TNF-α、IL-1和IL-6浓度,Gries... 为考察复方肿节风溶液的抗炎平喘作用,进行了该药的体外抗炎和体内平喘作用研究。用脂多糖(LPS)诱导RAW 264.7细胞建立体外炎症模型,MTT法检测复方肿节风对RAW 264.7细胞活力的影响,ELISA检测细胞上清液中TNF-α、IL-1和IL-6浓度,Griess法检测NO水平。体内试验通过卵清蛋白(OVA)致敏、激发Wistar大鼠建立哮喘模型,并灌服不同剂量(12、6、3g/kg)的复方肿节风溶液。ELISA检测大鼠血清中IL-4、IL-17、IFN-γ及IgE水平;瑞特-吉姆萨染色血涂片,用血细胞计数器计数血液白细胞总数和嗜酸性粒细胞数,肺组织HE染色,观察肺组织病理变化。体外抗炎试验结果表明,复方肿节风溶液在10μg/mL^40μg/mL的浓度范围内对RAW 264.7细胞活力无显著影响。10、20、40μg/mL的复方肿节风溶液能不同程度抑制LPS诱导的RAW 264.7细胞产生TNF-α、IL-6、IL-1和NO的水平(P<0.05),并存在一定的剂量依赖关系。体内平喘试验结果表明,与哮喘模型组相比,复方肿节风溶液能明显下调血清中IL-4、IL-17和IgE的高分泌,上调血清中IFN-γ水平(P<0.05)。表明复方肿节风溶液抗炎平喘作可能通过抑制相关炎症因子的表达来实现的。 展开更多
关键词 复方肿节风溶液 小鼠单核-巨噬细胞 抗炎 平喘 炎症因子
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蒲公英根多糖的体外抗炎作用研究 被引量:18
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作者 李欢 许艳艳 +2 位作者 高进勇 余炎炎 宫安东 《动物医学进展》 北大核心 2019年第5期75-78,共4页
从蒲公英根(Taraxacum root)中提取植物多糖(TRP),并探究其对脂多糖(LPS)引起小鼠单核巨噬细胞系(RAW264.7)细胞炎症模型的抗炎作用。采用MTT法检测不同浓度(50μg/mL,100μg/mL,200μg/mL)多糖提取物对细胞的毒性作用。Griess法检测一... 从蒲公英根(Taraxacum root)中提取植物多糖(TRP),并探究其对脂多糖(LPS)引起小鼠单核巨噬细胞系(RAW264.7)细胞炎症模型的抗炎作用。采用MTT法检测不同浓度(50μg/mL,100μg/mL,200μg/mL)多糖提取物对细胞的毒性作用。Griess法检测一氧化氮(NO)的分泌量,反转录-聚合酶链反应(PCR)检测细胞炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平。结果表明,TRP在50μg/mL~200μg/mL的剂量范围内对RAW264.7细胞无明显细胞毒作用,TRP可以显著抑制小鼠单核巨噬细胞NO的分泌,且IL-1β、IL-6、TNF-α的表达量下调。结果表明,TRP具有一定的体外抗炎作用,体外抗炎效果与质量浓度呈现出剂量依赖关系。 展开更多
关键词 蒲公英根多糖 小鼠单核巨噬细胞 一氧化氮 炎症因子
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