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培养基对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导分化破骨细胞的影响 被引量：1
1
作者 刘昕 李圆圆 +4 位作者 刘红 李艳 潘静华 王少君 赵宏艳 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1422-1427,共6页
目的 探讨培养基对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法 实验分为3组:高糖DMEM培养基组(DMEM组);高糖DMEM/α-MEM培养基组(DMEM/α-MEM组);α-MEM培养基组(α-MEM组)。按常规方法采用上述3种培养基进行破骨细胞培养,培... 目的 探讨培养基对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7向破骨细胞分化的影响。方法 实验分为3组:高糖DMEM培养基组(DMEM组);高糖DMEM/α-MEM培养基组(DMEM/α-MEM组);α-MEM培养基组(α-MEM组)。按常规方法采用上述3种培养基进行破骨细胞培养,培养5 d后,采用抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase, TRAP)染色观察各组破骨细胞的形成情况,并采用实时荧光定量PCR方法观察破骨细胞分化相关标志物NFATc-1、c-Fos和TRAF-6 mRNA的表达;培养11 d后采用甲苯胺蓝染色进行骨陷窝面积分析,观察破骨细胞骨吸收功能情况。结果 3组均可以观察到典型的TRAP^(+)破骨细胞。与DMEM组相比,DMEM/α-MEM组、α-MEM组TRAP^(+)破骨细胞数量明显增加(P<0.01),但各组形态略有不同。在骨吸收功能上,与DMEM组和DMEM/α-MEM组相比,α-MEM组骨陷窝面积明显增加(P<0.01)。在破骨细胞分化相关调控因子表达上,与DMEM组相比,α-MEM组NFATc-1、c-Fos和TRAF-6 mRNA表达显著增加(P<0.01,P<0.05);DMEM/α-MEM组NFATc-1 mRNA表达显著增加(P<0.01),c-Fos和TRAF-6 mRNA表达有增加的趋势,但差异无统计学意义;α-MEM组与DMEM/α-MEM组比较差异无统计学意义。结论 高糖DMEM培养基、高糖DMEM/α-MEM培养基、α-MEM培养基均可用于小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导分化破骨细胞的实验;从破骨细胞数量、状态及功能来看,α-MEM培养基更适合做为破骨细胞分化培养基。 展开更多
关键词 破骨细胞 小鼠单核巨噬细胞raw264.7 高糖DMEM培养基 α-MEM培养基
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大豆苷元通过调控NLRP3/GSDMD信号通路对小鼠单核巨噬RAW264.7细胞焦亡的影响
2
作者 齐璐瑶 马宇慧 +2 位作者 孟佳磊 叶慧 雷鸣 《中成药》 北大核心 2025年第6期1982-1985,共4页
目的 探讨大豆苷元对小鼠单核巨噬RAW264.7细胞焦亡的影响。方法 采用脂多糖(LPS)联合三磷酸腺苷(ATP)诱导RAW264.7巨噬细胞构建焦亡模型,设置对照组、LPS+ATP组、地塞米松组(5μmol/L)和大豆苷元10、20、40μmol/L组。CCK8法检测RAW26... 目的 探讨大豆苷元对小鼠单核巨噬RAW264.7细胞焦亡的影响。方法 采用脂多糖(LPS)联合三磷酸腺苷(ATP)诱导RAW264.7巨噬细胞构建焦亡模型,设置对照组、LPS+ATP组、地塞米松组(5μmol/L)和大豆苷元10、20、40μmol/L组。CCK8法检测RAW264.7细胞增殖能力;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞损伤程度;Hochest-PI染色法观察细胞死亡率;ELISA法检测细胞上清液肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平;荧光探针法检测细胞活性氧(ROS)水平;Western blot法检测细胞NLRP3炎症小体相关蛋白(NLRP3、Caspase-1 p20、Caspase-1 p45、GSDMD-N、GSDMD-FL)表达。结果 与对照组比较,大豆苷元各剂量组RAW264.7细胞增殖能力无明显变化(P>0.05)。与LPS+ATP组比较,细胞死亡率降低(P<0.05),细胞上清液TNF-α、IL-1β、IL-6水平降低(P<0.05),细胞ROS水平降低,NLRP3炎症小体相关蛋白表达降低(P<0.05)。结论 大豆苷元可抑制由LPS+ATP诱导的NLRP3炎症小体激活,缓解巨噬细胞焦亡,减少炎症因子的释放。 展开更多
关键词 大豆苷元 raw264.7巨噬细胞 细胞焦亡 NLRP3炎症小体 NLRP3/GSDMD信号通路
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高浓度葡萄糖对体外Raw264.7巨噬细胞极化状态的影响
3
作者 胡晓霞 李亚龙 +2 位作者 杨东亮 拉巴泽仁 刘欣跃 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第2期403-411,共9页
目的:探讨不同浓度葡萄糖对体外Raw264.7巨噬细胞极化的诱导作用。方法:将DMEM培养基培养的Raw264.7细胞分为对照组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、不同浓度高糖组(15.0、25.0、35.0和45.0 mmol·L^(-1)葡萄糖)和阳性对照组[脂多糖(... 目的:探讨不同浓度葡萄糖对体外Raw264.7巨噬细胞极化的诱导作用。方法:将DMEM培养基培养的Raw264.7细胞分为对照组(5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖)、不同浓度高糖组(15.0、25.0、35.0和45.0 mmol·L^(-1)葡萄糖)和阳性对照组[脂多糖(LPS)],分别培养3、6和9h,观察各组细胞形态,细胞计数试剂盒8 (CCK-8)法检测各组细胞存活率,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中白细胞介素6 (IL-6)、肿瘤坏死因子α (TNF-α)和白细胞介素10 (IL-10) mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组细胞上清中IL-6、TNF-α和IL-10水平,流式细胞仪检测各组细胞M1和M2型巨噬细胞标志物CD86+及CD163+细胞百分比。结果:对照组Raw264.7细胞贴壁生长,形态以圆形为主;35.0 mmol·L^(-1)高糖组和阳性对照组细胞拉长、伪足形成,呈现炎症性改变。与对照组比较,作用6、12、24和48 h后不同浓度高糖组细胞存活率均升高(P<0.05)。与对照组比较,作用3h后,35.0 mmol·L^(-1)高糖组细胞中IL-6和IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01),细胞上清中IL-6、TNF-α和IL-10水平无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05);作用6h后,35.0 mmol·L^(-1)高糖组细胞中TNF-α mRNA表达水平升高(P<0.001),细胞上清中IL-6、TNF-α和IL-10水平明显升高(P<0.05或P<0.001);作用3h后,35.0 mmol·L^(-1)高糖组巨噬细胞极化标志物CD86+和CD163+细胞百分比明显升高(P<0.01或P<0.001)。结论:一定高浓度葡萄糖可诱导体外Raw264.7巨噬细胞向M1亚型极化。 展开更多
关键词 raw264.7细胞 葡萄糖 炎症 巨噬细胞极化 炎症细胞因子
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菊粉对巨噬细胞RAW 264.7免疫活性的影响 被引量：2
4
作者 牛甜 杨帅 +3 位作者 段宏伟 成文婧 张丽鸿 胡俊杰 《天然产物研究与开发》 北大核心 2025年第1期10-17,共8页
菊粉(inulin,INU)作为一种植物多糖,因具有广泛的应用价值以及增强免疫、抗炎、抗肿瘤等生物学功能而备受关注,本研究旨在探究INU对巨噬细胞RAW 264.7免疫活性的影响。采用细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)、中性红试验检... 菊粉(inulin,INU)作为一种植物多糖,因具有广泛的应用价值以及增强免疫、抗炎、抗肿瘤等生物学功能而备受关注,本研究旨在探究INU对巨噬细胞RAW 264.7免疫活性的影响。采用细胞增殖检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)、中性红试验检测INU对巨噬细胞RAW 264.7增殖活性和吞噬活性的影响。采用格里斯试剂法和免疫酶联吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞中一氧化氮(nitric oxide,NO)和细胞因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的释放量。实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)检测细胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的基因表达量以及免疫蛋白印迹(Western blotting,WB)检测INU对巨噬细胞RAW 264.7中环氧化酶2(cyclooxygenase 2,COX2)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和丝裂原蛋白活化激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)相关通路关键蛋白表达的影响。实验结果表明,INU显著增强RAW 264.7细胞的增殖活性、吞噬活性并促进NO的分泌及IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平(P<0.01)。此外,INU还以浓度依赖的方式显著上调了COX2、iNOS及MAPK通路中磷酸化细胞外调节蛋白激酶(phosphorylated extracellular regulatory protein kinase,p-ERK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38)的蛋白表达(P<0.01)。综上所述,INU可通过ERK/p38MAPK通路调控巨噬细胞的免疫活性,具有良好的免疫调节能力。 展开更多
关键词 菊粉 巨噬细胞raw 264.7 MAPK信号通路 免疫活性
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基于NF-κB/NLRP3信号通路探讨香青兰总黄酮对ox-LDL诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响
5
作者 赵云丽 黄川生 +3 位作者 郭新红 曹文疆 袁勇 王新春 《中成药》 北大核心 2025年第2期413-420,共8页
目的研究香青兰总黄酮(TFDM)通过调节核因子κB(NF-κB)/NOD样受体家族3(NLRP3)信号通路减轻ox-LDL诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的作用。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,将其分为正常组、模型组(50μg/mL ox-LDL)、香青兰总黄酮组(100μ... 目的研究香青兰总黄酮(TFDM)通过调节核因子κB(NF-κB)/NOD样受体家族3(NLRP3)信号通路减轻ox-LDL诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的作用。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,将其分为正常组、模型组(50μg/mL ox-LDL)、香青兰总黄酮组(100μg/mL TFDM+50μg/mL ox-LDL)、NF-κB抑制剂组(10μmol/L Bay11-7821+50μg/mL ox-LDL)、香青兰总黄酮+抑制剂组(100μg/mL TFDM+10μmol/L Bay11-7821+50μg/mL ox-LDL)。采用CCK-8法检测细胞活力,试剂盒测定ROS表达,RT-qPCR法检测细胞NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-18和IL-1βmRNA表达,Western blot法检测细胞NF-κB p65、IκBα、NLRP3、pro-Caspase-1、Caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达,免疫荧光法检测细胞NF-κB p65和NLRP3蛋白表达。结果与正常组比较,模型组细胞ROS表达升高(P<0.01),NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-18和IL-1βmRNA表达升高(P<0.05,P<0.01),IκBα、胞浆NF-κB p65蛋白表达降低(P<0.01),细胞核NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达升高(P<0.01),NF-κB p65和NLRP3蛋白荧光强度增强(P<0.01)。与模型组比较,香青兰总黄酮组和香青兰总黄酮+抑制剂组ROS表达降低(P<0.01);香青兰总黄酮组、NF-κB抑制剂组和香青兰总黄酮+抑制剂组NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-18和IL-1βmRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),IκBα、胞浆NF-κB p65蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),细胞核NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),NF-κB p65和NLRP3蛋白荧光强度减弱(P<0.01)。与香青兰总黄酮组比较,NF-κB抑制剂组各指标无明显变化(P>0.05),香青兰总黄酮+抑制剂组IL-1β和IL-18 mRNA表达降低(P<0.05),IκBα蛋白表达升高(P<0.05),细胞核NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达降低(P<0.05),NLRP3蛋白免疫荧光强度减弱(P<0.05)。结论香青兰总黄酮可抑制ox-LDL诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应,该作用可能与减少ROS和炎症因子的表达,抑制NF-κB/NLRP3信号通路的活化有关。 展开更多
关键词 香青兰总黄酮 ox-LDL raw264.7巨噬细胞 炎症反应 NF-κB/NLRP3信号通路
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敲低双特异性磷酸酶5(DUSP5)通过阻断NF-κB信号抑制卡介苗诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应 被引量：1
6
作者 任超 刘文淼 骆佳 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期404-410,共7页
目的探讨双特异性磷酸酶5(DUSP5)对卡介苗(BCG)介导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应的调控作用。方法Western blot法检测BCG感染RAW264.7巨噬细胞0.5、1、2、4、6、8、12、24 h,DUSP5表达变化;采用小干扰RNA(siRNA)技术下调RAW264.7巨... 目的探讨双特异性磷酸酶5(DUSP5)对卡介苗(BCG)介导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应的调控作用。方法Western blot法检测BCG感染RAW264.7巨噬细胞0.5、1、2、4、6、8、12、24 h,DUSP5表达变化;采用小干扰RNA(siRNA)技术下调RAW264.7巨噬细胞DUSP5水平,并设置siRNA阴性对照(si-NC)组、DUSP5敲低(si-DUSP5)组、si-NC联合BCG感染组、si-DUSP5联合BCG感染组。实时定量PCR检测细胞白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10的mRNA表达,ELISA检测细胞上清液IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10含量;Western blot法检测细胞核因子κB(NF-κB)与磷酸化的NF-κB(p-NF-κB)表达变化。结果BCG感染上调RAW264.7巨噬细胞核DUSP5蛋白表达,并在BCG刺激4 h后,DUSP5表达量达到高峰;与si-NC联合BCG感染组相比,敲低DUSP5抑制细胞促炎因子IL-1β、IL-6与TNF-α表达与分泌,而抑炎因子IL-10表达不受DUSP5的影响;且敲低DUSP5抑制细胞NF-κB磷酸化。结论敲低DUSP5通过阻断NF-κB信号抑制BCG介导的巨噬细胞炎性反应。 展开更多
关键词 卡介苗(BCG) 双特异性磷酸酶5(DUSP5) raw264.7巨噬细胞 炎性反应
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小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)的培养及其在诱导破骨细胞中的应用 被引量：24
7
作者 许丹 律颖 +4 位作者 朱小语 陈晓文 冯金秋 范爱琴 许雅君 《中国骨质疏松杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1355-1360,共6页
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)是通过Abelson鼠白血病病毒诱导BALB/c小鼠产生肿瘤后得到的细胞株。RAW264.7细胞在医学研究中应用十分普遍:它是许多白血病相关研究模型的常用细胞株;在微生物学、免疫学等研究中也十分常用;同时... 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)是通过Abelson鼠白血病病毒诱导BALB/c小鼠产生肿瘤后得到的细胞株。RAW264.7细胞在医学研究中应用十分普遍:它是许多白血病相关研究模型的常用细胞株;在微生物学、免疫学等研究中也十分常用;同时也是小鼠源性破骨前体细胞,可通过特定细胞因子的诱导在体外获得成熟破骨细胞,因此也成为许多骨骼疾病研究的体外模型。但RAW264.7细胞形态和分化状态多变,在实际培养中较难把握,给科研工作带来了一定困难。科研工作者在RAW264.7细胞的培养方法、细胞的形态及分化状态等方面始终观点不一,对于用RAW264.7细胞在体外诱导获得破骨细胞的方法也有许多差别。本文结合文献资料及实践,探索了RAW264.7细胞的培养条件,冻存、复苏、传代方法,以及用核因子κB受体活化因子配基(receptor activator for nuclear factor-κB ligand,RANKL)诱导其成为成熟破骨细胞的技术关键;旨在总结RAW264.7细胞的培养及诱导其分化为破骨细胞的经验教训,探讨RAW264.7细胞的培养和在体外用RANKL诱导RAW264.7细胞分化为破骨细胞的方法、技巧,供广大科研工作者借鉴。 展开更多
关键词 raw264.7 单核巨噬细胞 破骨细胞 RANKL 细胞分化
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依普利酮介导Kv1.3/Bcl-2/NF-κB通路抑制巨噬细胞M1极化缓解小鼠类风湿性关节炎
8
作者 肖翅 蔡静 +3 位作者 王子航 张雍正 杨劲 程路峰 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第4期726-737,共12页
目的探讨依普利酮(eplerenone,EPL)基于电压门控钾通道1.3(voltage-gated potassium channel 1.3,Kv1.3)/B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)/核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)抑制巨噬细胞M1型极化而缓解小鼠类风湿性... 目的探讨依普利酮(eplerenone,EPL)基于电压门控钾通道1.3(voltage-gated potassium channel 1.3,Kv1.3)/B淋巴细胞瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)/核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)抑制巨噬细胞M1型极化而缓解小鼠类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)。方法使用生物信息学技术筛选疾病通路与靶点、计算EPL-Kv1.3复合物体系结合亲和力和稳定性。建立RA小鼠模型,灌胃EPL干预42 d,记录并检测反映药物缓解RA的指标;利用RAW264.7细胞模型给予EPL,检测反映药物影响巨噬细胞M1极化的指标,并验证药物介导的相关信号通路上下游关键靶点。结果生物信息学分析发现,疾病靶点主要涉及炎症反应和NF-κB信号通路、EPL-Kv1.3亲和力较高且结合稳定。动物实验发现,检测抗环瓜氨酸肽抗体(CCP-Ab)与小鼠关节评分显示造模成功。与模型组(Model)相比,EPL可减少足趾红肿评分、缓解小鼠足跖红肿、滑膜肿胀、减少纤维增生及炎性细胞浸润,且EPL中、高剂量组降低HE染色评分(P<0.05、P<0.01),EPL高剂量组可降低小鼠血清RF(P<0.01)。细胞实验CCK-8结果显示,EPL低、中、高剂量对RAW264.7巨噬细胞活性没有影响(P>0.05)。与Model组相比,EPL各剂量组明显降低细胞上清液IL-6、TNF-α及NO含量(P<0.01),EPL高剂量组减少NF-κB-p65核移位,EPL中、高剂量组降低细胞M1极化并升高M2极化比例(P<0.01)。EPL各剂量组明显降低细胞相关mRNA含量(P<0.01)。EPL可升高Bcl-2蛋白表达(P<0.01),降低细胞NF-κB通路蛋白表达(P<0.05)。结论EPL可能通过调控Kv1.3/Bcl-2/NF-κB通路,减少巨噬细胞M1型极化,改善巨噬细胞相关炎症反应,发挥免疫调节作用从而缓解小鼠RA。 展开更多
关键词 依普利酮 巨噬细胞M1极化 raw264.7巨噬细胞 类风湿性关节炎 Kv1.3 分子动力学模拟
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CFSE荧光负染法检测RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞摄取超顺磁性氧化铁纳米粒子
9
作者 何向锋 杨俐萍 +5 位作者 陈宝安 王建红 文颂 施文 徐薇薇 凌国杰 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期1168-1172,共5页
目的:探讨CFSE荧光负染法用于检测RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞吞噬超顺磁性氧化铁纳米粒子(super paramaganetic iron oxide nanoparticles,SPIO)的可行性及其荧光特征。方法:体外对RAW264.7细胞进行SPIO的标记,然后分别采用普... 目的:探讨CFSE荧光负染法用于检测RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞吞噬超顺磁性氧化铁纳米粒子(super paramaganetic iron oxide nanoparticles,SPIO)的可行性及其荧光特征。方法:体外对RAW264.7细胞进行SPIO的标记,然后分别采用普鲁士蓝染色方法和CFSE荧光负染法检测RAW264.7细胞对SPIO的摄取情况;用台盼蓝染色法检测CFSE荧光负染细胞的活力;应用激光扫描共聚焦显微镜进行荧光负染法检测RAW264.7细胞对SPIO的摄取。结果:普鲁士蓝将RAW264.7细胞内吞噬的SPIO标记为醒目的蓝色,核固红将细胞核标记为红色,在荧光图像上表现为荧光负染区,呈筛孔状。CFSE荧光负染法与普鲁士蓝染色法的检测结果具有很好的对应性。RAW264.7细胞经过SPIO和CFSE双重标记后,对细胞活力的影响较小,死细胞比例较低。结论:CFSE荧光负染法可用于RAW264.7活细胞吞噬SPIO的检测,同普鲁士蓝染色法具有很好的对应性,两者的检测结果可相互印证。 展开更多
关键词 CFSE荧光负染法 raw264.7小鼠 单核巨噬细胞 白血病细胞 超顺磁性氧化铁纳米粒子
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植物乳植杆菌IMAU30043胞外多糖对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞氧化损伤的保护作用 被引量：3
10
作者 李鸾 王丹丹 +3 位作者 青格乐 扎木苏 李建立 陈永福 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期80-89,共10页
为探究植物乳植杆菌IMAU30043胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)对RAW264.7巨噬细胞氧化损伤的保护作用,作者以还原能力、超氧阴离子自由基抑制能力和DPPH自由基清除能力来评价EPS的体外抗氧化水平。通过离子色谱分析IMAU30043EPS的组成... 为探究植物乳植杆菌IMAU30043胞外多糖(exopolysaccharides,EPS)对RAW264.7巨噬细胞氧化损伤的保护作用,作者以还原能力、超氧阴离子自由基抑制能力和DPPH自由基清除能力来评价EPS的体外抗氧化水平。通过离子色谱分析IMAU30043EPS的组成,并采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激RAW264.7巨噬细胞建立氧化损伤模型,测定其超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)酶活力、丙二醛(malondialdehyde,MDA)质量摩尔浓度、NO质量摩尔浓度及炎症因子表达水平的变化。根据Nrf2/HO-1/NF-κB通路关键基因表达水平的变化,探讨EPS保护细胞免受氧化损伤和抑制炎症反应的作用机制。结果表明,IMAU30043 EPS的体外抗氧化活性最强,由岩藻糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、葡萄糖醛酸和甘露糖醛酸组成,其摩尔比为4.50∶51.49∶256.73∶95.96∶3.64∶5.35∶111.10∶16.93。另外,EPS可显著提高LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞氧化损伤后的SOD酶活力,降低MDA和NO质量摩尔浓度;在基因水平上能显著下调iNOS、TNF-α、IL-1β和IL-6的表达量,但显著上调IL-10的表达量。此外,EPS促进了模型细胞中Nrf2和HO-1基因的mRNA表达,并抑制了NF-κB的激活。表明植物乳植杆菌IMAU30043产生的EPS能有效保护巨噬细胞免受氧化损伤,且该功能与Nrf2/HO-1/NF-κB信号通路有关。 展开更多
关键词 植物乳植杆菌IMAU30043 胞外多糖 raw264.7巨噬细胞 氧化损伤 抗炎作用
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慢性高糖抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞AKT磷酸化并促进其Ml型极化 被引量：8
11
作者 罗维 艾磊 +2 位作者 李显 王博发 周越 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期910-917,共8页
目的研究慢性高糖对小鼠巨噬细胞的影响及机制.方法以正常生长液和含(40、60)mmol/L葡萄糖的生长液培养小鼠RAW264.7巨噬细胞1、3、5、7 d,相差显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞增殖能力,Western blot法检测细胞白细胞介素1β(IL-1β... 目的研究慢性高糖对小鼠巨噬细胞的影响及机制.方法以正常生长液和含(40、60)mmol/L葡萄糖的生长液培养小鼠RAW264.7巨噬细胞1、3、5、7 d,相差显微镜观察细胞形态,CCK-8法检测细胞增殖能力,Western blot法检测细胞白细胞介素1β(IL-1β)和IL-1O蛋白水平,ELISA检测培养细胞上清液IL-Iβ和IL,-10分泌量;实时定量PCR法检测细胞蛋白激酶B(AKT)mRNA水平,Western blot法检测细胞AKT、磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白水平.结果60 mmol/L葡萄糖处理1 d即出现较多长梭形细胞,可见伸展的伪足,且随时间延长数量增加、体积变大;处理1 d即明显抑制细胞增殖,随时间延长抑制效果有所改善;处理3,5,7d后,IL-1β蛋白水平增加、IL-10蛋白水平降低;处理1 d后IL-1β分泌显著增加,但处理3d后IL-10分泌显著减少且随时间延长进一步减少;处理3,5,7 d后,AKT蛋白磷酸化被抑制,但AKT mRNA水平未见明显变化.40 mmol/L葡萄糖处理在一定程度上发挥作用,但不如60 mmol/L葡萄糖显著和稳定.结论长期高糖刺激诱导巨噬细胞向促炎性M1型转变,诱发巨噬细胞的持续慢性炎症反应,其机制可能与抑制AKT蛋白磷酸化激活有关. 展开更多
关键词 糖尿病 慢性炎症 raw264.7细胞 巨噬细胞极化
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文冠果叶黄酮对巨噬细胞RAW264.7细胞因子及TLR2受体的影响 被引量：1
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作者 冯嫣 《粮食与油脂》 北大核心 2024年第2期141-143,154,共4页
通过四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法分析文冠果叶黄酮(XLF)对巨噬细胞RAW 264.7增殖活力的影响,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞RAW 264.7分泌的细胞因子含量;通过XLF处理Toll样受体2(TLR2)抗体作用的巨噬细胞,研究TLR2受体对该细胞因子... 通过四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法分析文冠果叶黄酮(XLF)对巨噬细胞RAW 264.7增殖活力的影响,酶联免疫吸附测定法检测巨噬细胞RAW 264.7分泌的细胞因子含量;通过XLF处理Toll样受体2(TLR2)抗体作用的巨噬细胞,研究TLR2受体对该细胞因子的介导作用。结果表明:当XLF质量浓度为320μg/mL时,巨噬细胞RAW 264.7分泌的NO、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子-β(TNF-β)细胞因子最多,且与空白对照差异极显著,但都小于脂多糖(LPS);且与未加入TLR2抗体相比,加入了TLR2抗体的巨噬细胞减少了各细胞因子的分泌,且差异均极显著。XLF可促进巨噬细胞RAW 264.7的增殖及细胞因子的分泌,并且可能通过TLR2受体介导。 展开更多
关键词 文冠果叶黄酮 巨噬细胞raw264.7 细胞因子 TLR2受体
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利用载体介导的RNA干扰技术抑制小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7内糖皮质激素受体表达及功能的研究
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作者 朱晓燕 刘宇健 +1 位作者 卢建 徐仁宝 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第11期1541-1542,共2页
关键词 载体 RNA干扰技术 小鼠 腹腔 巨噬细胞 raw264.7 糖皮质激素受体 基因表达
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Kobophenol A通过Prdx6抑制LPS诱导的巨噬细胞M1型极化
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作者 陈天宇 王浩 +4 位作者 王金虹 赵英杰 周仁鹏 胡伟 鲁超 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第9期1644-1652,共9页
目的探究Kobophenol A(KPA)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞M1型极化的作用及机制,以期为炎症免疫性疾病的治疗和新药研发提供理论依据。方法使用LPS诱导建立RAW264.7巨噬细胞M1型极化模型,并使用过氧化物还原酶6(Prdx6)的抑制剂MJ33和Prdx... 目的探究Kobophenol A(KPA)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞M1型极化的作用及机制,以期为炎症免疫性疾病的治疗和新药研发提供理论依据。方法使用LPS诱导建立RAW264.7巨噬细胞M1型极化模型,并使用过氧化物还原酶6(Prdx6)的抑制剂MJ33和Prdx6-siRNA构建Prdx6沉默模型。采用不同浓度的KPA处理小鼠巨噬细胞系RAW264.7,CCK-8法检测细胞活力。Western blot和免疫荧光染色法检测巨噬细胞Prdx6和巨噬细胞M1型极化相关蛋白诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧化酶-2(COX-2)的表达水平。RT-qPCR检测巨噬细胞Prdx6和巨噬细胞M1型极化相关基因iNOS、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平。流式检测M1型巨噬细胞标志分化簇86分子(CD86)的表达情况。结果与LPS诱导的巨噬细胞M1型极化模型相比,KPA可以显著恢复RAW264.7巨噬细胞M1型极化形态学变化,降低巨噬细胞M1型极化相关蛋白iNOS、COX-2、CD86和相关基因iNOS、IL-6、TNF-α的表达(均P<0.05)。此外,LPS显著下调RAW264.7巨噬细胞中Prdx6的表达,而加入KPA可以上调Prdx6的表达,并且Prdx6的抑制剂MJ33处理能够上调RAW264.7巨噬细胞M1型极化标志蛋白iNOS的表达,而KPA处理可以下调iNOS的表达(均P<0.05)。结论KPA通过上调Prdx6的表达抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞M1型极化。 展开更多
关键词 Kobophenol A raw264.7巨噬细胞 LPS M1型极化 Prdx6 MJ33
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牛磺鹅去氧胆酸对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞凋亡的影响 被引量：4
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作者 张文 王建光 +4 位作者 李金莲 赵孝民 陈正涛 周川 石有斐 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第7期1674-1680,共7页
为了探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的抗凋亡作用,试验采用二苯胺法及实时荧光定量PCR技术分别检测了针对RAW264.7细胞凋亡百分率及凋亡抑制蛋白CIAP-1、CIAP-2和XIAP的mRNA表达影响。结果显示,剂量为0.05、0.1... 为了探讨牛磺鹅去氧胆酸(TCDCA)对小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7的抗凋亡作用,试验采用二苯胺法及实时荧光定量PCR技术分别检测了针对RAW264.7细胞凋亡百分率及凋亡抑制蛋白CIAP-1、CIAP-2和XIAP的mRNA表达影响。结果显示,剂量为0.05、0.10和10μg/mL TCDCA可以极显著地对抗地塞米松(DEX)诱导的RAW264.7细胞系凋亡(P<0.01)。1μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1和XIAP表达有显著的促进作用(P<0.05);10μg/mL TCDCA对正常RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和XIAP表达均具有显著的促进作用(P<0.05)。TCDCA给药后对DEX诱导的RAW264.7细胞系CIAP-1、CIAP-2和XIAP表达均具有极显著的促进作用(P<0.01),但不同给药剂量的TCDCA作用有所差异。以上研究结果表明,TCDCA具有对抗DEX诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7凋亡作用,且与上调凋亡抑制蛋白mRNA表达有关。 展开更多
关键词 牛磺鹅去氧胆酸 小鼠巨噬细胞系raw264.7 细胞凋亡 凋亡抑制蛋白
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冠突散囊菌与木霉混合发酵液醇提物对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节的影响 被引量：3
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作者 范冬月 李倩 +1 位作者 邹先伟 张君毅 《中国酿造》 CAS 北大核心 2021年第5期37-42,共6页
为进一步开发冠突散囊菌的药理活性,该研究将冠突散囊菌与木霉共同发酵,通过不同体积分数的乙醇对混合发酵液化学活性部位进行追踪,并结合液质联用(LC-MS)技术对活性部位化合物组成进行分析,通过四氮甲基唑蓝(MTT)比色法、中性红吞噬实... 为进一步开发冠突散囊菌的药理活性,该研究将冠突散囊菌与木霉共同发酵,通过不同体积分数的乙醇对混合发酵液化学活性部位进行追踪,并结合液质联用(LC-MS)技术对活性部位化合物组成进行分析,通过四氮甲基唑蓝(MTT)比色法、中性红吞噬实验及酶联免疫吸附测定方法分别研究冠突散囊菌与木霉混合发酵液活性部位对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖、吞噬以及分泌细胞因子的能力的影响。结果表明,冠突散囊菌与木霉混合发酵液体积分数70%乙醇提取部位有较好的免疫活性,该部位含有大黄素、芥子碱等生物活性成分。与阳性对照组脂多糖相比,500μg/mL冠突散囊菌与木霉混合发酵液的体积分数70%乙醇提物能够使小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖率提高12%,增强小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红的能力,并能促进NO及细胞因子IL-6、TNF-α的分泌。 展开更多
关键词 冠突散囊菌 木霉 混合发酵 乙醇提取物 免疫调节 小鼠巨噬细胞raw264.7
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阻断连接子蛋白43(Cx43)抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞M1型极化 被引量：1
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作者 蒋涵 王璐 +5 位作者 张莹莹 何文君 闫美娟 单莉娅 李新芝 马克涛 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期972-978,共7页
目的研讨连接子蛋白43(Cx43)在脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞M1型极化中的作用。方法将体外培养的小鼠RAW264.7巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS联合Cx43阻断剂模拟肽19(Gap19)或模拟肽26(Gap26)预处理组(LPS联合Gap19组、LPS联... 目的研讨连接子蛋白43(Cx43)在脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞M1型极化中的作用。方法将体外培养的小鼠RAW264.7巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS联合Cx43阻断剂模拟肽19(Gap19)或模拟肽26(Gap26)预处理组(LPS联合Gap19组、LPS联合Gap26组)。Western blot法检测小鼠RAW264.7巨噬细胞Cx43和M1型极化标志物CD86、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的蛋白水平,免疫荧光细胞化学染色观察CD86在RAW264.7巨噬细胞的表达和定位,流式细胞术检测小鼠RAW264.7巨噬细胞M1型极化标志物CD86的表达频数。结果与对照组相比,LPS组中CD86、iNOS和Cx43的蛋白表达明显升高,CD86的表达频数明显升高;与LPS组相比,在LPS联合Gap19组和LPS联合Gap26组中CD86和iNOS的蛋白表达均显著降低,CD86的表达频数均显著降低。因此,LPS可以诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞向M1型极化,而Gap19和Gap26能够降低M1型极化标志物的表达。结论通过阻断Cx43可以抑制巨噬细胞M1型极化。 展开更多
关键词 脂多糖(LPS) raw264.7巨噬细胞 极化 连接子蛋白43(Cx43)
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酿酒葡萄皮渣多糖的提取工艺及其对巨噬细胞氧化损伤的保护作用研究
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作者 袁永旭 党俊然 +2 位作者 李明 何文兵 崔艳艳 《饲料研究》 北大核心 2025年第17期98-103,共6页
试验旨在优化酿酒葡萄皮渣多糖(WGPP)的提取工艺,并探究其对巨噬细胞氧化损伤的保护作用。采用响应面法优化提取工艺,以液料比、提取温度和提取时间为自变量,多糖得率为因变量,确定最佳提取条件。利用傅里叶变换红外光谱、刚果红试验和... 试验旨在优化酿酒葡萄皮渣多糖(WGPP)的提取工艺,并探究其对巨噬细胞氧化损伤的保护作用。采用响应面法优化提取工艺,以液料比、提取温度和提取时间为自变量,多糖得率为因变量,确定最佳提取条件。利用傅里叶变换红外光谱、刚果红试验和扫描电子显微镜等对WGPP结构进行表征;建立脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞氧化损伤模型,测定超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,评估WGPP对巨噬细胞氧化损伤的保护作用。结果显示,当液料比30 mL/g、提取温度92℃、提取时间186 min时,WGPP得率为4.33%。WGPP结构呈高度分支状且无三螺旋构型;微观结构为无规则颗粒状,表面凹凸不平;500和1000 mg/L的WGPP可极显著提高巨噬细胞SOD活性并降低MDA含量(P<0.01),有效缓解LPS诱导的巨噬细胞氧化损伤。研究表明,WGPP具有抗氧化能力,可作为功能性饲料添加剂开发利用。 展开更多
关键词 酿酒葡萄皮渣 多糖 结构表征 raw264.7巨噬细胞 氧化损伤
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miRNA-144抑制小鼠RAW264.7巨噬细胞ABCA1表达
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作者 于雪婧 尚伟 +3 位作者 杨向贵 秦华迪 于军 周建中 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期951-955,共5页
目的构建miR-144真核表达载体,检测miR-144是否调控小鼠RAW264.7巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达。方法结合文献,通过预测软件分析,选取评分较高、可作用于ABCA1 mRNA 3'非编码区(ABCA1 mRNA3'UTR)的miR-144。... 目的构建miR-144真核表达载体,检测miR-144是否调控小鼠RAW264.7巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的表达。方法结合文献,通过预测软件分析,选取评分较高、可作用于ABCA1 mRNA 3'非编码区(ABCA1 mRNA3'UTR)的miR-144。通过分子克隆技术,利用PCR扩增miR-144和ABCA1 mRNA 3'UTR的DNA序列,酶切胶回收后,分别连接至真核表达载体pcDNA3.1(+)载体和pcDNA3.1(+)-luciferase载体上。测序后,运用双荧光素酶报告基因系统检测萤火虫荧光素酶的活性,观察miR-144是否对ABCA1 mRNA 3'UTR具有直接靶向作用。运用LipofectamineTM2000将pcDNA3.1(+)空载体、pcDNA3.1(+)-miR-144转染至小鼠RAW264.7巨噬细胞。通过实时定量PCR(qRT-PCR)检测转染后miR-144的表达含量。通过qRT-PCR和Western blot法检测过表达miR-144后ABCA1在mRNA和蛋白水平的变化。结果 miR-144 PCR产物连接至pcDNA3.1(+)载体上,ABCA1 mRNA 3'UTR连接至pcDNA3.1(+)-luciferase载体上,测序正确。运用双荧光素酶报告基因系统检测发现,和对照组[pcDNA3.1(+)空载体、pcDNA3.1(+)-luciferase-ABCA1 3'UTR和PRL-SV40联合转染]三者相比,实验组[pcDNA3.1(+)-miR144、pcDNA3.1(+)-luciferase-ABCA1 3'UTR和PRL-SV40联合转染]三者可以显著降低萤火虫荧光素酶的活性(P<0.05),证明miR-144对ABCA1 mRNA3'UTR具有直接靶向作用。将pcDNA3.1(+)空载体、pcDNA3.1(+)-miR-144转染至小鼠RAW264.7细胞中,qRT-PCR结果显示,转染pcDNA3.1(+)空载体组miR-144表达无明显变化(P>0.05);转染pcDNA3.1(+)-miR-144组中miR-144表达量显著增高(P<0.01).qRT-PCR结果显示,转染pcDNA3.1(+)空载体和pcDNA3.1(+)-miR-144对ABCA1 mRNA表达水平无明显影响(P>0.05),Western blot结果显示转染pcDNA3.1(+)-miR-144可以显著降低ABCA1蛋白水平的表达(P<0.01)。结论 miR-144可以在转录后水平降低ABCA1蛋白的表达。 展开更多
关键词 miR-144 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 巨噬细胞 raw264.7细胞
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重组黑芝免疫调节蛋白对小鼠巨噬细胞RAW264.7向M1型分化的影响
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作者 刘玲 李奇璋 +1 位作者 周选围 王玉亮 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第23期170-175,共6页
真菌免疫调节蛋白具有免疫调节和抗肿瘤功效。巨噬细胞在肿瘤免疫治疗中发挥重要的作用,M1型巨噬细胞具有很强的肿瘤杀伤能力和抗原递呈能力。本研究通过真菌免疫调节蛋白在体外对小鼠巨噬细胞RAW264.7经典活化M1型的影响探究其抗肿瘤... 真菌免疫调节蛋白具有免疫调节和抗肿瘤功效。巨噬细胞在肿瘤免疫治疗中发挥重要的作用,M1型巨噬细胞具有很强的肿瘤杀伤能力和抗原递呈能力。本研究通过真菌免疫调节蛋白在体外对小鼠巨噬细胞RAW264.7经典活化M1型的影响探究其抗肿瘤的作用机制。利用重组黑芝免疫调节蛋白(recombinant Ganoderma atrum immunomodulatory protein,rFIP-gat)干预RAW264.7细胞,用中性红吞噬实验测定细胞吞噬能力,一氧化氮(nitric oxide,NO)检测试剂盒测定NO浓度,采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的mRNA相对表达量。结果表明,rFIP-gat以剂量依赖的方式增强RAW264.7细胞的吞噬能力,促进其产生NO,并提高iNOS和TNF-α基因的转录。因此,rFIP-gat可能具有诱导RAW264.7细胞向M1型巨噬细胞分化的作用。 展开更多
关键词 重组黑芝免疫调节蛋白 巨噬细胞raw264.7 肿瘤坏死因子-Α 诱导型一氧化氮合酶
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